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ALEJANDRO CHAVES POSADA
Aspirante al título de Biólogo
Director:
Dr. MATHEW W. BLAIR
Codirectores:
JUÁN DIEGO PALACIO
MARÍA del PILAR MÁRQUEZ
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
PREGRADO
BOGOTÁ D.C.
2007
ESTIMACIÓN DE LA DIVERSIDAD GENÉTICA DE ACCESIONES DE
HABICHUELA VOLUBLE (Phaseolus vulgaris L.) MEDIANTE MICROSATÉLITES
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ESTIMACIÓN DE LA DIVERSIDAD GENÉTICA DE ACCESIONES DE HABICHUELA
VOLUBLE (Phaseolus vulgaris L.) MEDIANTE MICROSATÉLITES
1. Introducción
El cultivo de la habichuela (Phaseolus vulgaris L.) se remonta a los tiempos de la colonia
Europea en América, donde los españoles introdujeron este material al viejo mundo desde el
nuevo mundo, a partir de intercambios, trueques y comercialización, difundiéndose así en muchos
países Europeos. Se considera que debido a esto, se generó una rápida diversificación de la
habichuela en Europa y posteriormente en Estados Unidos. Actualmente se observa una alta
competencia entre las casas comerciales por generar nuevas variedades que satisfagan las
necesidades tanto del consumidor como del cultivador.
La habichuela pertenece a la especie del fríjol común (Phaseolus vulgaris L.), pero a diferencia
del cultivo para grano seco, la habichuela es un producto seleccionado por sus vainas suculentas
y un bajo contenido de fibra. Las vainas inmaduras y las semillas son consumidas como hortaliza
verde. Mientras que el fríjol común está clasificado para el mercado con base en las
características de la semilla, la habichuela está determinada por las cualidades tanto de la vaina
como del hábito de crecimiento.
La habichuela es ampliamente cultivada en algunas regiones de Colombia, como el pie de monte
del Valle del Cauca y la zona de Fusagasuga en la región Andina. Considerándose una hortaliza
importante por su aporte proteínico (2.45% en base fresca), de aminoácidos esenciales (lisina y
metionina), vitaminas (C, A y B12) y de carbohidratos (54%). Dentro de las variedades volubles
más conocidas está el tipo Blue Lake, mientras que otras no son muy usadas en el país.
En Colombia se ha manejado una base genética poco diversa de los materiales de habichuela,
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reduciendo el cultivo a la línea comercial Blue Lake o derivados que son muy susceptibles a la
roya causada por (Uromyces phaseoli), a la bacteriosis causada por (Xanthomonas campestris) y
a otros limitantes lesivos para los rendimientos y la calidad de la cosecha, ocupando alrededor del
90% del área sembrada. Esta estrecha base genética hace necesaria la inclusión de nuevas
variedades provenientes de diferentes líneas comerciales que permitirá ampliar la variabilidad
genética de la habichuela en el país, con el fin de desarrollar programas de mejoramiento que
eleven la resistencia a los factores limitantes bióticos y abióticos, y para disminuir las
aplicaciones de agroquímicos (insecticidas, fungicidas y herbicidas) que pueden afectar la calidad
del producto, deterioro del medio ambiente y la salud del consumidor. Para lograr un proceso
adecuado de premejoramiento es esencial contar con información acerca de la variabilidad
genética de los materiales disponibles en los bancos de germoplasma.
Los materiales de este estudio fueron facilitados por la Unidad de Recursos Genéticos del
Centro Internacional de Agricultura Tropical (CIAT-URG), evaluados previamente por Tofiño
(2004), quien estimó la variabilidad genética mediante descriptores morfo-agronómicos y
bioquímicos (Isoenzimas) y por Calderón (2005), quien evaluó la diversidad genética a partir de
marcadores moleculares AFLP. Para este estudio, se estimará la diversidad genética a partir de
microsatélites fluorescentes, con el fin de obtener datos más precisos y poder corroborar los
resultados obtenidos por estos dos estudios previos.
Entre los marcadores moleculares para la evaluación de la diversidad genética, los más
utilizados por su eficacia son los SSR (Repeticiones de secuencias discretas) o �microsatélites�,
teniendo en cuenta que son codominantes, multi-alélicos y altamente polimórficos. Además su
distribución aleatoria en el genoma permite una amplia cobertura de éste. Esto a su vez ha hecho
posible identificar posibles centros de origen en Phaseolus vulgaris L., procesos de
domesticación y observar eventos de introgresión alélica entre los acervos genéticos y variedades.
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2. MARCO TEÓRICO
2.1 CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA
El género Phaseolus incluye alrededor de 35 especies y pertenece a la familia Fabaceae cuyas
especies son comúnmente conocidas como leguminosas.
La habichuela se conoce por varios nombres comunes, dependiendo de la ubicación geográfica;
Vainica (Centroamérica), fríjol agitar (México y Guatemala); Chaucha y judía (Argentina y
Uruguay). En inglés se denomina Snap bean o pole bean (CIAT, 1984).
Orden: Rosales
Familia: Fabaceae
Subfamilia: Papilionoidae
Tribu: Phaseolae
Subtribu: Phaseolinae
Género: Phaseolus
Especie: Phaseolus vulgaris L.
Existen dentro del género Phaseolus, cinco especies consideradas como formas cultivadas
(Freytag et al. 2002), estas son:
Phaseolus vulgaris L. 1753
Sinónimos:
Phaseolus esculentus Salisb (1796)
Phaseolus communis L. ex Pritzel (1855)
Phaseolus aborigineus (1952)
Phaseolus vulgaris L. (1953)
Nombres comunes: fríjol común, caraota, habichuela, feijao, frejol, alubia y poroto.
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Phaseolus lunatus L. (1753)
Sinónimos:
Phaseolus inamoemus L. (1753)
Phaseolus bipunctactus Jacq. (1770)
Phaseolus puberulus (1823)
Phaseolus xuaresii Zucc. (1825)
Phaseolus limensis Macfadyen. (1837)
Phaseolus sackaratus Macfadyen. (1837)
Phaseolus Lunatus var. Macrocarpus (1859)
Phaseolus rosei (1926)
Phaseolus viridis (1926)
Phaseolus lunatus var. Silvester (1977)
Nombres comunes: Fríjol lima, pallar, haba lima.
Phaseolus coccineus L. (1753)
Sinónimos:
Phaseolus multiflorus Lam. (1789)
Nombres comunes: Fríjol ayacote, fríjol petaco, fríjol de vida, fríjol piloy.
Phaseolus acutifolius A. Gray (1852)
Variedades:
Phaseolus acutifolius var. Acutifolius (1852)
Phaseolus acutifolius var. Latifolius (1912)
Phaseolus cutifolius var. Fenuifolius (1853)
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Nombre común: fríjol tepari.
Phaseolus dumosus (1837)
Sinónimos:
Phaseolus polyanthus (1907)
Phaseolus flavescens (1926)
Phaseolus leuconthus (1926)
Phaseolus harmisianus (1937)
Phaseolus coccineus subsp. Darwinianus (1959)
Nombres comunes: Piligue de monte, cuba, fríjol del año.
(Freytag et al. 2002).
2.2 FILOGENIA Y GÉNETICA
Phaseolus, pertenece al grupo Fabaceae comúnmente conocido como Leguminosae. Esta familia
está dividida en tres grandes subfamilias, donde Phaseolus hace parte de la subfamilia
Papilionoideae, la cual es considerada como la más grande de las tres y la de mayor importancia
económica; conteniendo 476 géneros y alrededor de 14,000 especies, varias de ellas cultivadas,
entre las que se encuentran la soya, la arveja y el caupi, entre otras. Datos basados en pocas
evidencias, sugieren que esta subfamilia se originó hace 50 millones de años y es considerada
como un grupo monofilético. La tribu Phaseoleae, se considera importante a nivel económico por
contener a los géneros; Phaseolus, Vigna y Glycine. Dentro de las filogenias más precisas
construidas hasta el momento para el género Phaseolus, es la elaborada por Delgado-Salinas et
al, usando rDNA 5.8S (McClean et al. 2004).
El genoma de Phaseolus vulgaris L., es de 635 Mbp (Bennet & Leitch, 1995; Singh, 1999a). Este
es pequeño comparado con otras especies vegetales y otras leguminosas especialmente las de
genomas grandes como la de Vicia faba. Con respecto al número de cromosomas Phaseolus
cuenta con 11, de tipo diploide y se ha probado que sus familias de genes son pequeñas (Basset et
al. 1999).
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2.3 ORIGEN Y DIVERSIDAD DE Phaseolus vulgaris L.
La investigación de Phaseolus se beneficia de la existencia de dos grandes colecciones de
germoplasma; el Centro Internacional de Agricultura Tropical (CIAT), ubicado en Colombia, que
cuenta con 35,000 accesiones. Y la del Departamento de Agricultura de los Estados Unidos
(USDA) Plant Introduction Station in Pullman, WA, USA, con alrededor de 13,001 accesiones.
Ambas colecciones contienen una amplia muestra tanto de especies silvestres como
domesticadas, representando así la diversidad genética de éstas. Esto representa una gran fuente
de diversidad para el estudio de este grupo de plantas tan diverso (McClean et al. 2004).
Se acepta que todas las especies de Phaseolus se originaron en América Tropical siendo esto
ratificado por la diversidad genética de los materiales que existen en esa región. El origen del
fríjol común domesticado se infiere por los hallazgos arqueológicos que demuestran la
antigüedad de ellos en zonas como México y Perú (Ospina, 1980).
Con base en datos arqueológicos de restos orgánicos como semillas, vainas y hasta plantas
completas, se ha podido determinar que la domesticación del fríjol común viene de 7,000 a
10,000 años aproximadamente. La mayoría de estos restos han sido encontrados en zonas muy
secas en los Andes y en Mesoamérica. Este alto nivel de sequedad, ha contribuido a la
conservación de estos tejidos vegetales por largos periodos de tiempo, sin embargo, sabiendo que
el fríjol común crece generalmente en zonas más húmedas, esto sugiere que dichos genotipos
encontrados fueron posiblemente domesticados en otra zona y luego introducidos. Indicando que
estos restos arqueológicos realmente no representan el punto de origen del fríjol, poniendo en
duda cual es la verdadera región de origen y en que época se iniciaron los primeros procesos de
domesticación (Gepts & Debouck, 1991).
La domesticación se define como un proceso de selección, consciente o inconsciente, por
adaptación a un ambiente cultivado y al consumo humano (Velásquez et al. 1994). Este síndrome
de domesticación como se ha denominado actualmente, se refiere básicamente a la presencia de
un determinado número de diferencias tales como: fenotípicas, dormancia de la semilla, flujo de
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polen, adaptación a medio ambiente, entre otras. Esto es el resultado de una selección durante un
largo periodo de tiempo en busca de adaptación a condiciones de cultivo (Koinange et al. 1996).
La historia de la domesticación en fríjol ha sido bien estudiada y hoy en día se conoce el
progenitor silvestre (Gepts & Debouck, 1991). A partir del cual se han observado cambios como
la pérdida de dos atributos importantes, consecuencia del proceso de domesticación; 1) la
dormancia y 2) la capacidad de dispersión de las semillas, siendo cruciales para una buena
adaptación al cultivo. En cuanto a la dispersión de semillas, este depende directamente de la
presencia de fibras en la vaina, lo cual lleva a la indehiscencia prematura de la vaina y una
dispersión de semillas antes de la madurez. En cuanto a la dormancia, el fríjol cultivado tiene una
germinación rápida en comparación con el no cultivado. Se ha observado que debido a cambios
en cuanto al hábito de crecimiento y sensibilidad al fotoperíodo, los cultivos de fríjol común,
florecen y maduran generalmente antes que los ancestros silvestres (Koinange et al. 1996).
Una característica general dentro del proceso de domesticación es la pérdida de variación
genética de la forma cultivada con respecto a su progenitor silvestre. Esto puede ser explicado si
se tiene en cuenta que los primeros agricultores partieron de una pequeña fracción de la variación
presente dentro de la especie de interés. De esto se deriva el término �efecto fundador�, el cual
indica el establecimiento de una nueva población a partir de unos pocos individuos quienes llevan
consigo una pequeña parte de la variabilidad genética de la población de origen (Flórez, 1996).
Estudios basados en aloenzimas, proteínas (faseolina) y caracteres morfológicos, demuestran la
existencia de dos acervos genéticos, el Mesoamericano y el Andino. Esto refleja múltiples
eventos de domesticación dentro de las diferentes poblaciones silvestres (Beebe et al. 2000).
Otras investigaciones han constatado que el origen del fríjol común mesoamericano se dio más
precisamente en la región centro-occidental de México, en donde actualmente se unen los estados
de Jalisco, Michoacán y Guanajuato (Zizumbo et al. 2005).
En los últimos años se han obtenido datos provenientes del análisis electroforéticos de faseolina,
siendo esta la proteína principal de la semilla del fríjol común, lo cual permitió así identificar dos
principales centros de importancia en la domesticación, Mesoamérica (para cultivadores con
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faseolina S) y los Andes sureños (para cultivares con faseolina H, T y C) (Gepts et al. 1986).
Estas dos áreas han originado dos acervos genéticos separados por barreras, principalmente por
aislamiento a nivel reproductivo (Gepts & Bliss, 1985). Más recientemente se corroboró que la
faseolina I, es la más ancestral y no hace parte de ninguno de los dos acervos genéticos, ya que
fue aislada de accesiones silvestres ya extintas de las regiones montañosas de Ecuador y el norte
de Perú, las cuales son consideradas un área intermedia geográficamente entre los dos acervos,
Andino y Mesoamericano. Sin embargo, lo más significativo dentro de este estudio, es el hallazgo
que este tipo de faseolina no posee repeticiones directas en secuencia de15 y 21 pares de bases,
observadas en los otros tipos, ratificando aún más la posibilidad que sea el tipo más ancestral
encontrado hasta el momento en Phaseolus vulgaris L. (Kami et al. 1995).
En cuanto al fríjol común, se ha observado frecuentemente una disminución en la viabilidad de la
F1 entre genotipos de los dos acervos (Mesoamericano y Andino). Genéticamente puede estar
controlado por un grupo de genes que involucraron la inviabilidad de los descendientes o
evolucionaron especialmente para reducir la introgresión genética. Estos genes posiblemente
codifican para funciones esenciales de crecimiento y desarrollo de plantas no hibridas y
ocasionalmente llevan a la disminución de la viabilidad de la F1 en P. vulgaris. Siendo un
indicador del grado de aislamiento entre los dos acervos genéticos. Este fenómeno
evolutivamente ha generado una marcada divergencia genética entre los acervos Andino y
Mesoamericano. Indicadores de esto tales como los diferentes hábitos de crecimiento, variantes
isoenzimáticas y adaptaciones ambientales (Gepts & Bliss, 1985).
2.3.1 Origen de la Habichuela (Phaseolus vulgaris L.)
El poroto Chaucha Phaseolus vulgaris L. etimológicamente es una palabra de origen quechua
utilizada más que todo en las regiones del sur de Perú hacia Argentina, Chile y Uruguay para
referirse al fríjol consumido en sus estados inmaduros; en otras palabras, consumo de la vaina
verde �habichuela�. Los hallazgos de antiguas tumbas, parece corroborar que inicialmente los
porotos se utilizaban solo en estado seco para ser almacenados durante el invierno. Una vez
llegado el otoño, la escasez de semillas nuevas y maduras, probablemente generó la costumbre de
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usar semillas frescas para desgrane, extendiéndose esta tradición por Sur América y Europa
(Millan, 1987).
Aproximadamente hacia la mitad del siglo XVIII y seguramente en Europa se inició el consumo
de la chaucha como verdura, ya que en Europa existía otra tradición con otras leguminosas. Esta
tendencia se difundió más tarde en los países suramericanos a excepción de regiones apartadas
del Perú y Ecuador (Millan, 1987).
El poroto o habichuela como tal es propio de Sur América precisamente en el norte argentino-
chileno y posiblemente sufrió una separación temprana de aquel centro. Esto ha sido confirmado
por las apreciaciones de O. Voysest (1983) con su libro �Variedades de Fríjol en América Latina
y su Origen�. Al parecer gracias a la amplia distribución del imperio de los Incas que se extendía
desde Pasto (Colombia) hasta el Río Maule por el sur de Chile, se difundieron los diferentes tipos
de poroto. Por esta razón, se cree que dichos genotipos adquirieron características propias que los
diferencian de los de otras regiones (Millan, 1987).
Los porotos se introdujeron en Europa después del descubrimiento de América, donde pasado un
tiempo se difundieron y se arraigaron, pero la implementación de cultivos apropiados para
chaucha se dio a principios del siglo XIX. Esto fue posible gracias a la constante experimentación
fitotécnica, cruzando aquellos porotos con materiales procedentes de América Central, que se
caracterizaban por tener un crecimiento sin guías, vainas angostas y redondas y semillas
alargadas. Estos primeros cultivos europeos eran de enrame y con la chauchas anchas o tipo lápiz
y de color verde o amarillo. Posteriormente, este material fue introducido a Norte América,
donde se realizaron nuevos cruces con porotos autóctonos de esta región (semejantes
morfológicamente a los materiales de América Central) que se diferencian en su reacción
fotoperiódica. De esta forma, tanto en América del Norte como en Europa, se buscaban
constantemente nuevas variedades que han llevado al extremo, que en la actualidad difícilmente
se puede reconocer el origen de dichos materiales (Millan, 1987) (Figura 1).
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Figura 1. Mapa de los posibles centros de domesticación del fríjol común y el tiempo estimado de antigüedad
antes del presente, a partir de evidencias arqueológicas (Ospina, 1980).
