Análisis estructural, ultraestructural y desarrollo ...lillo.org.ar/revis/lilloa/2012-49-1/v49n1a05.pdf · sables de la actividad antidiabética de las hojas, es acumulada bajo la

M. I. Mercado et al.: Análisis estructural, ultraestructural y desarrollo ontogenético...40

Mercado, María I.1; María V. Coll Araoz2; Ana I. Ruiz1; Alfredo Grau2;Graciela I. Ponessa11 Fundación Miguel Lillo, Instituto de Morfología Vegetal. Miguel Lillo 251, (4000) S.M. de Tucumán, Tucumán,

Argentina.2 Universidad Nacional de Tucumán, Facultad de Ciencias Naturales, Instituto de Ecología Regional (IER), CC34,

(4107) Yerba Buena, Tucumán, Argentina.C.e. [email protected], [email protected]

Recibido: 05/04/12 – Aceptado: 07/07/12

Análisis estructural, ultraestructural y desarrolloontogenético de los tricomas glandulares deSmallanthus sonchifolius (Asteraceae), «yacón»

Resumen — Mercado, María I.; María V. Coll Araoz; Ana I. Ruiz; Alfredo Grau; Gracie-la I. Ponessa. 2012. “Análisis estructural, ultraestructural y desarrollo ontogenético de lostricomas glandulares de Smallanthus sonchifolius (Asteraceae), «yacón»”. Lilloa 49 (1). Sedescribe el desarrollo ontogenético, anatómico y ultraestructural de tricomas glandulares (TG)durante el desarrollo foliar y el ciclo anual vegetativo de Smallanthus sonchifolius (Poepp. &Endl.) H. Rob. «yacón», un cultivo andino. Para ello se utilizó una combinación de técnicas demicroscopía óptica y electrónica. Los TG de las hojas de «yacón» se hallan completamentedesarrollados y concluyen su actividad secretora en etapas tempranas del desarrollo foliar. Lasecreción de los TG constituida mayormente por lactonas sesquiterpénicas, en parte respon-sables de la actividad antidiabética de las hojas, es acumulada bajo la cutícula y liberada solopor acción mecánica. Este trabajo contribuye a la comprensión de las defensas químicasfoliares del «yacón» y permite diseñar técnicas de cosecha apuntando a la elaboración deinfusiones con fines medicinales.

Palabras clave: Smallanthus sonchifolius, tricomas glandulares, ontogenia, estructura,ultraestructura.

Abstract — Mercado, María I.; María V. Coll Araoz; Ana I. Ruiz; Alfredo Grau; Gracie-la I. Ponessa. 2012. “Structure, ultrastructure and ontegenetic development of glandular tri-chomes of Smallanthus sonchifolius (Asteraceae), «yacón»”. Lilloa 49 (1). Anatomical and ul-trastructural changes occurring in glandular trichomes (GT) during leaf development and dur-ing the annual growth cycle of the Andean crop Smallanthus sonchifolius (Poepp. & Endl.) H.Rob. «yacón», were studied using a combination of light and electron microscopy. GT are fullyestablished and their secretory activity appears to be concluded at early stages of leaf devel-opment. GT secretion is mainly constituted by sesquiterpene lactones, partly responsible forthe antidiabetic activity of leaves, that are accumulated underneath the cuticle and releasedonly when GT are mechanically disrupted. This study contributes to the understanding of«yacón» leaves chemical defenses and to improve harvesting techniques aiming at its pharma-cological use.

Keywords: Smallanthus sonchifolius; glandular trichomes; ontogeny; structure; ultrastruc-ture.

INTRODUCCIÓN

Smallanthus sonchifolius (Poepp. & Endl.)H. Rob. (Heliantheae, Asteraceae), común-mente conocida como «yacón», es una plan-ta alimenticia y medicinal andina cuya dis-tribución se extiende desde Colombia hasta

el noroeste argentino (Grau & Rea, 1997).Por su atractivo, el cultivo de «yacón» se haexpandido a muchos países alrededor delmundo, principalmente China, Japón y Bra-sil, siendo importado a Europa.

