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Manual de Prcticas de Histologa
1.2 Tcnicas de tincin utilizadas en HistologaOBJETIVO
Conocer las caractersticas elementales de las tinciones ms
empleadas, as como el montaje de la muestra.
INTRODUCCIN
En ciertos casos, cuando es preciso destacar alguna estructura
celular o tisular, se pueden emplear ciertas sustancias colorantes
inocuas para la vida de las clulas y que tampoco modifican la
estructura ni interfieren con sus funciones. A este procedimiento
se le conoce como coloracin vital.
La coloracin vital puede ser de dos tipos:
Coloracin intravital. Consiste con la administracin de
colorantes vitales a travs de las vas digestiva e intratraqueal,
sangunea, linftica, subcutnea o intraperitoneal para demostrar
actividad fagoctica de ciertas clulas (macrfagos del pulmn o del
tejido subcutneo, clulas de Kpffer o las dendrticas fagocticas de
los rganos linfticos) o calcular la cantidad de determinados
organelos celulares como las mitocondrias. Las soluciones de uso ms
comn son la tinta china, carmn de litio y azul de tripn (partculas
que demuestran la capacidad fagoctica).
Coloracin supravital. Se emplean colorantes que se aplican a
clulas o porciones tisulares extradas de organismos vivos. Este
tipo de coloracin demuestra de manera especfica componentes
celulares como mitocondrias con el verde de Jano, los grnulos de
las clulas cebadas con el rojo neutro, la sustancia
granulofilamentosa de los reticulocitos con el azul brillante de
cresilo, las ramificaciones nerviosas con el azul de metilo o el
DNA y RNA de las clulas con naranja de acridina (mediante el
microscopio de fluorescencia).
Coloracin o tincin
Los cortes de los tejidos adheridos a los portaobjetos estn
listos para colorearse, una vez realizado el procedimiento de la
prctica 1. El procedimiento de coloracin o tincin consiste en que
una estructura celular o tisular adquiere especficamente un color
bajo la accin de una sustancia colorante. Se considera que una
estructura se ha coloreado o teido cuando al lavarse con el lquido
que disuelve el colorante no se decolora. Es una sustancia
colorante la que puede transferir su color a otro cuerpo. Existen
dos teoras que explican el procedimiento de la coloracin:
Teora fsica. Presupone que la coloracin es un proceso fsico de
adsorcin. De acuerdo con esto, las partculas de las sustancias
colorantes disueltas penetran en los espacios intercelulares e
intracelulares en los que se mantienen adheridas en razn de la
cohesin molecular. Por ejemplo, la coloracin de las grasas o lpidos
es una tincin puramente fsica, pues el Sudn III o el Sudn IV se
absorben por la facilidad que tienen para disolverse es estas
sustancias.
Teora qumica. El colorante se une a la sustancia coloreable
ntimamente debido a la presencia de agrupaciones moleculares cidas
o bsicas en los componentes celulares o tisulares, que se unen a
los cromgenos bsicos o cidos de los colorantes, respectivamente. As
se forman sales insolubles. De acuerdo con esta teora, los
colorantes se unen (ligan) a los tejidos por enlaces inicos,
covalentes o de hidrgeno.
El enlace inico o electrosttico ocurre cuando el colorante y la
sustancia a teir desarrollan diferentes cargas elctricas y entonces
se atraen la una a la otra; por ejemplo, el citoplasma se colorea
porque las protenas citoplasmticas poseen carga elctrica (+) y las
partculas del colorante tienen carga elctrica (-).
Existen varios criterios para clasificar los colorantes: Por su
origen, pueden ser naturales y artificiales (sintticos). Los
colorantes naturales proceden de:
1. Animales, como el carmn, que se extrae de la cochinilla.
2. Vegetales., como la hematoxilina, obtenida de la corteza de
un rbol, el palo de Campeche.
En cambio, los colorantes artificiales o sintticos son productos
derivados de la destilacin de la hulla o carbn. Genricamente se
conocen como colorantes derivados de la anilina. Los colorantes
artificiales y sintticos se clasifican en:
1. cidos. Son sales cuya parte bsica en incolora y el componente
cido posee color. As, en el colorante eosina o eosinato de sodio la
propiedad colorante se debe al cido eosnico y no a la base, el
sodio. Los colorantes cidos tienen carga elctrica negativa, por lo
tanto la designacin correcta sera la de colorantes aninicos. Las
sustancias que atraen elctricamente a los colorantes cidos se
denominan acidfilas y qumicamente estn constituidas por componentes
bsicos o alcalinos. Son ejemplos de ellas la eosina, amarillo de
metanilo, fucsina cida, cido pcrico, verde rpido, naranja G,
safranina, azul de anilina, y otros.
