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CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA ACTIVIDAD
ANTIBACTERIANA Y
ANTIOXIDANTE DE EXTRACTOS
DE PLANTAS MEDICINALES
UTILIZADAS EN PEREIRA Y
SANTA ROSA DE CABAL
(RISARALDA)
JOHANNA ANDREA CALDEROacuteN
ESTUDIANTE DE TECNOLOGIacuteA
QUIacuteMICA
OSCAR MARINO MOSQUERA
DIRECTOR DEL PROYECTO
ZONAS DE ESTUDIO
MARCO TEOacuteRICO
PLANTAS
MEDICINALES
Cidroacuten (Aloysia triphylla)
Malva (Malva sylvestris)
Toronjil (Melissa officinalis)
Perejil (Petroselinum sativum)
Ortiga (Urtica dioica)
CIDROacuteN
Limoneno Linalool
Citral a
(geraniaL)
Citral b
(neral)
Familia Verbenaceae
CH2CH3
CH3
H
CHO
CH3CH3
CH3
CH2
OHCH3
CH3CH3
CH2
OHCH3
CH3CH3
(Aloysia triphylla)
MALVA
Malvidina Arabinosa
O
CH3
OH
OH OH
OH
Ramnosa Aacutecido
galacturoacutenico
Familia Malvaceae
O+
OH
OCH3
OCH3
OH
OH
OH
O
OH
OH
OH
OH
O
OH
OH
OH
OH
CO2H
(Malva sylvestris)
TORONJIL
Aacutecido clorogeacutenico
Aacutecido cafeacuteico
Aacutecido rosmariacutenico
Familia Labiadaceae
O
HOOC
OH
O
OH
OH OH
COOH
OH
OH
O
O
OH
OHOH
OH
OHHOOC
(Melissa officinalis)
PEREJIL
Familia Umbeliferaceae
Apiol α- Pineno
Apigenina
O
OH
OOH
OH
CH3
O
O
OCH3
OCH3
CH2
(Petroselinum sativum)
ORTIGA
Histamina
Serotonina
Acetilcolina
Familia Urticaceae
NNH
NH2
NH
NH2
OH
OCH3 CH3
N+
CH3CH3
O
(Urtica dioica)
CARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MICROORGANISMOS EMPLEADOS
PARA LA EVALUACIOacuteN DE LA
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Bacillus
subtilis
Bacteria Gram positiva
Aerobia facultativa
No es un
patoacutegeno
humano
Staphylococcus
aureus
Bacterias Gram
positiva
Anaerobia facultativa
Gastroenteritis
Infecciones de la
piel
Artritis
Neumoniacutea
Escherichia
coli
Bacteria Gram
negativa
Aerobia facultativa
Diarrea
Infecciones
extraintestinales
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Klebsiella
pneumoniae
Bacteria Gram negativa
Anaerobia facultativa
Infecciones del
tracto urinario
Neumoniacutea
Pseudomonas
aeruginosa
Bacteria Gram negativa
Aeroacutebica
Dermatitis
Infecciones
(tracto urinario
tejido blando
oacuteseo articular y
gastrointestinal
Candida
albicans
Levadura
Aerobio estricto
Dimorfo
Candidiasis
Infeccioacuten
sanguiacutenea
nosocomial
RADICALES Y
ANTIOXIDANTES
RADICALES LIBRES Y
ANTIOXIDANTES
Radical libre Es una especie quiacutemica que
contiene uno o maacutes electrones desapareados ya
sea por perdida o ganancia de ellos
Antioxidante Es una sustancia que se opone a
la oxidacioacuten o inhibe las reacciones promovidas
por oxigeno o peroacutexidos
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Cadena de transporte mitocondrial
O2-bull + H2O2 bullOH+OH-
Reaccioacuten de Haber-Weiss
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Peroxidacioacuten lipiacutedica
Iniciacioacuten
R-H + radical libre Rbull
Propagacioacuten
Rbull+ O2 ROObull
ROObull+ R-H Rbull+ ROOH
Terminacioacuten
R bull + Rbull
RO2 bull + Rbull
RO2 bull + RO2 bull
Productos que no inician
ni propagan la oxidacioacuten
Destruccioacuten de las
membranas
nucleares
Degradacioacuten de
alimentos
Dantildeo al ADN
Consecuencias
PROCESOS ASOCIADOS AL DANtildeO
OXIDATIVO EN MOLEacuteCULAS BIOLOacuteGICAS
Envejecimiento
Dantildeo del ADN y Peroxidacioacuten de
los aacutecidos grasos de la
membrana celular
Ateroesclerosis
Peroxidacioacuten de liacutepidos en las
partiacuteculas de LDL con dantildeo de
otros de sus componentes
Caacutencer Dantildeo del ADN
Cataratas Modificaciones irreversibles en
las proteiacutenas
MEacuteTODOS IN VITRO PARA DETERMINAR
LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
TIPO DE ENSAYOCARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MEacuteTODOS
FRAP (Ferric ion reducing
antioxidant parameter)TPTZ-Fe+3 +1e TPTZ-Fe+2
DPPH (11-difenil-2-picril-
hidrazilo)
DPPHbull+ A-H DPPH-H
DPPHbull+ Rbull DPPH-R
ABTS (3-etilbenztiazolin-6-
sulfonato de amonio)
ABTS -1e ABTSbull+
ABTSbull+ + A-H ABTS + Rbull
ORAC (Oxygen radical
absorbance capacity)ROObull + A-H ROOH + Abull
JUSTIFICACIOacuteN
Las plantas medicinales presentan unaposibilidad alta de encontrar compuestos activoscomo antioxidantes y antibacterianos contradeterminadas enfermedades
Mas del 25 de los medicamentos modernosproceden de plantas
La medicina ha utilizado una gran variedad deplantas medicinales para desarrollar medicamentosaltamente efectivos contra diversas enfermedades
OBJETIVO GENERAL
Determinar la actividad antioxidante y antibacteriana
contra Bacillus subtilis Candida albicans Escherichia
coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa y
Staphylococcus aureus de los extractos de las plantas
medicinales Aloysia triphylla (Cidroacuten) Malva
sylvestris (Malva) Melissa officinalis (Toronjil)
Petroselinum sativum (Perejil) y Urtica dioica
(Ortiga)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
Obtener extractos de n-hexano diclorometano y
metanol por maceracioacuten pasiva de las plantas
medicinales A triphylla M sylvestris M
officinalis P sativum y U dioica
Realizar mediante cromatografiacutea de capa delgada
la caracterizacioacuten fitoquiacutemica de los extractos
obtenidos
Evaluar la actividad antibacteriana de los extractosobtenidos de A triphylla M sylvestris M officinalisP sativum y U dioica mediante el meacutetodo deperforacioacuten en placa de agar contra B subtilis Calbicans E coli K pneumoniae P aeruginosa y Saureus
Establecer la capacidad antioxidante de los extractosde n-hexano diclorometano y metanol de las especiesA triphylla M sylvestris M officinalis P sativum yU dioica a traveacutes del ensayo de decoloracioacuten delradical 22-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
SECCIOacuteN
EXPERIMENTAL
bullActividad antibacteriana
bullExtraccioacuten del material vegetal
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
bullActividad antioxidante
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
JOHANNA ANDREA CALDEROacuteN
ESTUDIANTE DE TECNOLOGIacuteA
QUIacuteMICA
OSCAR MARINO MOSQUERA
DIRECTOR DEL PROYECTO
ZONAS DE ESTUDIO
MARCO TEOacuteRICO
PLANTAS
MEDICINALES
Cidroacuten (Aloysia triphylla)
Malva (Malva sylvestris)
Toronjil (Melissa officinalis)
Perejil (Petroselinum sativum)
Ortiga (Urtica dioica)
CIDROacuteN
Limoneno Linalool
Citral a
(geraniaL)
Citral b
(neral)
Familia Verbenaceae
CH2CH3
CH3
H
CHO
CH3CH3
CH3
CH2
OHCH3
CH3CH3
CH2
OHCH3
CH3CH3
(Aloysia triphylla)
MALVA
Malvidina Arabinosa
O
CH3
OH
OH OH
OH
Ramnosa Aacutecido
galacturoacutenico
Familia Malvaceae
O+
OH
OCH3
OCH3
OH
OH
OH
O
OH
OH
OH
OH
O
OH
OH
OH
OH
CO2H
(Malva sylvestris)
TORONJIL
Aacutecido clorogeacutenico
Aacutecido cafeacuteico
Aacutecido rosmariacutenico
Familia Labiadaceae
O
HOOC
OH
O
OH
OH OH
COOH
OH
OH
O
O
OH
OHOH
OH
OHHOOC
(Melissa officinalis)
PEREJIL
Familia Umbeliferaceae
Apiol α- Pineno
Apigenina
O
OH
OOH
OH
CH3
O
O
OCH3
OCH3
CH2
(Petroselinum sativum)
ORTIGA
Histamina
Serotonina
Acetilcolina
Familia Urticaceae
NNH
NH2
NH
NH2
OH
OCH3 CH3
N+
CH3CH3
O
(Urtica dioica)
CARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MICROORGANISMOS EMPLEADOS
PARA LA EVALUACIOacuteN DE LA
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Bacillus
subtilis
Bacteria Gram positiva
Aerobia facultativa
No es un
patoacutegeno
humano
Staphylococcus
aureus
Bacterias Gram
positiva
Anaerobia facultativa
Gastroenteritis
Infecciones de la
piel
Artritis
Neumoniacutea
Escherichia
coli
Bacteria Gram
negativa
Aerobia facultativa
Diarrea
Infecciones
extraintestinales
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Klebsiella
pneumoniae
Bacteria Gram negativa
Anaerobia facultativa
Infecciones del
tracto urinario
Neumoniacutea
Pseudomonas
aeruginosa
Bacteria Gram negativa
Aeroacutebica
Dermatitis
Infecciones
(tracto urinario
tejido blando
oacuteseo articular y
gastrointestinal
Candida
albicans
Levadura
Aerobio estricto
Dimorfo
Candidiasis
Infeccioacuten
sanguiacutenea
nosocomial
RADICALES Y
ANTIOXIDANTES
RADICALES LIBRES Y
ANTIOXIDANTES
Radical libre Es una especie quiacutemica que
contiene uno o maacutes electrones desapareados ya
sea por perdida o ganancia de ellos
Antioxidante Es una sustancia que se opone a
la oxidacioacuten o inhibe las reacciones promovidas
por oxigeno o peroacutexidos
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Cadena de transporte mitocondrial
O2-bull + H2O2 bullOH+OH-
Reaccioacuten de Haber-Weiss
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Peroxidacioacuten lipiacutedica
Iniciacioacuten
R-H + radical libre Rbull
Propagacioacuten
Rbull+ O2 ROObull
ROObull+ R-H Rbull+ ROOH
Terminacioacuten
R bull + Rbull
RO2 bull + Rbull
RO2 bull + RO2 bull
Productos que no inician
ni propagan la oxidacioacuten
Destruccioacuten de las
membranas
nucleares
Degradacioacuten de
alimentos
Dantildeo al ADN
Consecuencias
PROCESOS ASOCIADOS AL DANtildeO
OXIDATIVO EN MOLEacuteCULAS BIOLOacuteGICAS
Envejecimiento
Dantildeo del ADN y Peroxidacioacuten de
los aacutecidos grasos de la
membrana celular
Ateroesclerosis
Peroxidacioacuten de liacutepidos en las
partiacuteculas de LDL con dantildeo de
otros de sus componentes
Caacutencer Dantildeo del ADN
Cataratas Modificaciones irreversibles en
las proteiacutenas
MEacuteTODOS IN VITRO PARA DETERMINAR
LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
TIPO DE ENSAYOCARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MEacuteTODOS
FRAP (Ferric ion reducing
antioxidant parameter)TPTZ-Fe+3 +1e TPTZ-Fe+2
DPPH (11-difenil-2-picril-
hidrazilo)
DPPHbull+ A-H DPPH-H
DPPHbull+ Rbull DPPH-R
ABTS (3-etilbenztiazolin-6-
sulfonato de amonio)
ABTS -1e ABTSbull+
ABTSbull+ + A-H ABTS + Rbull
ORAC (Oxygen radical
absorbance capacity)ROObull + A-H ROOH + Abull
JUSTIFICACIOacuteN
Las plantas medicinales presentan unaposibilidad alta de encontrar compuestos activoscomo antioxidantes y antibacterianos contradeterminadas enfermedades
Mas del 25 de los medicamentos modernosproceden de plantas
La medicina ha utilizado una gran variedad deplantas medicinales para desarrollar medicamentosaltamente efectivos contra diversas enfermedades
OBJETIVO GENERAL
Determinar la actividad antioxidante y antibacteriana
contra Bacillus subtilis Candida albicans Escherichia
coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa y
Staphylococcus aureus de los extractos de las plantas
medicinales Aloysia triphylla (Cidroacuten) Malva
sylvestris (Malva) Melissa officinalis (Toronjil)
Petroselinum sativum (Perejil) y Urtica dioica
(Ortiga)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
Obtener extractos de n-hexano diclorometano y
metanol por maceracioacuten pasiva de las plantas
medicinales A triphylla M sylvestris M
officinalis P sativum y U dioica
Realizar mediante cromatografiacutea de capa delgada
la caracterizacioacuten fitoquiacutemica de los extractos
obtenidos
Evaluar la actividad antibacteriana de los extractosobtenidos de A triphylla M sylvestris M officinalisP sativum y U dioica mediante el meacutetodo deperforacioacuten en placa de agar contra B subtilis Calbicans E coli K pneumoniae P aeruginosa y Saureus
Establecer la capacidad antioxidante de los extractosde n-hexano diclorometano y metanol de las especiesA triphylla M sylvestris M officinalis P sativum yU dioica a traveacutes del ensayo de decoloracioacuten delradical 22-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
SECCIOacuteN
EXPERIMENTAL
bullActividad antibacteriana
bullExtraccioacuten del material vegetal
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
bullActividad antioxidante
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
ZONAS DE ESTUDIO
MARCO TEOacuteRICO
PLANTAS
MEDICINALES
Cidroacuten (Aloysia triphylla)
Malva (Malva sylvestris)
Toronjil (Melissa officinalis)
Perejil (Petroselinum sativum)
Ortiga (Urtica dioica)
CIDROacuteN
Limoneno Linalool
Citral a
(geraniaL)
Citral b
(neral)
Familia Verbenaceae
CH2CH3
CH3
H
CHO
CH3CH3
CH3
CH2
OHCH3
CH3CH3
CH2
OHCH3
CH3CH3
(Aloysia triphylla)
MALVA
Malvidina Arabinosa
O
CH3
OH
OH OH
OH
Ramnosa Aacutecido
galacturoacutenico
Familia Malvaceae
O+
OH
OCH3
OCH3
OH
OH
OH
O
OH
OH
OH
OH
O
OH
OH
OH
OH
CO2H
(Malva sylvestris)
TORONJIL
Aacutecido clorogeacutenico
Aacutecido cafeacuteico
Aacutecido rosmariacutenico
Familia Labiadaceae
O
HOOC
OH
O
OH
OH OH
COOH
OH
OH
O
O
OH
OHOH
OH
OHHOOC
(Melissa officinalis)
PEREJIL
Familia Umbeliferaceae
Apiol α- Pineno
Apigenina
O
OH
OOH
OH
CH3
O
O
OCH3
OCH3
CH2
(Petroselinum sativum)
ORTIGA
Histamina
Serotonina
Acetilcolina
Familia Urticaceae
NNH
NH2
NH
NH2
OH
OCH3 CH3
N+
CH3CH3
O
(Urtica dioica)
CARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MICROORGANISMOS EMPLEADOS
PARA LA EVALUACIOacuteN DE LA
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Bacillus
subtilis
Bacteria Gram positiva
Aerobia facultativa