Actualmente el conocimiento genético sobre el fríjol común, sugiere que la habichuela derivó del
fríjol de grano seco ya que si proviniera del fríjol silvestre, implicaría muchos más cambios por
selección humana. Sin embargo, Singh et al. (1990), sugirió que poblaciones de América Nativa,
posiblemente consumían vainas verdes ya que el tiempo de cocción de éstas es mucho menor al
de las semillas verdes. Mientras que los grupos contemporáneos en América y África consumían
hojas y vainas verdes de fríjol de grano seco. Esto posiblemente indica otra posible ruta que llevó
a la derivación de la habichuela (Myers & Bagget, 1999).
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Posteriormente se comenzó la selección de vainas con menor contenido de fibra, lo cual
permitió a las casas comerciales europeas a la selección de genes involucrados en esta
característica. Se considera que la diversificación de la habichuela sucedió en Europa y han sido
distribuidas alrededor del mundo (Myers & Bagget, 1999).
Se considera basándose en el tipo de faseolina, que el centro de origen de la habichuela es
Andino. Sin embargo, las variedades contemporáneas derivadas del cruce entre genotipos
Andinos y Mesoamericanos, han generado que su estructura poblacional sea confusa. Esta mezcla
pudo ocurrir seguramente por los programas de mejoramiento genético en Europa y U.S.A
(Myers & Bagget, 1999).
En Colombia el cultivo de habichuela se ha visto limitado a la variedad Blue Lake, debido a la
falta de programas de cruzamientos, lo cual hace necesario un programa de fito-mejoramiento
con base en cruzamientos y poblaciones segregantes (Palacios et al. 1987).
2.4 ESTUDIOS DE DIVERSIDAD GENÉTICA EN HABICHUELA
A pesar de los avances para estimar la variabilidad genética en especies como el fríjol común de
grano seco (Phaseolus vulgaris), son muy pocos los estudios realizados para variedades
comerciales de consumo fresco o sea de la habichuela.
Las variedades Oregon BBL, poseen una combinación única de caracteres morfoagronomicos
deseables; alta producción, excelente calidad de la vaina y una mala arquitectura vegetal que las
diferencia de otras variedades de Estados Unidos. Por otro lado, esto ha generado que la
recombinación entre Oregon BBL y otras variedades sea sumamente complicada y los resultados
no sean positivos Myers y Davis (2002). Con el fin de comprender dichas diferencias entre las
habichuelas Oregon BBL y el resto de variedades, utilizaron RAPDs para caracterizar 75 líneas
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comerciales de habichuela. Obteniendo 5 grupos; 1) se agruparon la mayoría de los genotipos de
EE.UU. con faseolina T y C. 2) Este grupo contenía las variedades europeas con faseolina S y T
y en algunos caso C. 3) Grupo conteniendo los de raza Durango, Meso América y algunos Blue
Lake Pole, con faseolina S. 4) Una combinación de europeos con norteamericanos de vainas
alargadas, la mayoría con faseolina T. 5) Agrupación de las variedades BBL con faseolina S. El
gran descubrimiento de este estudio fue establecer que los materiales BBL tienen un origen
Mesoamericano, lo cual ayuda a entender porque se hace tan difícil la recombinación de estos con
otras variedades.
Los estudios en variabilidad genética realizados hasta la fecha, se han basado en descriptores
morfológicos, bioquímicos y marcadores moleculares. Encontrando patrones de variación en
faseolina, (proteína en semillas), aloenzimas y diferencias morfológicas, revelan la existencia de
grupos de alelos Mesoamericanos y Andinos en el fríjol común (Gepts et al, 1986., Singh et al.
1990).
Las descripciones morfológicas se complementaron con el tipo de faseolina y los sistemas
isoenzimáticos ribulosa bifosfato carboxilasa (RUBISCO), shikimato deshidrogenasa (SKDH),
peroxidasas (PRX), enzima málica (ME), malato deshidrogenasa (MDH), diaforasa (DIAP) y
luciano amino peptidasa (LAP). Esto sirvió para la identificación de razas tanto en el acervo
Mesoamericano (Mesoamérica, Durango, Jalisco) y en el acervo Andino (Nueva Granada, Chile y
Perú). Como resultado de estas investigaciones se encontró que la diversidad del acervo
Mesoamericano es mayor que la del acervo Andino y descubren dos grupos pertenecientes al
germoplasma de la habichuela dentro de los dos centros de origen, presentan crecimiento
determinado e indeterminado respectivamente (Singh et al. 1990).
Métais et al. (2002), basándose en la construcción de una librería genética rica en motivos ATA,
CA, CAC y GA, escogieron microsatélites polimórficos, para evaluar la diversidad genética de
35 líneas comerciales de habichuela y 10 controles de fríjol común de grano seco. El análisis
reveló diferentes niveles de variabilidad dependiendo de la clase comercial, pero en cuanto a las
líneas provenientes de Francia se observó muy poco polimorfismo, esto se le atribuye al efecto
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que genera la intensa selección por parte de los fito-mejoradores, sugiriendo la introducción de
material nuevo con la expectativa de recuperar la diversidad genética dentro de las líneas
comerciales (Tabla 1).
Tabla 1. Descripción de líneas comerciales de habichuela francesa. Tomada de Metais et al (2002).
No VARIETY BREEDER TYPE1 ANDROS Nuhems2 BACCARA Bakker3 BOOSTER Vilmorin4 CABRI Clause5 CAPITOLE Clause6 INTER Vilmorin7 LABEL Vilmorin8 LONGIO Sluis Groot9 MASTER Vilmorin10 PANAMA Royal Sluis11 SKIPPER Vilmorin12 TWIGGY Pop Vriend13 ARRAS Vilmorin/Nickerson14 CASTEL Vilmorin15 FORUM Caillard16 LAKE SUPERIOR Keystone17 MASAI Sluis Groot18 POLDER Vilmorin19 ROMEO Novartis20 SONATE Pop Vriend21 STRIKE Asgrow22 TENDERETTE Charter23 TUF Royal Sluis24 GOLDEN SAND Ferry morse Wax bean (3)25 PI 165426 Black bean mexican accession (A)26 FIN DE BAGNOLS Public ownership27 MORGANE Clause28 TRIOMPHE DE FARCY Public ownership29 ARAMIS Sluis Groot30 ROCBRUN Sluis Groot31 RUDY Tezier32 TALISMAN Caillard33 TOTEM Sluis Groot34 ROCQUENCOURT Vilmorin35 CLOVIS Tezier36 SUNRAY Yates37 ROMA 2 Sluis Groot38 FLAGRANO Holland select39 FLAMATA Royal Sluis40 VERNEL Vilmorin41 BIG BORLOTTO Varietal type42 EXTASY Sluis Groot43 MOGEX Vilmorin44 PB 4246 Vilmorin45 RED KIDNEY Varietal type
Frijol de grano seco
Habichuela
Habichuela
Frijol de grano seco
Market snap bean (6)
Flat bush bean (7)
Kidney bean (8)
Butter bean (9)
French bean (for processing) (1) very fine (sieve5/6.5mm)
French bean (for processing) (2) very fine (sieve6.5/12mm)
Stringy French bean (4)
Snap bean (5)
Muchas de las variedades de habichuela que se cultivan en las regiones tropicales no presentan
características agronómicas deseables, ya que su desarrollo se ve limitado por enfermedades,
plagas y estrés abiótico. Para poder dar solución a esto y entender las formas silvestres con
relación a las cultivadas se han realizado estudios a partir de marcadores moleculares, que
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permiten establecer los centros de origen, la diversidad genética y elaboración de mapas
genéticos para el fríjol común. En Colombia, se han llevado acabo dos estudios sobre la
diversidad genética de habichuela, el de Tofiño (2004) mediante descriptores morfológicos y
bioquímicos y el de Calderón (2005) mediante AFLPs. En ambos casos se evaluaron las mismas
accesiones de habichuela (P. vulgaris) provenientes del banco de germoplasma del CIAT. Tofiño
observó un claro agrupamiento por acervo (Mesoamericano o Andino). Se debe tener en cuenta
que el uso de marcadores bioquímicos (isoenzimas), puede ser una limitante por su bajo
polimorfismo al interior de cada acervo, al presentar pocos alelos por locus, variación de acuerdo
al órgano, tejido o edad del individuo y que de alguna manera se ven influenciados por factores
ambientales (Schulman, 2006). Sin embargo, se ha observado rara vez que en el fríjol común, los
análisis de proteínas de reserva mediante este tipo de marcadores bioquímicos, sean influenciados
por factores ambientales (Becerra & Paredes, 1999).
En cuanto al estudio realizado por Calderón (2005), mediante el uso de AFLP, describe que la
diversidad de dichas accesiones de habichuela es muy baja debido a la alta presión de selección
ejercida por el hombre.
El uso de marcadores moleculares tiene ventajas sobre la simple caracterización morfológica, ya
que estos se ven influenciados directamente por factores ambientales. Más aún, los marcadores
morfológicos no permiten determinar la diversidad genética de Nei (1972), el flujo génico y
estructura genética con exactitud. Esto se observó en el estudio de Teixeira et al. (2004), donde
buscaron estimar la variabilidad genética de 14 accesiones de habichuela mediante descriptores
morfoagronómicos, teniendo en cuenta las estaciones climáticas. Se reportaron diferencias
significativas para muchos caracteres morfológicos a excepción del diámetro de la vaina y la
inserción de la primera vaina, lo cual demuestra que los genotipos responden de formas diferentes
de acuerdo a cambios ambientales. En cuanto a la agrupación, entre las temporadas de otoño e
invierno se reportó una similitud más alta en los genotipos que en verano. Sin embargo, se
observó un comportamiento poco constante de las accesiones en los diferentes ambientes lo cual
llevo a una reducción en la similaridad dentro del grupo. Este tipo de estudios, demuestran que
realizar estimaciones de la diversidad de una población mediante marcadores morfológicos puede
llegar a ser una limitante y hoy en día no son los más indicados para llevar a cabo este tipo de
análisis.
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El programa de Hortalizas de la Universidad Nacional de Colombia al igual que el centro
Internacional de Agricultura Tropical CIAT, ha investigado sobre la variabilidad genética de la
habichuela (Phaseolus vulgaris L.), utilizando diversos descriptores. Estos estudios se han
realizado con el fin de proveer un soporte para el mejoramiento genético de esta leguminosa,
viendo que la base genética ha estrechado y los cultivos colombianos se han limitado a la
variedad Blue Lake.
2.5 MARCADORES MOLECULARES
Los marcadores moleculares son secuencias de ADN que detectan un locus polimórfico que
permiten diferenciar entre un genotipo y otro a nivel genómico, pueden ser fragmentos
codificantes o no codificantes (Tohme et al. 1998). Según Weising (1995), los marcadores
moleculares deben poseer características tales como: alto comportamiento polimórfico, herencia
codominante (permitiendo diferenciar estados homocigotos de heterocigotos en organismos
diploides), alta frecuencia genómica, comportamiento selectivo neutral, fácil acceso y alta
reproducibilidad, entre otros.
Tradicionalmente los marcadores utilizados en estudios de genética y mejoramiento eran aquellos
controlados por genes asociados a caracteres morfológicos en general fenotipos de fácil
identificación visual, que contribuyeron significativamente al desarrollo teórico del análisis de
ligamiento y en la construcción de las primeras versiones de mapas genéticos (Ferreira y
Grattaplagia, 1998). Sin embargo, el bajo número de estos marcadores y la posibilidad de
interferencia espistática o ambiental limitaba su uso. La revolución en este plano se inició con el
descubrimiento y utilización de elementos isoenzimáticos. El número de marcadores genéticos
disponibles fue ampliado y la aplicación de la técnica se expandió prácticamente a todas las
especies vegetales (Ferreira & Grattaplagia, 1998).
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2.6 MICROSATÉLITES
Los microsatélites son marcadores moleculares, polimórficos y codominantes que poseen
secuencias repetidas en serie con una longitud que puede oscilar entre 1 y 6 pares de bases. Existe
una definición universal acerca de cuantas repeticiones deben existir para ser consideradas como
un microsatélite, dos repeticiones mínimo. Se ha observado que existe una variación entre los
microsatélites, la cual parece estar dada por el deslizamiento de la DNA polimerasa durante la
replicación y/o por entrecruzamiento desequilibrado, viéndose el resultado en el número de
copias de las secuencias (Yu et al. 1999). Esta técnica presenta ventajas muy importantes frente a
las otras técnicas; ya que presentan un mayor contenido de información que le permite trabajar
con cualquier población segregante, además de su amplia cobertura en el genoma eucariótico
(Ferreira & Grattapaglia, 1998).
Los usos que se le han dado a los microsatélites van desde estudios de genética de poblaciones,
medicina forense y localización de genes, construcción de mapas moleculares en diferentes
organismos, hasta la caracterización de germoplasmas (Gaitan, 1999). Otras ventajas son que se
encuentran distribuidos al azar a lo largo del genoma, son locus específicos y multialélicos, se
heredan de una manera Mendeliana (Gaitan 1999).
En el pasado, el desarrollo de microsatélites era un proceso bastante costoso y estaba limitado a
los cultivos principales. El primer reporte de aislamiento y clonación de microsatélites para
plantas fue para árboles tropicales. Hoy en día, es posible obtener SSRs directamente de librerías
genómicas, de cDNA y enriquecidas para microsatélites específicos, o simplemente a partir de
secuencias disponibles en Genebank como es el caso de Phaseolus vulgaris y Phaseolus Vigna
(Gaitan et al. 2002).
El uso de microsatélites para describir la diversidad genética del fríjol común se ha convertido
en una herramienta importante para entender la organización de su diversidad genética,
determinar sus centros de origen, el flujo génico que existe entre los dos grandes acervos
genéticos (Andino y Mesoamericano) y recientemente para el fortalecimiento de programas de
mejoramiento genético (Blair et a. 2006; Ferreira et al. 2007; Buso et al. 2006).
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Blair et al. (2003), evaluaron un total de 150 microsatélites para el fríjol común Phaseolus
vulgaris L., fueron probados con el objetivo de evaluar el polimorfismo parental y determinar la
posición de 100 loci dentro del mapa genético de fríjol común. Se mapearon dos tipos de
microsatélites; basados en genes y secuencias genómicas anónimas. Al mapa genético del fríjol
común, quedaron integrados 100 nuevos loci de microsatélites, a los cuales se integraron con los
15 mapeados previamente por Yu et al. (2000), sumando un total de 115 loci. Esto significa una
cobertura para cada uno de los cromosomas y alrededor de 20 microsatélites por grupo de
ligamiento.
Blair et al. (2006), evaluó la diversidad alélica y heterocigocidad de 129 microsatélites en un
panel de 44 genotipos de (Phaseolus vulgaris L.), los cuales han sido utilizados previamente
como parentales en poblaciones de mapeo. En este estudio, dos tipos de microsatélites fueron
evaluados, codificantes y no codificantes. Se observó que el polimorfismo de los microsatélites
geonómicos es mayor en términos de alelos y de los valores de contenido de información
polimórfica (PIC). Este estudio fue útil para distinguir entre los genotipos mesoamericanos y los
andinos, revelar las diferentes razas entre cada acervo genético y por ultimo, para separar
accesiones silvestres de cultivadas. A partir de esto, se observó mayor polimorfismo y estructura
genética dentro del acervo Andino, más aún, se encontró mayor diversidad intrapoblacional e
intraracial dentro del acervo Andino que en el Mesoamericano y este patrón se dio tanto en
microsatélites no codificantes como en codificantes. En este estudio a diferencia de evaluaciones
previas con genotipos Andinos, se identificaron dos grupos raciales dentro de este acervo, Nueva
Granada y Perú, mientras que dentro del acervo Mesoamericano no se evidenciaron claramente
grupos raciales. La alta diversidad dentro del grupo Andino refleja sus múltiples hábitos de
crecimiento y un origen en diferentes regiones agroecológicas.
2.6.1 Detección alélica con tinción en plata y fluorescencia
Los polimorfismos de SSR se pueden visualizar mediante electroforesis en geles de agarosa o de
poliacrilamida. Los alelos del microsatélite se detectan usando diversos métodos: tinción con
bromuro de etidio, nitrato de plata, radioisótopos o fluorescencia.
18
La detección alelica con tinción en plata, se lleva acabo en un gel de archilamida donde se hace
migrar los productos de PCR mediante electroforesis, obteniendo una serie de bandas las cuales
representan los alelos (Dean et al. 1999).
El uso del análisis semiautomatizado por fluorescencia, fue reportado en un principio por Carrano
et al. (1989), después fue adaptado y mejorado para análisis de microsatélites (Coburn et al.
2002). Esta técnica nace con el fin de incrementar la detección alélica por SSR y por ende ha
demostrado disminuir costos a la vez (Masi et al. 2003). Recientemente, se ha venido empleando
la detección por fluorescencia para diferentes especies como: Oryza sativa, P. vulgaris,
Arabidopsis, Brassica sp., maíz, soya y tomate. Blair et al. (2002) diseñaron 27 microsatélites
fluorescentes organizados en cuatro paneles para evaluar la diversidad de Oryza. Estos paneles
fueron probados en 72 accesiones representando la diversidad de los ecotipos y los grupos
isoenzimáticos de arroz cultivado. Los microsatélites fluorescentes utilizando cuatro colores y
una detección automatizada de secuencias genómicas han mostrado ser una herramienta eficiente
para genotipificación (Blair et al. 2002). Otra ventaja que ofrece esta técnica es que la alta
sensibilidad de detección permite disminuir el volumen de la reacción de PCR y por otro lado
esto facilita la detección de loci difíciles de amplificar.