Las raíces tuberosas del yacón consumi-das desde tiempos precolombinos como «fru-tas frescas», son una rica fuente de fructooli-gosacáridos (FOS) (Grau & Rea, 1997) y

Lil loa 49 (1): 40–51, 2012 40

Lil loa 49 (1): 40–51, 2012 41

compuestos fenólico con numerosas propie-dades benéficas para la salud (Simonovskaet al., 2003; Genta et al., 2005, 2009). Enlas últimas décadas las hojas de «yacón» hancomenzado a usarse para la elaboración deinfusiones medicinales con propiedades anti-diabéticas, hipocolesteromiantes (Aybar etal., 2001; Baroni et al., 2008; Genta et al.,2010) y antioxidantes (Valentova et al.,2005).

Los terpenos son metabolitos secundariostípicamente secretados por tricomas glandu-lares (TG) y, entre ellos, las lactonas sesqui-terpénicas (LST) son características de lasAsteraceae (Spring, 2000; Duke et al.,2000). En la naturaleza actúan como com-puestos disuasivos a herbívoros, tóxicos antepatógenos o alelopáticos (Picman, 1986;Harborne & Tomas-Barberan, 1991), presen-tando interés comercial y medicinal (Harbor-ne & Tomas-Barberan, 1991; Marles et al.,1995). De las hojas de yacón, específicamen-te de sus TG, se han aislado 16 LST, ácidosditerpénicos acíclicos y derivados del ácidoent-kaurénico (Schorr et al., 2007; Hong etal., 2008; Dou et al., 2008; Kakuta et al.,1992; Mercado et al., 2010). Enhydrina, laLST mayoritaria, aislada de TG de las hojasde «yacón», presenta actividad anti-inflama-toria (Feltenstein et al., 2004; Hwang et al.,1996), antimicrobiana (Inoue et al., 1995) yse ha demostrado recientemente que es enparte responsable de la actividad antidiabé-tica del té de «yacón» (Genta et al., 2010),siendo incluida como principio activo de for-mulaciones farmacéuticas (Schorr & Da Cos-ta, 2005).

Se presenta la ontogenia, anatomía y ul-traestructura de TG de «yacón», en relacióna su producto de secreción (LST, particular-mente enhydrina), durante el desarrollo fo-liar de la planta. Los resultados se discutenen relación al uso medicinal de sus hojas y ala resistencia de esta especie frente a pató-genos y otros herbívoros.

MATERIALES Y MÉTODOS

Material Examinado.— Smallanthus sonchi-folius: ARGENTINA, Tucumán, Dpto. Yerba

Buena, Horco Molle. Centro UniversitarioHorco Molle (CUHM) 26° 47’S, 65° 19’W,547 msnm. 2006. M. I. Mercado y G. I. Po-nessa s.n. (LIL 607173).

Técnicas Anatómicas.— Hojas de S. sonchifo-lius fueron coleccionadas periódicamentedesde Enero a Julio de 2006.

Se tomaron muestras de 1 cm2 de la sec-ción media de la lámina en hojas de cuatroestadios de desarrollo: estadio 1, primordiofoliar de menos de 3 cm de longitud, cu-briendo los ápices meristemáticos; estadio 2,hojas apicales en expansión, 3 a 5 cm delongitud, situadas a la altura del primernudo; estadio 3, hojas medias, 8 a16 cmlong., situadas en el tercer a cuarto nudo yestadio 4, hojas basales maduras a senescen-tes, 16 a 20 cm de longitud., situadas en sex-to o séptimo nudo (Fig. 1 A).

Para preparados permanentes las mues-tras fueron fijadas en FAA (formol, alcoholetílico, ácido acético, agua, 100: 500:50:350 ml), deshidratadas en una serie de alco-hol butílico terciario e incluidas en parafinasegún Johansen (1940). Se realizaron cortesseriados de 7-10 µm de espesor, en un Mi-crótomo rotativo de Minot.

Se realizaron cortes a mano alzada dematerial fresco y fijado en FAA. Se utilizócoloración simple con safranina, metacro-mática con violeta de cresilo, combinadasucesiva doble safranina- fast green y sudánIV para la detección histoquímica de lípidos.

Se realizaron diafanizados empleando latécnica Dizeo de Strittmatter (1973) para laobservación de las superficies foliares.

Para el estudio en microscopía óptica seutilizó un microscopio Karl Zeiss Axiostarplus con ocular micrométrico. Las fotogra-fías fueron tomadas con una cámara digitalCanon compact, modelo PowerShot A 620 ISM52 (O) 12.1 megapixels.

