Pruebas Pruebas Bioquímicas de Bioquímicas de IdentificaciónIdentificación

Pruebas de Identificación Pruebas de Identificación rápidasrápidas

PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN PARA COCOS GRAM +PARA COCOS GRAM +

SE UTILIZAN ALGUNOS ATB: BACITRACINA - NOVOBIOCINA

Prueba de la catalasaPrueba de la catalasa

FundamentoFundamento: Detecta la presencia de la : Detecta la presencia de la enzima catalasa.enzima catalasa.

ProcedimientoProcedimiento: En portaobjetos colocar : En portaobjetos colocar sobre una colonia unas gotas de Hsobre una colonia unas gotas de H22002 2 3 %. 3 %.

HH22002 2 HH220 + 00 + 022

Liberación de burbujas rápida y sostenida Liberación de burbujas rápida y sostenida indica la producción de oxígeno molecular indica la producción de oxígeno molecular = prueba (+)= prueba (+)

ConsideracionesConsideraciones: : No Agar sangre (No Agar sangre (peroxidasa en los peroxidasa en los eritrocitos).eritrocitos).

PRUEBA DE LA CATALASAPRUEBA DE LA CATALASA

PRUEBA DE LA COAGULASAPRUEBA DE LA COAGULASAFundamentoFundamento: Detecta un factor de agregación “clumping factor” : Detecta un factor de agregación “clumping factor”

en la superficie de la bacteria.en la superficie de la bacteria.ProcedimientoProcedimiento: : se coloca una colonia sospechosa de se coloca una colonia sospechosa de

pertenecer a una especie de pertenecer a una especie de StaphylococcusStaphylococcus y se emulsifica y se emulsifica en una gota de plasma de conejo.en una gota de plasma de conejo.

InterpretaciónInterpretación: “arracimamiento” aglutinación ,bacteriana en 1 : “arracimamiento” aglutinación ,bacteriana en 1 minuto = prueba (+).minuto = prueba (+).

Si el resultado es negativo ensayar la producción de coagulasa Si el resultado es negativo ensayar la producción de coagulasa en tubo.en tubo.

ConsideracionesConsideraciones: : UU

tilizar plasma con EDTA y no citratado, ya que hay tilizar plasma con EDTA y no citratado, ya que hay organismos capaces de metabolizar el citrato (Enterococcus organismos capaces de metabolizar el citrato (Enterococcus

spp.) pueden dar resultados falsos (+).spp.) pueden dar resultados falsos (+).LL

as pruebas (-) luego de 4 hs de incubación a 35ºC, dejar a as pruebas (-) luego de 4 hs de incubación a 35ºC, dejar a temperatura ambiente y leer luego de 18-24 hs a fin de evitar temperatura ambiente y leer luego de 18-24 hs a fin de evitar la fibrinólisis que producen algunas cepas al ser incubadas en la fibrinólisis que producen algunas cepas al ser incubadas en forma prolongada a 35ºC. forma prolongada a 35ºC.

COAGULASACOAGULASA

PRUEBA DEL PYRPRUEBA DEL PYR: :

Fundamento:Fundamento: detecta la enzima pirrolidonil arilamidasa se detecta la enzima pirrolidonil arilamidasa se utiliza como sustrato el reactivo L-pirrolidonil- beta-naftilamida utiliza como sustrato el reactivo L-pirrolidonil- beta-naftilamida (PYR), para la identificación rápida de enterococos. (PYR), para la identificación rápida de enterococos.

ProcedimientoProcedimiento: Realizar un alto inóculo en Sol Fis : Realizar un alto inóculo en Sol Fis

(2 MacFarland) e introducir un disco de PYR. (2 MacFarland) e introducir un disco de PYR.

Tiempo y Tº de incubación: 30 minutos a 35º C.Tiempo y Tº de incubación: 30 minutos a 35º C.

Tiempo de lectura: 5 minutos.Tiempo de lectura: 5 minutos.

InterpretaciónInterpretación: :

Disco rosado o rojo (+)Disco rosado o rojo (+)

Disco y/o solución amarillo a incoloro (-).Disco y/o solución amarillo a incoloro (-).

ConsideracionesConsideraciones: Algunas especies de : Algunas especies de StaphylococcusStaphylococcus y los y los estreptococos del grupo A dan, también, una prueba positiva. estreptococos del grupo A dan, también, una prueba positiva.