No es un
patoacutegeno
humano
Staphylococcus
aureus
Bacterias Gram
positiva
Anaerobia facultativa
Gastroenteritis
Infecciones de la
piel
Artritis
Neumoniacutea
Escherichia
coli
Bacteria Gram
negativa
Aerobia facultativa
Diarrea
Infecciones
extraintestinales
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Klebsiella
pneumoniae
Bacteria Gram negativa
Anaerobia facultativa
Infecciones del
tracto urinario
Neumoniacutea
Pseudomonas
aeruginosa
Bacteria Gram negativa
Aeroacutebica
Dermatitis
Infecciones
(tracto urinario
tejido blando
oacuteseo articular y
gastrointestinal
Candida
albicans
Levadura
Aerobio estricto
Dimorfo
Candidiasis
Infeccioacuten
sanguiacutenea
nosocomial
RADICALES Y
ANTIOXIDANTES
RADICALES LIBRES Y
ANTIOXIDANTES
Radical libre Es una especie quiacutemica que
contiene uno o maacutes electrones desapareados ya
sea por perdida o ganancia de ellos
Antioxidante Es una sustancia que se opone a
la oxidacioacuten o inhibe las reacciones promovidas
por oxigeno o peroacutexidos
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Cadena de transporte mitocondrial
O2-bull + H2O2 bullOH+OH-
Reaccioacuten de Haber-Weiss
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Peroxidacioacuten lipiacutedica
Iniciacioacuten
R-H + radical libre Rbull
Propagacioacuten
Rbull+ O2 ROObull
ROObull+ R-H Rbull+ ROOH
Terminacioacuten
R bull + Rbull
RO2 bull + Rbull
RO2 bull + RO2 bull
Productos que no inician
ni propagan la oxidacioacuten
Destruccioacuten de las
membranas
nucleares
Degradacioacuten de
alimentos
Dantildeo al ADN
Consecuencias
PROCESOS ASOCIADOS AL DANtildeO
OXIDATIVO EN MOLEacuteCULAS BIOLOacuteGICAS
Envejecimiento
Dantildeo del ADN y Peroxidacioacuten de
los aacutecidos grasos de la
membrana celular
Ateroesclerosis
Peroxidacioacuten de liacutepidos en las
partiacuteculas de LDL con dantildeo de
otros de sus componentes
Caacutencer Dantildeo del ADN
Cataratas Modificaciones irreversibles en
las proteiacutenas
MEacuteTODOS IN VITRO PARA DETERMINAR
LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
TIPO DE ENSAYOCARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MEacuteTODOS
FRAP (Ferric ion reducing
antioxidant parameter)TPTZ-Fe+3 +1e TPTZ-Fe+2
DPPH (11-difenil-2-picril-
hidrazilo)
DPPHbull+ A-H DPPH-H
DPPHbull+ Rbull DPPH-R
ABTS (3-etilbenztiazolin-6-
sulfonato de amonio)
ABTS -1e ABTSbull+
ABTSbull+ + A-H ABTS + Rbull
ORAC (Oxygen radical
absorbance capacity)ROObull + A-H ROOH + Abull
JUSTIFICACIOacuteN
Las plantas medicinales presentan unaposibilidad alta de encontrar compuestos activoscomo antioxidantes y antibacterianos contradeterminadas enfermedades
Mas del 25 de los medicamentos modernosproceden de plantas
La medicina ha utilizado una gran variedad deplantas medicinales para desarrollar medicamentosaltamente efectivos contra diversas enfermedades
OBJETIVO GENERAL
Determinar la actividad antioxidante y antibacteriana
contra Bacillus subtilis Candida albicans Escherichia
coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa y
Staphylococcus aureus de los extractos de las plantas
medicinales Aloysia triphylla (Cidroacuten) Malva
sylvestris (Malva) Melissa officinalis (Toronjil)
Petroselinum sativum (Perejil) y Urtica dioica
(Ortiga)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
Obtener extractos de n-hexano diclorometano y
metanol por maceracioacuten pasiva de las plantas
medicinales A triphylla M sylvestris M
officinalis P sativum y U dioica
Realizar mediante cromatografiacutea de capa delgada
la caracterizacioacuten fitoquiacutemica de los extractos
obtenidos
Evaluar la actividad antibacteriana de los extractosobtenidos de A triphylla M sylvestris M officinalisP sativum y U dioica mediante el meacutetodo deperforacioacuten en placa de agar contra B subtilis Calbicans E coli K pneumoniae P aeruginosa y Saureus
Establecer la capacidad antioxidante de los extractosde n-hexano diclorometano y metanol de las especiesA triphylla M sylvestris M officinalis P sativum yU dioica a traveacutes del ensayo de decoloracioacuten delradical 22-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
SECCIOacuteN
EXPERIMENTAL
bullActividad antibacteriana
bullExtraccioacuten del material vegetal
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
bullActividad antioxidante
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
MARCO TEOacuteRICO
PLANTAS
MEDICINALES
Cidroacuten (Aloysia triphylla)
Malva (Malva sylvestris)
Toronjil (Melissa officinalis)
Perejil (Petroselinum sativum)
Ortiga (Urtica dioica)
CIDROacuteN
Limoneno Linalool
Citral a
(geraniaL)
Citral b
(neral)
Familia Verbenaceae
CH2CH3
CH3
H
CHO
CH3CH3
CH3
CH2
OHCH3
CH3CH3
CH2
OHCH3
CH3CH3
(Aloysia triphylla)
MALVA
Malvidina Arabinosa
O
CH3
OH
OH OH
OH
Ramnosa Aacutecido
galacturoacutenico
Familia Malvaceae
O+
OH
OCH3
OCH3
OH
OH
OH
O
OH
OH
OH
OH
O
OH
OH
OH
OH
CO2H
(Malva sylvestris)
TORONJIL
Aacutecido clorogeacutenico
Aacutecido cafeacuteico
Aacutecido rosmariacutenico
Familia Labiadaceae
O
HOOC
OH
O
OH
OH OH
COOH
OH
OH
O
O
OH
OHOH
OH
OHHOOC
(Melissa officinalis)
PEREJIL
Familia Umbeliferaceae
Apiol α- Pineno
Apigenina
O
OH
OOH
OH
CH3
O
O
OCH3
OCH3
CH2
(Petroselinum sativum)
ORTIGA
Histamina
Serotonina
Acetilcolina
Familia Urticaceae
NNH
NH2
NH
NH2
OH
OCH3 CH3
N+
CH3CH3
O
(Urtica dioica)
CARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MICROORGANISMOS EMPLEADOS
PARA LA EVALUACIOacuteN DE LA
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Bacillus
subtilis
Bacteria Gram positiva
Aerobia facultativa
No es un
patoacutegeno
humano
Staphylococcus
aureus
Bacterias Gram
positiva
Anaerobia facultativa
Gastroenteritis
Infecciones de la
piel
Artritis
Neumoniacutea
Escherichia
coli
Bacteria Gram
negativa
Aerobia facultativa
Diarrea
Infecciones
extraintestinales
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Klebsiella
pneumoniae
Bacteria Gram negativa
Anaerobia facultativa
Infecciones del
tracto urinario
Neumoniacutea
Pseudomonas
aeruginosa
Bacteria Gram negativa
Aeroacutebica
Dermatitis
Infecciones
(tracto urinario
tejido blando
oacuteseo articular y
gastrointestinal
Candida
albicans
Levadura
Aerobio estricto
Dimorfo
Candidiasis
Infeccioacuten
sanguiacutenea
nosocomial
RADICALES Y
ANTIOXIDANTES
RADICALES LIBRES Y
ANTIOXIDANTES
Radical libre Es una especie quiacutemica que
contiene uno o maacutes electrones desapareados ya
sea por perdida o ganancia de ellos
Antioxidante Es una sustancia que se opone a
la oxidacioacuten o inhibe las reacciones promovidas
por oxigeno o peroacutexidos
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Cadena de transporte mitocondrial
O2-bull + H2O2 bullOH+OH-
Reaccioacuten de Haber-Weiss
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Peroxidacioacuten lipiacutedica
Iniciacioacuten
R-H + radical libre Rbull
Propagacioacuten
Rbull+ O2 ROObull
ROObull+ R-H Rbull+ ROOH
Terminacioacuten
R bull + Rbull
RO2 bull + Rbull
RO2 bull + RO2 bull
Productos que no inician
ni propagan la oxidacioacuten
Destruccioacuten de las
membranas
nucleares
Degradacioacuten de
alimentos
Dantildeo al ADN
Consecuencias
PROCESOS ASOCIADOS AL DANtildeO
OXIDATIVO EN MOLEacuteCULAS BIOLOacuteGICAS
Envejecimiento
Dantildeo del ADN y Peroxidacioacuten de
los aacutecidos grasos de la
membrana celular
Ateroesclerosis
Peroxidacioacuten de liacutepidos en las
partiacuteculas de LDL con dantildeo de
otros de sus componentes
Caacutencer Dantildeo del ADN
Cataratas Modificaciones irreversibles en
las proteiacutenas
MEacuteTODOS IN VITRO PARA DETERMINAR
LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
TIPO DE ENSAYOCARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MEacuteTODOS
FRAP (Ferric ion reducing
antioxidant parameter)TPTZ-Fe+3 +1e TPTZ-Fe+2
DPPH (11-difenil-2-picril-
hidrazilo)
DPPHbull+ A-H DPPH-H
DPPHbull+ Rbull DPPH-R
ABTS (3-etilbenztiazolin-6-
sulfonato de amonio)
ABTS -1e ABTSbull+
ABTSbull+ + A-H ABTS + Rbull
ORAC (Oxygen radical
absorbance capacity)ROObull + A-H ROOH + Abull
JUSTIFICACIOacuteN
Las plantas medicinales presentan unaposibilidad alta de encontrar compuestos activoscomo antioxidantes y antibacterianos contradeterminadas enfermedades
Mas del 25 de los medicamentos modernosproceden de plantas
La medicina ha utilizado una gran variedad deplantas medicinales para desarrollar medicamentosaltamente efectivos contra diversas enfermedades
OBJETIVO GENERAL
Determinar la actividad antioxidante y antibacteriana
contra Bacillus subtilis Candida albicans Escherichia
coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa y
Staphylococcus aureus de los extractos de las plantas
medicinales Aloysia triphylla (Cidroacuten) Malva
sylvestris (Malva) Melissa officinalis (Toronjil)
Petroselinum sativum (Perejil) y Urtica dioica
(Ortiga)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
Obtener extractos de n-hexano diclorometano y
metanol por maceracioacuten pasiva de las plantas
medicinales A triphylla M sylvestris M
officinalis P sativum y U dioica
Realizar mediante cromatografiacutea de capa delgada
la caracterizacioacuten fitoquiacutemica de los extractos
obtenidos
Evaluar la actividad antibacteriana de los extractosobtenidos de A triphylla M sylvestris M officinalisP sativum y U dioica mediante el meacutetodo deperforacioacuten en placa de agar contra B subtilis Calbicans E coli K pneumoniae P aeruginosa y Saureus
Establecer la capacidad antioxidante de los extractosde n-hexano diclorometano y metanol de las especiesA triphylla M sylvestris M officinalis P sativum yU dioica a traveacutes del ensayo de decoloracioacuten delradical 22-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
SECCIOacuteN
EXPERIMENTAL
bullActividad antibacteriana
bullExtraccioacuten del material vegetal
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
bullActividad antioxidante
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
PLANTAS
MEDICINALES
Cidroacuten (Aloysia triphylla)
Malva (Malva sylvestris)
Toronjil (Melissa officinalis)
Perejil (Petroselinum sativum)
Ortiga (Urtica dioica)
CIDROacuteN
Limoneno Linalool
Citral a
(geraniaL)
Citral b
(neral)
Familia Verbenaceae
CH2CH3
CH3
H
CHO
CH3CH3
CH3
CH2
OHCH3
CH3CH3
CH2
OHCH3
CH3CH3
(Aloysia triphylla)
MALVA
Malvidina Arabinosa
O
CH3
OH
OH OH
OH
Ramnosa Aacutecido
galacturoacutenico
Familia Malvaceae
O+
OH
OCH3
OCH3
OH
OH
OH
O
OH
OH
OH
OH
O
OH
OH
OH
OH
CO2H
(Malva sylvestris)
TORONJIL
Aacutecido clorogeacutenico
Aacutecido cafeacuteico
Aacutecido rosmariacutenico
Familia Labiadaceae
O
HOOC
OH
O
OH
OH OH
COOH
OH
OH
O
O
OH
OHOH
OH
OHHOOC
(Melissa officinalis)
PEREJIL
Familia Umbeliferaceae
Apiol α- Pineno
Apigenina
O
OH
OOH
OH
CH3
O
O
OCH3
OCH3
CH2
(Petroselinum sativum)
ORTIGA
Histamina
Serotonina
Acetilcolina
Familia Urticaceae
NNH
NH2
NH
NH2
OH
OCH3 CH3
N+
CH3CH3
O
(Urtica dioica)
CARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MICROORGANISMOS EMPLEADOS
PARA LA EVALUACIOacuteN DE LA
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Bacillus
subtilis
Bacteria Gram positiva
Aerobia facultativa
No es un
patoacutegeno
humano
Staphylococcus
aureus
Bacterias Gram
positiva
Anaerobia facultativa
Gastroenteritis
Infecciones de la
piel
Artritis
Neumoniacutea
Escherichia
coli
Bacteria Gram
negativa
Aerobia facultativa
Diarrea
Infecciones
extraintestinales
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Klebsiella
pneumoniae
Bacteria Gram negativa
Anaerobia facultativa
Infecciones del
tracto urinario
Neumoniacutea
Pseudomonas
aeruginosa
Bacteria Gram negativa
Aeroacutebica
Dermatitis
Infecciones
(tracto urinario
tejido blando
oacuteseo articular y
gastrointestinal
Candida
albicans
Levadura
Aerobio estricto
Dimorfo
Candidiasis
Infeccioacuten
sanguiacutenea
nosocomial
RADICALES Y
ANTIOXIDANTES
RADICALES LIBRES Y
ANTIOXIDANTES
Radical libre Es una especie quiacutemica que
contiene uno o maacutes electrones desapareados ya
sea por perdida o ganancia de ellos
Antioxidante Es una sustancia que se opone a
la oxidacioacuten o inhibe las reacciones promovidas
por oxigeno o peroacutexidos
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Cadena de transporte mitocondrial
O2-bull + H2O2 bullOH+OH-
Reaccioacuten de Haber-Weiss
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Peroxidacioacuten lipiacutedica
Iniciacioacuten
R-H + radical libre Rbull
Propagacioacuten
Rbull+ O2 ROObull
ROObull+ R-H Rbull+ ROOH
Terminacioacuten
R bull + Rbull
RO2 bull + Rbull
RO2 bull + RO2 bull
Productos que no inician
ni propagan la oxidacioacuten
Destruccioacuten de las
membranas
nucleares
Degradacioacuten de
alimentos
Dantildeo al ADN
Consecuencias
PROCESOS ASOCIADOS AL DANtildeO
OXIDATIVO EN MOLEacuteCULAS BIOLOacuteGICAS
Envejecimiento
Dantildeo del ADN y Peroxidacioacuten de
los aacutecidos grasos de la