Para microscopía electrónica de barrido(MEB) y de transmisión (MET), las muestrasfueron fijadas en glutaraldehído fosfato 5%con buffer 0.1 M de cocadilato de sodio ajus-tado a pH 7, post fijadas en tetróxido de os-mio 1.5% con buffer 0.1 M de cocadilato desodio ajustado a pH 7.2.


Fig. 1. Smallanthus sonchifolius. Morfología y anatomía foliar. A: Detalle de diferentes estadiosde maduración foliar. B: Superficie foliar, vista paradermal de material fresco en microscopioestereoscópico. C: Transcorte de lámina. D: Vista paradermal, epidermis abaxial. E: Vistaparadermal, diafanizado de hojas en estadio 1. F: Vista paradermal, diafanizado de hojas en es-tadio 2. G: Vista paradermal, diafanizado de hojas en estadio 3. H: Vista paradermal, diafanizadode hojas en estadio 4. Referencias: a, primordios foliares (estadio 1); b, hoja apical (estadio2); c, hoja media (estadio 3); d, hojas basales (estadio 4); TG, tricoma glandular; TE, tricomaeglandular.

Lil loa 49 (1): 40–51, 2012 43

Para MEB, las muestras fueron deshidra-tadas en acetona, secadas mediante puntocrítico con CO2 y recubiertas con oro (FineCoat Ion Sputter JEOL JFC-1100).

Para MET las muestras fueron deshidrata-das en acetona a 4º C, embebidas en resinasintética epoxi y seccionadas en forma seria-da utilizando un ultra micrótomo con cuchi-lla de diamante. Los cortes seriados ultrafi-nos fueron teñidos en acetato de uranilo ycitrato de plomo.

Las observaciones en MEB de la LST en-hydrina cristalina, de material fresco y demuestras recubiertas en oro fueron realiza-das en un MEB JEOL 35 CF y en un MEB conemisión de campo ZEISS SUPRA-55 VP(field emission scanning electron microscope- FESEM) acoplado a un espectrómetro deenergía dispersiva de rayos X (energy disper-sive X-ray spectrometer - EDS) para realizarcaracterización elemental (LAMENOA, UNT,Tucumán, Argentina).

Las observaciones en MET se realizaronen un equipo Zeiss Leo 906-E con cámaradigital adosada en el Centro de microscopíaelectrónica, UNC, Córdoba, Argentina.

Aislamiento de enhydrina cristalina.— LaLST enhydrina en su forma cristalina fueobtenida por cristalización en EtOH a partirde una mezcla de LST extraída de las hojasde «yacón» siguiendo el procedimiento des-cripto por Schorr et al.(2007) y Kakuta etal. (1992), con algunas modificaciones(Genta et al., 2010).

La lactona fue identificada por compara-ción de su espectro de masas, 1H y 13 C RMNutilizando un cromatógrafo gaseoso Hewlett-Packard 5973 acoplado a un espectrómetrode masas quadrupolar Hewlett-Packard 6890GC con una columna Elite-5MS Perkin-Elmer(5% fenil metil siloxano, 30 m × 0.25 mmd.i. × 0.25 µm de espesor de film) y espec-trómetro de RMN Bruker AC 200 operando a200 MHz para 1H y a 50 MHz para 13C utili-zando deutero cloroformo con TMS comostandart interno.

RESULTADOS

MORFOLOGÍA Y ANATOMÍASmallanthus sonchifolius presenta hojas

simples, opuestas decusadas, pubescentes,color verde oscuro de brillo céreo. Pecíoloalado con estípulas superpuestas, muchasveces connadas en la base foliar. Láminatriangular simétrica, ovada, de textura mem-branácea, con venación primaria acródromay venación secundaria camptódroma broqui-dódroma. Ápice acuminado, base truncada,cordada a levemente sagitada y margen den-tado serrado (Fig. 1 A). El mesofilo es dorsi-ventral con haces vasculares colaterales ycanales secretores esquizógenos asociados alas nervaduras, previamente descriptos porMercado et al. (2006).