Prueba de PYRPrueba de PYR

PRUEBA DE DNAsaPRUEBA DE DNAsa

PRUEBA DE LA DNASA

Fundamento:Fundamento: El El S. aureusS. aureus produce una DNAasa produce una DNAasa termoestable que hidroliza DNA.termoestable que hidroliza DNA. La producción de DNAsa puede determinarse La producción de DNAsa puede determinarse incorporando ácido desoxirribonucleico (DNA) en agar incorporando ácido desoxirribonucleico (DNA) en agar nutritivo .nutritivo .

ProcedimientoProcedimiento: Se inocula el microorganismo: Se inocula el microorganismo en en manchas densas sobre agar DNAmanchas densas sobre agar DNA y después de 18 a 24 y después de 18 a 24 hs de incubación. Revelar con HCl al 1%, que precipita hs de incubación. Revelar con HCl al 1%, que precipita el DNA nativo del medio.el DNA nativo del medio.

InterpretaciónInterpretación: colonias rodeadas por una zona clara : colonias rodeadas por una zona clara donde el ADN ha sido despolimerizado e hidrolizado = donde el ADN ha sido despolimerizado e hidrolizado = prueba (+). Sin cambios , prueba (-).prueba (+). Sin cambios , prueba (-).

MANITOL SALADO

Agar Manitol saladoFundamento: el medio contiene manitol (1%), cloruro de sodio (7,5 %), rojo de fenol y peptonas.

Procedimiento: Sembrar la cepa e incubar 18 a 24 hs a 35ºC. Interpretación: Crecimiento y viraje Staphylococcus aureus

Crecimiento sin viraje. S. epidermidis y otros coagulasa negativos

Consideraciones: La alta concentración de sal inhibe otros microorganismos excepto

enterococos (por lo tanto usar la placa para identificación, no para aislamiento).

Bilis EsculinaBilis Esculina

PRUEBA DE LA BILIS-ESCULINA::

Fundamento:Fundamento: bacterias como estreptococos del grupo D bacterias como estreptococos del grupo D hidrolizan la esculina en presencia de 1-4% de sales biliares.hidrolizan la esculina en presencia de 1-4% de sales biliares.ProcedimientoProcedimiento: Se inocula el microorganismo: Se inocula el microorganismo en la superficie en la superficie de un pico de flauta. Incubarde un pico de flauta. Incubar 24 hs. 24 hs. InterpretaciónInterpretación: La beta glucosidasa escinde la esculina en : La beta glucosidasa escinde la esculina en glucosa y esculetina. Esta ultima es soluble en el medio y glucosa y esculetina. Esta ultima es soluble en el medio y forma un complejo de color negro con Fe 3+ .La hidrólisis de forma un complejo de color negro con Fe 3+ .La hidrólisis de esculina se observa como un oscurecimiento del medio (color esculina se observa como un oscurecimiento del medio (color negro) en 24 hs de incubación a 35ºC, raramente se requieren negro) en 24 hs de incubación a 35ºC, raramente se requieren 48 hs de incubación hasta que la hidrólisis sea aparente.48 hs de incubación hasta que la hidrólisis sea aparente.ConsideracionesConsideraciones: Es importante que el medio contenga 40% : Es importante que el medio contenga 40% de bilis, ya que algunos productos contienen menos cantidad lo de bilis, ya que algunos productos contienen menos cantidad lo que lleva a confundir algunos estreptococos viridans con que lleva a confundir algunos estreptococos viridans con enterococos enterococos

PRUEBA DE CAMP

Fundamento:Fundamento: Los estreptococos grupo B secretan el factor Los estreptococos grupo B secretan el factor CAMP que interactúa con la ß-hemolisina secretada por una CAMP que interactúa con la ß-hemolisina secretada por una cepa ß-hemolítica de cepa ß-hemolítica de S. aureusS. aureus (ATCC 25923) lo que causa un (ATCC 25923) lo que causa un acrecentamiento o sinergismo de la hemólisis. acrecentamiento o sinergismo de la hemólisis.

ProcedimientoProcedimiento: En placa de agar sangre sembrar una estría : En placa de agar sangre sembrar una estría de la cepa de de la cepa de S. aureusS. aureus y perpendicularmente a ésta (lo más y perpendicularmente a ésta (lo más cerca posible, sin llegar a tocarla) sembrar la cepa de cerca posible, sin llegar a tocarla) sembrar la cepa de estreptococo en estudio.estreptococo en estudio.