2. Bsicos. Son sales que poseen la base coloreada y la porcin
cida incolora. Por ejemplo, el azul de metileno, o clorhidrato de
azul de metileno debe su propiedad colorante a la base azul de
metileno y no al cido clorhdrico, que es incoloro. Poseen una carga
elctrica positiva y por lo tanto son colorantes catinicos. Se les
conoce tambin como colorantes nucleares porque tienen afinidad por
los cidos nucleicos (DNA y RNA). Las sustancias teidas por los
colorantes bsicos se denominan basfilas y estn constituidas por
componentes cidos. Son ejemplos de ellas la hematoxilina, rojo
nuclear, azul de metileno, tionina, azul de toluidina, fucsina
bsica, entre otros.
3. Neutros. Son sales en las que tanto la parte bsica como la
cida proporcionan color; por ejemplo el eosinato de azul de
metileno. Estos colorantes tienen la propiedad de teir de una
manera simultnea los componentes nucleares y los citoplasmticos e
incluso pueden emitir colores distintos a determinados componentes
citoplasmticos, como las granulaciones especficas de los
granulocitos (cierto tipo de glbulos blancos o leucocitos). Forman
parte de las frmulas colorantes para frotis de sangre, como los
colorantes de Wright, May Grunwald, Giemsa, Leischman, y otros.
4. Indiferentes. No forman sales. Son compuestos no inicos
incapaces de producir la disociacin electroltica. Son insolubles en
agua, pero solubles en solventes orgnicos como el alcohol y tambin
en las grasas o lpidos y, aunque poseen color, en realidad, es
sentido estricto, no son colorantes. Sobre la base de su
solubilidad en las grasas, estas sustancias se emplean para
demostrar la presencia de grasas en clulas y tejidos, pues tien
selectivamente los lpidos. Son ejemplos de ellas el Sudn negro,
Sudn III, Sudn IV y rojo oleoso.
Existe una serie de procedimientos por intermedio de los cuales
clulas y tejidos se tien por lo colorantes. De acuerdo con ellos,
las coloraciones se clasifican en:
1. Coloracin directa o sustantiva: se denomina as a la tincin
que se ejerce sobre clulas y tejidos cuando stos se ponen en
contacto con la solucin colorante. El resultado indica una
verdadera afinidad entre tejido y colorante. Ejemplo: la tincin de
los ncleos por el azul de metileno.
2. Coloracin indirecta o adjetiva: para que se lleve a efecto la
coloracin es indispensable recurrir al empleo de sustancias
intermediarias que faciliten la adherencia del colorante a las
estructuras tisulares. La sustancia intermediaria utilizada se
denomina laca. La mayora de las soluciones colorantes de
hematoxilina requiere un mordiente para que el colorante tenga
efecto.
3. Coloracin progresiva: se refiere a la marcha misma de la
coloracin y consiste en que los tejidos se ponen en contacto con la
solucin colorante para que, conforme transcurre el tiempo de
coloracin, el tejido, de manera progresiva, alcance la intensidad
de tincin deseada. En dicho momento se detiene la coloracin
mediante lavado y eliminacin del colorante sobrante.
4. Coloracin regresiva: en este caso los tejidos se
sobrecolorean con la solucin de coloracin para someterlos despus a
la accin de una sustancia denominada diferenciador, cuya funcin
consiste en extraer parte de l colorante. Mediante la observacin al
microscopio, el proceso de diferenciacin se detiene cuando los
componentes celulares o tisulares a colorear alcanzan la tincin
deseada.
5. Coloracin simple: se denomina as al procedimiento de
coloracin en el que se utiliza un solo colorante para teir algn
componente celular o tisular. Por ejemplo, teir los ncleos con
tionina.