membrana celular
Ateroesclerosis
Peroxidacioacuten de liacutepidos en las
partiacuteculas de LDL con dantildeo de
otros de sus componentes
Caacutencer Dantildeo del ADN
Cataratas Modificaciones irreversibles en
las proteiacutenas
MEacuteTODOS IN VITRO PARA DETERMINAR
LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
TIPO DE ENSAYOCARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MEacuteTODOS
FRAP (Ferric ion reducing
antioxidant parameter)TPTZ-Fe+3 +1e TPTZ-Fe+2
DPPH (11-difenil-2-picril-
hidrazilo)
DPPHbull+ A-H DPPH-H
DPPHbull+ Rbull DPPH-R
ABTS (3-etilbenztiazolin-6-
sulfonato de amonio)
ABTS -1e ABTSbull+
ABTSbull+ + A-H ABTS + Rbull
ORAC (Oxygen radical
absorbance capacity)ROObull + A-H ROOH + Abull
JUSTIFICACIOacuteN
Las plantas medicinales presentan unaposibilidad alta de encontrar compuestos activoscomo antioxidantes y antibacterianos contradeterminadas enfermedades
Mas del 25 de los medicamentos modernosproceden de plantas
La medicina ha utilizado una gran variedad deplantas medicinales para desarrollar medicamentosaltamente efectivos contra diversas enfermedades
OBJETIVO GENERAL
Determinar la actividad antioxidante y antibacteriana
contra Bacillus subtilis Candida albicans Escherichia
coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa y
Staphylococcus aureus de los extractos de las plantas
medicinales Aloysia triphylla (Cidroacuten) Malva
sylvestris (Malva) Melissa officinalis (Toronjil)
Petroselinum sativum (Perejil) y Urtica dioica
(Ortiga)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
Obtener extractos de n-hexano diclorometano y
metanol por maceracioacuten pasiva de las plantas
medicinales A triphylla M sylvestris M
officinalis P sativum y U dioica
Realizar mediante cromatografiacutea de capa delgada
la caracterizacioacuten fitoquiacutemica de los extractos
obtenidos
Evaluar la actividad antibacteriana de los extractosobtenidos de A triphylla M sylvestris M officinalisP sativum y U dioica mediante el meacutetodo deperforacioacuten en placa de agar contra B subtilis Calbicans E coli K pneumoniae P aeruginosa y Saureus
Establecer la capacidad antioxidante de los extractosde n-hexano diclorometano y metanol de las especiesA triphylla M sylvestris M officinalis P sativum yU dioica a traveacutes del ensayo de decoloracioacuten delradical 22-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
SECCIOacuteN
EXPERIMENTAL
bullActividad antibacteriana
bullExtraccioacuten del material vegetal
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
bullActividad antioxidante
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
CIDROacuteN
Limoneno Linalool
Citral a
(geraniaL)
Citral b
(neral)
Familia Verbenaceae
CH2CH3
CH3
H
CHO
CH3CH3
CH3
CH2
OHCH3
CH3CH3
CH2
OHCH3
CH3CH3
(Aloysia triphylla)
MALVA
Malvidina Arabinosa
O
CH3
OH
OH OH
OH
Ramnosa Aacutecido
galacturoacutenico
Familia Malvaceae
O+
OH
OCH3
OCH3
OH
OH
OH
O
OH
OH
OH
OH
O
OH
OH
OH
OH
CO2H
(Malva sylvestris)
TORONJIL
Aacutecido clorogeacutenico
Aacutecido cafeacuteico
Aacutecido rosmariacutenico
Familia Labiadaceae
O
HOOC
OH
O
OH
OH OH
COOH
OH
OH
O
O
OH
OHOH
OH
OHHOOC
(Melissa officinalis)
PEREJIL
Familia Umbeliferaceae
Apiol α- Pineno
Apigenina
O
OH
OOH
OH
CH3
O
O
OCH3
OCH3
CH2
(Petroselinum sativum)
ORTIGA
Histamina
Serotonina
Acetilcolina
Familia Urticaceae
NNH
NH2
NH
NH2
OH
OCH3 CH3
N+
CH3CH3
O
(Urtica dioica)
CARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MICROORGANISMOS EMPLEADOS
PARA LA EVALUACIOacuteN DE LA
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Bacillus
subtilis
Bacteria Gram positiva
Aerobia facultativa
No es un
patoacutegeno
humano
Staphylococcus
aureus
Bacterias Gram
positiva
Anaerobia facultativa
Gastroenteritis
Infecciones de la
piel
Artritis
Neumoniacutea
Escherichia
coli
Bacteria Gram
negativa
Aerobia facultativa
Diarrea
Infecciones
extraintestinales
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Klebsiella
pneumoniae
Bacteria Gram negativa
Anaerobia facultativa
Infecciones del
tracto urinario
Neumoniacutea
Pseudomonas
aeruginosa
Bacteria Gram negativa
Aeroacutebica
Dermatitis
Infecciones
(tracto urinario
tejido blando
oacuteseo articular y
gastrointestinal
Candida
albicans
Levadura
Aerobio estricto
Dimorfo
Candidiasis
Infeccioacuten
sanguiacutenea
nosocomial
RADICALES Y
ANTIOXIDANTES
RADICALES LIBRES Y
ANTIOXIDANTES
Radical libre Es una especie quiacutemica que
contiene uno o maacutes electrones desapareados ya
sea por perdida o ganancia de ellos
Antioxidante Es una sustancia que se opone a
la oxidacioacuten o inhibe las reacciones promovidas
por oxigeno o peroacutexidos
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Cadena de transporte mitocondrial
O2-bull + H2O2 bullOH+OH-
Reaccioacuten de Haber-Weiss
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Peroxidacioacuten lipiacutedica
Iniciacioacuten
R-H + radical libre Rbull
Propagacioacuten
Rbull+ O2 ROObull
ROObull+ R-H Rbull+ ROOH
Terminacioacuten
R bull + Rbull
RO2 bull + Rbull
RO2 bull + RO2 bull
Productos que no inician
ni propagan la oxidacioacuten
Destruccioacuten de las
membranas
nucleares
Degradacioacuten de
alimentos
Dantildeo al ADN
Consecuencias
PROCESOS ASOCIADOS AL DANtildeO
OXIDATIVO EN MOLEacuteCULAS BIOLOacuteGICAS
Envejecimiento
Dantildeo del ADN y Peroxidacioacuten de
los aacutecidos grasos de la
membrana celular
Ateroesclerosis
Peroxidacioacuten de liacutepidos en las
partiacuteculas de LDL con dantildeo de
otros de sus componentes
Caacutencer Dantildeo del ADN
Cataratas Modificaciones irreversibles en
las proteiacutenas
MEacuteTODOS IN VITRO PARA DETERMINAR
LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
TIPO DE ENSAYOCARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MEacuteTODOS
FRAP (Ferric ion reducing
antioxidant parameter)TPTZ-Fe+3 +1e TPTZ-Fe+2
DPPH (11-difenil-2-picril-
hidrazilo)
DPPHbull+ A-H DPPH-H
DPPHbull+ Rbull DPPH-R
ABTS (3-etilbenztiazolin-6-
sulfonato de amonio)
ABTS -1e ABTSbull+
ABTSbull+ + A-H ABTS + Rbull
ORAC (Oxygen radical
absorbance capacity)ROObull + A-H ROOH + Abull
JUSTIFICACIOacuteN
Las plantas medicinales presentan unaposibilidad alta de encontrar compuestos activoscomo antioxidantes y antibacterianos contradeterminadas enfermedades
Mas del 25 de los medicamentos modernosproceden de plantas
La medicina ha utilizado una gran variedad deplantas medicinales para desarrollar medicamentosaltamente efectivos contra diversas enfermedades
OBJETIVO GENERAL
Determinar la actividad antioxidante y antibacteriana
contra Bacillus subtilis Candida albicans Escherichia
coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa y
Staphylococcus aureus de los extractos de las plantas
medicinales Aloysia triphylla (Cidroacuten) Malva
sylvestris (Malva) Melissa officinalis (Toronjil)
Petroselinum sativum (Perejil) y Urtica dioica
(Ortiga)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
Obtener extractos de n-hexano diclorometano y
metanol por maceracioacuten pasiva de las plantas
medicinales A triphylla M sylvestris M
officinalis P sativum y U dioica
Realizar mediante cromatografiacutea de capa delgada
la caracterizacioacuten fitoquiacutemica de los extractos
obtenidos
Evaluar la actividad antibacteriana de los extractosobtenidos de A triphylla M sylvestris M officinalisP sativum y U dioica mediante el meacutetodo deperforacioacuten en placa de agar contra B subtilis Calbicans E coli K pneumoniae P aeruginosa y Saureus
Establecer la capacidad antioxidante de los extractosde n-hexano diclorometano y metanol de las especiesA triphylla M sylvestris M officinalis P sativum yU dioica a traveacutes del ensayo de decoloracioacuten delradical 22-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
SECCIOacuteN
EXPERIMENTAL
bullActividad antibacteriana
bullExtraccioacuten del material vegetal
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
bullActividad antioxidante
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
MALVA
Malvidina Arabinosa
O
CH3
OH
OH OH
OH
Ramnosa Aacutecido
galacturoacutenico
Familia Malvaceae
O+
OH
OCH3
OCH3
OH
OH
OH
O
OH
OH
OH
OH
O
OH
OH
OH
OH
CO2H
(Malva sylvestris)
TORONJIL
Aacutecido clorogeacutenico
Aacutecido cafeacuteico
Aacutecido rosmariacutenico
Familia Labiadaceae
O
HOOC
OH
O
OH
OH OH
COOH
OH
OH
O
O
OH
OHOH
OH
OHHOOC
(Melissa officinalis)
PEREJIL
Familia Umbeliferaceae
Apiol α- Pineno
Apigenina
O
OH
OOH
OH
CH3
O
O
OCH3
OCH3
CH2
(Petroselinum sativum)
ORTIGA
Histamina
Serotonina
Acetilcolina
Familia Urticaceae
NNH
NH2
NH
NH2
OH
OCH3 CH3
N+
CH3CH3
O
(Urtica dioica)
CARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MICROORGANISMOS EMPLEADOS
PARA LA EVALUACIOacuteN DE LA
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Bacillus
subtilis
Bacteria Gram positiva
Aerobia facultativa
No es un
patoacutegeno
humano
Staphylococcus
aureus
Bacterias Gram
positiva
Anaerobia facultativa
Gastroenteritis
Infecciones de la
piel
Artritis
Neumoniacutea
Escherichia
coli
Bacteria Gram
negativa
Aerobia facultativa
Diarrea
Infecciones
extraintestinales
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Klebsiella
pneumoniae
Bacteria Gram negativa
Anaerobia facultativa
Infecciones del
tracto urinario
Neumoniacutea
Pseudomonas
aeruginosa
Bacteria Gram negativa
Aeroacutebica
Dermatitis
Infecciones
(tracto urinario
tejido blando
oacuteseo articular y
gastrointestinal
Candida
albicans
Levadura
Aerobio estricto
Dimorfo
Candidiasis
Infeccioacuten
sanguiacutenea
nosocomial
RADICALES Y
ANTIOXIDANTES
RADICALES LIBRES Y
ANTIOXIDANTES
Radical libre Es una especie quiacutemica que
contiene uno o maacutes electrones desapareados ya
sea por perdida o ganancia de ellos
Antioxidante Es una sustancia que se opone a
la oxidacioacuten o inhibe las reacciones promovidas
por oxigeno o peroacutexidos
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Cadena de transporte mitocondrial
O2-bull + H2O2 bullOH+OH-
Reaccioacuten de Haber-Weiss
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Peroxidacioacuten lipiacutedica
Iniciacioacuten
R-H + radical libre Rbull
Propagacioacuten
Rbull+ O2 ROObull
ROObull+ R-H Rbull+ ROOH
Terminacioacuten
R bull + Rbull
RO2 bull + Rbull
RO2 bull + RO2 bull
Productos que no inician
ni propagan la oxidacioacuten
Destruccioacuten de las
membranas
nucleares
Degradacioacuten de
alimentos
Dantildeo al ADN
Consecuencias
PROCESOS ASOCIADOS AL DANtildeO
OXIDATIVO EN MOLEacuteCULAS BIOLOacuteGICAS
Envejecimiento
Dantildeo del ADN y Peroxidacioacuten de
los aacutecidos grasos de la
membrana celular
Ateroesclerosis
Peroxidacioacuten de liacutepidos en las
partiacuteculas de LDL con dantildeo de
otros de sus componentes
Caacutencer Dantildeo del ADN
Cataratas Modificaciones irreversibles en
las proteiacutenas
MEacuteTODOS IN VITRO PARA DETERMINAR
LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
TIPO DE ENSAYOCARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MEacuteTODOS
FRAP (Ferric ion reducing
antioxidant parameter)TPTZ-Fe+3 +1e TPTZ-Fe+2
DPPH (11-difenil-2-picril-
hidrazilo)
DPPHbull+ A-H DPPH-H
DPPHbull+ Rbull DPPH-R
ABTS (3-etilbenztiazolin-6-
sulfonato de amonio)
ABTS -1e ABTSbull+
ABTSbull+ + A-H ABTS + Rbull
ORAC (Oxygen radical
absorbance capacity)ROObull + A-H ROOH + Abull
JUSTIFICACIOacuteN
Las plantas medicinales presentan unaposibilidad alta de encontrar compuestos activoscomo antioxidantes y antibacterianos contradeterminadas enfermedades
Mas del 25 de los medicamentos modernosproceden de plantas
La medicina ha utilizado una gran variedad deplantas medicinales para desarrollar medicamentosaltamente efectivos contra diversas enfermedades
OBJETIVO GENERAL
Determinar la actividad antioxidante y antibacteriana
contra Bacillus subtilis Candida albicans Escherichia
coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa y
Staphylococcus aureus de los extractos de las plantas
medicinales Aloysia triphylla (Cidroacuten) Malva
sylvestris (Malva) Melissa officinalis (Toronjil)
Petroselinum sativum (Perejil) y Urtica dioica
(Ortiga)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
Obtener extractos de n-hexano diclorometano y
metanol por maceracioacuten pasiva de las plantas
medicinales A triphylla M sylvestris M
officinalis P sativum y U dioica
Realizar mediante cromatografiacutea de capa delgada
la caracterizacioacuten fitoquiacutemica de los extractos
obtenidos
Evaluar la actividad antibacteriana de los extractosobtenidos de A triphylla M sylvestris M officinalisP sativum y U dioica mediante el meacutetodo deperforacioacuten en placa de agar contra B subtilis Calbicans E coli K pneumoniae P aeruginosa y Saureus
