Aseguramiento de Calidad Labaratorio de microbiología

8/18/2019 Aseguramiento de Calidad Labaratorio de microbiología

1/52

ASEGURAMIENTO DE

CALIDAD


2/52

DEFINICIONES

Aseguramiento de calidad: Todas las actividades planeadas ysistemáticas implementadas dentro del sistema de calidad ydemostradas como necesarias, para proveer una adecuadaconfanza que la entidad cumplirá los requerimientos para calidad.

Control de calidad: técnicas y actividades operacionales queson usadas para cumplir con los requerimientos de calidad.

Lote de medio de cultivo unidad que permite una trazabilidadcompleta reerida a una cantidad defnitiva de producto a granel,producto semiterminado o producto fnal, que es coherente en tipo

y calidad, y ha cumplido los requisitos de ensayo de produccióncontrol durante el proceso! y de garant"a de la calidad y que hasido producido durante un per"odo de producción defnido al quese le ha asignado el mismo n#mero de lote.

UN !rograma ACe"ectivo con#rma la

calidad de losresultados $ aumentala con#a%ilidad en los

datos.


3/52

Desem!e&o del medio de cultivo:respuesta de un medio de cultivo sometido acepas de control ba$o condiciones defnitivas.

Clasi#caci'n del medio de cultivo:

%eg#n sucomposición:

&edio de cultivosdefnidosqu"micamente

&edio de cultivos

qu"mica incompleta, agar.'$. (gar nutritivo

%eg#n su consistencia:&ediosl"quidos&edios de cultivos solidosy semisólidos

%eg#n el métodode preparación

)istos para su uso

*ultivos preparados conormulaciones comerciales


4/52

%eg#n su uso:

&edio de transporte

&edio de preservación

&edio de +esucitación

&edio de

enriquecimiento&edio de enriquecimientoselectivo

&edio deenriquecimiento noselectivo

&edio de aislamiento

&edio de aislamiento no selectivo

&edio dierencial

&edio de identifcación


5/52

Ce!as de re"erencia: &icroorganismo defnido al menos anivel de género y especie, catalogado y descrito seg#n suscaracter"sticas y preeriblemente indicando su origen.

Ce!as de reserva de re"erencia: lote de cultivosobtenido en el laboratorio por una sola propagación a partirde una cepa de reerencia, ya sea en el laboratorio o desdeun proveedor.

Cultivo de tra%a(o: subcultivo primario de una reserva de

reerencia.


6/52

DIRECCIONAMIENTO DE UN )ROGRAMA DEASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD

+esponsabilidadesadministrativas

+esponsable deaseguramiento de la

calidad

ersonal de traba$o


7/52

O*+ETI,OS DE UN )ROGRAMA DEASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD roveer inormación de calidad, asegurando

que el laboratorio tenga un desempe-o dealta calidad,

&antener continuamente la evaluación dela operación del laboratorio,

dentifcar las debilidades del laboratorio,

detectando las necesidades de capacitacióny me$orando la documentación y registros.


8/52

ELEMENTOS DE UN )ROGRAMA DE CALIDAD

El establecimiento de objetivos, describiendo los ob$etivosespec"fcos del laboratorio.

Procedimientos de muestreo, incluye la selección de lugares

espec"fcos y representativos, tiempo y temperatura de conservación.)os datos pueden ser ob$eto de litigio, se debe usar la cadena decustodia.

Políticas del personal , describe las cualidades espec"fcas y elentrenamiento requerido por los supervisores y analistas.

Equipos e instrumentos, proporcionar los procedimientos y la

recuencia de calibración y del mantenimiento. Especifcaciones para proveedores, para asegurar que los

reactivos y suministros son de alta calidad y están probados yaceptados.


9/52

Métodos analíticos, utilizar métodos estandarizados por un organismonormalizados y validados.

Medidas de control de calidad analítico, incluye cada verifcación anal"tica,y pruebas de verifcación.

Procedimientos Operativos Estándar (POEs), escritos establecidos ydocumentados de todas las operaciones de rutina del laboratorio.

Documentacin, concierne la inormación de adquisición, registros,trazabilidad y contabilidad.

Evaluacin! auditor-as internas de las operaciones del laboratorio, realizadopor el encargado del programa (* y el supervisor.

'valuaciones en el lugar por e/pertos para asegurar que el laboratorio y supersonal siguen un programa de aseguramiento de la calidad aceptable.

"cciones correctivas: *uando los problemas son identifcados por el personal,supervisor y0o coordinador del (* se deben usar procedimientos estándaresgraduales para determinar las causas y corregirlas. )as no conormidadesidentifcadas por los pares e/ternos son corregidas, registradas y frmadas porel administrador y el encargado de (*.