En ambas superficies, predominando enel envés de la hoja, se observan estomas ano-mocíticos, tricomas eglandulares uniseria-dos (TE) y tricomas glandulares (TG) bise-riados con 6 a 12 pares de células (Fig. 1 B-D), miden 76,9 (± 20,6) µm de longitud por48,5 (± 4,7) µm de diámetro a la altura dela cabeza.

Al analizar hojas en diferentes estadiosde desarrollo se hace evidente que a medidaque la hoja se expande disminuye la densi-dad de TG por unidad de superficie (Tabla 1;Fig. 1 E-H). Cuando las hojas alcanzan el20% de su máxima expansión, aproximada-mente 5 cm de longitud (hojas apicales, es-tadio 2), coexisten TG maduros funcionalesy TG inmaduros en proceso de diferencia-ción (Fig. 2 G). Cuando alcanzan el 50% desu expansión, 8-10 cm de longitud (hojasmedias, estadio 3), todos los TG observadosson maduros y funcionales.

ONTOGENIAEl desarrollo de los TG foliares ocurre en

sentido acrópeto, a partir de una única célu-la protodérmica prominente sobre la super-ficie foliar (Fig. 2 A), la cual se divide enforma periclinal asimétrica, resultando unestadio bicelular del tricoma (Fig. 2 B).Ambas células se dividen nuevamente en sen-tido anticlinal para formar el estadio tetra-celular (Fig. 2 C), esta etapa es seguida por


Fig. 2. Smallanthus sonchifolius. Desarrollo ontogenético de tricomas glandulares foliares. A:Célula protodérmica. B: TG bicelular. C: TG tetracelular. D: TG hexacelular simétrico. E: TGhexacelular asimétrico. F: TG maduro que aún no comenzó a exudar. G: Hoja apical que haalcanzado el 10% de su tamaño máximo, donde coexisten tricomas glandulares maduros(TGM) e inmaduros (TGI).

Lil loa 49 (1): 40–51, 2012 45

Fig. 3. Smallanthus sonchifolius. Tricomas glandulares foliares. A: TG vista paradermal concutícula parcialmente obliterada (flecha). B y C: TG vista lateral. D: TG con células del pieelongadas. E: MET, TG en etapa unicelular de desarrollo. F: MET, TG inmaduro pre-secretor.G: MET, TG maduro secretor con cutícula expandida (flecha). Referencias: a, cabeza; b, pie;c, base; N, núcleo; nu, nucleolo; v, vacuola; pl, plástidos; flecha, cutícula en expansión oparcialmente desgarrada.


subsecuentes divisiones periclinales asimétri-cas en sentido acrópeto, resultando en esta-dios alternativos de cinco, seis, siete, catorce(Fig. 2 D-F) y ocasionalmente más célulasdistribuidas simétrica o asimétricamente(Fig. 2 E).

El proceso de división lleva a la forma-ción de un TG maduro constituido por treszonas definidas. La base, con un único parde células basales; el pie, con número varia-ble (3-8 pares) de células que en algunoscasos se presentan elongadas; y finalmentela cabeza, constituida por 1-2 pares de célu-las subapicales y un par de células secreto-ras apicales cubiertas por una gruesa cutícu-la (Fig. 3 A-D), donde se acumulan los pro-ductos de secreción que se tiñen intensamen-te con sudán IV.

ULTRAESTRUCTURA Y PRODUCTOSDE SECRECIÓN

Durante la etapa uni- y bicelular, las cé-lulas del TG presentan citoplasma denso,núcleos conspicuos con nucleolos prominen-tes, numerosos ribosomas libres, mitocon-drias, plástidos con cierta organización ti-lacoidal, dictiosomas, retículo endoplasmá-tico liso y rugoso en forma de sacos y escasovolumen vacuolar (Fig. 3 E). En las etapasposteriores la densidad citoplasmática au-menta, las vacuolas se hacen más conspi-cuas y el número de mitocondrias aumentamarcadamente (Fig. 3 F y G).

En el TG maduro, las células apicales dela cabeza secretora presentan grandes va-cuolas, abundante retículo endoplasmáticocon dilataciones en las que se forman vesícu-las, mitocondrias con estroma denso, dictio-somas dispersos con pequeñas vesículas. Losplástidos presentan membranas degeneradasen un cuerpo prolamelar asociado a glóbu-los electrodensos (plastoglobuli); en las in-mediaciones de los plástidos se observa retí-culo periférico (Fig. 4 A-C). Se observan pro-fusiones en la pared celular y desprendimien-to incipiente de la cutícula asociada a la se-creción (Fig. 4 B).