Tiempo y Tº de incubaciónTiempo y Tº de incubación:: Incubar 24 hs a 35ºC en Incubar 24 hs a 35ºC en aerobiosis (en CO2 aumentan los falsos positivos). aerobiosis (en CO2 aumentan los falsos positivos).

InterpretaciónInterpretación: El sinergismo se observa como un área de ß-: El sinergismo se observa como un área de ß- Hemólisis en forma de “punta de flecha” en la zona Hemólisis en forma de “punta de flecha” en la zona de desarrollo más cercana a ambas estrías. de desarrollo más cercana a ambas estrías.

Prueba de CAMP

PRUEBA DEL HIPURATO DE SODIO Fundamento: Enterococos son capaces de hidrolizar el hipurato de sodio. La producción de hipuricasa resulta en la hidrólisis del hipurato de sodio con la formación de benzoato de sodio y glicina.

Procedimiento:

Inocular un tubo con medio hipurato de sodio con el microorganismo. Incubar 24 hs a 35ºC. Centrifugar. Pipetear 0.8 ml el sobrenadante. Agregar 0.2 ml de cloruro férrico 7%.

Inocular un tubo con 0.4 ml de medio hipurato de sodio con el microorganismo. Incubar 2 hs a 35ºC. Agregar 0.2 ml de Ninhidrina.

Interpretación: Formación de un precipitado denso y persistente por 10 minutos = prueba (+) benzoato

La aparición de un color púrpura profundo = prueba (+) glicina.

Hidrólisis de hipurato

Prueba de la susceptibilidad a la Novobiocina

Fundamento: Se basa en que ciertas bacterias son sensibles a la novobiocina.Procedimiento: Se inocula el microorganismo en agar Mueller Hinton según técnica de Kirby-Bauer, utilizando discos de Novobiocina (5 µg). Interpretación: Sensible: inhibición del desarrollo con un diámetro mayor o igual a 16 mm

Staphylococcus Sensibles Micrococcus Resistentes

Consideraciones: Kirby Bauer (Difusión en disco)Inoculo sin incubación previaTiempo de lectura: 24 hs.Tº de incubación: 33º a 35º

PRUEBA DE LA BACITRACINA:

Fundamento: Algunos Streptococos son sensibles a la bacitracina.Procedimiento: Se inocula el microorganismo en AS según técnica de Kirby-Bauer utilizando discos de Bacitracina (0.04 U). Interpretación: Sensible: Cualquier zona de inhibición del desarrollo. Consideraciones: Kirby Bauer (Difusión en disco)Inoculo sin incubación previaTiempo de lectura: 18 a 24 hs.Tº de incubación: 33º a 35º en CO2Recordar que el uso de discos de Bacitracina en forma directa en las placas primarias de cultivo puede dar como resultado un 40% a 50% de falsos negativos.

PRUEBA DE LA BACITRACINA

PRUEBA DE LA OPTOQUINA

Fundamento:Fundamento: se usa el disco de optoquina para diferenciar se usa el disco de optoquina para diferenciar entre S. pneumoniae (sensibles) y otras especies de entre S. pneumoniae (sensibles) y otras especies de estreptococos a hemolíticos (resistentes). La sensibilidad a la estreptococos a hemolíticos (resistentes). La sensibilidad a la optoquina es una medida de la fragilidad de la membrana optoquina es una medida de la fragilidad de la membrana celular bacteriana. celular bacteriana. Método:Método: se toma una suspensión de colonias puras en caldo se toma una suspensión de colonias puras en caldo Mueller Hinton o tioglicolato y con un hisopo se estría una Mueller Hinton o tioglicolato y con un hisopo se estría una placa de agar sangre de carnero al 5 %. Sobre la estría se placa de agar sangre de carnero al 5 %. Sobre la estría se coloca el disco de optoquina. Se incuba con atmósfera de CO2 coloca el disco de optoquina. Se incuba con atmósfera de CO2 al 5 % ( jarra con vela ). durante 24 hs. a 35° C. al 5 % ( jarra con vela ). durante 24 hs. a 35° C. InterpretaciónInterpretación: Sensible, cuando hay inhibición alrededor del : Sensible, cuando hay inhibición alrededor del disco. Se considera como punto de corte 16 mm. (discos de 10 disco. Se considera como punto de corte 16 mm. (discos de 10 mm) o 14 mm (discos de 6 mm). Resistente, cuando el mm) o 14 mm (discos de 6 mm). Resistente, cuando el crecimiento no es inhibido alrededor del disco. crecimiento no es inhibido alrededor del disco.

