El desarrollo del ADN recombinante, ha dado tresdesarrollos científicos importantes que puedenconsiderarse como las piedras angulares de latecnología: Introducir ADN en E. Coli (transformación) y

después seleccionar las bacteriastransformadas.

Purificar el ADN plasmídico con altosrendimientos.

Descubrimiento y la purificación de lasenzimas de restricción.

Con estos tres sencillos procedimientos puedellevarse a cabo la ingeniería genética.

Se ha descrito en muchas especies de bacterias quetienen la capacidad de fijar ADN en forma natural.Sólo un pequeño porcentaje de una poblaciónbacteriana tiene ésta capacidad, y se dice que éstaspocas células son competentes.

En E. Coli, las células competentesno existen en forma natural, sinoque tienen que fabricarse portratamiento con soluciones de CaCL2en frío. Después de éstetratamiento, las células se mezclancon el ADN que va a introducirse,se les somete a un ligero choquetérmico y se les permite que serecuperen.

No se conoce el mecanismo preciso por el cualentra el ADN en la bacteria. El proceso no esmuy eficiente, pero puede lograrse unatransformación de 10^7 bacterias por organismode ADN, que es suficiente para los objetivos dela ingeniería genética

Son moléculas de ADN que se mantienen en

forma autónoma y que se encuentran con

frecuencia en bacterias y en algunos

eucariontes inferiores.

No son esenciales para el crecimiento, pero

confieren algunas propiedades poco

usuales a las células que los albergan. Los

plásmidos se replican independientemente

del cromosoma y algunas veces se les

describe como ADN extracromosómico.

La mayoría de los

plásmidos son

moléculas circulares

de ADN, aunque se han

encontrado modelos

lineales.

Las propiedades que confierenlos plásmidos sonextremadamente variadas.

El primer plásmido que

se identificó en E. Coli

confiere la habilidad de

participar en el

intercambio conyugal

simple de formación

genética

Éste plásmido se conocecomo factor F (DeFertilidad). El factor F esbastante grande, delorden de 96 000 pares debases. También estransmisible, es decir,que tiene la capacidadde promover el acto deconjugación otransferirse de unacélula bacteriana a otra

Otros plásmidos que

son similares y que en

algunos casos están

relacionados con el

factor F, son los

factores R (

resistencia). Éstos

confieren resistencia a

los antibióticos y

también son

transmisibles y

provocan graves

problemas clínicos.

Algunos plásmidos proporcionan

propiedades poco usuales a las bacterias

huésped por ejemplo los plásmidos TOL

permiten que Pseudomonas sp degraden el

tolueno y lo utilice como fuente de carbono

Fig. Pseudonomas sp

Todos los plásmidos que se

han descrito hasta ahora

son grandes, algunos

plásmidos como el

Rhizobium tiene hasta 300

Kb de longitud y solo

existen una o dos copias por

cada célula. La purificación

de estos plásmidos es difícil

y en general los

rendimientos son bajos

Sin embargo también se conocen muchos

tipos de plásmidos pequeños de menos de

0 Kb. Éstos por lo general no son

transmisibles y con frecuencia sólo

confieren un fenotipo simple a la bacteria

huésped.

.Existen de 20 a 40

copias por célula y

pueden purificarse con

facilidad.

Uno de los primeros deestos plásmidos que secaracterizó se aisló deE. Coli y se le llamóColE1 . Produce unaproteína llamadacolicina E1 que destruyeotras cepas de E. Coli.Sin embargo lasbacterias que contienenéste plásmidos sonresistentes a la colicinaE1

*Alvarado Muñoz Carlos Enrique

*Balam Villarreal Wendy L.

*Montero Espinosa Leopoldo

*Ortega Morales Claudia Margarita