Establecer la capacidad antioxidante de los extractosde n-hexano diclorometano y metanol de las especiesA triphylla M sylvestris M officinalis P sativum yU dioica a traveacutes del ensayo de decoloracioacuten delradical 22-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
SECCIOacuteN
EXPERIMENTAL
bullActividad antibacteriana
bullExtraccioacuten del material vegetal
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
bullActividad antioxidante
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
TORONJIL
Aacutecido clorogeacutenico
Aacutecido cafeacuteico
Aacutecido rosmariacutenico
Familia Labiadaceae
O
HOOC
OH
O
OH
OH OH
COOH
OH
OH
O
O
OH
OHOH
OH
OHHOOC
(Melissa officinalis)
PEREJIL
Familia Umbeliferaceae
Apiol α- Pineno
Apigenina
O
OH
OOH
OH
CH3
O
O
OCH3
OCH3
CH2
(Petroselinum sativum)
ORTIGA
Histamina
Serotonina
Acetilcolina
Familia Urticaceae
NNH
NH2
NH
NH2
OH
OCH3 CH3
N+
CH3CH3
O
(Urtica dioica)
CARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MICROORGANISMOS EMPLEADOS
PARA LA EVALUACIOacuteN DE LA
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Bacillus
subtilis
Bacteria Gram positiva
Aerobia facultativa
No es un
patoacutegeno
humano
Staphylococcus
aureus
Bacterias Gram
positiva
Anaerobia facultativa
Gastroenteritis
Infecciones de la
piel
Artritis
Neumoniacutea
Escherichia
coli
Bacteria Gram
negativa
Aerobia facultativa
Diarrea
Infecciones
extraintestinales
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Klebsiella
pneumoniae
Bacteria Gram negativa
Anaerobia facultativa
Infecciones del
tracto urinario
Neumoniacutea
Pseudomonas
aeruginosa
Bacteria Gram negativa
Aeroacutebica
Dermatitis
Infecciones
(tracto urinario
tejido blando
oacuteseo articular y
gastrointestinal
Candida
albicans
Levadura
Aerobio estricto
Dimorfo
Candidiasis
Infeccioacuten
sanguiacutenea
nosocomial
RADICALES Y
ANTIOXIDANTES
RADICALES LIBRES Y
ANTIOXIDANTES
Radical libre Es una especie quiacutemica que
contiene uno o maacutes electrones desapareados ya
sea por perdida o ganancia de ellos
Antioxidante Es una sustancia que se opone a
la oxidacioacuten o inhibe las reacciones promovidas
por oxigeno o peroacutexidos
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Cadena de transporte mitocondrial
O2-bull + H2O2 bullOH+OH-
Reaccioacuten de Haber-Weiss
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Peroxidacioacuten lipiacutedica
Iniciacioacuten
R-H + radical libre Rbull
Propagacioacuten
Rbull+ O2 ROObull
ROObull+ R-H Rbull+ ROOH
Terminacioacuten
R bull + Rbull
RO2 bull + Rbull
RO2 bull + RO2 bull
Productos que no inician
ni propagan la oxidacioacuten
Destruccioacuten de las
membranas
nucleares
Degradacioacuten de
alimentos
Dantildeo al ADN
Consecuencias
PROCESOS ASOCIADOS AL DANtildeO
OXIDATIVO EN MOLEacuteCULAS BIOLOacuteGICAS
Envejecimiento
Dantildeo del ADN y Peroxidacioacuten de
los aacutecidos grasos de la
membrana celular
Ateroesclerosis
Peroxidacioacuten de liacutepidos en las
partiacuteculas de LDL con dantildeo de
otros de sus componentes
Caacutencer Dantildeo del ADN
Cataratas Modificaciones irreversibles en
las proteiacutenas
MEacuteTODOS IN VITRO PARA DETERMINAR
LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
TIPO DE ENSAYOCARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MEacuteTODOS
FRAP (Ferric ion reducing
antioxidant parameter)TPTZ-Fe+3 +1e TPTZ-Fe+2
DPPH (11-difenil-2-picril-
hidrazilo)
DPPHbull+ A-H DPPH-H
DPPHbull+ Rbull DPPH-R
ABTS (3-etilbenztiazolin-6-
sulfonato de amonio)
ABTS -1e ABTSbull+
ABTSbull+ + A-H ABTS + Rbull
ORAC (Oxygen radical
absorbance capacity)ROObull + A-H ROOH + Abull
JUSTIFICACIOacuteN
Las plantas medicinales presentan unaposibilidad alta de encontrar compuestos activoscomo antioxidantes y antibacterianos contradeterminadas enfermedades
Mas del 25 de los medicamentos modernosproceden de plantas
La medicina ha utilizado una gran variedad deplantas medicinales para desarrollar medicamentosaltamente efectivos contra diversas enfermedades
OBJETIVO GENERAL
Determinar la actividad antioxidante y antibacteriana
contra Bacillus subtilis Candida albicans Escherichia
coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa y
Staphylococcus aureus de los extractos de las plantas
medicinales Aloysia triphylla (Cidroacuten) Malva
sylvestris (Malva) Melissa officinalis (Toronjil)
Petroselinum sativum (Perejil) y Urtica dioica
(Ortiga)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
Obtener extractos de n-hexano diclorometano y
metanol por maceracioacuten pasiva de las plantas
medicinales A triphylla M sylvestris M
officinalis P sativum y U dioica
Realizar mediante cromatografiacutea de capa delgada
la caracterizacioacuten fitoquiacutemica de los extractos
obtenidos
Evaluar la actividad antibacteriana de los extractosobtenidos de A triphylla M sylvestris M officinalisP sativum y U dioica mediante el meacutetodo deperforacioacuten en placa de agar contra B subtilis Calbicans E coli K pneumoniae P aeruginosa y Saureus
Establecer la capacidad antioxidante de los extractosde n-hexano diclorometano y metanol de las especiesA triphylla M sylvestris M officinalis P sativum yU dioica a traveacutes del ensayo de decoloracioacuten delradical 22-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
SECCIOacuteN
EXPERIMENTAL
bullActividad antibacteriana
bullExtraccioacuten del material vegetal
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
bullActividad antioxidante
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
PEREJIL
Familia Umbeliferaceae
Apiol α- Pineno
Apigenina
O
OH
OOH
OH
CH3
O
O
OCH3
OCH3
CH2
(Petroselinum sativum)
ORTIGA
Histamina
Serotonina
Acetilcolina
Familia Urticaceae
NNH
NH2
NH
NH2
OH
OCH3 CH3
N+
CH3CH3
O
(Urtica dioica)
CARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MICROORGANISMOS EMPLEADOS
PARA LA EVALUACIOacuteN DE LA
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Bacillus
subtilis
Bacteria Gram positiva
Aerobia facultativa
No es un
patoacutegeno
humano
Staphylococcus
aureus
Bacterias Gram
positiva
Anaerobia facultativa
Gastroenteritis
Infecciones de la
piel
Artritis
Neumoniacutea
Escherichia
coli
Bacteria Gram
negativa
Aerobia facultativa
Diarrea
Infecciones
extraintestinales
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Klebsiella
pneumoniae
Bacteria Gram negativa
Anaerobia facultativa
Infecciones del
tracto urinario
Neumoniacutea
Pseudomonas
aeruginosa
Bacteria Gram negativa
Aeroacutebica
Dermatitis
Infecciones
(tracto urinario
tejido blando
oacuteseo articular y
gastrointestinal
Candida
albicans
Levadura
Aerobio estricto
Dimorfo
Candidiasis
Infeccioacuten
sanguiacutenea
nosocomial
RADICALES Y
ANTIOXIDANTES
RADICALES LIBRES Y
ANTIOXIDANTES
Radical libre Es una especie quiacutemica que
contiene uno o maacutes electrones desapareados ya
sea por perdida o ganancia de ellos
Antioxidante Es una sustancia que se opone a
la oxidacioacuten o inhibe las reacciones promovidas
por oxigeno o peroacutexidos
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Cadena de transporte mitocondrial
O2-bull + H2O2 bullOH+OH-
Reaccioacuten de Haber-Weiss
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Peroxidacioacuten lipiacutedica
Iniciacioacuten
R-H + radical libre Rbull
Propagacioacuten
Rbull+ O2 ROObull
ROObull+ R-H Rbull+ ROOH
Terminacioacuten
R bull + Rbull
RO2 bull + Rbull
RO2 bull + RO2 bull
Productos que no inician
ni propagan la oxidacioacuten
Destruccioacuten de las
membranas
nucleares
Degradacioacuten de
alimentos
Dantildeo al ADN
Consecuencias
PROCESOS ASOCIADOS AL DANtildeO
OXIDATIVO EN MOLEacuteCULAS BIOLOacuteGICAS
Envejecimiento
Dantildeo del ADN y Peroxidacioacuten de
los aacutecidos grasos de la
membrana celular
Ateroesclerosis
Peroxidacioacuten de liacutepidos en las
partiacuteculas de LDL con dantildeo de
otros de sus componentes
Caacutencer Dantildeo del ADN
Cataratas Modificaciones irreversibles en
las proteiacutenas
MEacuteTODOS IN VITRO PARA DETERMINAR
LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
TIPO DE ENSAYOCARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MEacuteTODOS
FRAP (Ferric ion reducing
antioxidant parameter)TPTZ-Fe+3 +1e TPTZ-Fe+2
DPPH (11-difenil-2-picril-
hidrazilo)
DPPHbull+ A-H DPPH-H
DPPHbull+ Rbull DPPH-R
ABTS (3-etilbenztiazolin-6-
sulfonato de amonio)
ABTS -1e ABTSbull+
ABTSbull+ + A-H ABTS + Rbull
ORAC (Oxygen radical
absorbance capacity)ROObull + A-H ROOH + Abull
JUSTIFICACIOacuteN
Las plantas medicinales presentan unaposibilidad alta de encontrar compuestos activoscomo antioxidantes y antibacterianos contradeterminadas enfermedades
Mas del 25 de los medicamentos modernosproceden de plantas
La medicina ha utilizado una gran variedad deplantas medicinales para desarrollar medicamentosaltamente efectivos contra diversas enfermedades
OBJETIVO GENERAL
Determinar la actividad antioxidante y antibacteriana
contra Bacillus subtilis Candida albicans Escherichia
coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa y
Staphylococcus aureus de los extractos de las plantas
medicinales Aloysia triphylla (Cidroacuten) Malva
sylvestris (Malva) Melissa officinalis (Toronjil)
Petroselinum sativum (Perejil) y Urtica dioica
(Ortiga)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
Obtener extractos de n-hexano diclorometano y
metanol por maceracioacuten pasiva de las plantas
medicinales A triphylla M sylvestris M
officinalis P sativum y U dioica
Realizar mediante cromatografiacutea de capa delgada
la caracterizacioacuten fitoquiacutemica de los extractos
obtenidos
Evaluar la actividad antibacteriana de los extractosobtenidos de A triphylla M sylvestris M officinalisP sativum y U dioica mediante el meacutetodo deperforacioacuten en placa de agar contra B subtilis Calbicans E coli K pneumoniae P aeruginosa y Saureus
Establecer la capacidad antioxidante de los extractosde n-hexano diclorometano y metanol de las especiesA triphylla M sylvestris M officinalis P sativum yU dioica a traveacutes del ensayo de decoloracioacuten delradical 22-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
SECCIOacuteN
EXPERIMENTAL
bullActividad antibacteriana
bullExtraccioacuten del material vegetal
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
bullActividad antioxidante
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
ORTIGA
Histamina
Serotonina
Acetilcolina
Familia Urticaceae
NNH
NH2
NH
NH2
OH
OCH3 CH3
N+
CH3CH3
O
(Urtica dioica)
CARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MICROORGANISMOS EMPLEADOS
PARA LA EVALUACIOacuteN DE LA
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Bacillus
subtilis
Bacteria Gram positiva
Aerobia facultativa
No es un
patoacutegeno
humano
Staphylococcus
aureus
Bacterias Gram
positiva
Anaerobia facultativa
Gastroenteritis
Infecciones de la
piel
Artritis
Neumoniacutea
Escherichia
coli
Bacteria Gram
negativa
Aerobia facultativa
Diarrea
Infecciones
extraintestinales
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Klebsiella
pneumoniae
Bacteria Gram negativa
Anaerobia facultativa
Infecciones del
tracto urinario
Neumoniacutea
Pseudomonas
aeruginosa
Bacteria Gram negativa
Aeroacutebica
Dermatitis
Infecciones
(tracto urinario
tejido blando
oacuteseo articular y
gastrointestinal
Candida
albicans
Levadura
Aerobio estricto
Dimorfo
Candidiasis
Infeccioacuten
sanguiacutenea
nosocomial
RADICALES Y
ANTIOXIDANTES
RADICALES LIBRES Y
ANTIOXIDANTES
Radical libre Es una especie quiacutemica que
contiene uno o maacutes electrones desapareados ya
sea por perdida o ganancia de ellos
Antioxidante Es una sustancia que se opone a
la oxidacioacuten o inhibe las reacciones promovidas
por oxigeno o peroacutexidos
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Cadena de transporte mitocondrial
O2-bull + H2O2 bullOH+OH-
Reaccioacuten de Haber-Weiss
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Peroxidacioacuten lipiacutedica
Iniciacioacuten
R-H + radical libre Rbull
Propagacioacuten
Rbull+ O2 ROObull
ROObull+ R-H Rbull+ ROOH
Terminacioacuten
R bull + Rbull
RO2 bull + Rbull
RO2 bull + RO2 bull
Productos que no inician
ni propagan la oxidacioacuten
Destruccioacuten de las
membranas
nucleares
Degradacioacuten de
alimentos
Dantildeo al ADN
Consecuencias
PROCESOS ASOCIADOS AL DANtildeO
OXIDATIVO EN MOLEacuteCULAS BIOLOacuteGICAS
Envejecimiento
Dantildeo del ADN y Peroxidacioacuten de
los aacutecidos grasos de la
membrana celular
Ateroesclerosis
Peroxidacioacuten de liacutepidos en las
partiacuteculas de LDL con dantildeo de
otros de sus componentes
Caacutencer Dantildeo del ADN
Cataratas Modificaciones irreversibles en
las proteiacutenas
MEacuteTODOS IN VITRO PARA DETERMINAR
LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
TIPO DE ENSAYOCARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MEacuteTODOS
FRAP (Ferric ion reducing
antioxidant parameter)TPTZ-Fe+3 +1e TPTZ-Fe+2
DPPH (11-difenil-2-picril-
