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II
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA DE QUÍMICA Y FARMACIA
Modalidad: Investigación
TEMA:
“ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DEL EXTRACTO
ALCOHÓLICO DEL TUBÉRCULO MASHUA (Tropaeolum tuberosum) EN
SUS DIFERENTES ESPECIES”
TRABAJO DE TITULACIÓN PRESENTADO COMO REQUISITO PREVIO PARA
OPTAR POR EL GRADO DE QUÍMICAS Y FARMACÉUTICAS
AUTORES:
Angélica María Chica Rosales
Shirley Lisseth Guayaquil Manzaba
TUTORA:
Dr. Q.F María del Carmen Villacrés
COTUTORA:
Dr. Q.F María Elena Jiménez
2018-2019
Guayaquil – Ecuador
III
IV
V
VI
VII
VIII
IX
X
XI
XII
XIII
Agradecimientos
Mis agradecimientos a la mentora de este proyecto Dra. María Elena
Jiménez Gracias por confiar en nosotros y guiarnos por buen camino para
culminar este trabajo, así mismo a nuestra tutora María del Carmen que
con su conocimiento, enseñanza, consejos y compartir
desinteresadamente sus conocimientos y experiencia.
A nuestra querida universidad de Guayaquil, a la facultad de ciencias
química por brindarnos tanta ayuda en nuestra formación como
profesionales, este trabajo de tesis ha sido de gran bendición y cada
momento vivido durante estos años son únicos y la oportunidad brindada
cada día al despertar es para corregir nuestros errores y empezar de nuevo
sin importar las veces que nos hemos equivocado.
Gracias a nuestros queridos amigos Doctores y Doctoras: María auxiliadora
Alarcón, María Elena Jiménez, María del Carmen Villacrés a nuestra
Facultad de Ciencias Químicas quienes invirtieron su tiempo para formar
cada herramienta utilizada ya en el área profesional sin más que decirles
les agradecemos con todo nuestro ser.
XIV
Dedicatoria
En primer lugar agradezco a Dios por su bondad y amor infinito por
permitirnos sonreír ante todos nuestros logros los cuales son el resultado de su gran ayuda cuando caemos o nos pones muchas pruebas
aprendemos de ellas por todo lo bueno y lo malo.
Todo este arduo trabajo se la dedico con todo el amor y cariño a mamá Mariuxi Manzaba por todo su esfuerzo y sacrificio, por ayudarme en la
carrera que escogí para mi futuro porque te enseñe a creer en mi día tras día a lo largo de todos estos años, por cada palabra de aliento, por no
dejarme caer, por darme fuerzas para continuar, por ayudarme a ser perseverante y así logre llegar a la meta tan anhelada.
A mis sobrinos Emiliana y Benjamín por ser mis motores de inspiración y superación, por la lucha constante por las sonrisas diarias, a mis
hermanas Aylin, Barby y Mile por cuidar de mis motores de inspiración y por tanta ayuda para poder superarnos día tras día de nuestras vidas y seguir en esta lucha que ganamos de la mejor manera siempre juntas.
A mi hermana de diferente sangre y madre Angélica María por la paciencia, amistad y hermandad que nos dejan tantos años como siempre
te lo dije ERES LA MEJOR!!
A mi papá Franklin Guayaquil por ayudarme al inicio en los primeros años de este mi sueño, a mi tío paterno Héctor (Titor) por todo el apoyo sin
condición alguna, a mis tías y abuelos por cada consejo brindado.
A mi novio Chris que vivió cada una de mis etapas y estuvo ahí apoyándome en todo momento y en cada parte de este largo proceso, a Chabelita y Sebas por el apoyo cuando sentí que estaba en la nada y ser
un gran ejemplo en mí vida.