10/52

)ERSONAL

)as pruebas microbiológicas deben ser realizadas

por un microbiólogo proesional o técnico capacitado. 1e lo contrario un microbiólogo proesional debe

estar disponible para guiarle. 'ntrenar y evaluar alanalista en los procedimientos básicos dellaboratorio.

)a gerencia debe procurar que el personal delaboratorio obtenga entrenamiento adicional y cursosde traba$o para avanzar sus habilidades y carreras.


11/52

E.ui!os einsu

mosdella%oratorio/

ITEM ACCION FRECUENCIA

Agua &onitoreo de calidad

Su!er#cies +evisión de contaminación SemanalAires &onitoreo de carga bacteriana Mensual

Term'metros *omprobar e/actitud Semestral

*alan1as $ !esas *omprobar e/actitud Mensual

*alan1as +ecalibrar Anual

)otenci'metro 'standarizar En cada uso

*omparar contra otro patrón Mensual

Dis!ensadores 2erifcar la e/actitud del volumen en cada uso

2orno *ontrol de rendimiento mensual

Autoclave *ontrol de rendimiento Mensual

Re"rigerador *hequear temperatura Diario

Congelador *hequear temperatura diario

1escongelar Semestralmente

E.ui!o de #ltraci'n

!or mem%rana

*omprobar que no haya ugas ni

rasgu-os en la superfcie

En cada uso

L3m!aras U, 2erifcar con 32metro Trimestral

Ca%ina 4u(o Laminar +evisar el aire y la luz 32 Mensual

Ins!eccionar el 4u(o de aire Trimestral


12/52

E.ui!oseinsu

mosdela%orato

rio

Incubadora Verificar la temperatura Dos veces aldía

Microscopio Limpiar los oculares y loslentes

En cada uso

Material de vidrio Revisar la limpieza En cada uso

Revisar el pH En cada lavado

Ensayo de inhibición porresiduos

Anualmente

Botellas de aguade dilución

Chequear pH y volumen En cada uso

Medios Verificar pH y apariencia En cada uso


13/52

*56T+5) 1' '%T'+)1(1 1' &(T'+() '%T'+)7echa deesterilización

&edio decultivo 0parámetro

8 de material a esterilizar *oncepto%atis %!6o %atis6%!

+esponsable Tubos de ensayo ipetas rascos *a$

apetri

probeta

9/

9;

9 /9;

9m

l

m

l

9;ml

;;ml

>;ml

9;;ml

9;;; ml

latecounte37*0ml!

?@Turbidez!

p@

latecounte37*0ml!

?@Turbidez!

p@

latecounte37*0ml!

?@Turbidez!

p@

late

counte37*0ml!

?@Turbidez!

p@

Material conforme:


14/52

ACTI,IDADES )ARA EL CONTROL DECALIDAD DE MEDIOS DE CULTI,OS/

+evisión de documentación suministradapor el abricante:

6ombre

*omponentesindividuales :comparar conormea lo que indica lanorma a validar.


15/52

'valuación de desempe-o ymicroorganismos utilizados.

)ote

7echa devencimiento

• p@• normación de

almacenamiento

• 1atos técnicos• *ertifcados de calidad• 1atos de seguridad.


16/52

EN EL LA*ORATORIO SE DE*EANOTAR LOS SIGUIENTES )UNTOS

6ombre del medio de cultivo y código de lote 1"a de recepción del medio de cultivo

1"a de e/piración *ondiciones e integridad del empaque.


17/52

ALMACENAMIENTO 'n todo caso se deben seguir las instrucciones del

abricante, cuando e/istan en relación a condiciones dealmacenamiento, echa de caducidad y uso.

's importante planifcar la recepción para asegurar unarotación regular de los productos almacenados primerosque entran, primeros que salen!.

)a calidad del medio depende del adecuadoalmacenamiento, se debe desechar todo medio que hayaadquirido humedad y se reAe$e en apelmazamiento ycambio de color.


18/52

)RE)ARACI5N DE MEDIOS DECULTI,OS

1eben revisarse los siguientes detalles: (gua: debe ser destilada o de agua de calidad

equivalente. 1ebe ser almacenada en material inerte.

◦ (B3( B+(15 +'(*T25 T5 : 1ebe ser preparada pordestilación, cambio iónico, ósmosis reversa o una combinación delas anteriores, seguido por una limpieza con un fltro demembrana de ;,C Dm. %e recomienda para el uso general enpruebas de laboratorio.