hidrazilo)
DPPHbull+ A-H DPPH-H
DPPHbull+ Rbull DPPH-R
ABTS (3-etilbenztiazolin-6-
sulfonato de amonio)
ABTS -1e ABTSbull+
ABTSbull+ + A-H ABTS + Rbull
ORAC (Oxygen radical
absorbance capacity)ROObull + A-H ROOH + Abull
JUSTIFICACIOacuteN
Las plantas medicinales presentan unaposibilidad alta de encontrar compuestos activoscomo antioxidantes y antibacterianos contradeterminadas enfermedades
Mas del 25 de los medicamentos modernosproceden de plantas
La medicina ha utilizado una gran variedad deplantas medicinales para desarrollar medicamentosaltamente efectivos contra diversas enfermedades
OBJETIVO GENERAL
Determinar la actividad antioxidante y antibacteriana
contra Bacillus subtilis Candida albicans Escherichia
coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa y
Staphylococcus aureus de los extractos de las plantas
medicinales Aloysia triphylla (Cidroacuten) Malva
sylvestris (Malva) Melissa officinalis (Toronjil)
Petroselinum sativum (Perejil) y Urtica dioica
(Ortiga)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
Obtener extractos de n-hexano diclorometano y
metanol por maceracioacuten pasiva de las plantas
medicinales A triphylla M sylvestris M
officinalis P sativum y U dioica
Realizar mediante cromatografiacutea de capa delgada
la caracterizacioacuten fitoquiacutemica de los extractos
obtenidos
Evaluar la actividad antibacteriana de los extractosobtenidos de A triphylla M sylvestris M officinalisP sativum y U dioica mediante el meacutetodo deperforacioacuten en placa de agar contra B subtilis Calbicans E coli K pneumoniae P aeruginosa y Saureus
Establecer la capacidad antioxidante de los extractosde n-hexano diclorometano y metanol de las especiesA triphylla M sylvestris M officinalis P sativum yU dioica a traveacutes del ensayo de decoloracioacuten delradical 22-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
SECCIOacuteN
EXPERIMENTAL
bullActividad antibacteriana
bullExtraccioacuten del material vegetal
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
bullActividad antioxidante
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
CARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MICROORGANISMOS EMPLEADOS
PARA LA EVALUACIOacuteN DE LA
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Bacillus
subtilis
Bacteria Gram positiva
Aerobia facultativa
No es un
patoacutegeno
humano
Staphylococcus
aureus
Bacterias Gram
positiva
Anaerobia facultativa
Gastroenteritis
Infecciones de la
piel
Artritis
Neumoniacutea
Escherichia
coli
Bacteria Gram
negativa
Aerobia facultativa
Diarrea
Infecciones
extraintestinales
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Klebsiella
pneumoniae
Bacteria Gram negativa
Anaerobia facultativa
Infecciones del
tracto urinario
Neumoniacutea
Pseudomonas
aeruginosa
Bacteria Gram negativa
Aeroacutebica
Dermatitis
Infecciones
(tracto urinario
tejido blando
oacuteseo articular y
gastrointestinal
Candida
albicans
Levadura
Aerobio estricto
Dimorfo
Candidiasis
Infeccioacuten
sanguiacutenea
nosocomial
RADICALES Y
ANTIOXIDANTES
RADICALES LIBRES Y
ANTIOXIDANTES
Radical libre Es una especie quiacutemica que
contiene uno o maacutes electrones desapareados ya
sea por perdida o ganancia de ellos
Antioxidante Es una sustancia que se opone a
la oxidacioacuten o inhibe las reacciones promovidas
por oxigeno o peroacutexidos
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Cadena de transporte mitocondrial
O2-bull + H2O2 bullOH+OH-
Reaccioacuten de Haber-Weiss
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Peroxidacioacuten lipiacutedica
Iniciacioacuten
R-H + radical libre Rbull
Propagacioacuten
Rbull+ O2 ROObull
ROObull+ R-H Rbull+ ROOH
Terminacioacuten
R bull + Rbull
RO2 bull + Rbull
RO2 bull + RO2 bull
Productos que no inician
ni propagan la oxidacioacuten
Destruccioacuten de las
membranas
nucleares
Degradacioacuten de
alimentos
Dantildeo al ADN
Consecuencias
PROCESOS ASOCIADOS AL DANtildeO
OXIDATIVO EN MOLEacuteCULAS BIOLOacuteGICAS
Envejecimiento
Dantildeo del ADN y Peroxidacioacuten de
los aacutecidos grasos de la
membrana celular
Ateroesclerosis
Peroxidacioacuten de liacutepidos en las
partiacuteculas de LDL con dantildeo de
otros de sus componentes
Caacutencer Dantildeo del ADN
Cataratas Modificaciones irreversibles en
las proteiacutenas
MEacuteTODOS IN VITRO PARA DETERMINAR
LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
TIPO DE ENSAYOCARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MEacuteTODOS
FRAP (Ferric ion reducing
antioxidant parameter)TPTZ-Fe+3 +1e TPTZ-Fe+2
DPPH (11-difenil-2-picril-
hidrazilo)
DPPHbull+ A-H DPPH-H
DPPHbull+ Rbull DPPH-R
ABTS (3-etilbenztiazolin-6-
sulfonato de amonio)
ABTS -1e ABTSbull+
ABTSbull+ + A-H ABTS + Rbull
ORAC (Oxygen radical
absorbance capacity)ROObull + A-H ROOH + Abull
JUSTIFICACIOacuteN
Las plantas medicinales presentan unaposibilidad alta de encontrar compuestos activoscomo antioxidantes y antibacterianos contradeterminadas enfermedades
Mas del 25 de los medicamentos modernosproceden de plantas
La medicina ha utilizado una gran variedad deplantas medicinales para desarrollar medicamentosaltamente efectivos contra diversas enfermedades
OBJETIVO GENERAL
Determinar la actividad antioxidante y antibacteriana
contra Bacillus subtilis Candida albicans Escherichia
coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa y
Staphylococcus aureus de los extractos de las plantas
medicinales Aloysia triphylla (Cidroacuten) Malva
sylvestris (Malva) Melissa officinalis (Toronjil)
Petroselinum sativum (Perejil) y Urtica dioica
(Ortiga)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
Obtener extractos de n-hexano diclorometano y
metanol por maceracioacuten pasiva de las plantas
medicinales A triphylla M sylvestris M
officinalis P sativum y U dioica
Realizar mediante cromatografiacutea de capa delgada
la caracterizacioacuten fitoquiacutemica de los extractos
obtenidos
Evaluar la actividad antibacteriana de los extractosobtenidos de A triphylla M sylvestris M officinalisP sativum y U dioica mediante el meacutetodo deperforacioacuten en placa de agar contra B subtilis Calbicans E coli K pneumoniae P aeruginosa y Saureus
Establecer la capacidad antioxidante de los extractosde n-hexano diclorometano y metanol de las especiesA triphylla M sylvestris M officinalis P sativum yU dioica a traveacutes del ensayo de decoloracioacuten delradical 22-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
SECCIOacuteN
EXPERIMENTAL
bullActividad antibacteriana
bullExtraccioacuten del material vegetal
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
bullActividad antioxidante
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Bacillus
subtilis
Bacteria Gram positiva
Aerobia facultativa
No es un
patoacutegeno
humano
Staphylococcus
aureus
Bacterias Gram
positiva
Anaerobia facultativa
Gastroenteritis
Infecciones de la
piel
Artritis
Neumoniacutea
Escherichia
coli
Bacteria Gram
negativa
Aerobia facultativa
Diarrea
Infecciones
extraintestinales
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Klebsiella
pneumoniae
Bacteria Gram negativa
Anaerobia facultativa
Infecciones del
tracto urinario
Neumoniacutea
Pseudomonas
aeruginosa
Bacteria Gram negativa
Aeroacutebica
Dermatitis
Infecciones
(tracto urinario
tejido blando
oacuteseo articular y
gastrointestinal
Candida
albicans
Levadura
Aerobio estricto
Dimorfo
Candidiasis
Infeccioacuten
sanguiacutenea
nosocomial
RADICALES Y
ANTIOXIDANTES
RADICALES LIBRES Y
ANTIOXIDANTES
Radical libre Es una especie quiacutemica que
contiene uno o maacutes electrones desapareados ya
sea por perdida o ganancia de ellos
Antioxidante Es una sustancia que se opone a
la oxidacioacuten o inhibe las reacciones promovidas
por oxigeno o peroacutexidos
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Cadena de transporte mitocondrial
O2-bull + H2O2 bullOH+OH-
Reaccioacuten de Haber-Weiss
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Peroxidacioacuten lipiacutedica
Iniciacioacuten
R-H + radical libre Rbull
Propagacioacuten
Rbull+ O2 ROObull
ROObull+ R-H Rbull+ ROOH
Terminacioacuten
R bull + Rbull
RO2 bull + Rbull
RO2 bull + RO2 bull
Productos que no inician
ni propagan la oxidacioacuten
Destruccioacuten de las
membranas
nucleares
Degradacioacuten de
alimentos
Dantildeo al ADN
Consecuencias
PROCESOS ASOCIADOS AL DANtildeO
OXIDATIVO EN MOLEacuteCULAS BIOLOacuteGICAS
Envejecimiento
Dantildeo del ADN y Peroxidacioacuten de
los aacutecidos grasos de la
membrana celular
Ateroesclerosis
Peroxidacioacuten de liacutepidos en las
partiacuteculas de LDL con dantildeo de
otros de sus componentes
Caacutencer Dantildeo del ADN
Cataratas Modificaciones irreversibles en
las proteiacutenas
MEacuteTODOS IN VITRO PARA DETERMINAR
LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
TIPO DE ENSAYOCARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MEacuteTODOS
FRAP (Ferric ion reducing
antioxidant parameter)TPTZ-Fe+3 +1e TPTZ-Fe+2
DPPH (11-difenil-2-picril-
hidrazilo)
DPPHbull+ A-H DPPH-H
DPPHbull+ Rbull DPPH-R
ABTS (3-etilbenztiazolin-6-
sulfonato de amonio)
ABTS -1e ABTSbull+
ABTSbull+ + A-H ABTS + Rbull
ORAC (Oxygen radical
absorbance capacity)ROObull + A-H ROOH + Abull
JUSTIFICACIOacuteN
Las plantas medicinales presentan unaposibilidad alta de encontrar compuestos activoscomo antioxidantes y antibacterianos contradeterminadas enfermedades
Mas del 25 de los medicamentos modernosproceden de plantas
La medicina ha utilizado una gran variedad deplantas medicinales para desarrollar medicamentosaltamente efectivos contra diversas enfermedades
OBJETIVO GENERAL
Determinar la actividad antioxidante y antibacteriana
contra Bacillus subtilis Candida albicans Escherichia
coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa y
Staphylococcus aureus de los extractos de las plantas
medicinales Aloysia triphylla (Cidroacuten) Malva
sylvestris (Malva) Melissa officinalis (Toronjil)
Petroselinum sativum (Perejil) y Urtica dioica
(Ortiga)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
Obtener extractos de n-hexano diclorometano y
metanol por maceracioacuten pasiva de las plantas
medicinales A triphylla M sylvestris M
officinalis P sativum y U dioica
Realizar mediante cromatografiacutea de capa delgada
la caracterizacioacuten fitoquiacutemica de los extractos
obtenidos
Evaluar la actividad antibacteriana de los extractosobtenidos de A triphylla M sylvestris M officinalisP sativum y U dioica mediante el meacutetodo deperforacioacuten en placa de agar contra B subtilis Calbicans E coli K pneumoniae P aeruginosa y Saureus
Establecer la capacidad antioxidante de los extractosde n-hexano diclorometano y metanol de las especiesA triphylla M sylvestris M officinalis P sativum yU dioica a traveacutes del ensayo de decoloracioacuten delradical 22-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
SECCIOacuteN
EXPERIMENTAL
bullActividad antibacteriana
bullExtraccioacuten del material vegetal
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
bullActividad antioxidante
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
MICROORGANISMO CARACTERIacuteSTICASENFERMEDAD
QUE GENERA
Klebsiella
pneumoniae
Bacteria Gram negativa
Anaerobia facultativa
Infecciones del
tracto urinario
Neumoniacutea
Pseudomonas
aeruginosa
Bacteria Gram negativa
Aeroacutebica
Dermatitis
Infecciones
(tracto urinario
tejido blando
oacuteseo articular y
gastrointestinal
Candida
albicans
Levadura
Aerobio estricto
Dimorfo
Candidiasis
Infeccioacuten
sanguiacutenea
nosocomial
RADICALES Y
ANTIOXIDANTES
RADICALES LIBRES Y
ANTIOXIDANTES
Radical libre Es una especie quiacutemica que
contiene uno o maacutes electrones desapareados ya
sea por perdida o ganancia de ellos
Antioxidante Es una sustancia que se opone a
la oxidacioacuten o inhibe las reacciones promovidas
por oxigeno o peroacutexidos
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Cadena de transporte mitocondrial
O2-bull + H2O2 bullOH+OH-
Reaccioacuten de Haber-Weiss
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Peroxidacioacuten lipiacutedica
Iniciacioacuten
R-H + radical libre Rbull
Propagacioacuten
Rbull+ O2 ROObull
ROObull+ R-H Rbull+ ROOH
Terminacioacuten
R bull + Rbull
RO2 bull + Rbull
RO2 bull + RO2 bull
Productos que no inician
ni propagan la oxidacioacuten
Destruccioacuten de las
membranas
nucleares
Degradacioacuten de
alimentos
Dantildeo al ADN
Consecuencias
PROCESOS ASOCIADOS AL DANtildeO
OXIDATIVO EN MOLEacuteCULAS BIOLOacuteGICAS
Envejecimiento
Dantildeo del ADN y Peroxidacioacuten de
los aacutecidos grasos de la
membrana celular
Ateroesclerosis
Peroxidacioacuten de liacutepidos en las
partiacuteculas de LDL con dantildeo de
otros de sus componentes
Caacutencer Dantildeo del ADN
