BALDERAS MONTOYA JAZMÍN

MICROSCOPIO ELECTRONICO

DEFINICION

El primer microscopio electrónico fue diseñado por Ernst Ruska y Max Knoll entre 1925 y 1930, quienes se basaron en los estudios de Louis-Victor de Broglie acerca de las propiedades ondulatorias de los electrones.

Microscopio que usa electrones para iluminar el objeto que se desea observar y lo refleja en una pantalla fluorescente, obteniéndose imágenes más amplificadas que en un microscopio convencional.

Tipos de microscopios electrónicos

Microscopio electrónico de TRANSMICION

• El microscopio electrónico de transmisión emite un haz de electrones dirigido hacia el objeto cuya imagen se desea aumentar.

• Una parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada de la muestra.

• Para utilizar un microscopio electrónico de transmisión debe cortarse la muestra en capas finas.

• Los microscopios electrónicos de transmisión pueden aumentar la imagen de un objeto hasta un millón de veces.

• La longitud de onda de los electrones depende del voltaje de aceleración usado y tienen una longitud de onda mas corta que el microscopio de luz visible

• La longitud usual es de 0.05 angstroms

• ¿Que son los angstroms?

Unidad de medida equivalente a la diez mil millonésima parte del metro, 0.000,000,000,1 metros, cuyo símbolo es Å, utilizada principalmente para indicar las longitudes de onda de la luz visible. En un centímetro caben 10 millones de angstroms.

Microscopía electrónica de transmisión

PASOS NECESARIOS EN EL PROCESAMIENTO DEL TEJIDO ANTES DE SER OBSERVADO:

1. FijaciónEl tejido debe ser fijado, endurecido y preservado con tetraóxido de Osmio y glutaraldehído, con un cuidadoso manejo del PH para mantener membranas y proteínas celulares en una malla tridimensional. 2- Contraste Los organelos y estructuras de interés deben ser electro-densas y contrastar con el fondo (background)

Se contrasta con:-Tetraóxido de osmio-Acetato de uranilo o citrato de plomo Microfotografía de una

mitocondria

4- Inclusión

El espécimen deshidratado se coloca en óxido de propileno y resinas epóxicas o acrílicas, las cuales se endurecen y forman un bloque sólido de plástico muy duro.

5- CorteSe emplea un ultramicrotomo que permite rebanar el tejido en cortes ultrafinos con una cuchilla de diamante, logrando cortes del orden de los 100nm

6- Observación y toma de micrografías

Microscopio electrónico de BARRIDO

• En el microscopio electrónico de barrido (MEB) la muestra es recubierta con una capa de metal delgado, y es barrida con electrones enviados desde un cañón.

• Un detector mide la cantidad de electrones enviados que arroja la intensidad de la zona de muestra, siendo capaz de mostrar figuras en tres dimensiones, proyectados en una imagen de TV.

• Su resolución está entre 3 y 20 nm, dependiendo del microscopio.

• Permite obtener imágenes de gran resolución en materiales pétreos, metálicos y orgánicos. La luz se sustituye por un haz de electrones, las lentes por electroimanes y las muestras se hacen conductoras metalizando su superficie.

Microscopía electrónica de barridoPreparación de la muestra

1. Fijación Se trata a la muestra de la misma manera que el proceso de fijación del M.E.T

2. Deshidratación El método mas utilizado es el deshidratación por punto crítico en CO2 (El agua pasa rápidamente de estado líquido a vapor sin ebullición)

3- CorteAlgunos especímenes no ameritan ser rebanados, pues se observara la superficie del mismo

Células de la sangre

4- ContrasteEl espécimen deshidratado es revestido por una capa de grafito o de oro

5-Observación y toma de microfotografías

Granos de polen

Tipos de microscopios electrónicos de transmisión

Detector de electrones secundarios (SE): es el que ofrece la típica imagen en blanco y negro de la topografía de la superficie examinada. Es la señal más adecuada para la observación de la muestra por ser la de mayor resolución.

Detector de electrones retrodispersados (BSE): también ofrece una imagen de superficie aunque de menor resolución. Su ventaja consiste en que es sensible a las variaciones en el número atómico de los elementos presentes en la superficie. Si tenemos una superficie totalmente lisa observaremos distintos tonos de gris en función de que existan varias fases con distintos elementos.

DIFERENCIAS

Video sobre el uso del microscopio de barrido

https://www.youtube.com/watch?v=ETgHX603L24