PRUEBA DE LA OPTOQUINA

PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN PARA BACILOS GRAM

NEGATIVOS

CITOCROMOOXIDASA O PRUEBA DE LA OXIDASA

Fundamento: El sistema citocromooxidasa, se halla en microorganismo aerobios, microaerófilos y anaerobios facultativos.

Procedimiento: Hacer una suspensión del microorganismo con solución fisiológica (inóculo) en un tubo de vidrio, agregar un disco (disco comercial de papel impregnado de tetrametil-para-difenilamina) se agita y antes de los 2 minutos se debe leer.

Interpretación: Un cambio de color del disco a rosado o violeta = prueba (+). Si no hay cambio de color el microorganismo es oxidasa negativo.

Consideraciones Esta prueba no puede realizarse con colonias que provengan de medios de cultivo que contenga hidratos de carbono ni indicadores, por lo que si se la va a realizar se debe incubar los microorganismos en un placa de AS o bien un TSA (tripteina-soya-agar)

OXIDASA

NEG POS

PRUEBA DE OXIDACIÓN FERMENTACIÓN (O-F)

Fundamento: Determina el metabolismo oxidativo o fermentativo de un hidrato de carbono o su NO utilización. Se usa el medio O-F de Hugh y Leifson que contiene peptonas e hidratos de carbono en una relación 1:5. Al ser menor la concentración de peptonas, hay menor producción de productos de oxidación a partir de los AA que tienden a elevar el pH y pueden neutralizar los ácidos débiles producidos por los microorganismos no fermentadores. Procedimiento: Se utilizan 2 tubos con el medio O-F, se hace la siembra con ansa de punta hasta el fondo de los dos tubos. Uno de los tubos queda expuesto al aire, y el otro se cubre con vaselina estéril.Interpretación:Microorganismos oxidativos: producen ácido solo en el tubo abierto, expuesto al O2 atmosférico. Por lo que solamente el tubo expuesto al aire atmosférico cambia su color original a amarillo.Microorganismos fermentadores: producen ácido en los 2 tubos. O sea que los dos tubos viran del verde al amarillo.Microorganismos sacarolíticos: son inertes a este medio que conserva su pH alcalino después de la incubación, conservando su color original.

PRUEBA OFOXIDACIÓN - FERMENTACIÓN

TSI (TRIPLE AZÚCAR HIERRO AGAR)

Fundamento: Detecta la fermentación de hidratos de carbono. El medio contiene: glucosa al 0.1%, lactosa 1%, sacarosa al 1% y peptonas; también tiene un indicador rojo de fenol y sulfato de hierro para evidenciar la formación de SH2.Procedimiento: El medio se fracciona en pico de flauta con una capa basal profunda (2 cm. por lo menos). Con el ansa en punta se siembra por punción y estría.

El medio no inoculado es anaranjado-rojizo o rojo pálido. Incubar 24 hs a 35º C.

AGAR TSI

TSI (TRIPLE AZÚCAR HIERRO AGAR)

Interpretación:

Fermentación de la glucosa (alcalino/ácido) Primero los microorganismos empiezan a fermentar la glucosa, produciendo

ácidos y virando totalmente el medio a color amarillo. Como solamente utilizan la glucosa, no pueden usar la sacarosa ni la lactosa, cuando la glucosa que se halla en baja concentración se consume (antes de las 24hs) los microorganismos comienzan a utilizar la peptonas con producción de amoníaco que alcaliniza el medio dando un color rojo, pero solamente en el pico, quedando el fondo ácido. Fermentación de glucosa, lactosa y sacarosa (ácido/ácido)

Como la lactosa y sacarosa están en una proporción 10 veces mayor que la glucosa, en un período de 24hs., la lactosa y sacarosa, aún no se consumen quedando ácido el medio o sea totalmente amarillo.