Cataratas Modificaciones irreversibles en
las proteiacutenas
MEacuteTODOS IN VITRO PARA DETERMINAR
LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
TIPO DE ENSAYOCARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MEacuteTODOS
FRAP (Ferric ion reducing
antioxidant parameter)TPTZ-Fe+3 +1e TPTZ-Fe+2
DPPH (11-difenil-2-picril-
hidrazilo)
DPPHbull+ A-H DPPH-H
DPPHbull+ Rbull DPPH-R
ABTS (3-etilbenztiazolin-6-
sulfonato de amonio)
ABTS -1e ABTSbull+
ABTSbull+ + A-H ABTS + Rbull
ORAC (Oxygen radical
absorbance capacity)ROObull + A-H ROOH + Abull
JUSTIFICACIOacuteN
Las plantas medicinales presentan unaposibilidad alta de encontrar compuestos activoscomo antioxidantes y antibacterianos contradeterminadas enfermedades
Mas del 25 de los medicamentos modernosproceden de plantas
La medicina ha utilizado una gran variedad deplantas medicinales para desarrollar medicamentosaltamente efectivos contra diversas enfermedades
OBJETIVO GENERAL
Determinar la actividad antioxidante y antibacteriana
contra Bacillus subtilis Candida albicans Escherichia
coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa y
Staphylococcus aureus de los extractos de las plantas
medicinales Aloysia triphylla (Cidroacuten) Malva
sylvestris (Malva) Melissa officinalis (Toronjil)
Petroselinum sativum (Perejil) y Urtica dioica
(Ortiga)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
Obtener extractos de n-hexano diclorometano y
metanol por maceracioacuten pasiva de las plantas
medicinales A triphylla M sylvestris M
officinalis P sativum y U dioica
Realizar mediante cromatografiacutea de capa delgada
la caracterizacioacuten fitoquiacutemica de los extractos
obtenidos
Evaluar la actividad antibacteriana de los extractosobtenidos de A triphylla M sylvestris M officinalisP sativum y U dioica mediante el meacutetodo deperforacioacuten en placa de agar contra B subtilis Calbicans E coli K pneumoniae P aeruginosa y Saureus
Establecer la capacidad antioxidante de los extractosde n-hexano diclorometano y metanol de las especiesA triphylla M sylvestris M officinalis P sativum yU dioica a traveacutes del ensayo de decoloracioacuten delradical 22-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
SECCIOacuteN
EXPERIMENTAL
bullActividad antibacteriana
bullExtraccioacuten del material vegetal
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
bullActividad antioxidante
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
RADICALES Y
ANTIOXIDANTES
RADICALES LIBRES Y
ANTIOXIDANTES
Radical libre Es una especie quiacutemica que
contiene uno o maacutes electrones desapareados ya
sea por perdida o ganancia de ellos
Antioxidante Es una sustancia que se opone a
la oxidacioacuten o inhibe las reacciones promovidas
por oxigeno o peroacutexidos
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Cadena de transporte mitocondrial
O2-bull + H2O2 bullOH+OH-
Reaccioacuten de Haber-Weiss
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Peroxidacioacuten lipiacutedica
Iniciacioacuten
R-H + radical libre Rbull
Propagacioacuten
Rbull+ O2 ROObull
ROObull+ R-H Rbull+ ROOH
Terminacioacuten
R bull + Rbull
RO2 bull + Rbull
RO2 bull + RO2 bull
Productos que no inician
ni propagan la oxidacioacuten
Destruccioacuten de las
membranas
nucleares
Degradacioacuten de
alimentos
Dantildeo al ADN
Consecuencias
PROCESOS ASOCIADOS AL DANtildeO
OXIDATIVO EN MOLEacuteCULAS BIOLOacuteGICAS
Envejecimiento
Dantildeo del ADN y Peroxidacioacuten de
los aacutecidos grasos de la
membrana celular
Ateroesclerosis
Peroxidacioacuten de liacutepidos en las
partiacuteculas de LDL con dantildeo de
otros de sus componentes
Caacutencer Dantildeo del ADN
Cataratas Modificaciones irreversibles en
las proteiacutenas
MEacuteTODOS IN VITRO PARA DETERMINAR
LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
TIPO DE ENSAYOCARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MEacuteTODOS
FRAP (Ferric ion reducing
antioxidant parameter)TPTZ-Fe+3 +1e TPTZ-Fe+2
DPPH (11-difenil-2-picril-
hidrazilo)
DPPHbull+ A-H DPPH-H
DPPHbull+ Rbull DPPH-R
ABTS (3-etilbenztiazolin-6-
sulfonato de amonio)
ABTS -1e ABTSbull+
ABTSbull+ + A-H ABTS + Rbull
ORAC (Oxygen radical
absorbance capacity)ROObull + A-H ROOH + Abull
JUSTIFICACIOacuteN
Las plantas medicinales presentan unaposibilidad alta de encontrar compuestos activoscomo antioxidantes y antibacterianos contradeterminadas enfermedades
Mas del 25 de los medicamentos modernosproceden de plantas
La medicina ha utilizado una gran variedad deplantas medicinales para desarrollar medicamentosaltamente efectivos contra diversas enfermedades
OBJETIVO GENERAL
Determinar la actividad antioxidante y antibacteriana
contra Bacillus subtilis Candida albicans Escherichia
coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa y
Staphylococcus aureus de los extractos de las plantas
medicinales Aloysia triphylla (Cidroacuten) Malva
sylvestris (Malva) Melissa officinalis (Toronjil)
Petroselinum sativum (Perejil) y Urtica dioica
(Ortiga)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
Obtener extractos de n-hexano diclorometano y
metanol por maceracioacuten pasiva de las plantas
medicinales A triphylla M sylvestris M
officinalis P sativum y U dioica
Realizar mediante cromatografiacutea de capa delgada
la caracterizacioacuten fitoquiacutemica de los extractos
obtenidos
Evaluar la actividad antibacteriana de los extractosobtenidos de A triphylla M sylvestris M officinalisP sativum y U dioica mediante el meacutetodo deperforacioacuten en placa de agar contra B subtilis Calbicans E coli K pneumoniae P aeruginosa y Saureus
Establecer la capacidad antioxidante de los extractosde n-hexano diclorometano y metanol de las especiesA triphylla M sylvestris M officinalis P sativum yU dioica a traveacutes del ensayo de decoloracioacuten delradical 22-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
SECCIOacuteN
EXPERIMENTAL
bullActividad antibacteriana
bullExtraccioacuten del material vegetal
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
bullActividad antioxidante
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
RADICALES LIBRES Y
ANTIOXIDANTES
Radical libre Es una especie quiacutemica que
contiene uno o maacutes electrones desapareados ya
sea por perdida o ganancia de ellos
Antioxidante Es una sustancia que se opone a
la oxidacioacuten o inhibe las reacciones promovidas
por oxigeno o peroacutexidos
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Cadena de transporte mitocondrial
O2-bull + H2O2 bullOH+OH-
Reaccioacuten de Haber-Weiss
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Peroxidacioacuten lipiacutedica
Iniciacioacuten
R-H + radical libre Rbull
Propagacioacuten
Rbull+ O2 ROObull
ROObull+ R-H Rbull+ ROOH
Terminacioacuten
R bull + Rbull
RO2 bull + Rbull
RO2 bull + RO2 bull
Productos que no inician
ni propagan la oxidacioacuten
Destruccioacuten de las
membranas
nucleares
Degradacioacuten de
alimentos
Dantildeo al ADN
Consecuencias
PROCESOS ASOCIADOS AL DANtildeO
OXIDATIVO EN MOLEacuteCULAS BIOLOacuteGICAS
Envejecimiento
Dantildeo del ADN y Peroxidacioacuten de
los aacutecidos grasos de la
membrana celular
Ateroesclerosis
Peroxidacioacuten de liacutepidos en las
partiacuteculas de LDL con dantildeo de
otros de sus componentes
Caacutencer Dantildeo del ADN
Cataratas Modificaciones irreversibles en
las proteiacutenas
MEacuteTODOS IN VITRO PARA DETERMINAR
LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
TIPO DE ENSAYOCARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MEacuteTODOS
FRAP (Ferric ion reducing
antioxidant parameter)TPTZ-Fe+3 +1e TPTZ-Fe+2
DPPH (11-difenil-2-picril-
hidrazilo)
DPPHbull+ A-H DPPH-H
DPPHbull+ Rbull DPPH-R
ABTS (3-etilbenztiazolin-6-
sulfonato de amonio)
ABTS -1e ABTSbull+
ABTSbull+ + A-H ABTS + Rbull
ORAC (Oxygen radical
absorbance capacity)ROObull + A-H ROOH + Abull
JUSTIFICACIOacuteN
Las plantas medicinales presentan unaposibilidad alta de encontrar compuestos activoscomo antioxidantes y antibacterianos contradeterminadas enfermedades
Mas del 25 de los medicamentos modernosproceden de plantas
La medicina ha utilizado una gran variedad deplantas medicinales para desarrollar medicamentosaltamente efectivos contra diversas enfermedades
OBJETIVO GENERAL
Determinar la actividad antioxidante y antibacteriana
contra Bacillus subtilis Candida albicans Escherichia
coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa y
Staphylococcus aureus de los extractos de las plantas
medicinales Aloysia triphylla (Cidroacuten) Malva
sylvestris (Malva) Melissa officinalis (Toronjil)
Petroselinum sativum (Perejil) y Urtica dioica
(Ortiga)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
Obtener extractos de n-hexano diclorometano y
metanol por maceracioacuten pasiva de las plantas
medicinales A triphylla M sylvestris M
officinalis P sativum y U dioica
Realizar mediante cromatografiacutea de capa delgada
la caracterizacioacuten fitoquiacutemica de los extractos
obtenidos
Evaluar la actividad antibacteriana de los extractosobtenidos de A triphylla M sylvestris M officinalisP sativum y U dioica mediante el meacutetodo deperforacioacuten en placa de agar contra B subtilis Calbicans E coli K pneumoniae P aeruginosa y Saureus
Establecer la capacidad antioxidante de los extractosde n-hexano diclorometano y metanol de las especiesA triphylla M sylvestris M officinalis P sativum yU dioica a traveacutes del ensayo de decoloracioacuten delradical 22-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
SECCIOacuteN
EXPERIMENTAL
bullActividad antibacteriana
bullExtraccioacuten del material vegetal
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
bullActividad antioxidante
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Cadena de transporte mitocondrial
O2-bull + H2O2 bullOH+OH-
Reaccioacuten de Haber-Weiss
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Peroxidacioacuten lipiacutedica
Iniciacioacuten
R-H + radical libre Rbull
Propagacioacuten
Rbull+ O2 ROObull
ROObull+ R-H Rbull+ ROOH
Terminacioacuten
R bull + Rbull
RO2 bull + Rbull
RO2 bull + RO2 bull
Productos que no inician
ni propagan la oxidacioacuten
Destruccioacuten de las
membranas
nucleares
Degradacioacuten de
alimentos
Dantildeo al ADN
Consecuencias
PROCESOS ASOCIADOS AL DANtildeO
OXIDATIVO EN MOLEacuteCULAS BIOLOacuteGICAS
Envejecimiento
Dantildeo del ADN y Peroxidacioacuten de
los aacutecidos grasos de la
membrana celular
Ateroesclerosis
Peroxidacioacuten de liacutepidos en las
partiacuteculas de LDL con dantildeo de
otros de sus componentes
Caacutencer Dantildeo del ADN
Cataratas Modificaciones irreversibles en
las proteiacutenas
MEacuteTODOS IN VITRO PARA DETERMINAR
LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
TIPO DE ENSAYOCARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MEacuteTODOS
FRAP (Ferric ion reducing
antioxidant parameter)TPTZ-Fe+3 +1e TPTZ-Fe+2
DPPH (11-difenil-2-picril-
hidrazilo)
DPPHbull+ A-H DPPH-H
DPPHbull+ Rbull DPPH-R
ABTS (3-etilbenztiazolin-6-
sulfonato de amonio)
ABTS -1e ABTSbull+
ABTSbull+ + A-H ABTS + Rbull
ORAC (Oxygen radical
absorbance capacity)ROObull + A-H ROOH + Abull
JUSTIFICACIOacuteN
Las plantas medicinales presentan unaposibilidad alta de encontrar compuestos activoscomo antioxidantes y antibacterianos contradeterminadas enfermedades
Mas del 25 de los medicamentos modernosproceden de plantas
La medicina ha utilizado una gran variedad deplantas medicinales para desarrollar medicamentosaltamente efectivos contra diversas enfermedades
OBJETIVO GENERAL
Determinar la actividad antioxidante y antibacteriana
contra Bacillus subtilis Candida albicans Escherichia
coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa y
Staphylococcus aureus de los extractos de las plantas
medicinales Aloysia triphylla (Cidroacuten) Malva
sylvestris (Malva) Melissa officinalis (Toronjil)
Petroselinum sativum (Perejil) y Urtica dioica
(Ortiga)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
Obtener extractos de n-hexano diclorometano y
metanol por maceracioacuten pasiva de las plantas
medicinales A triphylla M sylvestris M
officinalis P sativum y U dioica
Realizar mediante cromatografiacutea de capa delgada
la caracterizacioacuten fitoquiacutemica de los extractos
obtenidos
Evaluar la actividad antibacteriana de los extractosobtenidos de A triphylla M sylvestris M officinalisP sativum y U dioica mediante el meacutetodo deperforacioacuten en placa de agar contra B subtilis Calbicans E coli K pneumoniae P aeruginosa y Saureus
Establecer la capacidad antioxidante de los extractosde n-hexano diclorometano y metanol de las especiesA triphylla M sylvestris M officinalis P sativum yU dioica a traveacutes del ensayo de decoloracioacuten delradical 22-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