2.7 DIVERSIDAD GENÉTICA
Nei (1973), introdujo el concepto de diversidad o similaridad génica (H: heterozigocidad)
(unidad medible) para así poder interpretar la variación genética (conceptual), valida tanto para
poblaciones sexuales como asexuales. Y para el caso de este estudio, el cual se basó en una
especie diploide (Phaseolus vulgaris L.), la diversidad genética, es el equivalente a la
heterocigocidad esperada bajo reproducción aleatoria (Duque, 1998). El termino heterocigocidad,
significa la frecuencia de heterocigotos considerando el apareamiento al azar dentro de una
población total de genotipos.
19
La Diversidad Genética de Nei (1978) fue calculada así:
H = 1 - ∑ Pi ²
Donde Pi es la frecuencia del i-esimo alelo dentro de locus.
La Distancia Genética de Nei (1972) fue calculada así:
D = -Ln I
I = Jxy √Jx Jy
Donde JX, JY y JXY son, respectivamente, las medias aritméticas de los valores Sxi2, Syi
2, y Sxiyi,
calculados para cada uno de los loci
La Distancia Euclidiana esta definida por:
Donde pij y qij , son las frecuencias alélicas del alelo jth en el locus ith en los dos organismos bajo consideración, ni es el numero de alelos en el locus ith. Y m se refiere al número de loci. El rango de dE va desde 0 hasta √2m (Reif et al. 2005). Índice de disimilaridad para datos alélicos:
dij : disimilaridad entre unidades i and j
L: numero de loci
π: ploidia
20
ml: número de alelos que concuerden con el locus l.
2.7.1 FLUJO GÉNICO E INTROGESIÓN ALÉLICA
Las poblaciones no constituyen generalmente unidades panmícticas, por el contrario se
encuentran subdivididas en pequeñas subpoblaciones. Por lo tanto, las especies en la naturaleza
ocupan un área geográfica que a la vez está poblada por otras subpoblaciones que están
constantemente interconectadas formando una estructura dinámica que permite que haya un flujo
génico. Se ha definido el flujo genético de una población X a otra Y mediante la proporción, m,
de individuos que por cada generación se reproducen en la población Y procedentes de la
población X (Fontdevila & Moya, 1999).
El flujo genético entre poblaciones silvestres y domesticadas, va de la mano con la domesticación
y evolución de una especie y de forma parcial ha venido afectando la diversidad genética de estas
poblaciones manipuladas por el hombre. Hoy en día, por programas de mejoramiento genético se
han introducido a especies cultivadas varios genes de sus parientes silvestres. Este flujo génico de
una población domesticada, tiende a reducir la diversidad genética de las poblaciones silvestres,
llevando en algunos casos a la extinción de ésta (Papa, 2005).
En el fríjol común, para estimar las tasas de flujo génico entre variedades silvestres y cultivadas,
se debe tener en cuenta que se trata de una especie anual y autogama. Donde se observa que la
estructura de la flor protege tanto los órganos masculinos como los femeninos gracias a los
pétalos. Por lo tanto, los granos de polen se deslizan por el estigma antes de la antesis. Ferreira et
al. (2007), estimaron la tasa de entre-cruzamiento, obteniendo valores muy bajos, por debajo del
1% y observando que la rata más alta de polinización cruzada se dio a una distancia de 1.0 mt
pero después de los 3.25 mt ya no ocurre entre-cruzamiento alguno. Por lo tanto, sugieren que el
flujo génico, es considerado como un evento de gran magnitud en especies alógamas, como
ocurre con el maíz, pero en cuanto a plantas autógamas, su magnitud todavía se desconoce.
A raíz de la presión genética que ha ejercido el hombre sobre el fríjol común, se han observado
eventos de introgresión alélica entre los dos acervos. Los programas de mejoramiento genético
21
emplean diferentes metodologías; algunos utilizan retrocruces, selección de gametos, entre otros.
Posiblemente, esta constante selección direccionada, genere que la base genética del fríjol común
cultivado y comercial se amplíe. Por ejemplo, se han observado introgresiones en cuanto al tipo
de hábito, como es el caso de la raza Durango, a la cual se le introgresó el tipo de hábito II de una
raza mesoamericana, mediante una selección fenotípica (Singh, 2001).
3. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIÓN
A nivel mundial, los fitomejoradores están constantemente en busca de nuevas variedades de
habichuela que cumplan con las exigencias agroeconómicas tanto para el agricultor como para el
consumidor, lo cual varía de acuerdo a la región y sus costumbres.
La habichuela, (Phaseolus vulgaris L.), es el resultado de mutaciones genéticas del fríjol común
que fue introducido a Europa, con el fin de reducir el alto contenido de fibra en la vaina y así
poder ser consumida en estados tempranos de desarrollo. Actualmente muchos de los países
cultivadores de habichuela, producen la mayor parte de su propia semilla y la otra parte proviene
de líneas comerciales extranjeras (Janssen, 1987). Sin embargo, las variedades introducidas que
se cultivan en las regiones tropicales, no presentan los caracteres deseables para este medio, entre
las que se pueden citar, resistencias a enfermedades, como la Roya (Uromyces phaseoli), que
reducen significativamente los rendimientos y elevan los costos de producción al ser necesario el
uso de gran cantidad de productos químicos (Pachico, 1987).
En Colombia, cerca de la mitad de la semilla que se siembra actualmente proviene de los Estados
Unidos y la otra mitad de producción propia. Blue Lake es la variedad más sembrada en
Colombia, ya que presenta características agroeconómicas que la hacen favorable para los
productores, como por ejemplo un alto rendimiento y adecuadas características de la vaina, las
cuales son aceptadas por el consumidor, pero es muy susceptible a enfermedades como,
bacteriosis (Xanthomonas campestres), la mancha angular y a la roya (Uromyces phaseoli), entre
otros. Además, su adaptación está limitada a tierras entre los 1.000 -1.6000 m.s.n.m, lo cual
22
reduce su producción y consumo (Palacios & Agudelo, 1987).
En un programa de mejoramiento vegetal es importante llevar a cabo, cruzamientos con en
poblaciones segregantes que presenten buena adaptación al medio, a diferentes pisos térmicos y
resistencia a plagas y enfermedades. De esta forma se podría aumentar la producción de
habichuela en regiones del país que hasta el momento no son aptas. Para esto, se hace importante
evaluar e identificar la variabilidad genética inter e intrapoblacional que se presente en los
acervos genéticos (Andino y Mesoamericano) de la especie (Palacios & Agudelo, 1987).
Para evaluar el estado de la diversidad genética de habichuela (Phaseolus vulgaris L.) se propone
el uso de marcadores moleculares microsatélites, lo cual contribuirá en el establecimiento de
estrategias de mejoramiento y conservación de accesiones con importancia agroeconómica.
4. OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL:
Determinar la diversidad genética de 127 accesiones de habichuela voluble (Phaseolus vulgaris
L.) provenientes de la Unidad de Recursos Genéticos del CIAT (URG-CIAT).
OBJETIVOS ESPECIFICOS:
1. Comparar el grado de polimorfismo entre las dos metodologías de detección alélica
(tinción con nitrato de plata y fluorescencia).
2. Comprobar eventos de introgresión alélica entre el acervo Mesoamericano y el Andino.
3. Identificar a qué acervo genético (Andino o Mesoamericano) pertenece cada uno de los
127 genotipos de habichuela evaluados.
23
5. MATERIALES Y MÉTODOS
5.1 UBICACIÓN ESPACIAL
El presente trabajo se llevó a cabo en las instalaciones del Laboratorio de Caracterización
Genética de Fríjol y en el Laboratorio de Biología Molecular del Instituto Alexander von
Humboldt, gracias a un acuerdo con CIAT; ambos laboratorios se encuentran en el interior del
CIAT.
5.1 MATERIAL BIOLÓGICO
Se evaluaron 127 accesiones, 119 de habichuela (P. vulgaris), y cuatro testigos usados como
controles de fríjol de grano seco, pertenecientes al acervo andino: G19833 y el DIACOL
CALIMA y al acervo Mesoamericano: Dor364 y el ICA PIJAO. Dentro de los genotipos, se tomó
la variedad nacional UNAPAL Milenio, pariente cercano de Blue Lake, como otro testigo con
respecto a las líneas Blue Lake. Estos materiales fueron facilitados por el Banco de germoplasma
del proyecto fríjol y la Unidad de Recursos Genéticos (URG-CIAT). Algunas de estas
variedades de habichuela están reportadas por la casa comercial �Heirloom bean seeds" (Tabla 2 y
3).
24
Tabla 2. Material biológico evaluado: 127 accesiones del banco de germoplasma del CIAT. N Genotipo H PO F N Genotipo H PO F N Genotipo H PO F1 CALIMA 1 CLB T 51 G18848 3 YUG C 101 G5760 4 USA T2 DOR364 2 CLB S 52 G18874 4 CLB T 102 G5763 4 USA S3 G10134 4 NLD S 53 G18894 4 CHN CH 103 G587 3 TUR T4 G1014 4 ZAF S 54 G18908 3 CAN T 104 G620 2 TUR S5 G10165 3 ESP C 55 G19093 4 MEX S 105 G621 3 TUR S6 G10181 4 ESP C 56 G19268 4 SUN S 106 G625 3 TUR T7 G10214 4 PRT S 57 G19279 4 CHN S 107 G634 3 TUR C8 G10220 4 PRT S 58 G19328 4 OEU CH 108 G6726 4 USA T9 G10222 4 PRT S 59 G19833 3 PER H 109 G8991 4 USA S10 G10233 4 PRT S 60 G20066 4 YUG C 110 G8992 4 USA C11 G10264 3 PRT C 61 G20120 4 YUG C 111 G8228 4 USA S12 G10310 4 PRT S 62 G20132 3 YUG C 112 G8757 1 CHE C13 G11269 3 NlD S 63 G20330 4 YUG C 113 G8776 4 USA Hls+n14 G11284 2 USA T 64 G20365 4 YUG CH 114 G8822 2 DEU T15 G11286 4 DEU S 65 G20400 4 CHN S 115 G8829 4 USA S16 G13431 4 CHN Sb 66 G20401 4 CHN S 116 G9069 4 USA NA17 G13450 4 JPN S 67 G20404 4 CHN S 117 G9180 4 FRA T18 G13597 4 USA S 68 G20624 4 INO S 118 G9194 4 FRA CH19 G14577 4 HUN S 69 G211 3 TUR T 119 G9218 4 USA S20 G14722 4 ITA S 70 21117 4 CLB NA 120 G922 4 USA S21 G14836 2 USA C 71 G217 3 TUR S 121 G928 4 USA T22 G15300 4 ZMB S 72 G23441 4 GTA NA 122 G9353 4 FRA S23 G15660 3 MEX S 73 G23627 4 USA T 123 G9444 1 CLB NA24 G15778 3 ESP C 74 G23952 4 CHN S 124 G9545 3 USA S25 G15779 3 ESP H1 75 G23953 4 CHN S 125 G9604 4 JPN T26 G15801 4 ZMB S 76 G24542 4 CHN CH 126 MILENIO 4 CLB S27 G15854 3 TUR C 77 G24543 4 CHN S 127 Pijao 2 CLB B28 G15905 4 TUR S 78 G24544 4 CHN S29 G15913 4 NLO S 79 G25 3 CDA NA30 G1610 2 HUN S 80 G2926 4 TUR S31 G16389 4 OEU S 81 G371 3 TUR T32 G16421 4 IRN T 82 G373 3 TUR T33 G16487 3 IRN T 83 G3736 4 USA S34 G16806 4 CHE S 84 G3747 3 ITA C35 G16831 4 GTM S 85 G3946 4 USA S36 G1729 4 ELS NA 86 G4205 4 CRI C37 G17374 3 USA S 87 G4225 4 USA S38 G17420 3 USA S 88 G4494 1 CLB T39 G17646 3 USA S 89 G4500 4 USA S40 G17647 3 USA S 90 G50633 4 TUR T41 G17723 4 USA S 91 G50634 3 TUR C42 G17750 4 HUN S 92 G50635 3 TUR C43 G17769 3 HUN CH 93 G50636 4 CHN T44 G17861 3 HUN S 94 G50637 4 CHN S45 G17915 4 HUN CH 95 G50638 4 CHN S46 G18212 4 ESP Sb 96 G50639 4 CHN S47 G18215 4 ESP C 97 G50640 4 CHN S48 G18220 3 ESP C 98 G50641 4 CHN T49 G18540 4 BRA S 99 G50796 3 CHN S50 G18722 4 TUR C 100 G5733 3 JMC NA
H: Habito de crecimiento., PO: País de origen., F: Faseolina. NA: Sin determinar.
Tabla 3. Variedades de habichuela evaluadas en este estudio, reportadas por la casa comercial "Heirloom bean seeds".
Nombre Acervo Faseolina Fecha de liberacion Lugar de liberacion No de accesionesKENTUCKY WONDER 780 Mesoamericano S 1800 USA 9
GOLDEN GATE WAX Mesoamericano T NA USA 2ROMANO POLE BEAN Andino C NA ESPANA 1
ROMANO Andino C NA ESPANA 1TENDERGREEN Mesoamericano T NA USA 1
BLUE LAKE Mesoamericano S NA USA 4GENUINE CORNFIELD Mesoamericano Hls+n NA USA 1
Habichuela voluble tradicional
25
5.2 EXTRACCIÓN DE ADN
5.2.1 GERMINACIÓN DEL MATERIAL VEGETAL
La germinación de las semillas se realizó bajo condiciones de laboratorio con el fin de garantizar
la obtención de plántulas libres de plagas, virus u hongos. Se seleccionaron 10 semillas por cada
una de las 127 accesiones, las cuales fueron escarificadas haciendo un corte superficial de la
testa del lado opuesto al micrópilo con el fin de acelerar la absorción de agua de las semillas.
Luego, cada una de las 10 semillas se colocó espaciadamente en forma lineal sobre el centro de
papel absorbente (debidamente marcado con el número de identificación del genotipo) donde
fueron enrolladas y amarradas con alambre para finalmente colocarlas en imbibición con una
solución de Sulfato de Calcio (Ca2SO4) 0.5mM. El periodo de germinación fue aproximadamente
de 5 a 8 días en la oscuridad para evitar procesos fotosintéticos para evitar la oxidación del tejido.
5.2.2. Procesamiento del material vegetal
Se extrajeron los primordios y en algunos casos los trifolios jóvenes preferiblemente, luego
fueron colocados en tubos Eppendorf de 2 µl debidamente etiquetados. Una parte de la población
se liofilizó en un Freeze Dryer MODULYoD-115 durante dos días para así deshidratar totalmente
el tejido y poder obtener un polvo más fino. La otra parte de la población no fue sometida al
proceso de liofilización sino que fue macerada inmediatamente con nitrógeno líquido después de
ser colectada.
5.2.3. Extracción y cuantificación de ADN
La extracción de ADN se realizó a partir de los primordios foliares, considerados como las
primeras hojas no fotosintéticas de la planta. Esto con el fin de evitar procesos de oxidación y
garantizar la obtención de material no degradado. La extracción de ADN se llevo acabo siguiendo
el protocolo CTAB propuesto por Doyle & Doyle (1987), con modificaciones realizadas por C.
Muñoz (2005). Se realizó un gel de agarosa al 1% y 1 µl de Bromuro de Etidio, en cada pozo se
sembraron 2 µl de ADN y 3 µl de buffer Blue Juice y 7 µl de agua HPLC y se corrió una
26
electroforesis a 120 V durante 30 minutos. Posteriormente se llevó el gel a un transiluminador de
luz UV y se fotografió con el equipo Geldoc Biorad para observar la calidad del ADN extraído.
Finalmente, se cuantificó utilizando un fluorómetro.
5.2.4 Dilución de ADN
A partir de la concentración de ADN original, se realizó una dilución a una concentración final
de 5 ng/ml en un volumen final de 300 µl (Anexo 1).
5.3 PCR para microsatélites
5.3.1 PCR para microsatélites analizados en gel de poliacrilamida (PAGE) con tinción en
plata
La amplificación de 11 microsatélites por PCR se llevó a cabo con un volumen final por reacción
de 15 µl, conteniendo 25 ng de ADN, 7.98 µl de agua grado HPLC, cada cebador a una
concentración de 10 µM, dNTPs [20mM], TAQ Polimerasa [1:10], buffer 10x para PCR [10mM
de tris-HCl (pH 7.2), KCl], y solución MgCl2 [25 mM]. Como termocicladores se utilizaron los
PTC 100TM y PTC 200TM (MJ Research) bajo el siguiente programa: denaturación a 94°C por 3
minutos, 34 ciclos de 92°C por 30 segundos, seguido de 50°C por 30 segundos, y una extensión
a 72°C por 45 segundos. Finalmente una extensión final de 72°C por 5 minutos (Tabla. 4).
El producto de la amplificación fue mezclado con buffer de carga (5µL de formamida, 0.4% de
azul de bromofenol y 0.25% p/v de xilen-cianol) y denaturado a 94°C por 4 min; una muestra de
2.8 µL de cada producto se cargó en un gel de poliacrilamida denaturante al 4%, (29:1
acrilamida:bis-acrilamida) y corrieron en unidades de Sequi-Gen GT electroforesis (Biorad,
Hercules, Calif., USA) a una potencia constante de 120W por una hora aproximadamente. La
detección del producto de amplificación se realizó a través de tinción con plata de acuerdo con las
instrucciones del fabricante del kit Silver Sequence® DNA sequencing System Kit (Promega,
Madison, WI, USA); el peso de los alelos se estimó a partir de patrones de una sola copia
27
basándose en la comparación de bandas de microsatélite de una escalera de peso molecular de
10pb (Invitrogen, Carlbad, CA, USA).
