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Proteínas 1
Objetivo:
• Extraer la caseína de la leche y reconocer su naturaleza proteica
Materiales y sustancias:
• Vaso de bohemia • Varilla de vidrio • Mechero • Soporte • Tela metálica • Gradilla • Tubos de ensayo • Termómetro
• Papel de filtro• Leche descremada • Ácido etanoico 2.0 M• Hidróxido de sodio al 10%• Sulfato cúprico al 1%• Ácido nítrico concentrado
Fundamento teórico:• La leche es:
• a) una emulsión de materia grasa (triglicéridos) en un medio acuoso.
• b) una suspensión de materia proteica (caseína, albúmina, globulina) en un medio acuoso.
• c) una solución acuosa de sales minerales y lactosa. Dentro contiene además lecitina, vitaminas, enzimas, nucleótidos y gases disueltos.
Componentes proteicos:
• Caseína: conjunto de proteínas fosforadas. Constituye el 80% de los compuestos nitrogenados.
• Proteínas del lactosuero: albúmina, globulina. Se insolubilizan por acción del calor antes de los 100ºC.
• Proteosas- peptonas: glicoproteínas poco abundantes en la leche.
Caseína • Es una proteína de carácter ácido debido a su
elevada proporción de aminoácidos ácidos (PI = 4.6). La caseína humana es mas rica en cistina y en glúcidos que en la vaca lo que la hace más apropiada para el bebé.
• Reacciona con las bases formando caseinatos utilizados en la industria para la fabricación de colas y adhesivos. Tambien se utilizan en la industria textil.
• Se precipita por acción de los ácidos. Esto puede ocurrir a través de la formación de acido láctico por acción bacteriana sobre la lactosa o mediante el agregado de un ácido hasta alcanzar el pH correspondiente a su punto isoeléctrico. La precipitación puede producirse por acción enzimática de la quimiotripsina.
Ensayos de Biuret y Xantoproteico
• Permiten determinar el carácter proteico de la caseína. El ensayo de Biuret muestra la presencia de enlaces peptídicos.
• El Xantoproteico identifica la presencia de restos aromáticos, en particular el grupo fenolico de la tirosina.
Procedimiento: 1ra parte Extracción
• 1) Coloque aproximadamente 25ml de leche descremada en un vaso de bohemia.
• 2) Caliente hasta aproximadamente 40ºC agitando con varilla de vidrio.
• 3) Adicione ácido etanoico 2.0M (gota a gota) agitando en forma continua hasta coagulación total.
• 4) Separe el coágulo de caseína del suero mediante filtración.
• 5) Seque cuidadosamente la caseína con la ayuda del papel de filtro.
• 6) Separe dos porciones del sólido obtenido de aproximadamente de 1 cm3 y colóquelas en dos tubos de ensayo.
2da parte: Caracterización
• a) Reacción de Biuret: Agregue sobre la caseína de uno de los tubos 20 gotas de NaOH al 10%. Luego agregue 2 gotas de solución de CuSO4 al 1%.
• b) Reacción Xantoproteica: Agregue sobre la caseína del segundo tubo 10 gotas de HNO3 concentrado.
TUBO ENSAYO OBSERVACIONES
1 Biuret Color Violeta
2 Xantoproteico Color Amarillo
Biuret Xantoproteico
Luego tomamos ciertas muestras y las hicimos reaccionar; estos fueron los
resultados obtenidos:
Muestra Biuret Xantoproteica
Caseína + +
Ovoalbúmina + +
Aspartamo - -
Gelatina + -
Glicina - -
Reacción de Biuret
1 2 3 4 5
Reacción de Biuret:
• 1- Caseína
• 2- Ovoalbúmina
• 3- Gelatina
• 4- Aspartamo
• 5- Glicina
Reacción Xantoproteica
1 2 3 4 5
Reacción Xantoproteica:
• 1- Glicina
• 2- Aspartamo
• 3- Gelatina
• 4- Ovoalbúmina
• 5- Caseína
Proteínas 2
Objetivos:
• Demostrar que mediante diálisis, las sales atraviesan la membrana y las proteínas quedan dentro.
Materiales:
• Dializador
• Gelatina + NaCl en solución acuosa
• Vaso de Bohemia
• NaOH al 10%
• CuSO4 al 1%
• AgNo3
PROTEÍNANaCl
Procedimiento:
• Coloque la solución acuosa de gelatina + NaCl dentro del dializador
• Luego de un tiempo, para comprobar que la dialización se realizó, tomar 2 muestras de la solución del interior del dializador y 2 muestras de la solución exterior.
• Hacer reaccionar una de las muestras del interior y una del exterior con Biuret; y, por consiguiente, las dos muestras restantes con AgNO3
Los resultados obtenidos son:
Muestra Biuret AgNO3
Interior + -
Exterior - +
EXTERIOR INTERIOR
CONCLUSIÓN:
• Si bien en la muestra del interior también dio positiva con nitrato de plata, la muestra del exterior dio negativa con Biuret; por lo tanto se demuestra que las proteínas quedaron contenidas dentro del dializador y que el cloruro de sodio sí atravesó la membrana.
6to M1
• Katerin Sinich
• Mariana Salaberry
• Douglas Arrillaga
• Viviana Bennasar
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