Purificación por Intercambio Iónico

Principios

Intercambiadores Iónicos

1. Matriz porosa insoluble2. Grupos cargados unidos a la matriz por enlaces

covalentes

_

+

+

+

+

+

Asociados

CONTRAIONES que pueden ser intercambiados de forma reversible.

+

Intercambiador Aniónico

Intercambiador Catiónico

+ + + + + +

+ + + + + +

+ + + + + +

_

_

•Cargado positivamente

•Tiene contraiones negativos(aniones) disponibles para intercambiar

_

_ _ _ _ _ _ _ _ _

+

+

•Cargado negativamente

•Tiene contraiones positivos(cationes) disponibles para intercambiar

+

Proteínas• Portadoras de cargas

• Tanto positivas como negativas

• Se pueden unir a intercambiador aniónico como catiónico

AFINIDAD Capacidad de una carga para unirse con una cierta itensidad

De una proteína depende de

1. Identidad y concentración de los otros iones en la disolución (competencia)

2. Del pH

+ _

Estos principios se emplean en el aislamiento de

moléculas biológicas

Purificación de proteínas

1. Se disuelve la mezcla a purificar con un tampón o buffer

2. Se eligen

5. Se pasa la mezcla por una columna

• pH

• Concetración de sal

• Intercambiador iónico

Dependiendo de la proteína que quieras purificar

Columna con intercambiador Mayor afinidad

Menor afinidad

Colector de fracciones

Elución

Lavado de la columna

Elución por gradiente

Se hacen variar las concentraciones

• pH

• Sal

Continuamente

Obteniendo secuencialmente las proteínas

(gradiente lineal) - concentración varia linealmente - con el volumen

Conclusión

La cromatografia de intercambio iónico

Iones unidos electrostaticamente a matriz insoluble inerte

Iones en disolución

Sustituidos de modo reversible