5.3.2. PCR para microsatélites analizados con fluorescencia en secuenciador automático.
Para los microsatélites fluorescentes, se utilizaron cinco paneles donde dentro de cada panel
existen dos grupos Panel A y B, compuestos cada uno por cuatro microsatélites representando
cada uno de los fluorocromos, sumando un total 36 microsatélites fluorescentes. La amplificación
por PCR se llevó a cabo en un volumen final de 15 µl para cada reacción, de la misma forma que
el método anterior pero con 0.15 µL de primer forward y reverse en mezcla [2 µM], dNTPs
[10mM], donde el forward equivale a un fluorocromo (Rojo=PET, Verde=VIC, Azul=6-FAM,
Amarillo=NED) según lo indicado en la tabla 4. En algunos casos las lecturas no fueron exitosas,
por lo que se desecharon 4 microsatélites, por esta razón en la tabla 5 algunos paneles están
incompletos.
Posterior a esto, a partir de dichos productos de PCR se realizó un mix teniendo: 2 µL de cada
uno de los productos de PCR más 9 µL de agua HPLC, esto fue agregado a cada uno de los
genotipos en una nueva placa. De esta mezcla se tomaron 0.5 µL para mezclarlo con 3µL de agua
grado HPLC. Esta nueva placa fue denaturada a 94°C durante tres minutos. Se corroboró la
amplificación en un gel de agarosa al 1%, escogiendo aleatóriamente cuatro productos por
microsatélite. Finalmente la placa de productos de PCR fue sometido a deshidratación por una
hora y media, en una centrífuga concentrador a vacío (speedvac) de marca Eppendorf Centrifuge
5417c. Finalmente, las lecturas de las bandas alélicas se realizaron con el programa Gene Mapper
v. 3.0, el cual permitió determinar con mayor precisión la posición y tamaño de los alelos.
28
Tabla 4. Lista de cebadores evaluados con tinción en plata
NUMERO MICROSATELITE TINCION1 BM164 AG2 BMd54 AG3 BMd07 AG4 BMd26 AG5 BM142 AG6 BMd32 AG7 BMd40 AG8 BM189 AG9 Pv-at001 AG10 BM201 AG11 BM139 AG
Tabla 5. Lista de cebadores fluorescentes evaluados. NUMERO MICROSATELITE FLUOROCROMO PANEL COLOR
1 BM172 PET 5A ROJO2 BMd08 NED 5A AMARILLO3 BMd20 VIC 5A VERDE4 GATs91 6-FAM 5A AZUL5 BM175 VIC 5B VERDE6 BM188A NED 5B AMARILLO7 BM188B NED 5B AMARILLO8 BM200 6-FAM 5B AZUL9 BM205 PET 5B ROJO10 BM156 6-FAM 6A AZUL11 BM160 NED 6A AMARILLO12 Pv-ctt001 VIC 6A VERDE13 BMd02 PET 6B ROJO14 BMd16 VIC 6B VERDE15 Pv-ag003 NED 6B AMARILLO16 AG01 VIC 7A VERDE17 BM140 6-FAM 7A AZUL18 GATs54 NED 7A AMARILLO19 BM183 NED 7B AMARILLO20 BM187 VIC 7B VERDE21 BMd17 PET 7B ROJO22 BM143 PET 8A ROJO23 BM149 6-FAM 8A AZUL24 BMd46 NED 8A AMARILLO25 BM141 6-FAM 8B AZUL26 BMd15 NED 8B AMARILLO27 BMd47 PET 8B ROJO28 Pv-cct001 VIC 8B VERDE29 BMd18 6-FAM 9A AZUL30 BMd51 PET 9A ROJO31 BMd56 NED 9A AMARILLO32 Pv-at003 VIC 9A VERDE
29
5.4 ANÁLISIS DE DATOS
La evaluación de los alelos se obtuvo a partir de la observación directa para el caso de los geles
PAGE con tinción en plata, mientras que los microsatélites corridos con fluorescencia los loci
fueron determinados mediante el programa Gene Mapper v. 3.7. Una vez se obtuvieron las
lecturas de los loci para ambos casos, se realizó una matriz codominante con los tamaños
alélicos. Posterior a esto se transformo dicha matriz en una de presencia/ausencia para ser
analizada mediante el programa Darwin.
Con la agrupación obtenida con este programa se corrió Popgene 1.3 (Yeh et al. 1997), programa
que permite estimar la diversidad genética, estructura genética, equilibrio Hardy-Weiberg y flujo
de genes, entre otros (Labate, 2000).
Una vez se obtuvo la agrupación utilizando el programa Darwin, se realizó un análisis de
coordenadas principales, con el fin de corroborar dicha agrupación y por otro lado para observar
la ubicación espacial de cada una de las accesiones de habichuela. Finalmente, se tomaron de los
datos morfoagrnomicos reportados por Tofiño (2004), faseolina y hábito de crecimiento, con el
fin de correlacionarlos con la agrupación obtenida en este estudio. Finalmente, partiendo del
análisis de coordenadas principales, se utilizo el programa NTSYS, con el fin de calcular la
distancia Euclidea representada en un cladograma.
6. RESULTADOS
6.1 Polimorfismo alélico
Partiendo de la base que la diversidad genética se evalúa comúnmente en términos de número de
alelos dentro de una población o entre poblaciones y que hace referencia al número de estados
variantes de un locus dentro del genoma de un individuo (Merchan, 2003).
Para este estudio dentro de los 43 microsatélites analizados (11 detectados con plata y 32 con
30
fluorescencia), se obtuvo un total de 288 alelos con un promedio de 8 alelos observados por
marcador.
Con respecto a los dos acervos genéticos, se encontró que el acervo Mesoamericano contiene
levemente en promedio más alelos (6) que el acervo Andino (5). Sin embargo, en cuanto a la
heterocigocidad de Nei (1973) de cada uno de los acervos fue muy similar, 0.469 para Andino y
para el Mesoamericano 0.4564, en promedio. Con respecto a la diversidad promedio de los
microsatélites genómicos y los génicos, respectivamente (0.61 versus 0.55), esto sugiere que de
acuerdo al origen del microsatélite se reportan diferentes niveles de polimorfismo. Y en total para
toda la población, se obtuvo una heterocigozidad de 0.5181.
El polimorfismo encontrado para los microsatélites fue del 95.35%, lo cual equivale a 41
marcadores polimórficos y dos monomórficos, el BMd32 el cual se corrió con electroforesis en
gel PAGE y el BMd51 corrido en fluorescencia. Dentro de los polimórficos con mayor número
de alelos se encontraron; el Pv-at001, BM200, BM187 y el GATS91, con 30, 20, 15 y 15
respectivamente. Con respecto al número de alelos en promedio, se obtuvo un valor relativamente
más alto con los marcadores fluorescentes que con los evaluados con tinción en plata, siendo
respectivamente 8 y 6 (Tabla 6 y 7, Figura 2). Para la heterocigocidad observada por
microsatélite, el Pv-at001 obtuvo el valor más alto (0.9435).
A
31
B
Figura 2. Representación de las dos metodologías empleadas para la lectura de bandas alélicas. A) Lectura del microsatélite Pv-at001 en plata. B) lectura del microsatélite fluorescente BM200 mediante el software Genemapper v3.7.
Tabla 6. Contenido de información polimórfica utilizando detección con fluorescencia
Marcador Fluorocromo No alelos H Nei Het obsGenómicos
GATS91 6-FAM 15 0.8753 0.0211BM172 PET 7 0.4117 0.0857
BM188A NED 4 0.4040 0.0093BM188B NED 11 0.8261 0.4130BM175 VIC 13 0.6288 0.0870BM200 6-FAM 20 0.8593 0.0270BM205 PET 9 0.5156 0.0472BM156 6-FAM 9 0.7216 0.0593BM160 NED 12 0.6405 0.0377AG01 VIC 6 0.3011 0.0410
BM140 6-FAM 10 0.6660 0.1301BM187 VIC 15 0.7950 0.1789BM183 NED 11 0.8505 0.1048BM143 PET 12 0.7138 0.1969BM149 6-FAM 2 0.2644 0.0085BM141 6-FAM 10 0.7197 0.0561
GATS54 NED 3 0.3090 0.0593Pv-gaat001 VIC 7 0.7078 0.1508Pv-ag003 NED 4 0.0930 0.0000Pv-at001 6-FAM 30 0.9435 0.0480Pv-at003 VIC 8 0.5341 0.1452
Media 10 0.61 0.09
GénicosBMd08 NED 5 0.3171 0.0157BMd20 VIC 7 0.4951 0.0583BMd02 PET 5 0.6779 0.1712BMd16 VIC 5 0.2551 0.0891BMd17 PET 5 0.7578 0.7581BMd47 PET 9 0.6238 0.1121BMd15 NED 6 0.2613 0.0280BMd18 6-FAM 4 0.0640 0.0164BMd56 NED 3 0.4880 0.0278
PVCCT001 VIC 15 0.0410 0.0083Media 6 0.40 0.13Media total 8 0.50 0.11
H: diversidad genética de Nei (1972) Het obs: heterocigocidad observada.
32
Tabla 7. Contenido de información polimórfica utilizando detección con tinción en plata.
Marcador Tincion No alelos H Nei Het obsGenómicos
BM139 Plata 6 0,5065 0,0323BM201 Plata 9 0,7782 0,0315BM164 Plata 7 0,5160 0,0000BM142 Plata 5 0,4616 0,0000BM189 Plata 10 0,8266 0,0656Media 7 0,6178 0,0259
GenicosBMd26 Plata 5 0.5666 1,0789BMd46 Plata 3 0,5101 0,0417BMd40 Plata 4 0,2324 0,0000BMd07 Plata 3 0,5747 0,0000BMd54 Plata 6 0,5456 0,0565Media 4 0,4657 0,2354
Media Total 6 0,5417 0,1307 H: diversidad genética de Nei (1972) Het obs: heterocigocidad observada.
6.2 AGRUPAMIENTO DE LAS 127 ACCESIONES DE HABICHUELA
Se generó una matriz codominante y a partir de esta se utilizó Darwin 5.0, software diseñado para
análisis filogenéticos y de diversidad genética, por medio de un índice de similaridad y utilizando
el método UPGMA, se obtuvo un árbol dividido en 7 grupos, de los cuales 3 fueron designados
como Andinos y 4 como Mesoamericanos (Figura 3). En la Figura 4 se puede observar una
representación espacial de los acervos Andino y Mesoamericano, a partir de un Análisis de
Coordenadas Principales a partir de las frecuencias alélicas obtenidas, utilizando el programa
NTSYS/SAS, pero basándose en la agrupación obtenida previamente con Darwin.
33
Figura 3. Agrupamiento de las 127 accesiones de habichuela mediante el índice de Nei basándose en el método UPGMA, mediante el programa Darwin. División en dos grandes acervos (Andino y Mesoamericano) y en 7 subgrupos.
A1
A2
A3
M1M2
M3
M4
A1: Andino 1 A2: Andino 2 A3: Andino 3 M1: Mesoamericano 1 M2: Mesoamericano 2 M3: Mesoamericano 3 M4: Mesoamericano 4
Controles Mesoamericanos
Controles Andinos
Testigo con respecto a Blue Lake
34
Figura 4. Representación tridimensional de un Análisis de Coordenadas Principales, basándose en datos de microsatélites en 127 accesiones de habichuela. Índice de similaridad de Nei establecido previamente con el programa Darwin. Azul = Acervo genético Andino. Magenta = Acervo genético Mesoamericano. Las figuras dentro de cada acervo genético solo me indican posibles subagrupaciones.
Una vez se obtuvo una clara agrupación y separación de los dos acervos genéticos, se utilizaron
de los datos morfoagronómicos descritos por Tofiño (2004), faseolina y hábito de crecimiento,
con el fin de calcular que porcentaje representan dentro de las 127 accesiones de habichuela
• Control Andino • Control Mesoamericano
UNAPAL Milenio
35
estudiadas (Tabla 8 y 9).
Tabla 8. Distribución geográfica de las faseolinas en las 127 accesiones de habichuela. CONTINENTE
NO DETERMINADASEUROPA S Sb H(S+1) B CH C T H1 HESPANA 1 5 1ALEMANIA 1 1FRANCIA 1 1 1HUNGRIA 4 2ITALIA 1 1HOLANDA 3PORTUGAL 5 1YUGOSLAVIA 1 5RUSIA 1REPUBLICA CHECA 1 1GRECIA 1 1
ASIACHINA 13 1 2 2INDIA 1IRAN 1 1TURQUIA 5 5 6JAPON 1 1
AFRICASURAFRICA 1ZAMBIA 2
AMERICABRASIL 1CANADA 1 1COLOMBIA 2 1 1 3 2MEXICO SPERU 1USA 17 1 2 5 1JAMAICA 1COSTA RICA 1GUATEMALA 1 1PUERTO RICO 1SALVADOR 1TOTAL DE ACCESIONES 64 2 1 1 7 24 21 1 1 5PORCENTAJE % 50 2 1 1 6 19 17 1 1 4
MESOAMERICANAS ANDINASTIPO DE FASOLINAS Y NUMERO DE ACCESIONES
Tabla 9. Distribución geográfica de las 127 accesiones de habichuela según el hábito de crecimiento. HABITO DE CRECIMIENTO ANDINO % de Andino MESOAMERICANO % de Mesoamericano TOTAL # TOTAL %
I 2 6 2 2 4 3II 1 3 6 6 7 6III 20 59 14 15 34 27IV 11 32 71 76 82 65
Total 34 100 93 100 127 100
36
37
Con el fin de conocer los índices de diferenciación genética de la muestra representativa de la
colección de habichuela del banco de germoplasma del CIAT, se utilizó el programa POPGENE
(Tabla 10).
Tabla 10. Índices de diferenciación genética con el fin de determinar la estructura poblacional.
Grupos pobl Na Ne Hs Ht Nm P %Total 7.6744 3.1195 0.5181 1.5094 41 95.35%
Andinos 4.9535 2.673 0.4686 41 95.35%Andino I 2.381 1.7359 0.2825 27 62.79%Andino II 2.2791 1.7787 0.2815 27 62.79%Andino III 3.7442 2.4658 0.4888 40 93.02%
Mesoamericanos 6.3721 2.7682 0.4564 41 95.35%Meso I 3.9767 2.2866 0.4101 38 88.37%Meso II 3.3023 2.0158 0.3524 37 86.05%Meso III 4.0698 2.5436 0.4341 38 88.37%Meso IV 3.4419 2.0533 0.4024 38 88.37%
Na: promedio de alelos observados. Ne: Promedio de alelos esperados. Hs: Div. gen. Dentro de subpoblaciones. Ht: Diversidad genética total. Nm: Número de migrantes por generación. P: número de loci polimórficos. %: Porcentaje de loci polimórfico.
Con el análisis de coordenadas principales (PCoA), se encontró una representación espacial de la
distancia genética de las 127 accesiones. Donde se observó una subdivisión de la población en 7
pequeños subgrupos, los cuales fueron nombrados como: grupos Andinos (A11, A6, A3) y
Mesoamericanos (M1, M2, M4, M5). (Figura 5).
38
Figura 5. Representación tridimensional de un Análisis de Coordenadas Principales (PCoA) a partir de datos de microsatelites en 127 accesiones de habichuela. Estructura dividida en 7 subgrupos.
Posteriormente, se incluyeron los datos morfológicos y bioquímicos evaluados anteriormente por
Tofiño (2004), y se realizó nuevamente un análisis de Coordenadas Principales, observando en la
representación espacial una alta incidencia del tipo de faseolina S, la cual es de tipo
Mesoamericano, seguida por el tipo C, propia del acervo Andino (Figura 6).
En cuanto al hábito de crecimiento, se obtuvo una marcada tendencia en cada uno de los acervos
genéticos, donde predominó el tipo 4 dentro del grupo Mesoamericano y el tipo 3 en el Andino
(Figura 7).
• Meso Americano 1
• Meso Americano 2
• Andino 3
• Meso Americano 4
• Meso Americano 5
• Andino 6
• Andino 11
Controles Andinos: , , .
Controles
Mesoamericanos:
UNAPAL Milenio:
39
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6. R
epre
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ació
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40
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7. R
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41
6.3 Diversidad genética de las 127 accesiones de habichuela voluble
A partir del Análisis de Coordenadas Principales, se calculo distancia Euclideana utilizando el
programa NTSYS, el dendograma obtenido, mostró una clara división en dos grandes grupos,
representando los acervos genéticos Mesoamericano y Andino. (Figura 8).
A partir del dendograma anterior, se tomo en cuenta el tipo de hábito de cada genotipo descrito
por Tofiño (2004), y se observó que el tipo de habito 3 (Indeterminado postrado con una o varias
guías largas, pero con ninguna o muy poca aptitud para trepar) predomina dentro del acervo
Andino, mientras que dentro del grupo Mesoamericano el hábito 4 (Indeterminado con guía larga
y trepadora) es más común (CIAT, 1992). De igual forma se realizo una correlación con el tipo de
faseolina, donde se observo en el acervo Mesoamericano una tendencia de la faseolina S y en el
Andino la C. (Anexo 5 y 6).
Con el fin de observar con mayor claridad y desde otra perspectiva los dos eventos mencionados
anteriormente (tipo de faseolina y hábito de crecimiento), se utilizó el programa Darwin con el fin
de correlacionar estos caracteres con la estructura poblacional obtenida anteriormente (Figura 9 y
10).