A mi mejor amigo Nelson Amaguaya por ser mi hermano siempre, a la Universidad Estatal de Guayaquil por brindarme la ayuda que necesite en todo momento como profesional, a los amigos que la vida me brindó a lo largo de muchos años, a mis queridos Doctores: Raúl Lucio, Luis, etc. Y
Doctoras: María Elena Jiménez, María del Carmen Villacrés, María auxiliadora Alarcón, Glenda Sarmiento de nuestra Facultad de Ciencias
Químicas quienes invirtieron su tiempo para que este proyecto sea realizado en forma correcta, sin más que decirles les dedicó este trabajo a
las demás personas que estuvieron apoyándome y gracias a todos por hacer de mi sueño una realidad.
Y RECUERDEN QUE LA MEJOR SUERTE PARA TRIUNFAR EN LA VIDA SE LLAMA CREE EN TI MISMA
Q.F. o mejor dicho Química y Farmacéutica
SHIRLEY LISSETH GUAYAQUIL MANZABA
XV
A Dios, por todas las bendiciones durante toda mi carrera, por su infinito amor, y por permitirme llegar al final de esta etapa de mi vida de su mano.
A mi madre Betsy Rosales por ser la mejor en todo momento y por su apoyo incondicional sacrificio y constancia y nunca dejarme caer a pesar
de los duros momentos.
A mi padre por su amor , su apoyo y sobre todo por demostrarme que nunca es tarde para darse cuenta que no hay nada mejor que el amor a
los hijos.
A hermanas(os) y a mis pequeños seres de luz Valentina, Renata, Matías, Santiago por apoyar mis sueños e impulsarme a crecer cada vez más
personal y profesionalmente. gracias por creer en mí, y ser mí mejor ejemplo de responsabilidad, perseverancia y dedicación.
A mi novio por su amor, mucha paciencia y respaldo, gracias por compartir conmigo los momentos más felices y más difíciles de este
proceso.
A mi compañera de fórmula Shirley Guayaquil por la amistad, por la paciencia, la constancia y la lucha diaria de vivir este esta hermosa
experiencia de iniciar y culminar este trabajo, y esta carrera que nos ha traído de todo un poco, pero nos llevamos los mejores momentos.
Q.F: ANGÉLICA MARÍA CHICA ROSALES.
XVI
ÍNDICE
RESUMEN ...................................................................................................... XXV
INTRODUCCIÓN ................................................................................................. 1
CAPÍTULO I. PROBLEMA .................................................................................. 3
I.1 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA .......................................................... 3
I.1 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA ................................................................ 3
I.2 HIPÓTESIS .................................................................................................... 3
I.3 JUSTIFICACIÓN E IMPORTANCIA ............................................................... 4
I.4 OBJETIVOS ................................................................................................... 5
I.4.1 OBJETIVO GENERAL .............................................................................. 5
I.4.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS .................................................................... 5
CAPÍTULO II. MARCO TERÓRICO..................................................................... 6
II.1 Antecedentes del Origen Vegetal ........................................................... 6
II.1 .1 Generalidades del tubérculo .............................................................. 7
II.1.2 NOMBRES COMUNES DE LA MASHUA ................................................ 9
II.1.3 CARACTERÍSTICAS AGRONÓMICAS ................................................. 10
II.2. PLAGAS Y ENFERMEDADES ................................................................ 10
II.3 DESCRIPCIÓN BOTÁNICA ..................................................................... 11
II.3.1 COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LA MASHUA ......................................... 11
II.4. USOS DEL TUBÉRCULO Tropaeolum tuberosum ................................... 13
II.4.1 Anti-fertilidad ......................................................................................... 13
II.4.2 Actividad Antimicrobiana ....................................................................... 13
II.5 CLASIFICACIÓN BOTÁNICA ................................................................... 14
II.6 VARIEDADES DE MASHUA .................................................................... 14
II.6 ANTOCIANINAS TOTALES DE LA MASHUA .......................................... 16
II.7 ENSAYO ANTIMICROBIANO ..................................................................... 17
II.8 RESISTENCIA MICROBIANA .................................................................... 18
II.9 TAXONOMÌA Y CARACTERÌSTICAS DE LAS CEPAS EN ESTUDIO ........ 19
II.9.1. Escherichia coli ...................................................................................... 19