SECCIOacuteN
EXPERIMENTAL
bullActividad antibacteriana
bullExtraccioacuten del material vegetal
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
bullActividad antioxidante
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
FUENTE DE RADICALES
LIBRES
Peroxidacioacuten lipiacutedica
Iniciacioacuten
R-H + radical libre Rbull
Propagacioacuten
Rbull+ O2 ROObull
ROObull+ R-H Rbull+ ROOH
Terminacioacuten
R bull + Rbull
RO2 bull + Rbull
RO2 bull + RO2 bull
Productos que no inician
ni propagan la oxidacioacuten
Destruccioacuten de las
membranas
nucleares
Degradacioacuten de
alimentos
Dantildeo al ADN
Consecuencias
PROCESOS ASOCIADOS AL DANtildeO
OXIDATIVO EN MOLEacuteCULAS BIOLOacuteGICAS
Envejecimiento
Dantildeo del ADN y Peroxidacioacuten de
los aacutecidos grasos de la
membrana celular
Ateroesclerosis
Peroxidacioacuten de liacutepidos en las
partiacuteculas de LDL con dantildeo de
otros de sus componentes
Caacutencer Dantildeo del ADN
Cataratas Modificaciones irreversibles en
las proteiacutenas
MEacuteTODOS IN VITRO PARA DETERMINAR
LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
TIPO DE ENSAYOCARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MEacuteTODOS
FRAP (Ferric ion reducing
antioxidant parameter)TPTZ-Fe+3 +1e TPTZ-Fe+2
DPPH (11-difenil-2-picril-
hidrazilo)
DPPHbull+ A-H DPPH-H
DPPHbull+ Rbull DPPH-R
ABTS (3-etilbenztiazolin-6-
sulfonato de amonio)
ABTS -1e ABTSbull+
ABTSbull+ + A-H ABTS + Rbull
ORAC (Oxygen radical
absorbance capacity)ROObull + A-H ROOH + Abull
JUSTIFICACIOacuteN
Las plantas medicinales presentan unaposibilidad alta de encontrar compuestos activoscomo antioxidantes y antibacterianos contradeterminadas enfermedades
Mas del 25 de los medicamentos modernosproceden de plantas
La medicina ha utilizado una gran variedad deplantas medicinales para desarrollar medicamentosaltamente efectivos contra diversas enfermedades
OBJETIVO GENERAL
Determinar la actividad antioxidante y antibacteriana
contra Bacillus subtilis Candida albicans Escherichia
coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa y
Staphylococcus aureus de los extractos de las plantas
medicinales Aloysia triphylla (Cidroacuten) Malva
sylvestris (Malva) Melissa officinalis (Toronjil)
Petroselinum sativum (Perejil) y Urtica dioica
(Ortiga)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
Obtener extractos de n-hexano diclorometano y
metanol por maceracioacuten pasiva de las plantas
medicinales A triphylla M sylvestris M
officinalis P sativum y U dioica
Realizar mediante cromatografiacutea de capa delgada
la caracterizacioacuten fitoquiacutemica de los extractos
obtenidos
Evaluar la actividad antibacteriana de los extractosobtenidos de A triphylla M sylvestris M officinalisP sativum y U dioica mediante el meacutetodo deperforacioacuten en placa de agar contra B subtilis Calbicans E coli K pneumoniae P aeruginosa y Saureus
Establecer la capacidad antioxidante de los extractosde n-hexano diclorometano y metanol de las especiesA triphylla M sylvestris M officinalis P sativum yU dioica a traveacutes del ensayo de decoloracioacuten delradical 22-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
SECCIOacuteN
EXPERIMENTAL
bullActividad antibacteriana
bullExtraccioacuten del material vegetal
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
bullActividad antioxidante
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
PROCESOS ASOCIADOS AL DANtildeO
OXIDATIVO EN MOLEacuteCULAS BIOLOacuteGICAS
Envejecimiento
Dantildeo del ADN y Peroxidacioacuten de
los aacutecidos grasos de la
membrana celular
Ateroesclerosis
Peroxidacioacuten de liacutepidos en las
partiacuteculas de LDL con dantildeo de
otros de sus componentes
Caacutencer Dantildeo del ADN
Cataratas Modificaciones irreversibles en
las proteiacutenas
MEacuteTODOS IN VITRO PARA DETERMINAR
LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
TIPO DE ENSAYOCARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MEacuteTODOS
FRAP (Ferric ion reducing
antioxidant parameter)TPTZ-Fe+3 +1e TPTZ-Fe+2
DPPH (11-difenil-2-picril-
hidrazilo)
DPPHbull+ A-H DPPH-H
DPPHbull+ Rbull DPPH-R
ABTS (3-etilbenztiazolin-6-
sulfonato de amonio)
ABTS -1e ABTSbull+
ABTSbull+ + A-H ABTS + Rbull
ORAC (Oxygen radical
absorbance capacity)ROObull + A-H ROOH + Abull
JUSTIFICACIOacuteN
Las plantas medicinales presentan unaposibilidad alta de encontrar compuestos activoscomo antioxidantes y antibacterianos contradeterminadas enfermedades
Mas del 25 de los medicamentos modernosproceden de plantas
La medicina ha utilizado una gran variedad deplantas medicinales para desarrollar medicamentosaltamente efectivos contra diversas enfermedades
OBJETIVO GENERAL
Determinar la actividad antioxidante y antibacteriana
contra Bacillus subtilis Candida albicans Escherichia
coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa y
Staphylococcus aureus de los extractos de las plantas
medicinales Aloysia triphylla (Cidroacuten) Malva
sylvestris (Malva) Melissa officinalis (Toronjil)
Petroselinum sativum (Perejil) y Urtica dioica
(Ortiga)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
Obtener extractos de n-hexano diclorometano y
metanol por maceracioacuten pasiva de las plantas
medicinales A triphylla M sylvestris M
officinalis P sativum y U dioica
Realizar mediante cromatografiacutea de capa delgada
la caracterizacioacuten fitoquiacutemica de los extractos
obtenidos
Evaluar la actividad antibacteriana de los extractosobtenidos de A triphylla M sylvestris M officinalisP sativum y U dioica mediante el meacutetodo deperforacioacuten en placa de agar contra B subtilis Calbicans E coli K pneumoniae P aeruginosa y Saureus
Establecer la capacidad antioxidante de los extractosde n-hexano diclorometano y metanol de las especiesA triphylla M sylvestris M officinalis P sativum yU dioica a traveacutes del ensayo de decoloracioacuten delradical 22-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
SECCIOacuteN
EXPERIMENTAL
bullActividad antibacteriana
bullExtraccioacuten del material vegetal
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
bullActividad antioxidante
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
MEacuteTODOS IN VITRO PARA DETERMINAR
LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
TIPO DE ENSAYOCARACTERIacuteSTICAS DE LOS
MEacuteTODOS
FRAP (Ferric ion reducing
antioxidant parameter)TPTZ-Fe+3 +1e TPTZ-Fe+2
DPPH (11-difenil-2-picril-
hidrazilo)
DPPHbull+ A-H DPPH-H
DPPHbull+ Rbull DPPH-R
ABTS (3-etilbenztiazolin-6-
sulfonato de amonio)
ABTS -1e ABTSbull+
ABTSbull+ + A-H ABTS + Rbull
ORAC (Oxygen radical
absorbance capacity)ROObull + A-H ROOH + Abull
JUSTIFICACIOacuteN
Las plantas medicinales presentan unaposibilidad alta de encontrar compuestos activoscomo antioxidantes y antibacterianos contradeterminadas enfermedades
Mas del 25 de los medicamentos modernosproceden de plantas
La medicina ha utilizado una gran variedad deplantas medicinales para desarrollar medicamentosaltamente efectivos contra diversas enfermedades
OBJETIVO GENERAL
Determinar la actividad antioxidante y antibacteriana
contra Bacillus subtilis Candida albicans Escherichia
coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa y
Staphylococcus aureus de los extractos de las plantas
medicinales Aloysia triphylla (Cidroacuten) Malva
sylvestris (Malva) Melissa officinalis (Toronjil)
Petroselinum sativum (Perejil) y Urtica dioica
(Ortiga)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
Obtener extractos de n-hexano diclorometano y
metanol por maceracioacuten pasiva de las plantas
medicinales A triphylla M sylvestris M
officinalis P sativum y U dioica
Realizar mediante cromatografiacutea de capa delgada
la caracterizacioacuten fitoquiacutemica de los extractos
obtenidos
Evaluar la actividad antibacteriana de los extractosobtenidos de A triphylla M sylvestris M officinalisP sativum y U dioica mediante el meacutetodo deperforacioacuten en placa de agar contra B subtilis Calbicans E coli K pneumoniae P aeruginosa y Saureus
Establecer la capacidad antioxidante de los extractosde n-hexano diclorometano y metanol de las especiesA triphylla M sylvestris M officinalis P sativum yU dioica a traveacutes del ensayo de decoloracioacuten delradical 22-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
SECCIOacuteN
EXPERIMENTAL
bullActividad antibacteriana
bullExtraccioacuten del material vegetal
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
bullActividad antioxidante
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
JUSTIFICACIOacuteN
Las plantas medicinales presentan unaposibilidad alta de encontrar compuestos activoscomo antioxidantes y antibacterianos contradeterminadas enfermedades
Mas del 25 de los medicamentos modernosproceden de plantas
La medicina ha utilizado una gran variedad deplantas medicinales para desarrollar medicamentosaltamente efectivos contra diversas enfermedades
OBJETIVO GENERAL
Determinar la actividad antioxidante y antibacteriana
contra Bacillus subtilis Candida albicans Escherichia
coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa y
Staphylococcus aureus de los extractos de las plantas
medicinales Aloysia triphylla (Cidroacuten) Malva
sylvestris (Malva) Melissa officinalis (Toronjil)
Petroselinum sativum (Perejil) y Urtica dioica
(Ortiga)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
Obtener extractos de n-hexano diclorometano y
metanol por maceracioacuten pasiva de las plantas
medicinales A triphylla M sylvestris M
officinalis P sativum y U dioica
Realizar mediante cromatografiacutea de capa delgada
la caracterizacioacuten fitoquiacutemica de los extractos
obtenidos
Evaluar la actividad antibacteriana de los extractosobtenidos de A triphylla M sylvestris M officinalisP sativum y U dioica mediante el meacutetodo deperforacioacuten en placa de agar contra B subtilis Calbicans E coli K pneumoniae P aeruginosa y Saureus
Establecer la capacidad antioxidante de los extractosde n-hexano diclorometano y metanol de las especiesA triphylla M sylvestris M officinalis P sativum yU dioica a traveacutes del ensayo de decoloracioacuten delradical 22-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
SECCIOacuteN
EXPERIMENTAL
bullActividad antibacteriana
bullExtraccioacuten del material vegetal
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
bullActividad antioxidante
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
OBJETIVO GENERAL
Determinar la actividad antioxidante y antibacteriana
contra Bacillus subtilis Candida albicans Escherichia
coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa y
Staphylococcus aureus de los extractos de las plantas
medicinales Aloysia triphylla (Cidroacuten) Malva
sylvestris (Malva) Melissa officinalis (Toronjil)
Petroselinum sativum (Perejil) y Urtica dioica
(Ortiga)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
Obtener extractos de n-hexano diclorometano y
metanol por maceracioacuten pasiva de las plantas
medicinales A triphylla M sylvestris M
officinalis P sativum y U dioica
Realizar mediante cromatografiacutea de capa delgada
la caracterizacioacuten fitoquiacutemica de los extractos
obtenidos
Evaluar la actividad antibacteriana de los extractosobtenidos de A triphylla M sylvestris M officinalisP sativum y U dioica mediante el meacutetodo deperforacioacuten en placa de agar contra B subtilis Calbicans E coli K pneumoniae P aeruginosa y Saureus
Establecer la capacidad antioxidante de los extractosde n-hexano diclorometano y metanol de las especiesA triphylla M sylvestris M officinalis P sativum yU dioica a traveacutes del ensayo de decoloracioacuten delradical 22-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
SECCIOacuteN
EXPERIMENTAL
bullActividad antibacteriana
bullExtraccioacuten del material vegetal
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
bullActividad antioxidante
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
Obtener extractos de n-hexano diclorometano y
metanol por maceracioacuten pasiva de las plantas
medicinales A triphylla M sylvestris M
officinalis P sativum y U dioica
Realizar mediante cromatografiacutea de capa delgada
la caracterizacioacuten fitoquiacutemica de los extractos
obtenidos
Evaluar la actividad antibacteriana de los extractosobtenidos de A triphylla M sylvestris M officinalisP sativum y U dioica mediante el meacutetodo deperforacioacuten en placa de agar contra B subtilis Calbicans E coli K pneumoniae P aeruginosa y Saureus
Establecer la capacidad antioxidante de los extractosde n-hexano diclorometano y metanol de las especiesA triphylla M sylvestris M officinalis P sativum yU dioica a traveacutes del ensayo de decoloracioacuten delradical 22-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