◦ (B3( B+(15 T5 2: 1ebe ser preparada por destilación, cambioiónico, ósmosis reversa, electrodiálisis, o una combinación de las

anteriores. uede ser usada en procedimientos que requierengrandes cantidades de agua de ba$a pureza, particularmente paraaguas de lavado y aguas de en$uague.


19/52

FEC2A

CONDUCTI,IDAD

CAR*ONOTOTAL

ORGANICO

CLORORESIDUALTOTAL

RECUENTO2ETEROTROFI

COS

METALES)ESADOSTOTALES

METALES)ESADOSSUELTOS

&onitoreo: diario

&onitoreo:

mensual

&onitoreo:

mensual

&onitoreo:

mensual

&onitoreo:

anual

&onitoreo:

anual

)im. &a/ aceptable:E>

Dmhos0cm ó

)im. &a/

aceptable:

E9.; mg0l

)im. &a/.

(ceptable:E;.9

mg0)

)im. &a/.

(ceptable:

E;; 37*0m)

)im. &a/.

(ceptable:

;.9; mg0)

)im. &a/.

(ceptable:

;.; mg0lDm siemens0cm a >F* &étodo usado: &étodo usado: &étodo usado: &étodo

usado:

&étodo usado:'quipo utilizado:

&edición Temperatura G*


20/52


21/52

'sterilización: se puede realizar utilizando dosmétodos fltración por membrana usando el calor y laesterilización por fltración. (lgunos solo necesitan

ebullirse para estar listos para su uso.

*alor h#medo7iltración pormembrana

%e utiliza un ciclo a 9>9G* por9 min. %e debe seguir lainstrucciones del abricante ycambiar de ciclo en caso de sernecesario.

*ontrol de la efcacia esesencial.

7iltros de tama-o de poro de;.>> Dm. )os fltros y equipos autilizar deben de serpreviamente esterilizados porcalor h#medo.

(lgunos fltros pueden retener prote"nasantibióticos!, por tanto se debenhumedecer antes los fltros para obtener laconcentración adecuada.


22/52


23/52

ncubación: (pilar las placas en n#mero no mayor a < unidades y de$arespacio para que circule el aire y alcance la temperatura el medio.

'liminación de medios: tanto los medios contaminados como los noutilizados deben ser eliminados de una manera que sea segura y quecumpla con las normas.

*ontrol de calidad de producto fnalizado

*ontrol de calidad "sico. 2alores de p@ medidos a temperaturaentre >;GI>G.

*antidad repartida y espesor de lacapa > mm! para ca$as de J; mm sedebe utilizar 9 mm!.

*olor, deectos visibles, esterilidad delgel, consistencia, h#meda.


24/52

*ontrol de calidadmicrobiológica

*ontaminación

*epas de control: cepas robustas que demuestrencrecimiento t"pico, cepas positivas que crecendébilmente, cepas bioqu"micamente no reactivasaquellas que muestren reacciones dierentes a

ermentación y Auorescencia!, cepas inhibidasreactivamente.


25/52


26/52


27/52


28/52

CULTI,O O MATERIAL DEREFERENCIA

&aterial o sustancia acompa-ado de un

certifcado , que posee valores de una o máspropiedades, certifcadas por unprocedimiento que establece su trazabilidad auna realización e/acta de la unidad en la cualse e/presan los valores de dichaspropiedades, para la cual cada valor

certifcado está acompa-ado por suincertidumbre, con nivel de confanzaestablecido.

*5B3(65+ 6B+0%50'* CKI9


29/52

MATERIAL DE REFERENCIACERTIFICADO *IOL5GICO

)a colección certifca que hasuministrado una determinada cepa,que es un cultivo puro y que se hacaracterizado por pruebasmorológicas, bioqu"micas y

moleculares adecuadas.


30/52

*epa dereerencia

%ubI cultivada

3na sola vez*epa dereserva

)ioflizaciónnitrógeno

liquido, etc.

*epas detraba$o

'specifcar tiempo y

condiciones dealmacenamiento. &antener en

lascondicionesespecifcas.

1escongelacreconstitució

'specifcar tiempo ycondiciones dealmacenamiento. *epas de usorutinario.

(T** (merican Type *ulture *ollection!%2& 7oundation or the (dvancementn o

ublic and 'nvironmental rotecction!*'*T *olección espa-ola de cultivos tipos!*6&* *ollection 6ationale de cultures de&icroorganismo! nstitut asteur


31/52

RE6UISITOS

2iabilidad de células microbianas capacesde crecer

*ultivos de reerencia e$. (T**! suministranlas cepas con instrucciones para surecuperación.

ureza se debe tratar de un cultivo puro 'stabilidad: genéticamente estables

caracter"sticas genot"picas y enot"picas!.


