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Análisis del agua
Objetivos
S Determinar la presencia de bacterias coliformes en una muestra de agua
Introducción
S Las tres pruebas básicas para determinar la presencia de bacterias coliformes (asociada con materia fecal) en el agua son:
S La prueba presuntiva
S La prueba de confirmación
S La prueba completa
Pruebas para determinar bacterias coliformes
S Las pruenbas se realizan secuencialmente para cada una de las muestras.
S Bacterias coliformes S Bacterias gram negativas
S Bacilos
S No formadoras de esporas
S Anaerobos fermentativos
S Fermentan lactosa
Coliformes fecales S Incluyen E.coli algunas Klebsiella y Enterobacter spp. Microbiología de Agua
¿Qué es un coliforme?
Escherichia coli
Citrobacter freundaii
Klebsiella pneumoniae
Enterobacter aerogenes
Grupo de especies de varios géneros
Prueba Presuntiva
S Es una prueba específica para determinar la presencia de bacterias coliformes.
S Se realiza agregando alícuotas de muestra de agua que se quiere evaluar en caldo de fermentación que contienen lactosa y que posea un tubo invertido.
S Un resultado positivo de esta prueba indica que la muestra de agua no es potable.
Prueba de Confirmación
S Confirman la presencia de bacteria coliformes en muestras de aguas que dieron resultados positivos a las pruebas presuntivas.
S Un resultado positivo de una prueba presuntiva debe confirmarse ya que resultados positivos pueden deberse a organismos de origen no coliformes que no son reconocidos como contaminantes causados por materia fecal.
Coliformes
S En la prueba de confirmación se usa Eosine Methylene Blue (EMB) un medio de cultivo selectivo y diferencial o Endo Agar.
S El EMB contiene azul de metileno que inhibe el crecimiento de organismos gram positivos ( selectivo).
S En un ambiente ácido, EMB forma un complejo que se precipita sobre las colonias coliformes y produce un centro negro y borde verde metálico (diferencial).
S Esta reacción es característica para Escherichia coli., el principal indicador de contaminación con materia fecal.
S El Endo Agar tiene el colorante fuchsina y en presencia de ácidos producidos por las bacterias coliformes, la fuchsina forma un complejo de color rosado obscuro que convierte a la colonias coliformes y sus alrededores en color rosado.
Prueba Completa
S Análisis final de la muestra de agua. Se utiliza para examinar las colonias coliformes que aparecieron en el medio EMB en la prueba de confirmación.
S Se selecciona una colonia aislada para ser transferida a un tubo con caldo de lactosa y se siembra en un tubo con agar inclinado para hacer la tinción Gram.
S Despúes de hacer la inoculación y la incubación, los tubos que muestren la formación de gas en el caldo de lactosa y den positivos en la tinción Gram (Gram negativos) comprueban la presencia de bacterias coliformes en la muestra de agua.
Parte Práctica Prueba Presuntiva
S Mezcle las muestras de agua. S Agregue con una pipeta estéril 1 mL de la muestra de agua a tres
tubos de LB1X y a tres tubos LB 2X S LB1X= Caldo con lactosa S LB 2X=Caldo con doble concentración de lactosa
S Saque los gases del tubo durham S Incube los tubos por 48 horas a 37 grados.
S Si se observa la presencia de gas en el tubo durham es muy posible que tengan bacterias coliformes.
S Resultados positivos se realiza la prueba de confrmación
Parte Práctica Prueba Confirmativa
S Cultivos que dieron positivos a la presuntiva se utilizan para esta parte.
S Identificar placas petri debidamente.
S Transferir bacterias del medio de cultivo de la prueba presuntiva a las placas de EMB utilizando la técnica de siembra por dilución.
S Incubar todas las cajas petri en posición invertida a 37 grados por 24 horas.
S Observar placas y guardar para realizar prueba completa.
Parte Práctica Prueba Completa
S Inocular en tubos con caldo de lactosa y agar inclinado con las colonias aisladas en EMB .
S Incubar todos los tubos durante 24 horas a 37 grados.
S Observar los tubos y hacer la tinción Gram.