II.9.1 .1 Características generales de Escherichia coli ........................... 19
II.9.2 Staphylococcus aureus ......................................................................... 20
II.9.2.1 Características generales de Staphylococcus aureus ............... 20
II.9.2.2 Supervivencia ambiental .............................................................. 21
II.9.3 Cándida albicans ................................................................................... 22
XVII
II.9.3.2 Características generales de Cándida albicans .......................... 22
II.9.3.3 Causas de Candidiasis ................................................................. 23
II.10 EXTRACTO VEGETAL ............................................................................. 24
II.10.1 Extractos secos ................................................................................... 24
II.10.2 Extractos fluidos .................................................................................. 24
II.10.3 Conservación de extractos .................................................................. 24
II.11 MÉTODOS PARA EVALUAR LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA ......... 25
II.11.1 Métodos de difusión ............................................................................ 25
II.11.2 Métodos de dilución ............................................................................. 26
II.11.3 Determinación de la MIC ..................................................................... 26
II.11.4 Difusión en agar (Técnica de Kirby & Bauer) ....................................... 27
CAPÍTULO III. MARCO METODOLÓGICO ....................................................... 29
II.1 METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN .......................................... 29
II.2 VARIABLES DEPENDIENTE ................................................................... 29
II.3 VARIABLE INDEPENDIENTE .................................................................. 29
III.4 MATERIALES DE LABORATORIO ......................................................... 29
III.4.1 EQUIPOS DE LABORATORIO............................................................. 29
III.4.2 REACTIVOS ........................................................................................ 30
III.4.3 AGARES .............................................................................................. 30
III.4.3 CEPAS MICROBIOLÓGICAS............................................................... 30
III.5 ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DEL TUBÉRCULO Tropaeolum
tuberosum EN SUS DIFERENTES VARIEDADES ........................................... 31
III.5.1 Recolección y selección del material vegetal ........................................ 31
III.6 PARÁMETROS FÍSICO-QUÍMICOS ........................................................... 32
III.6.1 CARACTERÍSTICAS ORGANOLÉPTICAS .......................................... 32
III.6.1.1 Determinación del olor ................................................................ 32
III.6.1.2 Determinación del color .............................................................. 32
III.6.2 Sólidos totales ................................................................................ 32
III.7 OBTENCIÓN DEL EXTRACTO ALCOHÓLICO ......................................... 33
III.8 EL MÉTODO KIRBY-BAUER (MÉTODO DE DIFUSIÓN EN AGAR) ......... 34
CAPÍTULO IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN .................................................. 36
IV.1 DETERMINACIÓN DE SÓLIDOS TOTALES ....................................... 36
IV.2 DETERMINACIÓN DE LOS PARÁMETROS FISICOQUÍMICOS ............ 37
IV.3 DETERMINACIÓN DEL RENDIMIENTO DE LOS EXTRACTOS ............ 38
IV.3 PESOS DE PRINCIPIOS ACTIVOS EN FILTRO .................................... 38
XVIII
IV.4 ANÁLISIS DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DEL EXTRACTO DEL
TUBÉRCULO Tropaeolum tuberosum ............................................................ 40
IV.4 .1 Ensayo 1 ......................................................................................... 40
IV.5 CONCLUSIONES ....................................................................................... 46
IV. 6 RECOMENDACIONES ............................................................................. 47
IV.8 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS .......................................................... 48
IV.9 APÉNDICES O ANEXOS ........................................................................... 52
TABLAS ............................................................................................................ 56
XIX
XX
ÍNDICE DE ANEXOS
XXI
ÍNDICE DE FIGURAS
XXII
XXIII
GLOSARIO DE ABREVIATURAS
LDL: La mayor parte del colesterol se transporta en la sangre unido a
proteínas, formando unas partículas conocidas como lipoproteínas de baja
densidad o LDL (del inglés low density lipoproteins).