42
Fi
gura
8. D
endo
gram
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G20
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G10
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G15
778
G50
635
G37
47
G15
779
G15
854
G20
132
G18
220
G21
1 G
1016
5 G
1884
8 G
371
G58
7 G
634
G37
3 G
217
G62
1 G
625
G10
181
G16
10
G16
487
G44
94
DO
R36
4 G
1889
4
Pija
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1680
6 G
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1737
4 G
1890
8 G
1128
6 G
4205
G
1764
6 G
8757
G
1591
3 G
5733
G
1887
4 G
1126
9 G
1345
0 G
1457
7 G
8228
G
1530
0 G
8992
G
9194
G
928
G96
04
G15
660
G92
18
G14
722
G16
389
G18
540
G17
647
G
9069
G
9545
G
1642
1 G
4500
M
ILEN
IO
G16
831
G20
365
G17
723
G42
25
G67
26
G19
093
G25
G
2040
0 G
1729
G
1926
8
G23
953
G19
328
G18
722
G24
542
G24
543
G37
36
G17
750
G17
861
G17
769
G24
544
G20
624
G18
215
G50
796
G39
46
G57
60
G20
401
G23
627
G50
637
G10
134
G62
0 G
9353
G
1128
4 G
1483
6 G
9180
G
9444
G
8822
G
1014
G
1821
2 G
8776
G
1343
1 G
1590
5
G92
2 G
1031
0 G
1359
7 G
5763
G
1021
4 G
1022
0 G
1580
1 G
8829
G
1791
5 G
8991
G
2040
4 G
1022
2 G
2926
G
1023
3 G
1927
9 G
2111
7 G
2344
1 G
5063
6 G
2006
6 G
5064
0 G
5063
9 G
5063
8 G
2033
0 G
5064
1
ANDINO MESOAMERICANO
43
Figura 9. Estructura poblacional de las 127 accesiones de habichuela basándose en el método UPGMA, mediante el programa Darwin. Se resalta en rojo los genotipos con faseolinas Andinas (CH, C, H, H, H) y en azul, los genotipos con faseolinas Mesoamericanas (S, Sb, H(S+1), CH, B). NA: faseolina indeterminada.
44
Figura 10. Estructura poblacional de las 127 accesiones de habichuela basándose en el método UPGMA, mediante el programa Darwin. Se resalta el hábito de crecimiento por genotipo. Tipo de habito: 1) Arbustivo determinado = amarillo, 2) Arbustivo indeterminado = verde, 3) Indeterminado postrado = naranja, 4) Indeterminado con guía larga y trepadora = azul.
45
7.0 DISCUSION DE RESULTADOS 7.1 MARCADORES MOLECULARES MICROSATÉLITES
De acuerdo con los resultados obtenidos con los marcadores moleculares SSRs utilizados en este
estudio, se establece que el nivel de polimorfismo y la capacidad discriminatoria entre los dos
acervos genéticos consistente con estudios anteriores. El uso de cuatro controles; Andinos
(Calima y Chauchachuga) y Mesoamericanos (DOR364 y ICAPijao) corroboró la existencia de
los dos acervos genéticos y fueron consistentes con el estudio de Tofiño (2004) y Calderón
(2005), donde se evaluaron las mismas accesiones. Otro punto de referencia para este estudio fue
el uso de la variedad UNAPAL Milenio, variedad nacional creada por la Universidad Nacional de
Palmira. Este genotipo es muy cercano a la línea comercial Blue Lake. Los dos genotipos tienen
una similaridad genética muy alta y comparten caracteres morfológicos y químicos como el
mismo hábito de crecimiento de tipo trepador y faseolina S. Sin embargo se observó que no todas
las subvariedades de Blue Lake comparten los mismos caracteres morfoagronómicos, por
ejemplo el genotipo G17646 en comparación con las otras líneas comerciales de Blue Lake y
UNAPAL-Milenio tiene un hábito de crecimiento indeterminado postrado con una o varias guías
largas, pero con ninguna o muy poca aptitud para trepar contrario a las otras líneas comerciales
de Blue Lake, que son de hábito indeterminado con guía larga y trepadora. Una agrupación muy
similar obtuvo Tofiño (2004), teniendo en cuenta las mismas características morfoagronomicas,
faseolina (tipo S) y algunos sistemas isoenzimáticos (PRX(98), ACP-II(100) y MDH-II(100)).
En cuanto a la heterocigocidad de Nei (1972), para las 127 accesiones de habichuelas (Phaseolus
vulgaris L.), muestra representativa del Banco de Germoplasma del CIAT, se obtuvo un Ht de
0.5181, siendo más alta que los valores reportados para la misma población por Tofiño, (2004) y
Calderón, (2005), siendo respectivamente 0.2684 y 0.225. Ratificando que los microsatélites son
marcadores moleculares más informativos y polimórficos que otros como: isoenzimas, AFLPs,
RAPDs, entre otros.
46
En otro estudio, Cunha et al. (2004), utilizaron marcadores moleculares tipo (RAPD), con el fin
de caracterizar las diferentes líneas comerciales de habichuela en Brasil con respecto a su
similaridad genética, donde obtuvieron un total de 49 polimorfismos entre las 79 variedades de
fríjol común evaluadas. Los genotipos se dividieron en 6 grandes grupos, donde las dos
variedades de fríjol común de grano seco incluidas, se separaron de las habichuelas. Este estudio
también permitió diferenciar la mayoría de los genotipos de tamiz pequeño en un solo grupo
conteniendo un solo tipo de tamiz grande. Esto se debe a que las variedades comparten un mismo
pedigrí que esta estrechamente relacionado con los genotipos de fríjol de grano seco con la
mayoría de los genotipos de habichuela. Sugiriendo que los genotipos de tamiz pequeño tienen
una alta similaridad genética con los genotipos de fríjol común de grano seco desarrollados fuera
del acervo Mesoamericano, basándose en hibridaciones con accesiones de este acervo.
En este estudio, la detección de ADN basado en fluorescencia y el análisis semiautomatizado de
fragmentos, mostró en promedio valores más altos del contenido polimórfico por marcador
comparado con los microsatélites analizados mediante electroforesis en gel PAGE corroborando
lo sustentado por Masi et al. (2003) y Blair et al. (2002). En cuanto a costos, la técnica de
detección con fluorescencia ahorra en gastos por mano de obra pero requiere de equipos más
especializados y costosos como un secuenciador automatizado (Blair et al. 2002).
7.2 AGRUPACIÓN Y DIVERSIDAD GENÉTICA DE LA COLECCIÓN DE
HABICHUELA DEL BANCO DE GERMOPLASMA DEL CIAT
Las razas de fríjol común cultivado reflejan la misma estructura genética que el fríjol silvestre.
Numerosos estudios han coincidido en la presencia de dos grandes acervos genéticos que han
sido distinguidos mediante diferentes metodologías; isoenzimas, caracteres morfológicos y
marcadores moleculares (Duran et al. 2005; Blair et al. 2006; Beebe et al. 2001; Cunha et al.
2004; Metais et al. 2002). La estructura poblacional obtenida en este estudio, es consistente con
la descrita anteriormente, observándose en este estudio un mayor número de genotipos
Mesoamericanos que Andinos, 93 y 34 respectivamente. Es importante tener en cuenta, que la
47
muestra de estudio no posee una estructura genética en términos de diversidad, tal vez por tratarse
de accesiones provenientes de un banco de germoplasma, que representan diversas variedades
comerciales de habichuela (Phaseolus vulgaris L.), que no han tenido una distribución aleatoria
dentro de un espacio y tiempo definido como lo define Fernández (2002).
Tofiño (2004), a partir de un análisis de sistemas isoenzimáticos y de proteínas de semilla
(faseolinas) con las mismas accesiones de habichuela, observó una tendencia similar a la descrita
por estudios anteriores, donde la faseolina tipo S predomina en el acervo Mesoamericano y la tipo
C en el Andino (Koening, R; Gepts, P, 1989; Singh, 2001; Gepts y Papa, 2003; McClean et al.
2004). Esto es consistente con el análisis de Coordenadas Principales realizado en este estudio,
donde la representación tridimensional de la estructura poblacional corroboró lo descrito tanto
por Tofiño (2004), como el escenario establecido por Chacon et al. (2005) y Beebe et al. (2001),
sugiriendo que esta tendencia, se deba posiblemente a que el tipo de faseolina S ha desplazado
otros tipos de faseolina encontrados en genotipos silvestres mesoamericanos, como consecuencia
de un efecto fundador de la domesticación, lo que sugiere que probablemente el acervo
Mesoamericano, sólo tiene un centro de domesticación. Se concluye de igual forma esto para el
acervo Andino, pero en este caso la faseolina silvestre tipo C, se reporta que fue encontrada en
un complejo de Cuzco- Apurimac, Perú, y fue introducida a los fríjoles cultivados mediante una
hibridización con fríjoles silvestres. Por ende, se piensa que las poblaciones andinas, poseen una
tasa de polimorfismo muy alta para los marcadores moleculares y esto ha llevado en algunos
casos establecer que no ocurrió solo un evento de domesticación sino varios (Chacon et al. 2005).
De acuerdo con el país de origen y el tipo de faseolina, para este estudio se observó en primera
instancia que los genotipos españoles (G18215, G10165, G15778, G15779, G18220 y G10181)
con faseolinas Andinas, se agruparon en el acervo genético Andino y en su mayoría dentro del
subgrupo Andino II. Esta tendencia es consistente con lo descrito por Ocampo et al. (2003),
quienes mediante descriptores morfológicos, análisis electroforéticos de patrones de faseolinas y
RAPDs en una población representativa de variedades españolas, determinaron que la mayoría de
los genotipos son de origen Andino, sin embargo, esto puede ser explicado también por posibles
eventos de introgresión, ya que España es considerado como el segundo centro de variabilidad en
fríjol común.
48
Se ha considerado que el estado ancestral del fríjol silvestre tiene un hábito de crecimiento de
tipo trepador que se encuentra más que todo en alturas entre los 1500 y 2000 msnm en claros de
bosque o áreas perturbadas desde el norte de México hasta el norte de Argentina (Beebe et al.
2001). De acuerdo con lo descrito en estudios anteriores, se observó en este estudio como dentro
de los dos acervos genéticos prevaleció un tipo de hábito sobre los demás, en el Mesoamericano
el hábito tipo 4 y en el Andino, predominó el tipo 3. Sin embargo, según Beebe et al. (2000),
reporta que dentro de los fríjoles de grano seco del acervo Mesoamericano, es más frecuente el
tipo de hábito 2 (arbustivo) o el 3 (Indeterminado postrado) y en algunos pocos casos el tipo 4
(indeterminado trepador). Esto es consistente con lo descrito por Singh (2001), donde menciona
que durante décadas los fitomejoradores en EE.UU. y Europa, han buscado cambiar el tipo de
hábito trepador a arbustivo. Esto se debe principalmente a que el uso de alta tecnología permite
mecanizar cada una de las fases del cultivo, favoreciendo el proceso de cosecha. Mientras que por
el contrario, se ha reportado que para los cultivos colombianos se prefiere la habichuela de tipo
de hábito 4 (trepador), por su mayor rendimiento y adaptabilidad a la agricultura de pequeña
escala, permitiendo que la recolección sea manual. Esto sugiere que el material utilizado para este
estudio representa variedades que fueron creadas hace más de una década donde los cultivos de
habichuela no eran lo suficientemente tecnificados y prevalecían las variedades comerciales con
un hábito de crecimiento de tipo trepador (habichuela voluble).
En estudios anteriores como el de Beebe et al (2001), se establece mediante AFLPs que la
diversidad genética dentro del acervo Andino es sumamente estrecha en comparación con el
grupo Mesoamericano. Sin embargo, en este estudio, se demuestra lo contrario, obteniendo una
diversidad genética dentro del acervo Andino y Mesoamericano, considerablemente alta, 0.47 y
0.46 respectivamente. Demostrando que el acervo Andino realmente posee una base genética
igual o mayor que la del acervo Mesoamericano, justificando la alta variabilidad morfológica que
existe entre los fríjoles comunes Andinos y por otro lado demuestra aun más que los
microsatélites son mucho más informativos que otro tipo de marcadores moleculares. Lo cual es
consistente con lo descrito por Blair et al. (2006), donde se evaluaron pocas accesiones de fríjol
común (Phaseolus vulgaris L.) quienes aumentaron el número de microsatélites, 44 y 129
49
respectivamente y de igual forma, obtuvieron una diversidad promedio de 0.356 dentro del
acervo Andino y 0.302 dentro del Mesoamericano.
Los valores de heterocigosidad observada y esperada, 0.0799 y 0.5205 respectivamente, indican
que el número de individuos heterocigotos dentro de la muestra de estudio es sumamente más
bajo a lo esperado, prevaleciendo los individuos homocigotos. Esto se traduce en un alto grado de
endogamia, lo cual es reflejo de la alta presión de selección por parte del hombre, al que ha
estado sometido el cultivo de habichuela.
7.3 FLUJO GÉNICO E INTROGRESIÓN ALÉLICA
Para este análisis se reporta un flujo génico entre el acervo Andino y el Mesoamericano
observado para la muestra de habichuelas se considera moderado, siendo el número de migrantes
por generación >1, Nm = 1.5094. Estos son valores moderadamente mas altos a los reportados
por (Diaz & Blair, 2006), Moreno, 2007; Zizumbo-Villarreal et al. 2005) quienes reportan un
Nm <1 entre los dos acervos genéticos, sugiriendo que existe suficiente flujo génico como para
negar los efectos de una posible deriva genética. Mientras que lo reportado por Calderón (2004),
quien obtuvo un Nm = 5.534, siendo mayor a 4; quien relacionó esto con su bajo polimorfismo
dentro de la población total, ya que establece que existe una relación estrecha entre las tasas de
migración y el proceso de diferenciación genética, medida por la intensidad y persistencia del
flujo génico. Si embargo, esto lo que realmente significa es que los materiales evaluados
pertenecen a una sola población panmítica, donde hay apareamiento al azar (Wright 1931). Para
el caso del fríjol común silvestre (Phaseolus vulgaris L.), con fertilización autógama como se
mencionó anteriormente, su tasa de dispersión de polen es muy baja y la magnitud del flujo
génico hasta el momento se desconoce, y ha sido descrita como poca. Pero en el caso de
variedades cultivadas, es frecuente encontrar tasas más altas en cuanto al flujo de genes, debido a
que los agricultores y fitomejoradores están constantemente intercambiando material y realizando
cruces dirigidos (Zizumbo-Villarreal et al. 2005).
50
Se ha reportado que la introgresión alélica puede ocurrir en ambas direcciones, del acervo Andino
hacia el Mesoamericano y viceversa. Para este estudio, los posibles eventos de introgresión se
observaron a nivel de faseolina, donde se observaron individuos Mesoamericanos con faseolinas
Andinas tipo C y H1. La existencia de este tipo de introgresiones no es una sorpresa,
considerando que muchas variedades Mesoamericanas han sido cultivadas en zonas Andinas
desde los tiempos precolombinos. Esto se debe a que en muchos casos, sobretodo se ha visto que
los pequeños agricultores en Colombia y Perú, los cuales no han recibido ningún tipo de
orientación sobre las variedades comerciales, frecuentemente permiten la existencia de variantes
que resultan de la recombinación genética (Beebe et al. 2001).
8. CONCLUSIONES
! El uso de 43 microsatélites como marcadores moleculares para la evaluación de la
diversidad genética en habichuelas, permitió determinar valores de diversidad (Ht) más
altos que los reportados en estudios previos donde se utilizaron otro tipo de marcadores
como Isoenzimas, RAPD, AFLP y marcadores morfológicos. Evidentemente, esto está
influenciado por el número de genotipos considerados (con variación entre los estudios) y
el número de marcadores utilizados pero se puede concluir, que el uso de microsatélites
con fines de estimar la diversidad de una población es precisa en distinguir acervos y
subgrupos.
! La detección de bandas alélicas mediante dos técnicas diferentes (fluorescencia y tinción
con plata), permitió observar en promedio un mayor polimorfismo para los microsatélites
fluorescentes comparado con el promedio de los microsatélites evaluados en plata.
Mientras que en términos de polimorfismo alélico reportado tanto para los marcadores
génicos como los genómicos, no mostró diferencias significativas entre estos, como lo
reportaron Blair et al (2006), demostrando la alta sensibilidad que posee esta técnica
automatizada para detección de alelos. Aunque habría que evaluar algunos de los mismos
microsatélites tanto en plata como en florescencia para ver si se debe a mayor detección
de alelos de cambios de una sola base y no de las repeticiones completas esperadas para
51
secuencias simples repetidas.
! El uso de datos reportados por Tofiño (2004), entre ellos el tipo de faseolina, permitió
identificar eventos de introgresión alélica entre el acervo Andino y el Mesoamericano, y
por otro lado, relacionar caracteres morfoagronómicos como el hábito de crecimiento con
el acervo genético, predominando las habichuelas con hábito indeterminado postrado en el
acervo Andino y con hábito indeterminado trepador para el acervo Mesoamericano.
! Partiendo de la base que sólo las poblaciones naturales presentan a su interior una
estructura genética, en este estudio por tratarse de accesiones provenientes de un banco de
germoplasma no se considera una población natural. Sin embargo, mediante el Análisis de
Coordenadas Principales y de disimilaridad obtenido con el programa Darwin, se observó
que la estructura poblacional presenta una clara agrupación al interior de cada uno de los
acervos genéticos, tres subgrupos dentro del Andino y cuatro dentro del Mesoamericano.
Sin embargo, estas agrupaciones no es posible considerarlas como razas al interior de esta
población.