6. Coloracin compuesta o combinada: es la aplicacin de varios
colorantes a una muestra de tejido u rgano con objeto de destacar
mediante colores diferentes estructuras especficas que forman parte
de ella. Segn esta clasificacin, la coloracin puede ser a su vez:
Simultnea: cuando en una misma solucin de coloracin se mezclan
varios colorantes. En este caso los tejidos reciben la tincin en el
mismo momento. Ejemplos: las soluciones colorantes de algunos
tricrmicos como el de van Gieson (fucsina cida y cido pcrico) el de
Mallory (azul de anilina y naranja G) o el de Shor (verde
brillante, fucsina cida y naranja G).
Sucesiva: esta coloracin consiste en aplicar a los tejidos
soluciones sucesivas de varios colorantes con la finalidad de que
ciertos componentes se tian con algunos de ellos. El ejemplo ms
ilustrativo es la coloracin de hematoxilina y eosina (HyE), en la
que los ncleos se tien primero con la hematoxilina y despus la
eosina se encarga de colorear el citoplasma.
7. Coloracin ortocromtica: se conoce as a la accin de coloracin
que ejerce un colorante al teir una determinada estructura con su
propio color. La gran mayora de los colorantes produce coloracin
ortocromtica.
8. Coloracin metacromtica: es una reaccin de coloracin en la que
un colorante, adems de proporcionar su propio color a una
estructura celular o tisular, tambin tie de distinto color otras
estructuras. La tionina y el azul de toluidina colorean de azul los
ncleos y otras estructuras basfilas, pero, al mismo tiempo, ciertos
componentes tisulares como la mucina, la matriz cartilaginosa o el
cido hialurnico se colorean de violeta o rosado.
9. Coloracin pancromtica: se produce por la actividad de tincin
de los colorantes neutros. En este caso, tanto la porcin bsica como
la cida de estos colorantes ejerce su accin de tintura, pero adems
ciertos componentes celulares se tien de colores diferentes a los
originales y adquieren tonalidades que resultan de la mezcla de
ellos. El ejemplo ms claro de esta accin de coloracin se produce
cuando se tien frotis de sangre. El empleo de las soluciones
colorantes de Wright, May Grunwald, Giemsa o Leischman da lugar a
que las plaquetas y los leucocitos (granulocitos y mononucleares)
muestran granulaciones especficas e inespecficas fcilmente
diferenciables por esta capacidad pancromtica del colorante.
Montaje. Concluido el proceso de tincin de los cortes, stos de
deben colocar en condiciones de proteccin para poderlos utilizar
muchas veces sin que se deterioren. Para alcanzar tales propsitos
se recurre al ltimo procedimiento, que es el montaje.
Este procedimiento supone la colocacin encima del corte
coloreado y difano de una gota de una sustancia adherente, diluida
casi siempre en xilol (resina natural como el blsamo de Canad o
resinas sintticas cuyos ndices de refraccin son similares a los del
vidrio) y sobre ellos una laminilla cubreobjetos, con cuidado de no
dejar burbujas de aire dentro de la resina. A continuacin se deja
que el xilol se evapore y la resina adquiera solidez suficiente
para ello; las lminas se colocan en una platina caliente (45 a 50)
durante 24 a 48 horas, tiempo suficiente para que estn listas y
puedan observarse.
RESPUESTAS A LAS PREGUNTAS DE CORRELACIN
1. Clasificacin de los colorantes de acuerdo a sus propiedades
qumicas
2. Describa brevemente las diferencias de coloracin supravital e
intravital
3. Enumere las semejanzas y diferencias entre los distintos
tipos de tinciones
OBSERVACIONES
CUESTIONARIO
1. Por qu la tincin hematoxilina-eosina permite distinguir los
ncleos del citoplasma?
2. Describir la tincin de PAS y en que situaciones se
utiliza?
3. La tincin histolgica es auxiliar del diagnostico? Justifique
su respuesta
DISCUSIN
CONCLUSIN
REFERENCIAS CONSULTADAS
BIBLIOGRAFA
[1] Jos de Jess Abad Moreno y colaboradores, La prctica
Histolgica, Segunda Edicin, 155 pp, Ed Mc Graw Hill, Mxico,
2002.
Dra. en C. Olga Yadira Barbosa Cisneros
Dra. en C.Ma. Guadalupe Solis Recendez
Q.F.B. Juan Armando Flores de la Torre
M. en C. Elena Donaji Ramrez Alvarado