NCCLS: National Committee for Clinical Laboratory Standards conocido
por el desarrollo de estándares de atención sanitaria que equilibran las
necesidades de la industria
MIC: La concentración de antibiótico que presente ausencia de crecimiento
es la Concentración Mínima Inhibitoria.
XXIV
GLOSARIO DE TÉRMINOS
Mashua: Tropaeolum tuberosum, llamada popularmente cubio, mashua,
mashwa, majua o papa amarga es una planta originaria de los Andes
centrales, y la mayor concentración
Antimicrobiano: Es una sustancia que elimina o inhibe el crecimiento de
microorganismos, tales como bacterias, hongos o parásitos.
Bacterias: Son microorganismos procariotas que presentan un tamaño de
unos pocos micrómetros (por lo general entre 0,5 y 5 μm de longitud) y
diversas formas, incluyendo filamentos, esferas (cocos), barras (bacilos),
sacacorchos (vibrios) y hélices (espirilos).
Cepas: Población de células de una sola especie descendientes de una
única célula, usualmente propagada clonalmente, debido al interés en la
conservación de sus cualidades definitorias.
Método Kirby Bauer: Difusión en agar es empleado para determinar la
sensibilidad de un agente microbiano frente a un antibiótico o
quimioterápico, este método comprende lo que se denomina un
antibiograma o prueba de susceptibilidad bacteriana frente a drogas
específicas.
Tubérculo: Parte de un tallo subterráneo o de una raíz que se desarrolla y
se engruesa por acumular en sus células sustancias de reserva.
Glucosinolatos: Son compuestos naturales del metabolismo secundario
de las plantas principalmente presentes en las Brassicas. Originalmente
también se denominaron "mustard oil glucosides" o "tioglucósidos", ya que
se descubrieron como derivados de los aceites son los responsables del
sabor picante de especias como la mostaza o los rábanos picantes.
Extracto: Es una sustancia obtenida por extracción de una parte de una
materia prima, a menudo usando un solvente como etanol o agua.
XXV
FACULTAD: CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA: QUÍMICA Y FARMACIA
UNIDAD DE TITULACIÓN
“ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DEL EXTRACTO
ALCOHÓLICO DEL TUBÉRCULO MASHUA (Tropaeolum tuberosum) EN
SUS DIFERENTES ESPECIES”
Autor:
Shirley Guayaquil Manzaba
Angélica Chica Rosales
Tutor:
María del Carmen Villacrés
RESUMEN
En este estudio se investigó la actividad antimicrobiana de extractos etanólicos de tres variedades del tubérculo Tropaeolum tuberosum frente a cepas de Escherichia coli, Staphylococcus aureus y Cándida albicans. La actividad antimicrobiana se evaluó mediante difusión de agar en disco por el método Kirby Bauer.
Se realizaron dos ensayos experimentales, en el primero se utilizaron volúmenes de 10 µl para cada variedad del tubérculo, dando como resultado actividad antimicrobiana solo en la variedad negra frente a E. coli e inhibición limitada de S. aureus. En un segundo ensayo experimental se utilizaron volúmenes de 20 y 40 µl, confirmando los resultados originales. En conclusión, los extractos con mayor actividad antimicrobiana fueron los extractos de la variedad negra frente a las cepas de E. coli y S. aureus.