! El flujo genético que existe entre los dos acervos (Andino y Mesoamericano) es de Nm =
1.5, lo cual significa que cada generación alrededor de un individuo esta migrando entre
acervos y aporta un nuevo alelo. Esto permite concluir que la alta diversidad reportada en
este estudio no se pueda explicar partiendo de este hecho. Sin embargo, es posible que la
alta diversidad genética del acervo Andino, se relacione a los eventos de introgresión
alélica del acervo Mesoamericano hacia este.
! La diferenciación genética dentro de cada uno de los acervos no varió de forma
significativa, teniendo un Ht = 0.469 en el acervo Andino y un Ht = 0.456 en el
Mesoamericano. Pero si es posible, sugerir que hay una alta variabilidad genética tanto
para el acervo Andino como para el Mesoamericano para la habichuela.
52
9. RECOMENDACIONES
! En futuros estudios enfocados en evaluar la diversidad genética de habichuela, se sugiere
incrementar el número de accesiones con hábito de crecimiento arbustivo, ya que estas
comprenden la mayoría de variedades comerciales más recientes y permitiría comparar su
agrupación con respecto a las habichuelas volubles que son de hábito de crecimiento
trepador.
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ANEXO 1. Tabla de Cuantificación y dilución del ADN G E NO TIPO TD NA n g r/ u l G E NO TIPO TD NA n g r/ u l DILU C IO N
G25 144 10 290 G1 1269 2 06 7 293G211 368 4 296 G1 1284 3 03 5 295G217 126 12 288 G1 1286 1 92 8 292G371 468 3 297 G1 3431 2 19 7 293G373 222 7 293 G1 3450 1 63 9 291G587 461 3 297 G1 3597 1 22 12 288G620 191 8 292 G1 4577 1 33 11 289G621 381 4 296 G1 4722 1 22 12 288G625 318 5 295 G1 4836 9 6 16 284G634 179 8 292 G1 5300 1 59 9 291G922 206 7 293 G1 5660 7 4 20 280G928 180 8 292 G1 5778 1 20 13 288
G101 4 336 4 296 G1 5779 2 21 7 293G161 0 295 5 295 G1 5854 2 06 7 293G172 9 160 9 291 G1 5913 1 88 8 292G292 6 158 9 291 G1 6389 1 66 9 291G373 6 201 7 293 G1 6421 2 69 6 294G374 7 239 6 294 G1 6487 2 15 7 293G420 5 251 6 294 G1 6806 1 95 8 292G422 5 141 11 289 G1 6831 1 69 9 291G450 0 128 12 288 G1 7374 2 61 6 294G573 3 201 7 293 G1 7420 1 69 9 291G576 0 300 5 295 G1 7646 3 32 5 295G576 3 178 8 292 G1 7647 2 36 6 294G672 6 231 6 294 G1 7723 9 3 16 284G822 8 252 6 294 G1 7750 2 58 6 294G875 7 210 7 293 G1 7769 4 05 4 296G877 6 230 7 293 G1 7861 1 59 9 291G882 9 201 7 293 G1 7915 1 10 14 286G899 1 165 9 291 G1 8212 1 07 14 286G899 2 281 5 295 G1 8215 1 33 11 289G906 9 164 9 291 G1 8220 2 16 7 293G918 0 336 4 296 G1 8540 1 35 11 289G919 4 120 13 288 G1 8722 1 00 15 285G921 8 320 5 295 G1 8848 1 42 11 289G935 3 193 8 292 G1 8874 1 34 11 289G944 4 170 9 291 G1 8894 2 21 7 293G954 5 229 7 293 G1 8908 1 26 12 288G960 4 304 5 295 G1 9093 9 6 16 284
G1013 4 211 7 293 G1 9268 9 8 15 285G1016 5 414 4 296 G1 9279 1 13 13 287G1018 1 95 16 284 G1 9328 8 6 17 283G1024 1 402 4 296 G2 0066 1 21 12 288G1022 0 175 9 291 G2 0120 2 68 6 294G1022 2 258 6 294 G2 0132 2 30 7 293G1023 3 160 9 291 G2 0330 1 95 8 292G1026 4 205 7 293 G2 0365 4 6 33 267G1031 0 92 16 284 G2 0400 5 8 26 274
G E NO TIPO TDNA D ILUC IO NG E NO TIPO TD NAG2040 1 345 4 296 G1 5801 1 68 9 291G2040 4 145 10 290 G2 4543 1 44 10 290G2062 4 166 9 291 G1 5905 1 51 10 290G2111 7 157 10 290 G2 4542 1 81 8 292G2344 1 89 17 283 G3 946 1 73 9 291G2362 7 178 8 292 G4 494 4 43 3 297G2395 2 171 9 291 G5 0635 4 47 3 297G2395 3 190 8 292 G5 0796 3 24 5 295G2454 4 88 17 283 G8 822 1 16 13 287G5063 3 144 10 290 G5 0641 3 87 4 296G5063 4 120 13 288 M ILENIO 3 7 41 259G5063 6 207 7 293 C A L IM A 6 94 2 298G5063 7 87 17 283 IC A P IJA O 2 68 6 294G5063 8 145 10 290 DO R 364 2 75 5 295G5063 9 56 27 273 G1 9833 4 98 3 297G5064 0 72 21 279
D ILUC IO N
DILU C IO N
63
Anexo 2. Tabla de Datos morfoagronomicos.
64
N GENOTIPO DF CF HC CV FV FP FS CS H CFP RR #AS lV RD #sv PS psv PZ PO F GRUPO1 CALIMA NA NA 1 NA NA NA NA 1 NA NA NA NA NA NA NA 24 NA NA NA NA A32 DOR364 NA NA 2 NA NA NA NA 6 NA NA NA NA NA NA NA 22 NA NA NA NA M33 G10134 2 5 4 6 4 3 2.4.7 4 3 1 1 1 12.6 0,48 5.5 42 13,6 619 NLD S M14 G1014 3 2 4 2 1 2 5 3 2 2 2 2 13,3 0,75 7,8 23.1 10,4 486 ZAF S M25 G10165 1 1 3 2 12 2 2 6 2 1 1 1 8,9 0,57 4,2 46 1 94 ESP C A16 G10181 1 1 4 2 4 3 3.2 6 2 2 1 1 8 0,39 3 54 8.1 285 ESP C A17 G10214 3 2 4 2 4 3 8.7.4 5 1 2.3 1 2 11,8 0.74 5,5 45 13,1 595 PRT S M28 G10220 3 3 4 7 4 3 8 5 1 1 1 2 14,6 0,62 6,1 48 17,9 452 PRT S M29 G10222 3 1 4 2 4 2 5 4 1 2 2 2 13,5 0,71 7,6 38.7 12,4 788 PRT S M2
10 G10233 3 1 4 2 4 3 8 4 1 2 2 2 11,7 0,5 7,9 38 8 737 PRT S M211 G10264 1 1 3 1 4 2 3 4 2 1 2 1 6,8 0,3 3,9 40 18,1 118 PRT C A212 G10310 3 4 4 2 6 2 8.2.5 5 1 2.3 1 1 10,7 0,57 6,6 38 10,7 758 PRT S M213 G11269 3 1 3 2 1 2 2 1 1 2.1 2 2 8,9 0,76 5,1 34 10,8 184 NlD S M114 G11284 2 1 2 2 4 2 5.3 7 1 2 1 2 12,1 0,64 5,9 40 16,7 178 USA T M115 G11286 1 1 4 2 6 3 2 7 1 3 1 3 5,9 0,4 2,6 21 13,6 276 DEU S M116 G13431 2 4 4 2 2 3 8 3 1 1.2 2 1 10,4 0.63 5,8 40 11,6 623 CHN Sb M117 G13450 2 1 4 2 1 3 8 1 1 3 2 3 12.2 0.39 5.4 28 15.4 583 (JPN) S M118 G13597 3 1 4 2 7 3 8 3 1 2 2 2 17.6 0,63 7 27 22,7 708 USA S M219 G14577 2 1 4 2 7 3 8 1 3 1 2 2 12,1 0,64 4,8 30 18,3 289 HUN S M120 G14722 3 2 4 2 3 3 5.2.4 2 3 1 3 2 11,2 0,94 6,3 23 18,4 794 ITA S M121 G14836 3 1 2 2 2 2 8.2.5 4 2 1 2 2 10,1 0.71 6,9 25 24,S 224 USA C M122 G15300 2 3 4 2 1 3 8.5 4 1 2 2 2 11,5 0,77 7,5 26 7 975 ZMB S M123 G15660 1 1 3 2 6 3 6 7 1 2.3 3 2 10,1 0,57 4,3 30 22,8 423 MEX S M124 G15778 1 1 3 2 5 3 2 6 2 1 1 1 7,5 0,36 3,5 61 17.1 346 ESP C A225 G15779 2 1 3 2 4 2 8 6 3 2 3 2 10 0,57 5,7 55 8,8 398 ESP H1 A226 G15801 1 2 4 2 2 3 8 3 1 2 2 2 13,5 0,51 7 30 11,6 378 ZMB S M227 G15854 1 1 3 2 4 2 2 3 2 1 1 1 8,8 0,42 4,2 56.5 5,2 487 TUR C A228 G15905 2 1 4 2 6 1 5 3 1 2 2 2 13.7 0.82 6,1 28 22.3 247 TUR S M129 G15913 2 1 4 2 9 3 8 1 1 3 1 3 13,5 0,67 5,4 39.1 16,7 718 NLO S M330 G1610 1 1 2 2 2 3 3 8 1 2 2 1 7 0,55 3,5 26.8 13 118 HUN S A131 G16389 1 3 4 2 11 2 8 1 3 1 3 2 14.1 0,8 6,3 25 24.3 513 OEU S M132 G16421 2 1 4 4 5 3 8 5 3 1 2 1 11.5 0,6 5,9 39 13,1 970 IRN T M333 G16487 1 2 3 2 5 2 3 6 3 3 3 3 8 0,47 5,3 34 13,9 362 IRN T M134 G16806 2 1 4 2 1 2 8 1 1 2 2 2 12 1,17 7,5 20 20,9 496 CHE S M335 G16831 2 1 4 1 4 3 8 3 1 2 2 2 11,1 0,5 6,2 31.6 6,8 927 GTM S M236 G1729 NA NA 4 NA NA NA NA 8 NA NA NA NA NA NA NA 23 NA NA ELS NA M337 G17374 2 3 3 2 2 3 5 2 1 2 3 2 10,1 0.67 7,6 23 17,1 804 USA S M338 G17420 2 1 3 2 1 3 3.8 1 1 3 3 2 9,9 0,99 6,4 25 15,3 694 USA S M339 G17646 2 1 3 2 7 3 8 1 1 1 2 2 9,3 0,71 6,3 24 22.6 539 USA S M340 G17647 2 1 3 2 5 3 8.5 1 1 1 2 1 12,1 0,84 7,4 26 7,8 857 USA S M141 G17723 3 1 4 2 5 2 8.5 1 1 2 2 2 11,2 0,93 7,9 25 16,1 817 USA S M142 G17750 3 1 4 4 4 3 8 6 3 1 2 2 12,8 0,9 6,4 31 18.3 625 HUN S M243 G17769 3 3 3 4 4 2 8.5 6 1 2.3 2 2 11.4 0,81 5,4 30 13,7 733 HUN CH M244 G17861 3 3 3 1 6 3 8.5 6 1 2.3 3 3 12,1 0,95 6,5 32.5 17.5 699 HUN S M245 G17915 3 1 4 4 4 1 5 4 1 2 1 2 12,6 0.66 7,8 33 11.1 696 HUN CH M246 G18212 3 1 4 1 2 3 5 5 1 3 2 3 131 0,67 6,2 29 5,1 926 ESP Sb M247 G18215 1 1 4 1 1 3 5 4 1 3 2 3 12,3 0,77 4,5 43 14,4 432 ESP C M148 G18220 1 2 3 1 4 2 1 4 2 1 2 2 7,6 0.38 2,7 42 14,9 343 ESP C A249 G18540 3 1 4 2 7 3 5 1 1 3 2 3 10,9 0,9 6,3 20 20,2 624 BRA S M150 G18722 2 1 4 2 10 1 8 7 1 2.3 2 3 14,4 0,78 6,2 32 37,3 456 TUR C M251 G18848 1 4 3 1 7 3 1 3 2 2 1 2 8,8 0,51 3,3 38 18,7 98 YUG C A252 G18874 1 1 4 1 4 3 8.5.4 5 1 3 3 3 10,3 0,72 5,8 37 13.1 341 CLB T M153 G18894 2 1 4 1 4 3 5 3 1 1 1 2 9,7 0.64 4,7 32 12,8 337 CHN CH M354 G18908 1 2 3 2 4 2 8 6 1 2 2 2 11,1 0.85 6,2 38 17,5 787 CAN T M355 G19093 1 1 4 2 6 3 2 3 1 3 3 3 7,6 0,67 3,1 35 12,4 485 MEX S M356 G19268 1 1 4 2 6 3 3.8.2 5 1 2 2 2 11.4 0,73 4,9 41 13,3 534 SUN S M457 G19279 2 3 4 2 4 3 5.7 6 1 2.3 2 2 9,4 0,77 4,4 44 7,8 575 CHN S A358 G19328 2 1 4 1 4 2 8.3 7 1 1 2 2 11,9 0.71 6,3 37 8,8 526 OEU CH M459 G19833 NA NA 3 NA NA NA NA 3 NA NA NA NA NA NA NA 40 NA NA PER NA A360 G20066 2 1 4 1 4 1 5.8 3 1 3 2 1 10,4 0,51 5,1 41 23,3 231 YUG C A361 G20120 2 1 4 1 4 3 5.8 3 1 3 2 3 10,5 0,5 5,2 38 15,7 181 YUG C A362 G20132 1 2 3 5 5 3 1 6 2 1 2 2 7 0.46 3,3 41 10,2 289 YUG C A263 G20330 2 4 4 1 2 3 5 3 3 2 2 2 11.2 0,52 6,1 42 14,6 515 YUG C A364 G20365 2 1 4 2 6 3 8 4 1 1 1 1 14,7 0,83 6,6 33 9,8 623 YUG CH M465 G20400 2 1 4 2 2 3 8 1 1 3 1 3 12,8 1,07 7,9 20 13.1 913 CHN S M166 G20401 2 1 4 1 4 2 5.8 3 1 2 3 2 11 0,62 5,8 29 15,5 486 CHN S M467 G20404 3 1 4 2 4 3 8 4 1 2 2 1 15 0,74 7,8 29 5,2 781 CHN S M268 G20624 3 1 4 1 4 2 5 4 1 2 2 2 14,8 0,89 7,6 31 14,9 696 INO S M469 G211 1 3 3 1 6 1 1 4 2 I 1 2 8,8 0,48 4 35.1 21 122 TUR T A170 21117 NA NA 4 NA NA NA NA 2 NA NA NA NA NA NA NA 11.2 NA NA CLB NA A371 G217 1 3 3 1 4 3 4.5 2 2 2 1 2 4,4 0,58 1,5 32 18,7 73 TUR S A172 G23441 NA NA 4 NA NA NA NA 2 NA NA NA NA NA NA NA 7.2 NA NA GTA NA A373 G23627 2 1 4 1 4 2 8.5 6 2 1 2 3 14,6 0,99 6,4 28 17,5 650 USA T M4
65
74 G23952 3 1 4 1 4 2 5 4 1 1 1 2 14,2 0.95 6,9 39 10,2 706 CHN S A375 G23953 1 1 4 2 4 2 5 3 1 3 3 3 12,2 0,68 5,6 29 13,1 216 CHN S M476 G24542 1 3 4 2 4 3 2 3 1 1 2 1 7,5 0,61 3,3 40 12,1 313 CHN CH M477 G24543 2 3 4 2 4 2 3 6 1 2 2 2 11 0,82 5,7 31.5 6,2 503 CHN S M478 G24544 1 1 4 2 4 2 5 6 1 3 3 2 14,4 0,68 6,4 41.4 8,3 629 CHN S M479 G25 NA NA 3 NA NA NA NA 1 NA NA NA NA NA NA NA 20 NA NA CDA NA M480 G2926 3 1 4 4 7 2 8 5 1 2 3 2 13,3 0,68 5,9 36.3 15,2 1005 TUR S M281 G371 1 1 3 1 4 3 2 1 2 2 1 2 9 0,64 4,7 40.5 13,2 189 TUR T A182 G373 1 1 3 1 1 1 3 1 2 1 1 1 8,3 0.56 4 49 10,9 256 TUR T A183 G3736 3 2 4 2 1 2 5 2 1 2 1 2 11,2 0,78 7,8 24.3 8,7 794 USA S M384 G3747 1 3 3 1 5 2 3 2 2 1 1 1 6.2 0,67 3.5 45 6,9 214 ITA C A285 G3946 2 1 4 2 1 2 5 1 2 2 1 2 12,1 0,78 7 33.8 13,8 603 USA S M186 G4205 3 3 4 1 1 3 5 2 1 1 2 1 10,7 0,62 7,9 22 19,4 949 CRI C M387 G4225 3 3 4 1 1 3 8 2 1 2 2 2 11,7 0,88 7 25 13,4 764 USA S M388 G4494 NA NA 1 NA NA NA NA 6 NA NA NA NA NA NA NA 54.8 54.8 54.8 CLB NA A389 G4500 3 1 4 2 1 3 8 5 1 3 2 3 11,4 0,63 8.1 28 14 760 USA S M390 G50633 2 1 4 1 7 3 1 1 2 1 1 2 11,3 0,92 4,9 45.4 13,3 342 TUR T A291 G50634 1 2 3 1 4 3 2 6 2 1 1 1 9,3 0,53 3,3 57.6 15,7 371 TUR C A392 G50635 1 2 3 1 4 3 3 6 2 1 2 2 8,2 0,91 4,5 42 19 135 TUR C A293 G50636 2 2 4 2 6 3 2 6 2 1 2 2 8,9 0,64 4,1 50,5 18.3 61 CHN T A394 G50637 1 3 4 1 5 3 5 2 1 2 2 2 15 0,55 7,5 29.3 15,8 382 CHN S M495 G50638 1 3 4 2 4 3 5 6 1 1 1 1 10,4 0,71 5,2 35.9 5.5 324 CHN S M496 G50639 1 3 4 2 5 2 8.5 6 1 1 1 2 13,2 0,64 6,1 30.5 20,1 283 CHN S M497 G50640 2 3 4 2 8 2 5 6 1 1 2 2 14,8 0,61 6,7 30 10,8 258 CHN S M498 G50641 2 1 4 1 4 3 8.5 6 1 2 2 2 14,3 0.63 6,5 37 15.3 577 CHN T A399 G50796 2 3 3 2 4 3 3 6 1 3 3 3 7,9 0,6 7,9 34.7 13.5 601 CHN S M4
100 G5733 NA NA 3 NA NA NA NA 5 NA NA NA NA NA NA NA 26 NA NA JMC NA M3101 G5760 1 1 4 1 3 2 8.7 5 2 1 2 1 11,2 0,72 5,9 43.5 14,7 430 USA T M1102 G5763 3 1 4 1 6 2 5 5 1 2 2 2 12,9 0,82 7,5 29 7,1 783 USA S M2103 G587 2 1 3 1 7 3 2 1 2 1 1 1 9,9 O,56 4,3 41 12,2 259 TUR T A1104 G620 2 1 2 2 7 3 8 1 2 2 2 2 10,2 1,02 8 25 12,3 630 TUR S M1105 G621 2 1 3 1 1 1 3.7.4 4 2 2 3 3 7,5 O,52 4,1 23 21,5 180 TUR S A1106 G625 1 2 3 1 1 3 1.5 3 3 2.3 2 3 8,1 O,55 4,3 36.5 12,8 189 TUR T A1107 G634 1 3 3 1 7 1 2 6 2 1 2 1 9 0,47 2,5 36 17,4 384 TUR C A1108 G6726 3 1 4 1 8 3 5.7 3 1 2 1 2 11,3 0,71 7 32 26,9 711 USA T M3109 G8991 3 1 4 2 4 3 5.8 4 1 2 2 2 13,4 0,67 7,5 41 7,7 715 USA S M2110 G8992 2 1 4 2 2 3 8.5 1 2 1 1 1 10,7 0,96 7.5 23 19,2 670 USA C M1111 G8228 2 1 4 2 8 2 8 1 2 1 1 1 10,2 0,86 7.6 28 17,7 756 USA S M1112 G8757 2 3 1 2 9 3 8.7 5 2 1 1 1 11,5 0,73 6,2 21 17,1 214 CHE C M3113 G8776 2 1 4 1 8 3 8 6 1 2 2 2 11,7 0,7 7 31.2 23,6 1172 USA Hls+n M2114 G8822 1 1 2 1 4 3 8.5 1 2 1 1 1 10,4 0,79 4,9 24 19,8 269 DEU T M1115 G8829 3 1 4 2 4 3 5.8 3 1 1 1 1 13,4 0,76 8.2 32 5,2 522 USA S M2116 G9069 NA NA 4 NA NA NA NA 1 NA NA NA NA NA NA NA 63.9 NA NA USA NA M1117 G9180 3 3 4 4 8 3 3 6 1 3 3 3 12,4 0,64 5,2 28.3 15,1 434 FRA T M3118 G9194 3 5 4 1 4 3 2.8 4 1 3 2 2 11,1 0,73 6,7 28.3 11,4 610 FRA CH M3119 G9218 3 1 4 2 10 1 2 3 2 1 3 2 12,9 0,6 4,6 50 19,8 321 USA S M1120 G922 3 1 4 2 2 3 5 3 1 2 2 1 14 0,9 7,7 30.6 14.4 433 USA S M2121 G928 3 1 4 1 1 3 2 5 1 3 3 3 10,7 0,53 5,7 30 12 531 USA T M3122 G9353 1 6 4 1 5 3 5 6 1 3 2 3 9.1 0,73 4.9 32 10,5 299 (FRA) S M1123 G9444 NA NA 1 NA NA NA NA 1 NA NA NA NA NA NA NA 24 NA NA CLB NA M1124 G9545 2 1 3 2 11 3 8.5 1 1 1 2 1 10,9 0,91 6,7 26 10,6 493 USA S M1125 G9604 2 1 4 1 2 3 2 3 1 1 3 1 11 0,53 6,3 30 10,4 517 JPN T M3126 MILENIO 3 1 4 2 2 2 8 1 1 3 2 3 14 0,94 6,8 26 11,8 685 CLB S M1127 Pijao NA NA 2 NA NA NA NA 8 NA NA NA NA NA NA NA 24 NA NA CLB NA M3 DF: días de floración; CF: color flor; HC: habito de crecimiento; CV: color vaina; FV: forma vaina; FP:
forma pico; FS: forma semilla; CS: color semilla; H: hilo; CFP: contenido de fibra en las paredes de la vaina;
RR: resistencia a ruptura; #AS: numero de aristas en la superficie de las secciones resultantes en la prueba de
ruptura; LV: longitud de la vaina; RD: relación de diámetros (ventral/sutural); #SV: numero de semillas por
vaina; PS: peso de 100 semillas; PSV: peso valvas secas %; PS: producción por surco ( 10 plantas x genotipo);
PO: país de origen; F: faseolina.
66
ANEXO 3. DATOS DE PASAPORTE.
G23441 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: DGD-2461 Common Names :: Locality of Collection :: Country :: GUATEMALA State :: GUATEMALA County :: AMATITLAN Site :: 1 Km E de Sta Helena Barrillas Las Torres Latitude :: 14° 25" N Longitude :: 90° 31" W Altitude :: 1740 Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: WILD Nature :: Core Collection :: NO
G21117 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: LEROI COL-28,NI-937 Common Names :: Locality of Collection :: Country :: COLOMBIA State :: CUNDINAMARCA County :: TENA Site :: Tena Latitude :: 4° 40" N Longitude :: 74° 24" W Altitude :: 1560 Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: WILD Nature :: Core Collection :: NO
G 4494 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: Common Names ::DIACOL CALIMA, LYAMUNGU 90 Locality of Collection :: Country :: COLOMBIA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: ARBUSTIVO Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: YES
G 5733 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: Common Names ::MISS KELLY Locality of Collection :: Country :: JAMAICA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: YES
G19268 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: SHOEMAKER 27693,PI353487 Common Names :: Locality of Collection :: Country :: UNION SOVIETICA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR DETERMINADO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G 922 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: E.U. 10,PI207205Common Names ::KENTUCKY WONDER 814 Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: NO
67
G15905 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: TR 39076,V-5572 Common Names ::AYSEKADIN-YAYLA FASULYESI Locality of Collection :: Country :: TURQUIA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G18215 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: B.G.-2204,NO.EXP.1216/80 Common Names ::FREIXOES 7 SEMANAS Locality of Collection :: Country :: ESPANA State :: PONTEVEDRA County :: LA CANIZA Site :: VILORINO, PARADA, AGENCIA SEA DE LA CANIZA Latitude :: 42° 13" N Longitude :: 8° 22" W Altitude :: 650 Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G20404 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: PI391629 Common Names ::YENAN-TS'AI-TOU Locality of Collection :: Country :: REP. POP. CHINA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G24542 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: CHI-B68 Common Names ::GUO LI BIAN Locality of Collection :: Country :: REP. POP. CHINA State :: HEBEI County :: FENGNING Site :: FENGNING Latitude :: 41° 12" N Longitude :: 116° 31" E Altitude :: 660 Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR DETERMINADO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G20401 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: PI391626 Common Names ::SHUANG-CHI-CHIA-TOU Locality of Collection :: Country :: REP. POP. CHINA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G15801 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: ZM 80-0117 Common Names :: Locality of Collection :: Country :: ZAMBIA State :: EASTERN PROVINCE County :: KAWERE Site :: ENROUTE PETAUKE-KATETE, BAPTIST CENTER, KAWERE Latitude :: 14° 10" S Longitude :: 31° 49" E Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