SECCIOacuteN
EXPERIMENTAL
bullActividad antibacteriana
bullExtraccioacuten del material vegetal
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
bullActividad antioxidante
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
Evaluar la actividad antibacteriana de los extractosobtenidos de A triphylla M sylvestris M officinalisP sativum y U dioica mediante el meacutetodo deperforacioacuten en placa de agar contra B subtilis Calbicans E coli K pneumoniae P aeruginosa y Saureus
Establecer la capacidad antioxidante de los extractosde n-hexano diclorometano y metanol de las especiesA triphylla M sylvestris M officinalis P sativum yU dioica a traveacutes del ensayo de decoloracioacuten delradical 22-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH)
OBJETIVOS ESPECIacuteFICOS
SECCIOacuteN
EXPERIMENTAL
bullActividad antibacteriana
bullExtraccioacuten del material vegetal
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
bullActividad antioxidante
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
SECCIOacuteN
EXPERIMENTAL
bullActividad antibacteriana
bullExtraccioacuten del material vegetal
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
bullActividad antioxidante
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
El material vegetal se
adquirioacute en los puntos
de venta de plantas
medicinales en la
ciudad de Pereira
(Risaralda)
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
EXTRACCIOacuteN DEL
MATERIAL VEGETAL
Con los solventes
n-hexano
diclorometano y
metanol
Secado y
molienda
Concentrar
Extraccioacuten por
maceracioacuten
pasiva
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
Preparar las
soluciones de
los extractos
Seleccionar
el eluyente
Sembrar
las
muestras
Desarrollar y
revelar las
placas
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Cumarinas KOH al 10 en
MeOHCumarina
Lactonas Cloruro de
hidroxilaminaCumarina
Saponinas H2SO4 al 10 en
EtOHDiosgenina
Amidas Cloruro de
hidroxilaminaFormamida
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
CARACTERIZACIOacuteN
FITOQUIacuteMICA POR CCD
NUacuteCLEO
FITOQUIacuteMICOREVELADOR PATROacuteN
Alcaloides Dragendorff Quinina
Triterpenos y
esterolesLieberman-Burchard Lanosterol
Fenoles FeCl3 al 5 en
HCl 05 N
Catecol
Flavonoides AlCl3 al 1 en EtOH Kaempferol
Taninos Ensayo de gelatina Aacutecido gaacutelico
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
A-H Moleacutecula antioxidante Difenilpicrilhidrazilo (DPPH)
N
NO2
NO2
O2N N
Teacutecnica de captacioacuten de radicales libres
de DPPH
Morado Amarillo paacutelido
AH AN
NO2
NO2
O2N N
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Preparar una solucioacuten
de DPPH a 20 mgL
y trasferir 1 mL a tres
tubos de ensayo
Adicionar 025 mL de
la solucioacuten del
extracto a 1000 mgL
Dejar reaccionar por 30
minutos en la oscuridad
Leer la absorbancia a λ 517nm y calcular al porcentaje de
actividad antioxidante (AA)
AA= [(AControl ndash (Aextracto - Ablanco extracto)) AControl]100
Medir el blanco
del extracto
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
CURVA DE TROLOX
Expresioacuten de los resultados en equivalentes Trolox
(μmolg extracto)
CH3
OH
CH3
O
CH3
CH3
O
OH
Trolox (6-hidroxi-
2578-tetrametilcromo-
2-aacutecido carboxiacutelico)
O
OH
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
Vitamina E
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Activacioacuten del microorganismo
Dilucioacuten el microorganismo
Adicionar 20 mL agar
homogenizar y dejar solidificar
1
Transferir 1 mL de inoacuteculo en
cada caja de petri
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
1
En cada pozo adicionar 20 microL
de las soluciones a evaluar
Incubar a 37ordmC por 24 horas
Realizar las mediciones de los
halos de inhibicioacuten
Marcar y hacer 7 pozos
simeacutetricos 4000 mgL 2000 mgL
1000 mgL 500 mgL 250 mgL
+ -
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
SOLUCIONES A EVALUAR
EXTRACTO
(10000 mgL)
PROPORCIOacuteN DE LOS
SOLVENTES (vv)
n-Hexano DMSO (100)
Diclorometano DMSO (100)
Metanol H2OEtOH (7030)
Concentraciones de los extractos 250 500 1000 2000 y 4000 mgL
EXTRACTO CONTROL NEGATIVO
n-Hexano DMSOEtOH (4060)
Diclorometano DMSOEtOH (4060)
Metanol H2O EtOH (8812)
Preparacioacuten de la solucioacuten madre
Preparacioacuten de los controles negativos
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
SOLUCIONES A EVALUAR
MICROORGANISMOS
CONTROL POSITIVO (mgL)
CEFOTAXIMA NISTATINA
Bacillus subtilis 250
Escherichia coli 250 -
Klebsiella pneumoniae 500 -
Pseudomonas aeruginosa 2000 -
Staphylococcus aureus 4000
Candida albicans - 1000
Controles positivos utilizados
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN
bullActividad antioxidante
bullActividad antibacteriana
bullCaracterizacioacuten fitoquiacutemica
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
De los 15 extractos estudiados (n-hexano
diclometano y metanol) para evaluar la actividad
antibacteriana contra B subtilis C albicans E
coli K pneumoniae P aeruginosa y S aureus
ninguno inhibioacute el crecimiento de los
microorganismos mencionados
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE EXTRACTOS VEGETALES
ESPECIE EXTRACTO MICROORGANISMO REFERENCIA
A triphylla MeOH E coliAlaniacutes et al
(2005)
M sylvestris MeOHB subtillis E coli C
albicans y S aureu
Souza et al
(2004)
P sativum MeOH
B subtillis C
albicans E coli K
pneumoniae y P
aeruginosa
Akroum et al
(2009)
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
CARACTERIZACIOacuteN FITOQUIacuteMICA
Especie Extracto Triterpenos Fenoles Flavonoides Taninos Saponinas
Aloysia
triphylla
Hex ++ + - + ++
DCM + ++ - + +
MeOH + + ++ + +
Malva
sylvestris
Hex ++ + - + ++
DCM ++ + ++ + +
MeOH ++ + ++ + +
Melissa
officinalis
Hex ++ ++ - ++ +
DCM + ++ - ++ +
MeOH ++ + ++ + +
Petroselinum
sativum
Hex ++ ++ - + +
DCM ++ ++ + + +
MeOH ++ + + + +
Urtica
dioica
Hex ++ - - - +
DCM ++ + + + +
MeOH + + + + +
Control (+)Lanosterol
++Catecol
++Kaempferol
++Aacutecido gaacutelico
++Diosgenina
++
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto
A triphylla 455 1000 mgL MeOH
M officinalis 503 1000 mgL MeOH
Especie AAConcentracioacuten
evaluada
Extracto Referencia
A triphylla 869 100 mgL MeOH Yoo et al (2008)
M officinalis 70 1000 mgL EtOHFerreira et al
2006
M officinalis 6068 100 mgL EtOHMontoya et al
(2003)
Resultados obtenidos
Resultados reportados en la literatura
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN EQUIVALENTES TROLOX
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
VEGETALES Y FRUTAS CON
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
VEGETALES Y FRUTAS AA EN
μMOL TROLOXG
Toronjil (Melissa officinalis) 3098
Cidroacuten (Aloysia triphylla) 2900
Malva (Malva sylvestris) 2689
Mortintildeo (Vaccinium meridionale ) 2404
Espinaca (Spinacia oleracia ) 500
Guayaba (Psidium guajava) 59
Banano (Musa x paradisiaca) 1100
Mango (Mangifera indica ) 129
Ajo (Allium sativum) 1300
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
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AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
CONCLUSIONES
4 de las 5 plantas estudiadas mostraron actividad
antioxidante significativa encontrando en 10 de 15extractos evaluadas un porcentaje de actividadantibacteriana superior al 25
Los valores mas altos de actividad antioxidante los
presentoacute los extractos de Melissa officinalis
superando al observado para el control positivo
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
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A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
CONCLUSIONES
Los extractos de Melissa officinalis podriacutean
convertirse en candidatos para el aislamiento de
compuestos antioxidantes activos
RECOMENDACIONES
Determinar la actividad antioxidante por
diferentes meacutetodos tales como FRAP y ABTS
Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
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1 209
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Realizar estudios mas minuciosos con Melissa
officinalis puesto que presentoacute los porcentajes mas
altos de actividad antioxidante Se pueden realizar
separaciones cromatograficas bioguiadas que
permitan aislar los compuestos responsables de
dicha actividad
AGRADECIMIENTOS
A los profesores Jaime Nintildeo Osorio y Oscar Marino
Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
laboratorio de Biotecnologiacutea-Productos Naturales (GB-
PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
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AA
1 209
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Mosquera por permitirme ser parte de la familia del
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PN)
A mis compantildeeros del laboratorio en especial a Anyela
marcela riacuteos y Juliana Cortez por su colaboracioacuten en la
realizacioacuten de este trabajo
A todos los profesores de la escuela de Tecnologiacutea quiacutemica
que contribuyeron a mi formacioacuten acadeacutemica y personal
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
GRACIAS
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
BIBLIOGRAFIacuteA
Avello M Suwalsky M (2006) Radicales libres antioxidantes naturales y mecanismos de
proteccioacuten Atenea 492 161-172
Brand-Willians W Cuvelier M Berset C (1995) Use of a free radical method to Evaluate
antioxidant activity Lebens Mittel-Wissenschaft and Techologie 28 25-30
Bruneton J (2001) Farmacognosia Fitoquiacutemica Plantas medicinales 2da Ed Acribia
editorial Espantildea 1099 P
Castillo E Martiacutenez I (2007) Manual de fitoterapia Elsevier Masson Barcelona 506 P
Challem J Block M (2008) Antioxidantes naturales 1 Ed Nowtilus ediciones Madrid 173
P
Chiej R (1983) Guiacutea de plantas medicinales Editorial Grijalbo Barcelona 456 P
Corzo T Victoria L Poma G Guija E (2007) Petroselinum sativum (Perejil) antioxidant
and hepatoprotective effects in rats with paracetamol induced hepatic intoxication Anales de
la Facultad de Medicina Universidad Nacional Mayor de San Marcos 68 333-343
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
BIBLIOGRAFIacuteA
Fonnegra G Jimenez R (2007) Plantas medicinales aprobadas en Colombia 2da Ed
Editorial Universidad de Antioquia (Medelliacuten) 353 P
Gonzaacutelez D (1988) Plantas medicinales un resumen de farmacologiacutea Tercer mundo
editores Bogota 390 P
Gonzaacutelez M Betancourt M Ortiz R (2000) Dantildeo oxidativo y antioxidantes
Bioquimica 25 3-9
Hoogesteger C (1994) Uso de plantas medicinales Aacuterbol Editorial SA Meacutexico 173 P
Mendell G Bennett J Dolin R (2006) Enfermedades infecciosas principios y
praacutecticas 6ta Ed Elservier Espantildea 330 P
Muntildeoz E (2004) Plantas medicinales de uso en Chile quiacutemica y farmacologiacutea Editorial
universitaria Santiago de chile 2da Ed P 315
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
BIBLIOGRAFIacuteA
Nintildeo J Narvaacutees D Mosquera O Correa Y (2006) Antibacterial antifungal and citotoxicactivities of eigth Asteraceae and two Rubiaceae plants Colombian biodiversity BrazilianJournal of Microbiology 37 566-570
Pumarola A (1995) Microbiologiacutea y parasitologiacutea meacutedica 2da Ed Elsevier Espantildea 916 P
Requena G Barrilao G Gonzaacutelez B Morales G Fernaacutendez T Oxidacioacuten y produccioacuten deradicales libres Texto procedente de httpwwwrevistascientiaesdocumentos 20076pdf(15052011)
Riacuteos J Recio M Villar A (1988) Screening methods for natural products with antimicrobialactivity A review of the literature Journal of Ethnopharmacology 23 127-149
Todar K (2008) The New Microbial WorldStaphylococcus aureus and Staphylococcal DiseaseTexto procedente de httpwwwtextbookof-bacteriologynet (180610)
Universidad de Antioquia Herbario Universidad de Antioquia Medelliacuten Colombia (2011)Cidroacuten Aloysia triphylla (LHer) Britton Texto procedente dehttpaprendeenlineaudeaeduco (180311)
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
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CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
16 2527
BIBLIOGRAFIacuteA
Wagner H Bladt S (1996) Plant Drug Analysis A thin layer chromatography atlas 2da
Ed Berlin Germany 384 P
Wetwitayaklung P Phaechamud T Limmatvapirat C Keokitichai S (2006) The study
of antioxidant capacity in various parts of Areca catechu L Naresuan University Journal
14 1-14
Willian Brown Center Missouri Botanical Garden (2010) Medicinal plants Tomado de
httpwwwwlbcenterorg (260710)
CURVA DE CALIBRACIOacuteN
DE TROLOX
CONCENTRACIOacuteN
TROLOX (microM)
PROMEDIO
AA
1 209
2 439
4 684
8 1389
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