En contraste, los plástidos de las célulassubapicales presentan mayor organizacióntilacoidal, formando un cuerpo prolamelar

con depósitos amorfos osmiofílicos de apa-rente naturaleza lipídica. Estos plástidos sehallan asociados con cisternas del retículoendoplasmático (Fig. 4 D). En el citoplasmase observan abundantes vesículas electro-densas.

Las células del pie presentan grandesáreas de retículo endoplasmático vesiculadoasociado a plástidos de tilacoides definidos ya pequeños glóbulos de material electroden-so, situados en la periferia celular (Fig. 4 E).

Las células basales presentan desarrollonormal a nivel de citoplasma y plástidos(Fig. 4 F).

Al realizar FESEM-EDS en material fres-co, se observa que la cutícula que recubre lacabeza de los TG maduras permanece intac-ta y turgente por la presencia del materialde secreción (Fig. 5 A), patrón que persisteaun cuando los tejidos comienzan a deshi-dratarse (Fig. 5 B). Cuando las muestras sonsometidas a secado mediante el método depunto crítico, se observa una línea de dehis-cencia que atraviesa la cutícula en coinci-dencia con la unión de las células apicalesde la cabeza del tricoma (Fig. 5 B y C). Elmismo efecto se observó en tejidos diafaniza-dos e incluidos en parafina (Fig. 3 A-C).

Tanto las células apicales, como el mate-rial secretado al espacio subcuticular se tiñenintensamente con sudán IV, revelando la natu-raleza lipídica de la secreción. El espectro ele-mental de rayos X muestra la presencia de70% C y 30% O en la cabeza de los TG, rela-ción idéntica a la observada para una muestrade enhydrina cristalina (Fig. 5 D-F).

DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES

Los resultados anatómicos, estructuralesy ultraestructurales indican que los TG sonlos lugares donde se sintetizan y acumulanlas LS de las hojas de yacón. Esto es consis-tente con observaciones previas realizadaspara esta especie (Schorr et al., 2007) yotras Asteraceae como Stevia rebaudiana(Bertoni) Bertoni (Favi et al., 2008; Montei-ro et al., 2001), Artemisia spp. (Werker etal., 1994), Inula spp. (Werker & Fhan,1981), Sigesbeckia jorullensis Kunth (Heinri-

Lil loa 49 (1): 40–51, 2012 47

Fig. 4. Smallanthus sonchifolius. MET, detalles celulares de tricomas glandulares foliaresmaduros. A: Aspecto general de células secretoras apicales. B: Detalle de la célula apical,protusiones de la membrana asociadas con la secreción de productos al espacio subcuticular;separación incipiente de la cutícula con respecto a la pared celular. C: Detalle de plastidio decélulas apicales secretoras, con plastoglobulos y membranas tilacoidales degeneradas. D:Detalle de células subapicales mostrando plástidos con cuerpo prolamelar y membranas ti-lacoidales formando cuerpos prolamelares. E: Detalle de células del pie con plastidios dedesarrollo normal asociados a retículo endosplasmático. F: Células basales con plastidios dedesarrollo normal. Referencias: cu, cutícula; d, dictiosoma; m, mitocondria; pl, plastido; pc,pared celular; re, retículo endoplasmático; v, vacuola; asterisco, protusiones de la paredcelular; punta de flecha, cuerpo prolamelar.


Fig. 5. Smallanthus sonchifolius. Tricomas glandulares foliares. A: MEB-FESEM TG con cutí-cula intacta en material fresco. B: MEB-FESEM Material fresco que ha iniciado el proceso dedeshidratación. Notar que la cutícula permanece intacta. C: MEB de TG de material someti-do a secado mediante el método de punto crítico de CO2 y posteriormente recubierto conoro. Detalle de la cutícula parcialmente desgarrada siguiendo la línea de dehiscencia entre lascélulas apicales. D: MEB-FESEM de cristales de enhydrina purificada de hojas de yacón. E yF: Espectroscopía elemental de rayos X revelando la presencia de 70% C y 30% O en cabe-za de TG y enhydrina cristalina respectivamente. Referencias: flecha, cutícula parcialmentedesgarrada.