68
G 625 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: HARLAN 5896,PI179423 Common Names :: Locality of Collection :: Country :: TURQUIA State :: ISTANBUL County :: BALTACI CIFTIGI Site :: Latitude :: 40° 38" N Longitude :: 29° 15" E Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G18848 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: PI255571 Common Names ::JERUZALEMCAN Locality of Collection :: Country :: YUGOSLAVIA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: Core Collection :: NO
G15300 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: ZM 80-0111 Common Names :: Locality of Collection :: Country :: ZAMBIA State :: EASTERN PROVINCE County :: KAWERE Site :: ENROUTE PETAUKE-KATETE, BAPTIST CENTER, KAWERE Latitude :: 14° 10" S Longitude :: 31° 30" E Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G 211 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: HARLAN 1543,PI169723 Common Names ::SWEET TYPE Locality of Collection :: Country :: TURQUIA State :: ANTALYA County :: KORKUTELI Site :: MARKET IN KORKUTELI Latitude :: 37° 4" N Longitude :: 30° 13" E Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G19093 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: MEXICO 22,PI313430 Common Names ::BAYO CLARO Locality of Collection :: Country :: MEXICO State :: MEXICO County :: CHALCO Site :: Chalco Latitude :: 19° 16" N Longitude :: 98° 54" W Altitude :: 2660 Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G10310 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: C.L.0217,V-5822Common Names ::SANDE Locality of Collection :: Country :: PORTUGAL State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
69
G23952 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: CHI-B41 Common Names ::HUI HUANG LI JIA YUN DOU Locality of Collection :: Country :: REP. POP. CHINA State :: HEBEI County :: SHIJIAZHUANG Site :: SHIJIAZHUANG Latitude :: 38° 4" N Longitude :: 114° 25" E Altitude :: 82 Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G20624 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: PLB 73-3,PI361226 Common Names :: Locality of Collection :: Country :: INDIA State :: HIMACHAL PRADESH County :: NAGAR Site :: Latitude :: 32° 7" N Longitude :: 77° 10" E Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G 2926 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: GODFREY 183,PI326351 Common Names ::SELECTION FROM PI204716 Locality of Collection :: Country :: TURQUIA State :: KAYSERI County :: KAYSERI Site :: MARKET IN KAYSERI Latitude :: 38° 43" N Longitude :: 35° 30" E Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G10222 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: C.L.0108,V-5713 Common Names ::POLE AS KENTUCKY WONDER Locality of Collection :: Country :: PORTUGAL State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G10134 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: I.V.P. 4.25,PI432700 Common Names ::BEIGE GELE BOON Locality of Collection :: Country :: HOLANDA State :: County :: DUITSLAND Site :: DUITSLAND Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G17915 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: NIAVT II-10-2781 Common Names :: Locality of Collection :: Country :: HUNGRIA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
70
G16831 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: MONCURE 2,PI181997 Common Names :: Locality of Collection :: Country :: GUATEMALA State :: ALTA VERAPAZ County :: COBAN Site :: San Pedro Carcha Latitude :: 15° 30" N Longitude :: 90° 15" W Altitude :: 1600 Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G50637 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: CHI-B45 Common Names ::QIU JIA DOU Locality of Collection :: Country :: REP. POP. CHINA State :: County :: Site :: HEBEI WENAN Latitude :: 38° 52" N Longitude :: 116° 28" E Altitude :: 6 Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G 3747 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: I-1025 Common Names ::CARNAVAL DE VENECIA Locality of Collection :: Country :: ITALIA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: NO
G14722 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: FAO-46113 Common Names ::RAMPICANTE MANGIATUTTO Locality of Collection :: Country :: ITALIA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G 217 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: HARLAN 1571,PI169730 Common Names ::CILVELI Locality of Collection :: Country :: TURQUIA State :: ANTALYA County :: KORKUTELI Site :: MARKET IN KORKUTELI Latitude :: 37° 4" N Longitude :: 30° 13" E Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G 4225 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: N-187 Common Names ::ALABAMA NO.1 Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: Core Collection :: NO
71
G17374 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: H 15 Common Names ::UW LOT 79 Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: BRED LINE Core Collection :: NO
G 4205 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: N-5 Common Names ::7-N Locality of Collection :: Country :: COSTA RICA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G17374 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: H 15 Common Names ::UW LOT 79 Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: BRED LINE Core Collection :: NO
G 4205 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: N-5 Common Names ::7-N Locality of Collection :: Country :: COSTA RICA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G15660 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: M7693 Common Names ::EJOTE (SNAP BEAN) Locality of Collection :: Country :: MEXICO State :: ZACATECAS County :: ZACATECAS Site :: Zacatecas Latitude :: 22° 46" N Longitude :: 102° 34" W Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G 3736 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: I-1012 Common Names ::ALABAMA NO.1 Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
72
G16421 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: PI416013,65-071-00056 Common Names ::IRAN MINISTRY NO.285 Locality of Collection :: Country :: IRAN State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G18722 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: HARLAN 219,PI167022 Common Names ::BLACK Locality of Collection :: Country :: TURQUIA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G 8991 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: Common Names ::STRINGLESS KENTUCKY Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: NO
G 5760 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: Common Names ::GOLDEN GATE WAX Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: NO
G 928 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: E.U. 17,PI207212Common Names ::KENTUCKY WONDER 765 Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: NO
G20365 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: ALADZAJKOV 2481,PI379481 Common Names ::PRECANSKA Locality of Collection :: Country :: YUGOSLAVIA State :: County :: NEREZI Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: 260 Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
73
G 1014 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: PI232075 Common Names ::GREEN SAVAGE RUNNER Locality of Collection :: Country :: REP. DE SUDAFRICA State :: TRANSVAAL County :: PRETORIA Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G 8757 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: IVT-77596 Common Names ::FEINE V MONTREUX Locality of Collection :: Country :: SUIZA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: ARBUSTIVO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G 4500 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: Common Names ::KENTUCKY WONDER 765 Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: NO
G18212 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: B.G.-2189,NO.EXP.333/80 Common Names ::JUDIAS Locality of Collection :: Country :: ESPANA State :: PONTEVEDRA County :: QUINA Site :: AGENCIA SEA DE LA CANIZA Latitude :: 42° 36" N Longitude :: 8° 25" W Altitude :: 415 Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G 1610 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: NIAVT II-10-127,PI289439 Common Names ::NONPAREILLE Locality of Collection :: Country :: HUNGRIA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: ARBUSTIVO Biological State :: CULTIVATED Nature :: Core Collection :: NO
G 8829 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: Common Names ::KENTUCKY Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: NO
74
G18874 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: PI282027 Common Names ::GORRION Locality of Collection :: Country :: COLOMBIA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G10165 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: C.L.0025B,V-5632 Common Names ::RED FIGURE AROUND HILUM Locality of Collection :: Country :: ESPANA State :: LOGRONO County :: STO DOMINGO DE LA CALZADA Site :: Santo Domingo de La Calzada Latitude :: 42° 25" N Longitude :: 2° 57" W Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G 5763 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: Common Names ::KENTUCKY WONDER 814 Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: NO
G17769 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: HGY-1560 Common Names ::NYIREGYHAZAI TF 2463 Locality of Collection :: Country :: HUNGRIA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G17750 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: NIAVT II-10-2409 Common Names :: Locality of Collection :: Country :: HUNGRIA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G 8776 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: Common Names ::GENUINE CORNFIELD Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: YES
75
G50636 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: CHI-A70 Common Names ::QUE DAN DOU Locality of Collection :: Country :: REP. POP. CHINA State :: County :: Site :: SHANXI WUTAI Latitude :: 38° 43" N Longitude :: 113° 13" E Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G18908 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: PI304810 Common Names ::PI151027 SELECTION Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: ARBUSTIVO-GUIAS Biological State :: CULTIVATED Nature :: Core Collection :: NO
G 634 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: HARLAN 10037,PI179435 Common Names ::SELECTION 2/942 Locality of Collection :: Country :: TURQUIA State :: ERZURUM County :: ERZURUM Site :: Latitude :: 39° 55" N Longitude :: 41° 16" E Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G50635 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: Common Names ::BONCUK Locality of Collection :: Country :: TURQUIA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: ARBUSTIVO-GUIAS Biological State :: CULTIVATED Nature :: Core Collection :: NO
G17861 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: NIAVT II-10-2639 Common Names :: Locality of Collection :: Country :: HUNGRIA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: YES
G19328 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: RYERSON 544A,PI353559 Common Names :: Locality of Collection :: Country :: ALEMANIA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
76
G10220 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: C.L.0106,V-5711 Common Names ::POLE FRESH POD DEEP PURPLE Locality of Collection :: Country :: PORTUGAL State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G11284 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: IVT-73225 Common Names ::TENDERGREEN NO.32304 Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: ARBUSTIVO Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: NO
G50641 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: CHI-B103 Common Names ::BAI MA CHANG DOU Locality of Collection :: Country :: REP. POP. CHINA State :: County :: Site :: HEBEI ZHANGJIAKOU Latitude :: 40° 46" N Longitude :: 114° 52" E Altitude :: 724 Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G16487 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: PI416131,65-071-00453 Common Names ::IRAN KERMANSHAH 453 Locality of Collection :: Country :: IRAN State :: KERMANSHAHAN County :: KERMANSHAH Site :: Latitude :: 34° 19" N Longitude :: 47° 4" E Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G10181 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: C.L.0054,V-5659Common Names ::POLE ROMANO TYPE Locality of Collection :: Country :: ESPANA State :: LEON County :: PONFERRADA Site :: N Ponferrada Latitude :: 42° 32" N Longitude :: 6° 34" W Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G 620 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: HARLAN 5173,PI179418 Common Names :: Locality of Collection :: Country :: TURQUIA State :: ANKARA County :: ANKARA Site :: Latitude :: 39° 55" N Longitude :: 32° 52" E Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: ARBUSTIVO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
77
G11286 Indentification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: IVT-77844 Common Names ::WACHS PROTECTA Locality of Collection :: Country :: ALEMANIA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: 3/1 Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: NO
G14836 Indentification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: FRC-0997 Common Names ::WAX 819 Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: ARBUSTIVO Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: NO
G 8822 Indentification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: IVT-77660 Common Names ::IMPULS Locality of Collection :: Country :: ALEMANIA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: ARBUSTIVO Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: NO
G24544 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: CHI-B93 Common Names ::HUA QIU JIA YUN DOU Locality of Collection :: Country :: REP. POP. CHINA State :: HEBEI County :: SHENXIAN Site :: SHENXIAN Latitude :: 38° 0" N Longitude :: 115° 32" E Altitude :: 26 Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR DETERMINADO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G50634 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: Common Names ::FERASETSIZ Locality of Collection :: Country :: TURQUIA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G24543 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: CHI-B69 Common Names ::HUI WEN YUN DOU Locality of Collection :: Country :: REP. POP. CHINA State :: HEBEI County :: FENGNING Site :: FENGNING Latitude :: 41° 12" N Longitude :: 116° 31" E Altitude :: 660 Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR DETERMINADO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
78
G 9353 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: FRC-0867 Common Names ::SENSATION REFUGEE Locality of Collection :: Country :: State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: 2/3 Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: NO
G15779 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: C.L.0476 Common Names ::PARACIDO Locality of Collection :: Country :: ESPANA State :: GRANADA County :: BERCHULES Site :: Berchules, on farm Fco. Barnet Toro, above village Latitude :: Longitude :: Altitude :: 1500 Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: YES
G50796 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: CHI-B59 Common Names ::CHANG BIAN GUN DOU JIAO Locality of Collection :: Country :: REP. POP. CHINA State :: County :: Site :: HEBEI FENGNING Latitude :: 41° 12" N Longitude :: 116° 31" E Altitude :: 660 Ecological Observations :: Habit :: ARBUSTIVO-GUIAS Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G23627 Indentification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: Common Names ::FORTEX Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: Core Collection :: NO
