C-I C-II C-III Y303

S

C-III* ¿Tyr303?

?

Y303

Hermoso et al. J. Mol. Biol. 319, 1133-1142 (2002) Nogués et al. Biochemistry 44, 11730-11740 (2005).Bortolotti et al. Biochem. Biophys. Acta-Proteins and Proteomics 1794, 199-210 (2009)

C4

N5

H-

La transferencia de hidruro entre FNRhq y NADP+

400 500 600 700 800 900 1000

0.00

0.05

0.10

0.15

0.20

0.25

Longitud de onda (nm)

Ab

sob

anci

a (U

.A.)

400 500 600 700 800 900 1000

0.00

0.05

0.10

0.15

0.20

0.25

Longitud de onda (nm)

Tyr303Ser FNRox + NADPH Tyr303Ser FNRhq + NADP+

B>C (6 oC) B>C (6 oC)

FNRox + NADPH FNRhq + NADP+ kHT-1

kHT

Variante de FNR

kHT (s-1) kHT-1 (s-

1)Kd(μM-1) kcat/Km(s-1 μM-1)

Eox/hq

(mV)

Silvestre 270 285 5,7 13,5 -374

Tyr303Ser 200 -- 0,007 2,9 -250

C-III* ¿Tyr303?

?

Lans et al. J. Phys. Chem. B. 114, 3368-3379 (2010)

-3 -2 -1 0 1 2 3

0

10

20

30

40

G (

Kca

l/mo

l)

Coordenada de reacción (Å)

TS

P (CTC-1)

R (CTC-2)

Análisis QM/MM del la transferencia de hidruro en Tyr303Ser FNRhq:NADP+

Reacción fotosintética

Lans et al. J. Phys. Chem. B. 114, 3368-3379 (2010)

P (CTC-1)R (CTC-2)

β=120º β=170º

α = 10º

HH

α = 60º

N5 C4

HH

N5 C4

TSR (CTC-2)

- +

β=120º β=170º α = 10º

HH

α = 60º

N5 C4

HH

N5 C4

Y303

Y303S WT

Peregrina et al. Biochem. Biophys. Acta- Bioernergetics. 1797, 1638-1646 (2010) Peregrina et al. Eur. Biophys. J. Submitted

R100

Y303

S80

E301H2OA

H2OB

Y303 reduce el apilamiento y contribuye a situar los átomos reaccionantes a

distancia y orientación adecuada

Ln(kobs) = lnA - Ea/RT FNR

AH/AD

WT 1.5

Y303W 30.8 Y303S 12.51

WT

Y303F

Y303S

Y303W. E301A

Y235F

FNR4

. R100A

0 20 40 60 80 100

0

100

200

300

400

k HT

-1 (

s-1)

%CTC-2 (apilamiento)