Lil loa 49 (1): 40–51, 2012 49

ch et al., 2002) y Vernonia galamensis(Cass.) Less. (Favi et al., 2008).

La tinción con sudán IV y el espectro ele-mental de rayos X (EDS) realizado sobrehojas frescas indican que el material acumu-lado en el espacio subcuticular de los TG esde naturaleza lipídica, coincidente en sucomposición elemental con la enhydrina. Asímismo, la presencia de protrusiones en lapared celular, plastidios con membranas de-generadas y cuerpos prolamelares asociadosa plastoglobulos en las células apicales delTG han sido asociadas a la producción deLST y precursores de terpenos como el iso-pentenil pirofosfato (Cheng et al., 2007).

El «yacón» es reconocido como un cultivocuyo follaje es poco afectado por insectos ypestes (Grau & Rea, 1997; Seminario et al.,2003). Esto se debe a las propiedades antiali-mentarias, antifúngicas y antimicrobianas desus LST (Inoue et al., 1995; Lin et al., 2003).

En el presente trabajo se demuestra quelas LST permanecen confinadas en el espa-cio subcuticular de los TG, siendo liberadassolo ante daño mecánico causado por el ata-que de herbívoros o insectos. Las LS actua-rían en dos líneas de defensa, inicialmentecomo disuasivos a herbívoros por su saborextremadamente amargo y luego frente a in-fecciones fúngicas y de otros patógenoscuando la hoja es dañada y estos metaboli-tos secundarios se derraman sobre la superfi-cie foliar.

Wagner et al. (2004) sugieren que unaposible limitación para el uso comercial delos productos obtenidos a partir de TG seríala exposición de los mismos a la atmósferay la radiación solar que podría causar modi-ficaciones químicas indeseables. Nuestrosresultados indican claramente que S. sonchi-folius, no sería el caso, ya que la LST en-hydrina, responsable en parte de la actividadantidiabética, permanece confinada al espa-cio subcuticular y protegida de los factoresambientales a lo largo del desarrollo foliar.

Se determinó que el número de TG se es-tablece en las primeras etapas del desarrollofoliar, disminuyendo en su densidad a medidaque la hoja se expande. En consecuencia, estollevaría a una disminución paulatina de la

concentración de LS en relación al peso secode hojas en las etapas tardías del desarrollofoliar. Este patrón donde el desarrollo de lostricomas precede al desarrollo del órgano enel que están localizados, es similar al obser-vado en otras familias de plantas, incluidaslas Asteraceae (Dell & Mccomb, 1974, 1977;Werker & Fahn, 1981; Ascensão & Pais, 1998,Göpfert et al., 2005). Desde una perspectivapráctica, hojas jóvenes (estadio 3) colectadascon fines medicinales rendirían una mayorconcentración de metabolitos bioactivos (en-hydrina), en base al peso seco.

BIBLIOGRAFIA

Ascensão, L. & M. S. S. Pais. 1998. The leaf capitatetrichomes of Leonotis leonurus: histochemistry,ultrastructure and secretion. Annals of Botany,81: 263-271.

Aybar, M. J.; A. N. S. Riera; A. Grau & S. S. Sanchez.2001. Hypoglycemic effect of the water extractof Smallantus sonchifolius (yacon) leaves in nor-mal and diabetic rats. Journal of Ethnopharma-cology, 74: 125-132.

Baroni, S.; F. Suzuki-Kemmelmeier; S. M. Caparroz-Assef; R. K. N. Cuman & C.A. Bersani-Amado.2008. Effect of crude extracts of leaves ofSmallanthus sonchifolius (yacon) on glycemia indiabetic rats. Brazilian Journal of PharmaceuticalScience, 44: 521-530.

Cheng, A-X; Y-G. Lou; Y-B. Mao; S. Lu; L-J. Wang &X-Y. Chen. 2007. Plant terponoids: biosynthesisand ecological functions. Journal of integrativeplant biology 49: 179-186.

Dell, B. & A. J. McComb. 1974. Resin production andglandular hairs in Beyeria viscose (Labill.) Miq.(Euphorbiaceae). Australian Journal of Botany,22:195-210.

