UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE INGENIERIA CAMPUS GUANAJUATO INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL- IPN

PROYECTO DE INVESTIGACIÓN 

PURIFICACIÓN DE INMUNOGLOBULINA A, A PARTIR DE LECHE MATERNA PARA SU POSIBLE ESTABILIZACIÓN IN VITRO

INVESTIGADORM. EN C. ROCHA RAMÍREZ AGUSTÍN HILARIO

COLABORADORA EN LA INVESTIGACIÓN 

HIGUERA JIMÉNEZ CITLALY

22 DE SEPTIEMBRE DEL 2016

UNIVERSIDAD AUTÒNOMA DE GUERREROUNIDAD ACADÈMICA CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS

PROGRAMA EDUCATIVO QUÍMICO BIÓLOGO PARASITÓLOGO

Introducción

La leche materna es un líquido producido por la glándula mamaria, constituido por nutrimentos, substancias inmunológicas, hormonas, enzimas y vitaminas, que la hacen nutricional e inmunológicamente apta para que un niño sea alimentado. (Holmes AV, 2011).

Las inmunoglobulinas se pueden definir como proteínas sintetizadas por linfocitos B como respuesta a la presencia de un antígeno especifico, actuando en defensa de un organismo. Entre ellas se encuentra la inmunoglobulina A (IgA).

La IgA, es conocida también como anticuerpo secretor, se encuentra en las secreciones mucosas del aparato respiratorio, tracto gastrointestinal, genitourinario, saliva, lágrimas y leche materna. Su estructura está compuesta por cuatro cadenas, dos cadenas pesadas alfa y dos cadenas ligeras kappa o lamba. Su peso molecular es de 150,330 a 400 KDa y tiene una vida media de seis días. (Rebeca & Ramírez, 2011).

Justificación

El papel de la IgA ha sido bien detallado en cuanto a la protección inmune frente a infecciones.

En estudios inmunológicos recientes se ha hablado de la importancia de la IgA, sin embargo no se ha logrado su uso fuera de ella.

El lograr la estabilización in vitro puede motivar al diseño de diferentes alternativas en la nutrición de los infantes, que por razones materno-infantil no se efectúa la lactancia materna.

Podrá ser retomada en diferentes investigaciones que lo necesiten, conduciendo a la generación de nuevas investigaciones e hipótesis.

Hipótesis

Se puede realizar la purificación de Inmunoglobulina A, a partir de leche materna para su posible estabilización in vitro.

Objetivo general• Purificar la inmunoglobulina A, a partir de leche materna para su posible estabilización in vitro.

Objetivos específicos• Obtener la muestra de leche materna de una participante voluntaria.

• Realizar el método de precipitación de IgA con sulfato de amonio para su purificación.

• Determinar la concentración de proteínas de leche materna mediante el método Bradford.

• Identificar la IgA por electroforesis.

Metodología

Se obtuvo de la muestra .

Se adicionó solución saturada de amonio.

Se centrifugó. Se disolvió SSRB*

Se realizó diálisis y se colocó en agitación constante (3 días).

Se centrifugó. Se eliminó el sobrenadante y se adiciono.

Se agitó por 30 minutos.

Se centrifugó y eliminó el sobrenadante y se agregó 1 ml de agua destilada.

Precipitación de IgA con sulfato de amonio

Se adicionó 200 µl leche materna y 800 µl de agua destilada.

Adicionó 200 µl y 800 µl de agua destilada , (Dos veces).

Se realizaron otras diluciones 200 µl /800 µl reactivo de Bradford.

Cuantificación de proteínas

SDS-PAGE

Se Preparó la solución de tapón.

Se preparó gel separador .

Se preparó gel concentrador .

Se agregaron las muestras de IgA.

Se colocó la cámara de electroforesis a la fuente de poder a 120 volts.

Se agregó solución teñidura.

Se adicionó desteñidora I.

Se adicionó desteñidora II.

Se colocó en el transiluminador para su lectura.

Resultados

Fig. 2 Gel de SDS-PAGE, carril uno y dos, se observan bandas en el rango de 160 a 140 KDa compatible con el rango de peso molecular para IgA. Fuente elaboración propia. Fuente elaboración propia.

Fig. 1 Precipitado de IgA, centrifugado a 3500 rpm a 4ºC durante 15 min aplicando la precipitación salina. Fuente elaboración propia.

Tabla 1. Concentración de proteínas de leche materna en diferentes diluciones.Dilución (%) Absorbancia Concentración µg/ml

     

20 0,308 117,923077

0,2 0,252 103,564103

0,02 0,216 94,3333333

Grafica 1. Gráfica de la concentración de leche

materna en diferentes diluciones. Fuente elaboración

propia.

Discusión

Pasando dicho tiempo la proteína logra su solubilidad llegando así a la precipitación de IgA. -Para la purificación de proteínas fue necesario realizar la diálisis utilizando una membrana de acetato de celulosa, con la finalidad de separar el producto, permitiendo la selección de partículas y limitar el resto.

Se realizo el método de Bradford a fin de determinar la concentración de proteínas de leche materna.- El ensayo de Bradford es un ensayo colorimétrico que nos permitió la medición de proteína total en leche materna.

Se realizo el método de electroforesis utilizando para este estudio (SDS-PAGE) - Para su posible resultado fue necesario realizar ajustes en el tapón a un pH mas especifico.- Reactivos de alta calidad.

Conclusión

Agradecimientos

En primer lugar al programa Delfín, por permitirnos participar como jóvenes investigadores en el XXI Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacifico 2016.

Universidad Autónoma de Guerrero, por apoyarme en los trámites correspondientes para obtener este logro.

Al investigador el M. EN C. Agustín Hilario Rocha Ramírez por aceptar ser mi asesor en el proyecto de investigación “Purificación de Inmunoglobulina A, a partir de Leche Materna para su posible estabilización in vitro”, que se llevó a cabo en la Unidad Profesional Interdisciplinaria de Ingeniería campus Guanajuato- Instituto Politécnico Nacional UPIIG-IPN mostrando disponibilidad e interés para obtener un trabajo adecuado.

A los profesores asesores, responsables del laboratorio

A mis compañeros con los que estuve compartiendo la misma experiencia.

“Siempre hay que saber cuándo una etapa llega a su fin. Cerrando ciclos, cerrando puertas, terminando capítulos; no importa el nombre que le demos, lo que importa es dejar en el pasado los momentos de la vida que ya se han acabado.”

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