PALABRAS CLAVES: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Cándida albicans, actividad antimicrobiana, mashua, Tropaeolum
XXVI
FACULTAD: CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA: QUÍMICA Y FARMACIA
UNIDAD DE TITULACIÓN
"STUDY OF THE ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF THE ALCOHOLIC EXTRACT OF THE MASHUA TUBERCLE (Tropaeolum tuberosum) IN ITS DIFFERENT SPECIES"
Author: Shirley Guayaquil Manzaba
Angélica Chica Rosales
ABSTRACT
Tutor:
María del Carmen Villacrés
The tubercle Tropaeolum tuberosum (mashua) has been used in ancestral
medicine by the Andean populations of South America. The antimicrobial
activity in ethanolic extracts of three varieties of the mashua was
investigated against strains of Escherichia coli, Staphylococcus aureus and
the fungus Candida albicans. The antimicrobial activity was evaluated by
the modified Kirby Bauer method of diffusion on agar. Two evaluations were
performed, the first one with 10 µl volumes of each pink, yellow and black
mashua, observing antimicrobial activity against E. coli and limited reactivity
with S. aureus only with the black mashua variety. These observations were
confirmed in a second assay, applying volumes of 20 and 40 µl containing
4.1 µg and 8.3 µg respectively of dry mashua substance. In conclusion, the
ethanolic extract of black mashua presented antimicrobial activity against
the bacteria E. coli and S. aureus. No activity was observed against a clinical
isolate of C. albicans.
Keywords: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Candida albicans,
antimicrobial activity, mashua, Tropaeolum.
.
1
INTRODUCCIÓN
Desde tiempos prehistóricos el hombre ha utilizado plantas con fines
medicinales (curativos y preventivos), alimenticios y cosméticos. Siendo
esta una herramienta importante en la medicina tradicional, en estos
tiempos las especies de plantas con uso farmacológico son posibles fuente
de posibles metabolitos con actividad biológica. Los metabolitos producidos
por las plantas han alcanzado una gran proyección dentro del campo
medicinal (Ruiz et al., 2009).
Es de manera urgente la resistencia bacteriana ya que ha generado nuevo
interés en la búsqueda de medicamentos con poder antimicrobiano, como
se demuestra en los últimos años el número de investigaciones, vinculando
los productos de origen natural con la actividad antimicrobiana,
centrándose las publicaciones de investigación en los productos naturales
como fuentes de moléculas bioactivas (Ruiz et al., 2009).
El avance de la Fitoterapia como disciplina médica es cada vez mayor esto
evidencia que las plantas medicinales representan el 25% del total de las
prescripciones médicas en países industrializados; en los países en
desarrollo la participación de las plantas medicinales en el arsenal
terapéutico alcanza el 80%. Los métodos para evaluar la actividad
antibacteriana están clasificados, en tres grupos principales: Métodos de
difusión, métodos de dilución y bioautografía, y un cuarto método es el
análisis conductimétrico el cual detecta el crecimiento microbiano como un
cambio en la conductividad eléctrica o impedancia del medio de cultivo.
Mediante la farmacognosia podemos identificar moléculas en efecto
terapéutico que pueden ser utilizadas en su forma original o como modelo
estructural para sintetizar compuestos de actividad mejorada (Bernal et al.,
1984).
En el presente proyecto se evaluó la actividad antimicrobiana de los
extractos alcohólicos de Tropaeolum tuberosum, el estudio experimental se
2
realizó en el Laboratorio de Microbiología II de la Facultad de Ciencias
Químicas, en el cual se utilizó cepas de: C. albicans, S. aureus, E. coli.
La mashua (Tropaeolum tuberosum) es reconocida como papa amarga y
ha sido altamente apreciada por las culturas precolombinas andinas,
utilizándola como depurativo para tratamientos por su contenido de fósforo
en alto porcentaje, calcio y hierro. Tiene un alto valor nutritivo ya que
combina proteínas, carbohidratos, fibra y calorías; se recomienda
consumirla para prevenir el cáncer de próstata ya que disminuye los niveles
de testosterona, en personas con problemas renales y hepáticos,
enfermedades venéreas, prostatitis, enfermedades urinarias y como
cicatrizantes. También ha sido utilizada para el control de plagas En la
actualidad, esta especie es valorada en la sierra ecuatoriana, en donde su
precio por quintal es similar al de la oca, papa y melloco (Bernal et al., 1984)
3
CAPÍTULO I. PROBLEMA
I.1 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
Desde la práctica ancestral, los cultivos andinos como el de mashua
(Tropaeolum tuberosum) han sido utilizados para ahuyentar plagas ya que
se consideran que tienen propiedades bactericidas, nematicidas,
fungicidas, insecticidas y repelentes de insectos teniendo así un efecto
protector para el almacenamiento de las cosechas.