32/52


33/52

MATERIAL LIOFILI7ADO CL8SICO

(mpolla conteniendo material lioflizado +otura de la ampolla con diamante +ehidratación en medio liquido apropiado.

'/tensión en medio solido apropiado *recimiento y preparación de cepas de

reserva.


34/52

,ALORACI5N DEMEDIOS DE CULTI,OS


35/52

CONTAMINACI5N MICRO*IANA %e debe analizar una cantidad

representativa 9M del medio servido! eincubar a K=G* por m"nimo 9N h.


36/52

CRECIMIENTO 'l crecimiento de los microorganismos en los

medios de cultivos debe ser evaluado de lasiguiente manera:

&étodos semi cuantitativos &étodos *uantitativos &étodos *ualitativos

%e tendrá como medio de re"erencia un lote demedio realizado recientemente, de reconocidabuena calidad y estabilidad a lo largo del tiempo.


37/52

)RODUCTI,IDAD

(plica: medios solidos, semisólidos y l"quidos. %e inocula una cantidad de inoculo apropiado

de las cepa de traba$o de los microorganismospreviamente defnidos.


38/52

SELECTI,IDAD

%e siembra el microorganismos deseado enel medio selectivo y de reerencia con elinoculo deseado.


39/52

ESTANDARI7ACI5N DEIN5CULOS

( partir del cultivo primario de la cepas inocular una coloniatomada a partir de un cultivo puro del microorganismo de pruebaen J m) de caldo ?@, incubar a KG* H >G*, por 9Nh a >C h.

( partir de cultivo hacer diluciones decimales, de cada una deellas transerir por cuadruplicado un mililitro a ca$as de etri yadicionar agar late *ount.

ncubar a KG* H >*, por 9N a >C horas, realizar el conteo en

cada dilución para conocer la concentración demicroorganismos.

'l proceso de estandarización debe repetirse entre < y N veces.


40/52


1iluciones 1ecimales 6#mero de *élulas porm)

3nidades 7ormadoras de*olonias 37*!

9;I 9 9;N 9;;.;;;.;;;

9;I > 9;= 9;.;;;.;;;

9;I K 9;< 9.;;;.;;;

9;I C 9; 9;;.;;;

9;I 9;C 9;.;;;

9;I < 9;K 9.;;;

9;I = 9;> 9;;

9;I N 9;9 9;

9;I J 9;; O 9I 9

9;I 9; ; ;

5


41/52


'stad"stico 9;I= 9;IN 9;IJ&edia 9,'rror t"pico ,9C= 9,;K> ;,K9 91esviación estándar >;,NN C,9>J 9,CC2arianza de la muestra C>K,NJ 9=,; >,99<&"nimo 99; 99 9&á/imo 9J; ><

6ivel de confanzaJ,;M! 9;,J=; >,>;; ;,==

)"mite inerior JM 9CJ,>9< 9C 9,NCJ)"mite superior JM 9=9,9N >;,N> K,C;

9N; >


42/52

I99 I9; I9; IJ IJ IN IN I= I= I<

;

>;

C;;

9C;

9CCCJ.


43/52

CULTI,OS DE TRA*A+O )ARAENSA9OS DE )RODUCTI,IDAD

ara ensayos cuantitativos: se utiliza un inoculo de 9;;37*

ara ensayos semiI cuantitativos o cualitativos : seutiliza inoculo de 9;;;I9;;;; 37*.

ara ensayos de productividad de medios l"quidos: 9;I9;; 37*.

)ara ensa$os de selectividad se utili1a delmicroorganismos no deseado de :;;;; $:;;;;;;/

%e incuban los microorganismos seg#n las normas de latécnica a validar/


44/52

M


45/52

M


46/52

M


47/52

,ALORACI5N DE MEDIOSL>6UIDOS

M?todos cuantitativos de diluci'n !ara microorganismoso%(etivo o diana $ no o%(etivo/

%e siembra un n#mero de tubos con unas cantidades de 9;I9;; 37* delmicroorganismo diana y del microorganismos intererente 9;;; 37*.

)os l"quidos diluyentes se deber"an incubar C min antes de ser

sembrados en placa. )uego cada tubo de dilución se siembra en una ca$a de agar no

selectivo. %e incuban siguiendo las indicaciones de la técnicas normalizadas. %e realizan los cálculos siguiendo las ormuas de r S % .

ara la r de los microorganismos diana no debe ser E ;,9 S para la % de los microorganismos no ob$etivo debe ser al menos igual

a >.


48/52


49/52


50/52


51/52


52/52

GRACIAS@@

Documents

Aseguramiento de Calidad Labaratorio de microbiología