G50640 Indentification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: CHI-B81 Common Names ::BAI JIAN DAO ZI Locality of Collection :: Country :: REP. POP. CHINA State :: County :: Site :: HEBEI CHENGDE Latitude :: 40° 58" N Longitude :: 117° 49" E Altitude :: 375 Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G18894 Indentification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: PI291369 Common Names :: Locality of Collection :: Country :: REP. POP. CHINA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: Core Collection :: NO
79
G 9180 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: FRC-0387 Common Names ::ENNA Locality of Collection :: Country :: State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: 3/1 Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: NO
G19279 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: SHOEMAKER 27819,PI353500 Common Names :: Locality of Collection :: Country :: REP. POP. CHINA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G 9194 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: FRC-0426 Common Names ::FIN DE MONTREUX Locality of Collection :: Country :: FRANCIA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: 3/1 Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: NO
G50639 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: CHI-B71 Common Names ::BAI JIA DOU Locality of Collection :: Country :: REP. POP. CHINA State :: County :: Site :: HEBEI YIXIAN Latitude :: 39° 21" N Longitude :: 115° 30" E Altitude :: 56 Ecological Observations :: Habit :: ARBUSTIVO-GUIAS Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G50638 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: CHI-B53 Common Names ::PANG DOU JIAO Locality of Collection :: Country :: REP. POP. CHINA State :: County :: Site :: HEBEI FENGNING Latitude :: 41° 12" N Longitude :: 116° 31" E Altitude :: 660 Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G15778 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: C.L.0456 Common Names ::PARRONA VERDE, ROMANO TYPE Locality of Collection :: Country :: ESPANA State :: GRANADA County :: BERCHULES Site :: Berchules, on farm Fco. Barnet Toro, above village Latitude :: Longitude :: Altitude :: 1500 Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
80
G20132 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: ALADZAJKOV 1144,PI358231 Common Names ::MISLIJA Locality of Collection :: Country :: YUGOSLAVIA State :: VOJVODINA County :: MOKRIN Site :: Latitude :: 45° 55" N Longitude :: 20° 25" E Altitude :: 330 Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G13597 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: Common Names ::MAY FRESH Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G 9218 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: FRC-0564 Common Names ::KENTUCKY Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: NO
G20330 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: ALADZAJKOV 2165,PI379432 Common Names ::PUTERKA Locality of Collection :: Country :: YUGOSLAVIA State :: County :: VBRANJSKA BANJA Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: 350 Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G 9604 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: COD-6224 Common Names ::KISAYA-SHAKUGOSUN SAITO Locality of Collection :: Country :: JAPON State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G13431 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: COD-5207 Common Names ::OANEGO Locality of Collection :: Country :: REP. POP. CHINA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
81
G18220 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: B.G.-2213,NO.EXP.1398/80 Common Names ::FABAS NEGRINAS Locality of Collection :: Country :: ESPANA State :: ORENSE County :: MEDOS Site :: SAN JUAN DEL RIO, AGENCIA SEA DE PBL. TRIVES Latitude :: 42° 23" N Longitude :: 7° 19" W Altitude :: 700 Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G15854 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: TR 35431,V-5464Common Names ::ENLI YORUK Locality of Collection :: Country :: TURQUIA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G 621 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: HARLAN 5179,PI179419 Common Names ::KARA AYSE Locality of Collection :: Country :: TURQUIA State :: KOCAELI County :: KULLAR Site :: Latitude :: 40° 46" N Longitude :: 29° 55" E Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G10233 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: C.L.0120,V-5725 Common Names ::POLE C.F.KENTUCKY WONDER Locality of Collection :: Country :: PORTUGAL State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G20066 Indentification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: ALADZAJKOV 164,PI358163 Common Names ::PRITKAS Locality of Collection :: Country :: YUGOSLAVIA State :: MACEDONIA County :: STRUMICA Site :: Latitude :: 41° 25" N Longitude :: 22° 38" E Altitude :: 220 Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G20120 Indentification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: ALADZAJKOV 972,PI358219 Common Names ::LISICKI PRITKAS Locality of Collection :: Country :: YUGOSLAVIA State :: County :: G. LISICE Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: 250 Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
82
G23953 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: CHI-B52 Common Names ::QING BAN JIN DUI Locality of Collection :: Country :: REP. POP. CHINA State :: HEBEI County :: KUANCHENG Site :: KUANCHENG Latitude :: 40° 36" N Longitude :: 118° 28" E Altitude :: 304 Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G 6726 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: Common Names ::KENTUCKY WONDER WAX Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: NO
G10264 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: C.L.0159,V-5764Common Names ::POLE SHORT STRINGLESS PODS Locality of Collection :: Country :: PORTUGAL State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G17646 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: Common Names ::ASGROW 299, BUSH BLUE LAKE 299, BBL 299 Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: NO
G 9069 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: COD-6123 Common Names ::BURPEE'S GREEN POD STRINGLESS Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: NO
G17723 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: Common Names ::LAGO AZUL Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: NO
83
G 8228 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: COD-6116 Common Names ::WHITE CASE BACK(BLUE LAKE) Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: NO
G14577 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: PHA0344/75 Common Names ::GOLDKRONE Locality of Collection :: Country :: HUNGRIA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: NO
G16389 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: PI321036 Common Names ::HILDS RAPID Locality of Collection :: Country :: ALEMANIA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G13450 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: COD-6130 Common Names ::COURONE DE ARE Locality of Collection :: Country :: State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G 3946 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: B-49 Common Names ::KENTUCKY WONDER 780 Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: NO
G15913 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: I.V.P. 1.55,PI458568 Common Names ::WITTE BOON Locality of Collection :: Country :: HOLANDA State :: LIMBURG County :: VENRAY Site :: VENRAY Latitude :: 51° 31" N Longitude :: 5° 58" E Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
84
G 9545 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: COD-6122 Common Names ::BLUE LAKE HYBRID Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: BRED LINE Core Collection :: NO
G17647 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: Common Names ::OSU 4852 Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: BRED LINE Core Collection :: NO
G16806 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: PI164096 Common Names :: Locality of Collection :: Country :: SUIZA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G18540 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: CEN- ? Common Names :: Locality of Collection :: Country :: BRASIL State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: Core Collection :: NO
G11269 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: IVT-73321 Common Names ::IVT 7233 Locality of Collection :: Country :: HOLANDA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: BRED LINE Core Collection :: NO
G 8992 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: Common Names ::STRING.BLUE LAKE PRIME PAC Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: COMMERCIAL VARIETY Core Collection :: NO
85
G20400 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: PI391625 Common Names ::CHIA-SSU-CHI-TOU Locality of Collection :: Country :: REP. POP. CHINA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G17420 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: B 40 Common Names ::UW TRIPLE R-40(ROUND POD Locality of Collection :: Country :: ESTADOS UNIDOS State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: BRED LINE Core Collection :: NO
G 1729 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: PI307800 Common Names ::S-246-N Locality of Collection :: Country :: EL SALVADOR State :: SANTA ANA County :: SAN CRISTOBAL FRONTERA Site :: San Cristobal Frontera Latitude :: 14° 10" N Longitude :: 89° 40" W Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G50633 Indentification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: Common Names ::SEKER Locality of Collection :: Country :: TURQUIA State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: TREPADOR Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G 373 Indentification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: HARLAN 7027,PI171780 Common Names ::CALI Locality of Collection :: Country :: TURQUIA State :: RIZE County :: RIZE Site :: Latitude :: 41° 1" N Longitude :: 40° 31" E Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G 371 Indentification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: HARLAN 7015,PI171777 Common Names :: Locality of Collection :: Country :: TURQUIA State :: RIZE County :: RIZE Site :: Latitude :: 41° 1" N Longitude :: 40° 31" E Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
86
G 587 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: HARLAN 4395,PI177498 Common Names :: Locality of Collection :: Country :: TURQUIA State :: ANKARA County :: ANKARA Site :: Latitude :: 39° 55" N Longitude :: 32° 52" E Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: RASTRERO Biological State :: CULTIVATED Nature :: LANDRACE Core Collection :: NO
G 25 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: Common Names :: Locality of Collection :: Country :: CANADA State :: SASKATCHEWAN County :: ARBORFIELD Site :: Latitude :: 63.1 Longitude :: -103.5 Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: Biological State :: Nature :: Core Collection ::
G 9444 Identification :: Genus :: Phaseolus Species :: vulgaris Synonymous :: Common Names :: Locality of Collection :: Country :: State :: County :: Site :: Latitude :: Longitude :: Altitude :: Ecological Observations :: Habit :: Biological State :: Nature :: Core Collection :: NO
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87
Anexo 4. Agrupamiento segun Análisis de PCoA ident
MESOAMERICANO 1 MESOAMERICANO 4 MESOAMERICANO 5 MESO 2
1
2
6 6 1 1 4 2 1 1 1 1 6 1 1 2 4 2 1 2 1 1 1 1 1 1 1 4 4 2 3 1 1 1 3 1 1 2 1 1 3 5 1 5 5 3 3 1 2 1 1 3 6 9 4 6 4 7 4 5
_ 5 6 1 6 1 8 2 0 8 7 0 8 9 7 1 1 6 5 8 3 1 2 1 1 2 3 7 0 9 3 1 2 0 9 0 1 1 1 2 3 4 1 1 1 2 7 4 2 2 3 2 4 8 0 9 5 8 1 9 3 3 4 8 3 8 2 0
M _ _ 4 1 _ 2 _ _ 2 _ _ _ 0 _ _ 4 3 _ _ _ _ 5 _ 8 2 5 _ _ 9 _ _ 0 2 _ _ _ _ 9 6 4 _ _ 2 _ 7 3 _ _ 7 _ _ _ _ _ 0 _ _ 6 0 _ _ _ _ _ _ _ _ _
I G G _ _ G 0 G G _ G G G _ G G _ _ G G G G _ G _ 1 _ G G _ G G 4 _ G G G G _ _ _ G G _ G _ _ G G _ D G G G G _ G G _ _ G G G G G G G G G
L 2 1 G G 1 _ 1 1 G 1 1 1 G 1 2 G G 1 1 1 1 G 1 G _ G 1 1 G 1 1 _ G 1 1 1 1 G G G 1 1 G 1 G G 1 1 P O 1 1 1 1 G 1 1 G G 1 2 5 1 2 1 2 1 1
E 0 3 1 8 8 G 5 0 5 3 0 0 2 0 0 8 8 5 7 0 5 8 5 9 G 9 1 3 8 4 0 G 9 7 8 4 6 9 9 9 6 1 8 4 9 9 7 8 i R 8 8 6 7 5 5 1 4 8 7 0 0 7 0 7 4 7 8
N 4 4 0 7 2 9 9 3 7 5 2 2 9 2 4 9 8 8 9 2 6 9 3 1 9 6 2 4 2 5 1 6 3 6 5 7 3 2 0 5 4 2 8 8 1 4 3 9 j 3 8 8 8 4 7 9 2 2 7 6 3 6 8 6 7 5 7 7
I 0 3 1 7 1 2 0 1 6 9 1 3 2 2 0 9 2 0 1 2 6 9 0 9 2 0 6 5 2 7 3 2 5 4 4 2 8 1 6 4 8 8 2 3 8 4 7 0 a 6 9 7 0 2 3 1 8 0 5 4 3 3 6 2 6 4 5 2
O 0 1 4 6 2 2 5 0 3 7 4 3 6 2 4 1 9 1 5 0 0 2 0 4 8 4 9 0 8 7 4 0 3 7 0 2 9 8 9 5 7 4 2 6 0 4 4 8 o 4 4 4 6 0 3 3 6 5 7 6 0 6 1 4 9 4 0 2
N 1 +. XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
u 2 +. XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
m 3 +. XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
b 4 +. XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
e 5 +. XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
r 6 +. XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX
7 +. XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX
o 8 +. XXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX
f 9 +. XXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
10 +. XXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
C 11 +. XXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
l 12 +. XXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
u 13 +. XXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
s 14 +. XXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX . XXXXXXXXX XXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
t 15 +. XXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX . XXXXXXXXX XXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
e 16 +. XXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX . XXXXXXXXX XXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXX XXXXXXXXXXX
r 17 +. XXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX . XXXXXXXXX XXX XXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX XXX XXXXXXXXXXX
s 18 +. XXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX . XXXXXXXXX XXX XXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX XXX XXXXXXXXXXX
19 +. XXXXXXXXXXXXXXXXXXX . XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX . XXXXXXXXX XXX XXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX XXX XXXXXXXXXXX
20 +. XXXXXXXXX XXXXXXXXX . XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX . XXXXXXXXX XXX XXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX XXX XXXXXXXXXXX
Microsatelites 127 ind-41 ssr
8 1 4 10 5 9
MESOAMERICANO 2 ANDINO 11 ANDINO 6 ANDINO 3
9 6 9 9 7 7 6 7 1 4 1 3 9 4 9 1 5 5 5 7 3 6 9 5 7 9 7 5 7 5 6 9 4 2 6 2 9 1 2
5 0 7 6 8 6 7 6 3 0 1 8 2 2 8 4 7 9 0 8 5 8 6 5 3 5 4 0 9 4 8 2 7 0 1 1 5 1 1 3 6 1 8 1 1 1 8 7 2 5 8 2 1 4
_ _ _ _ 3 _ _ _ _ 8 _ 7 6 _ 9 _ _ _ 1 5 _ _ _ _ 6 _ _ _ _ _ _ _ _ _ 0 0 7 _ 0 0 8 0 8 _ _ 8 _ _ _ _ 6 _ _ _ 4 _ _ _
G G G G _ G G G G _ G _ _ G _ G G G _ _ G 7 G G G _ G G G G G G G G G 6 5 1 G 7 3 1 _ 2 G G _ C G G G 9 G G G _ G G G
5 2 5 5 G 2 2 2 2 G 1 G M 1 G 5 1 5 G G 1 9 1 1 2 G 1 2 5 1 2 5 2 1 2 _ _ _ 1 _ _ _ G _ 1 1 G A 2 5 1 _ 1 2 1 G 5 1 1
0 0 0 0 3 4 4 0 3 6 7 4 I 6 4 0 8 0 5 3 9 _ 9 9 3 1 6 0 0 9 3 0 3 9 1 G G G 0 G G G 1 G 0 8 4 L 0 0 8 G 5 0 5 3 0 0 5
6 0 6 6 7 5 5 4 6 7 7 2 L 4 5 6 2 7 7 9 0 G 3 2 9 7 8 3 6 8 9 6 4 2 1 6 6 2 1 6 5 3 6 3 1 8 4 I 1 6 2 2 8 1 7 7 6 2 7
3 6 4 3 3 4 4 0 2 2 2 2 E 2 0 3 1 9 6 4 9 2 2 6 5 2 3 6 3 3 5 4 4 7 1 2 2 1 6 3 8 7 1 7 8 4 9 M 2 3 2 1 5 3 7 4 3 6 7
8 6 0 9 6 2 3 1 7 6 3 5 N 1 0 7 5 6 0 6 3 5 8 8 3 9 1 5 3 3 2 1 1 9 7 5 1 7 5 4 7 1 0 3 1 8 4 A 0 4 0 1 4 2 9 7 5 4 8
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXX XXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXX XXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX
XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXX XXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX
7
2
11
6
3
