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USO DE LA CAPTURA INMUNOMAGNÉTICA EN LA ELIMINACIÓN DE INTERFERENCIAS EN LA DETECCIÓN DE Legionella sp POR EN LA DETECCIÓN DE Legionella sp POR PCR Y PMA-PCR.
Inmaculada Solís 1, Marta Gallén 1, Miguel Martínez2, Guillermo Rodríguez 21 Iproma, S.L., 2Biótica, S.L.
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VI Congreso Nacional Legionella y Calidad Ambiental. Terrasa 2015
PROBLEMA
• Resultados no concluyentes en PCR debido a la
presencia de inhibidores en las muestras reales.
• Muestras de agua regenerada, torre de refrigeración
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y fuentes ornamentales.
SOLUCIÓN
• Separación inmunomagnética (SIM)
CLEANPID
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Esquema de trabajo
7Proceso de compras
RESULTADOSRESULTADOSRESULTADOSRESULTADOS
Referencia RECUENTO PCRMUESTRA UFC / mL Ct
1 a 26400 38,15
1 b 26600 31,29
2 a 27400 30,59
2 b 28000 29,6
3 a 29000 Inhibición
3 b 34000 Inhibición
4 a 34000 36,74
4 b 29000 39,88
Referencia RECUENTO PCRMUESTRA UFC / mL Ct
10 a 27000 36,33
10 b 30000 37,85
11 a 19000 36,19
11 b 21000 35,05
12 a 9700 31,79
12 b 11000 40,04
13 a 5400 34,92
13 b 6100 36,25
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4 b 29000 39,88
5 a 30000 37,75
5 b 27000 35,59
6 a 34000 29,38
6 b 32000 33,33
7 a 25000 27,89
7 b 27000 34,46
8 a 16000 25,86
8 b 14000 37,11
9 a 0 34,64
9 b 0 26,28
10 a 27000 36,33
10 b 30000 37,85
14 a 18000 26,51
14 b 22000 31,89
15 a 38000 Inhibición
15 b 41000 17,77
16 a 3200 37,49
16 b 2900 Inhibición
17 a 5700 26,36
17 b 6600 38,56
18 a 3400 34,23
18 b 3700 32,7
19 a 0 35,06
19 b 0 32,86
20 a 3200 Inhibición
20 b 3900 Negativa
PCR del sobrenadante
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sobrenadante
RESULTADOS
Referencia PCRMUESTRA Ct
3 a Inhibición
Inhibición
Inhibición
3 b Inhibición
Inhibición
Inhibición9 a 34,64
Referencia PCRMUESTRA Ct
16 a 37,49
22,70
16 b Inhibición
22,28
20 a Inhibición
Negativa
20 b Negativa
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10
9 a 34,64
41,47
19,57
9 b 26,28
37,77
19,21
15 a InhibiciónNegativa
26,97
15 b 17,77
Inhibición
26,33
20 b NegativaNegativa
• Mejora de la detección.
• Aumento de la repetibilidad
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MUESTRA ORIGINAL
FILTRACIÓN
MUESTRA
PCR
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MUESTRA CONCENTRADA PCR, con
separación de PM
62 muestras concentrados reales + Inoculo
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62 muestras reales
13
12% 12% 12% 12% 3% 3% 3% 3%
SIM
Muestra nº 6
Muestra nº 16
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PBS Agua
Inhibición 31,26
Inhibición 31,63
38,24 30,39
Inhibición 31,15
Inhibición 32,2
PCR
PMA - PCR
MUESTRA nº 6
14
Inhibición 32,2
Inhibición 30,18
PMA - PCR
PBS Agua
34,02 35,29
32,23 35,64
31,25 33,21
Inhibición 40,73
Inhibición 41,58
Inhibición > 42
PCR
PMA - PCR
MUESTRA nº 16
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Comparativa Cleanpid Qiagen
Manipulación Baja Medio - alta
Instrumental Rack magnético Microcentrífuga
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Coste material 3.0 – 3.5 euros 4.0 – 4.5 Euros
Interferencias 3% 12%
Repetibilidad SI Variable
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