Dell, B. & A. J. Mccomb. 1977. Glandular hair forma-tion and resin secretion in Eremophila fraseri F.Meull (Myoporaceae). Protoplasma, 92:71-86.

Dizeo de Strittmatter, C. 1973. Nueva técnica de dia-fanización. Boletín de la Sociedad Argentina deBotánica, 15: 126-129.

Dou, D. Q.; F. Tian; Y-Q. Qiu; T-G. Kang & F. Dong.2008. Structure, elucidation and complete NMRspectral assignments of four new diterpenoidsfrom Smallanthus sonchifolius. Magnetic Reso-nance in Chemistry, 46: 775-779

Duke, S.; C. Canel; A. M. Rimado; M. R. Tellez; M. V.Duke & R. N. Paul. 2000. Current potentialexploitation of plant glandular trichome produc-tivity. Advances in Botanical Research, 31: 121-141.

Favi, F.; C. L. Cantrell; T. Mebrahtu & M. E. Kraemer.2008. Leaf peltate glandular trichomes of Verno-


nia galamensis ssp. galamensis var. ethiopicaGilbert: development, ultrastructure and chemicalcomposition. International Journal of Plant Scien-ces, 169: 605-614.

Genta, S.; W. M. Cabrera; M. I. Mercado; A. Grau.;C. Catalán & S. S. Sánchez. 2010. Hypoglycemicactivity of leaf organic extracts from Smallan-thus sonchifolius: contituents of the most activefractions. Chemico-Biological Interactions, 185:143-152.

Genta, S.; W. M. Cabrera; N. Habib; J. Pons; I. M.Carillo; A. Grau & S. S. Sánchez. 2009. Yacónsyrup: beneficial effects on obesity and insulinresistance in humans. Clinical Nutrition, 28:182-187.

Genta, S.; W. M.Cabrera; A. Grau & S. S. Sanchez.2005. Subchronic 4-month oral toxicity study ofdried Smallanthus sonchifolius (yacon) roots asa diet supplement in rats. Food and ChemicalToxicoly, 43: 1657-1665.

Göpfert, J. C.; N. Heil; J. Conrad & O. Spring. 2005.Cytological development and sesquiterpene lacto-ne secretion in capitate glandular trichomes ofsunflower. Plant Biology, 7: 148-155.

Grau, A. & J. Rea. 1997. Yacon. Smallanthus sonchi-folius (Poepp. & Endl.) H. Robinson. En: M.Hermann & J. Heller (eds.): Andean roots andtuberous roots: Ahipa, Arracacha, Maca andYacon. Promoting the conservation and use ofunderulitized crops, IPK, Gatersleben/IPGRI,Rome. pp. 199–256.

Harborne, J. B. & F. A. Tomas-Barberan. 1991. Eco-logical Chemistry and Biochemistry of Plant Ter-penoids (Proceedings of the Phytochemical Socie-ty of Europe), Oxford University Press, USA, pp.466.

Heinrich, G.; H.W. Pfeifhofer; E. Stabentheiner & T.Sawidis. 2002. Glandular Hairs of Sigesbeckiajorullensis Kunth (Asteraceae): Morphology, His-tochemistry and Composition of Essential Oil.Annals of Botany, 89:459-469.

Hong, S. S.; S. A. Lee; X. H. Han; M. H. Lee; J. S.Hwang; J. S. Park; K. W. Oh; K. Han; M. K.Lee; H. Lee; W. Kim; D. Lee & B. Y. Hwang.2008. Melampolides from the Leaves of Sma-llanthus sonchifolius and Their Inhibitory Activityof LPS-Induced Nitric Oxide Production. Chemical& Pharmaceutical Bulletin, 56: 199-202.

Hwang, D.; N. H. Fischer; B. C. Jang; H. Tak; J. K.Kim & W. Lee, 1996. Inhibition of the expressionof inducible cyclooxygenase and proinflammatorycytokines by sesquiterpene lactones in macropha-ges correlates with the inhibition of MAP kina-ses. Biochemical and Biophysical Research Com-munications, 226: 810-818.

Inoue, A.; S. Tamogami; H. Kato; Y. Nakazato; M.Akiyama; O. Kodama; T. Akatsuka & Y. Hashido-ko. 1995. Antifungal melampolides from leafextracts of Smallanthus sonchifolius. Phytoche-mistry, 39: 845–848.