A lo largo del callejón interandino comunidades indígenas siembran este
tubérculo intercalado con otros tubérculos más susceptibles como la papa,
oca y melloco: con la finalidad de salvaguardar la cosecha de posibles
plagas.
I.1 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA
¿Presentarán actividad antimicrobiana los extractos etanólicos del
tubérculo (Tropaeolum tuberosum) en sus diferentes variedades frente a
cepas estándares?
I.2 HIPÓTESIS
Las variedades del tubérculo Tropaeolum tuberosum poseen componentes
activos con amplio espectro de acción antimicrobiana.
.
4
I.3 JUSTIFICACIÓN E IMPORTANCIA
La importancia de este proyecto se debe a la necesidad en terapias nuevas
contra los microorganismos ya que la interacción de los antimicrobianos sobre
las bacterias u hongos pueden causar efectos sinérgicos, aditamento,
incompatibilidad y el llamado efecto pos antimicrobiano.
Y también ya que en la práctica ancestral se ha usado este tubérculo conocido
como Tropaeolum tuberosum para ahuyentar plagas de cultivos vecinos por lo
que se deduce que la especie genera metabolitos que ayudan al control de
plagas. Lo que se busca con este proyecto es mediante una investigación
científica posible actividad bactericida y/o fungicida en un extracto alcohólico.
5
I.4 OBJETIVOS
I.4.1 OBJETIVO GENERAL
Determinar la actividad antimicrobiana de los extractos etanólicos de las
variedades del tubérculo (Tropaeolum tuberosum) en cepas estándares.
I.4.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Evaluar la actividad bactericida y fungicida de los extractos del tubérculo
(Tropaeolum tuberosum) en sus diferentes variedades
Establecer comparativamente la respuesta de los extractos mediante el
método de difusión en discos (halo de inhibición) para la actividad
bactericida y fungicida.
6
CAPÍTULO II. MARCO TERÓRICO
II.1 Antecedentes del Origen Vegetal
La especie es herbácea perenne que desarrolla tubérculos, semirastrera o
trepadora y alcanza los 2 metros de altura. La mashua es de alto
rendimiento y produce entre 9 y 70 tm/ha. La planta alcanza su mayor
rendimiento entre 3500 y 3800 m de altitud. La productividad de la mashua
ha superado a la de la papa en dos por uno ya que es muy tolerante, crece
en suelos pobres y sin fertilizantes (Caamaño, 2015)
Este tubérculo es cultivada en altitudes entre 3700 a 4000 msnm, en
pequeñas superficies de terreno que están asociadas con otros cultivos, es
resistentes a plagas y enfermedades por lo que no requiere de la utilización
de pesticidas y fertilizantes (Bonete, 2016).
La mashua es una especie rústica, que puede crecer bien a temperaturas
bajas y en suelos pobres, sin necesidad de fertilizantes. Además, es
resistente a nematodos, insectos y varias plagas, como el gorgojo de la
papa por esta razón, en los Andes se siembra habitualmente como cerco
perimétrico de protección de otros cultivos. Su ciclo de cultivo varía entre 6
y 9 meses, llegando a producir rendimientos superiores a los de otras
tuberosas andinas (Manrique, 2013).
Los tubérculos de la mashua tienen un elevado contenido de proteínas
(mayores a los de la papa, oca y olluco), carbohidratos, fibra, ácido
ascórbico (vitamina C) y calorías. También contienen una elevada
concentración de glucosinolatos aromáticos que al ser hidrolizados se
transforman en isotiocianatos, compuestos químicos responsables de
otorgar el típico sabor picante a los tubérculos, los isotiocianatos son
conocidos por sus propiedades antibióticas, insecticidas, nematicidas,
anticancerígenas y diuréticas, lo que contribuye a sustentar el uso
tradicional de la mashua en la medicina folclórica de los Andes (Sanchez et
al., 2013).