No hay fermentación de lactosa, sacarosa ni glucosa (alcalino/alcalino). Un microorganismo incapaz de obtener sus nutrientes de los hidratos de carbono, los obtiene de las peptonas. Cuando las peptonas son degradadas libran amoníaco y alcalinizan el medio. Produciéndose entonces intensificación del color.

VARIACIONES DEL TSI

SIM (SULFHÍDRICO – INDOL – MOVILIDAD)

Fundamento: Es un medio semi-sólido transparente que pone en evidencia la movilidad, la producción de triptofanasa y de SH2. Contiene:Triptofano: la enzima triptofanasa, lo desdobla, produce indol, que se pone de manifiesto con el reactivo de Erlich o KovacCitrato de hierro y amonio: los microorganismos productores de SH2 ennegrecen el medio de cultivoSi los microorganismos son móviles, al ser éste un medio semi-sólido se produce enturbiamiento del medio de cultivo, caso contrario solo crece en la punción, inmovil.Procedimiento: se inocula el microorganismo por punción con ansa de punta. Se deja incubar a 35ºC durante 24hs. y luego de este tiempo se agregan unas gotas del reactivo de Erlich o Kovac dejándolo resbalar por las paredes del tubo. Interpretación:Triptófano (+): observar la interfase, la aparición de un color rojo fucsia brillante por la formación de un complejo entre el indol y el p-dimetilaminobenzaldehido.M (+) / SH2 (-) enturbiamiento del medioM (+) / SH2 (+), se ennegrece todo el medioM (-) / SH2 (-) se observa crecimiento solamente en la estríaM (-) / SH2 (+), se observa precipitado negro alrededor de la estría (pero no ennegreciendo de todo el medio).

SIM

SIM

SH2+ Ind+ Mot+

SH2+ Ind- Mot-

SH2- Ind+ Mot+

SH2- Ind- Mot-

ROJO DE METILO – VOGES PROSKAUER:

Fundamento: El acido pirúvico, un compuesto fundamental formado en la fermentación de la glucosa, es metabolizado aún mas a través de cierto numero de vías metabólicas. Una de ellas da como resultado la producción de acetoína (acetil-metil-carbinol) un producto final de reacción neutra. En presencia de oxigeno e KOH al 40%, la acetoína es convertida en diacetilo y el α naftol sirve como catalizador para producir un complejo de color rojo.Procedimiento: Se usa el mismo caldo de enriquecimiento para las dos pruebas (2ml), se hace la inoculación del microorganismo, y se lleva a incubar a 35ºC durante como mínimo 24-72hs..Luego se lo divide en dos partes, una para la prueba de RM y otra para la de VP.Rojo de metilo: se agregan 3 gotas del reactivo de metilo, si en la superficie del medio aparece un color rojo intenso es RM (+) = microorganismos que utilizan la glucosa fermentándola hasta llegar a un pH menor a 4,4.VP: Se agrega 0.6 ml de alfa-naftol seguidos de 0,2 ml de KOH al 40%. Es esencial que los reactivos se agreguen en este orden. El tubo se sacude suavemente y luego se deja quieto de 10 a 15 min. La aparición de color rojo = prueba (+) (presencia de acetil-metil-carbinol).

Prueba de VP y RMPrueba de VP y RM

ONPG O-NITROFENIL-β-GALACTOPIRANÓSIDO

Fundamento: Lo microorganismos lactosa (+) tienen β-galactosidasa y permeasa, dos enzimas necesarias para la formación de ácidos a partir de la lactosaLa permeasa es necesaria para que la molécula de lactosa ingrese en la célula bacteriana.Hay algunos microorganismo que son falsos lactosa (-) por carecer de permeasa, pero sí tienen β-galactosidasa, en realidad son lactosas (+).Esta prueba se hace con los microorganismo que dan lactosa (-)

Procedimiento: Hacer un inóculo con SF estéril, agregar un disco de papel comercial, se agita y antes de los 2 minutos se debe leer. Interpretación: Un color amarillo intenso nos indica que el microorganismo es productor de β-galactosidasa= prueba (+). Consideraciones Se hace un inóculo del microorganismo en solución fisiológica estéril, se agrega un disco de papel. Se lleva a incubar a 37ºC durante 24hs.

ONPG

CITRATO

Fundamento: Sirve para poner de manifiesto aquellos microorganismos que utilizan el citrato como única fuente de carbono, el indicador es azul de bromo timol.