Johansen, D. A. 1940. Plant Microtechnique. Mc GrawHill Boock Co. New York: 523.

Kakuta, H.; T. Seki; Y. Hashidoko & J. Mizutani.1992. Ent-kaurenic acid and its related com-pounds from glandular trichome exudate and leafextracts of Polymnia sonchifolia. Bioscience,Biotechnology, and Biochemistry, 56: 1562-1564.

Lin F.Q.; M. Hasegawa & O. Kodama. 2003. Purifica-tion and identification of antimicrobial sesquiter-pene lactones from yacon (Smallanthus sonchi-folius) leaves. Bioscience, Biotechnology, andBiochemistry, 67: 2154-2159.

Mercado, M. I.; G. I. Ponessa & A. Grau. 2006.Morfología y anatomía foliar de yacón, Smallan-thus sonchifolius (Asteraceae), con fines decontrol de calidad. Acta Farmacéutica Bonaeren-se, 25: 526-532.

Mercado, M. I.; M. V. Coll Aráoz; A. Grau & C. A. N.Catalán. 2010. New acyclic diterpenic acidsfrom Yacon (Smallanthus sonchifolius) leaves.Natural Product Communications, 5: 1721-1726.

Monteiro, W. R; M. De Moraes Castro; S. C. Mazzoni-Viveiros & P. G. Mhalberg. 2001. Developmentand some histochemical aspects of foliar glandu-lar trichomes of Stevia rebaudiana (Bert.) Bert.Asteraceae. Revista Brasileira de Botânica, 24:349-357.

Picman, A. K. 1986. Biological activities of sesquiter-pene lactones. Biochemical Systematics andEcology, 14: 255-281.

Schorr K. & F. B. Da Costa. 2005. Quantitative deter-mination of enhydrina in leaf rinse extracts andglandular trichomes of Smallanthus sonchifolius(Asteraceae) by reversed-phase high performanceliquid chromatography. Phytochemical Analysis,16: 161-165

Schorr K.; I. Merford & F. B. Da Costa. 2007. A novelmelampolide and further terpenoids from Sma-llanthus sonchifolius (Asteraceae) and the inhibi-tion of the transcription factor NF –kB. NaturalProduct Communications, 2: 367-374.

Seminario, J.; M. Valderrama & I. Manrique. 2003.El Yacón: fundamentos para el aprovechamientode un recurso promisorio. Centro Internacionalde la Papa (CIP) Universidad Nacional de Caja-marca, Agencia Suiza para el Desarrollo y laCooperación (COSUDE), Lima, Perú, Pp 60.

Simonovska B., I. Vovk , S. Andrensek, K. Valentová &J. Ulrichová. 2003. Investigation of phenolic acidsin yacon (Smallanthus sonchifolius) leaves andtubers. Journal of Chromatography A, 1016: 89-98.

Spring, O. 2000. Chemotaxonomy based on metabolitesfrom glandular trichomes. Advances in BotanicalResearch, 31: 153-169.

Valentová, K.; A. Lebeda; I. Dolezalova; D. Jirovsky; B.Simonovska; I. Vovk; P. Kosina; N. Gasmanova;M. Dziechciarkova & J. Ulrichová. 2005. Thebiological and chemical variability of yacón. Jour-

Lil loa 49 (1): 40–51, 2012 51

nal of Agricultural and Food Chemistry, 54: 1347-1352.

Wagner, G. J.; E. Wang & R. W. Shepherd. 2004.New approaches for studying and exploiting anold protuberance, the plant trichome. Annals ofBotany, 93: 3-11.

Werker, E.; E. Putievsky; U. Ravid; N. Dudai & I.Katzir. 1994. Glandular hairs, secretory cavities,

and the essential oil in leaves of tarragon (Arte-misia dracunculus L.). Journal of Herbs Spicesand Medicinal Plants, 4: 19–32.

Werker, E. & A. Fhan. 1981. Secretory hairs of Inulaviscosa (L.) Ait. - development, ultrastructure, andsecretion. Botanical Gazette, 142:461-476.

Documents

Análisis estructural, ultraestructural y desarrollo ...lillo.org.ar/revis/lilloa/2012-49-1/v49n1a05.pdf · sables de la actividad antidiabética de las hojas, es acumulada bajo la