Procedimiento: El color original del medio es verde, y se encuentra fraccionado en pico de flauta, la siembra se hace por estría, se incuba 24-72hs a 35ºC.

Interpretación: Si el microorganismo utiliza citrato, se produce alcalinización del medio de cultivo pasando éste a color azul intenso, lo cual indica prueba positiva para el citrato.

Citrato

UREA

Fundamento:Fundamento: Pone de manifiesto a aquellos one de manifiesto a aquellos microorganismos que poseen la enzima ureasa.microorganismos que poseen la enzima ureasa.

Procedimiento:Procedimiento: El medio fraccionado en pico de flauta El medio fraccionado en pico de flauta contiene urea y rojo de fenol como indicador, el color contiene urea y rojo de fenol como indicador, el color original del medio es amarillo (o sea ácido) La siembra original del medio es amarillo (o sea ácido) La siembra se realiza con ansa de punta tanto en profundidad como se realiza con ansa de punta tanto en profundidad como en la superficie. Se deja incubar 24 hs a 35º C.en la superficie. Se deja incubar 24 hs a 35º C.

InterpretaciónInterpretación: Si el microorganismo es productor de : Si el microorganismo es productor de ureasa, desdobla la urea produciendo amoníaco, ureasa, desdobla la urea produciendo amoníaco, consecuentemente produce alcalinidad que se consecuentemente produce alcalinidad que se manifiesta porque el medio toma un color fucsia.manifiesta porque el medio toma un color fucsia.

Urea

Positivo Negativo

FENIL-ALANINA-DESAMINASA

Fundamento: Sirve para poner de manifiesto aquellos microorganismos que poseen la enzima FENIL-ALANINA-DESAMINASA. El medio se prepara con un pico de flauta largo, pues la lectura se hace sobre la superficie del medio de cultivo.

Procedimiento: Se siembra sobre la superficie del medio solamente, se incuba 24 hs a 35º C, se revela con cloruro férrico.

Interpretación: El color original es amarillo, si el microorganismo es productor de la enzima, al agregar sobre el medio cloruro férrico, ésta se pone de manifiesto, dando a la superficie un color verde intenso.

Fenilalanina FAL

(-) (+)

AMINOÁCIDOS / DESCARBOXILASAS

Fundamento: Las descarboxilasas son enzimas sustrato-específicas (presentes o no en los microorganismos) capaces de reaccionar con la porción carboxilo (COOH) de AA formando aminas de reacción alcalina. Esta reacción, conocida como descarboxilación, forma C02 como producto secundario. Cada descarboxilasa es específica para un aminoácido.Lisina, arginina y ornitina son los aminoácidos evaluados de rutina en la identificación de enterobacterias. El medio Moeller es la base (semi-sólida) que se emplea con más frecuencia. El aminoácido se agrega a la base. El color original es lila. Procedimiento: Se inoculan por punción 2 tubos y se sellan con aceite mineral. Uno de los tubos contiene el AA y el otro no.Interpretación: Si el aminoácido es descarboxilado, se forman aminas alcalinas y el medio pasa a violeta más intenso, POSITIVO. Si no es descarboxilado pero fermenta la glucosa, vira al amarillo por la formación de ácidos, NEGATIVO.

LISINA DECARBOXILASA

LIA:Agar de ensayo para la demostración simultánea de lisina decarboxilasa(LD) y de la formación de hidrogeno sulfurado (H2S) para la identificaciónde enterobacterias.► La lisina puede ser descarboxilada por microorganismos LD positivasque la transforman en la amina cadaverina. Esto produce un viraje al violeta del indicador de pH púrpura de bromocresol,puesto que la descarboxilación sólo tiene lugar en medio ácido (pH inferior a 6.0). Es necesario que se produzca previamente la acidificación del medio de cultivo, por fermentación de la glucosa. Este medio de cultivo solo puede utilizarse para la diferenciación de bacterias que fermentan glucosa.► Los microorganismos LD negativos, pero fermentadores de la glucosa,producen un viraje al amarillo de la totalidad del medio de cultivo. Laincubación prolongada puede ocasionar alcalinización en la zona de lasuperficie del medio de cultivo y en consecuencia, se produce un viraje alvioleta. La formación de H2S produce una coloración negra debido al sulfuro de hierro producido.

Lisina Hierro Agar (LIA)

LIA – SH2 - LIA + SH2 - LIA + SH2 -