7
En el Ecuador se cultiva en provincias como: Chimborazo, Pichincha,
Cotopaxi, Cañar, Imbabura y el Carchi en la parte del Callejos Andino.
Según el INIAP (Instituto Nacional de Investigación Agropecuaria) en el
Ecuador, la mashua se cultiva junto con la oca, y el melloco en forma
asociada y no se tiene una extensión de cultura real de este tubérculo
andino (INIAP, 2010).
La producción de raíces y tubérculos andinos está concentrada en la
ecorregión andina del Ecuador en esta zona se identificó como limitante de
producción ya que en el lugar habita población mestiza e indígena con una
limitada organización campesina donde existen pocos proyectos estatales
de organizaciones privadas (Manrique, 2013).
II.1 .1 Generalidades del tubérculo
La mashua (Tropaeolum tuberosum), tubérculo andino se cultiva hace
muchos años en Bolivia, Colombia, Ecuador, Perú y Venezuela. Este
tubérculo andino posee variedades que se distinguen por sus diferentes
colores como la amarilla, la rosada y la negra, presentando esta última una
intensa coloración púrpura que rodea la piel y dispersas partes del tubérculo
teniendo propiedades promotoras para la salud, ha sido poco investigado
hasta el momento y se conoce que presenta metabolitos que justifican su
uso ancestral, principalmente los glucosinolatos y compuestos fenólicos.
Los cultivos andinos incluida la papa, olluco, oca y mashua tienen un alto
potencial antioxidante; la variedad negra mostró que tenía actividad
antioxidante 8 - 10 veces mayor que los tubérculos de mashua de color
amarillo y se justificaron (Fig. 1) por su elevado contenido de antocianinas
(Chirinos, 2006).
8
Fig. 1 Estructura química de las principales antocianinas identificadas
en mashua (a) delfinidina 3-sophoroside5-ramnósido, (b) cianidina 3-
sophoroside5-ramnósido, (c) delfinidina 3-sophoroside5-acetylrhamnoside,
y (d) delfinidina 3- glucósido-5-acetylrhamnoside. Los asteriscos identifican
la posición provisional del grupo acetilo en 4-OH
Fuente: (Chirinos, 2006).
Es originaria de Los Andes Centrales, su cultivo se extendió por
migraciones del hombre precolombino en Colombia, Norte de Argentina,
Chile y Ecuador. En la sierra ecuatoriana, la mashua actualmente es
cultivada en pequeños terrenos de indígenas y campesinos, asociada con
melloco y papas nativas por lo que resulta difícil estimar su producción y
cosecha. A pesar de la escasez de información, las investigaciones
realizadas en 21 sectores al Norte de la provincia de Cotopaxi indican que
la producción de mashua podrían llegar hasta los 750 qq/ha (Valdivieso,
2014).
Estudios que se realizaron indican que este tubérculo posee notable
concentraciones de compuestos fenólicos (174,9 – 374,4 mg. AGE/100 g
MF), antocianinas (45,5 – 131,9 mg CGE / 100 g MF), flavonoides (0,2 –
5,3 mg/g MS) e importante actividad antioxidante hidrófila equivalente a 80
9
– 378 µmoles TE/ g MS, semejante al: arándano, fresa, pasas, grosella,
frambuesa, manzana etc. (Olvira, 2017)
Según Campos redacto que uno de los compuestos importantes del
tubérculo de mashua son los fenoles totales en un rango de 0,92 a
3,37mg/g. La variedad de mashua negra presentó un alto contenido de
fenoles totales, mientras que la variedad amarilla presentó bajo contenido
de los mismos. Las antocianinas totales de la variedad negra se encuentran
en un rango de 0,5 a 2,05 mg/g encontrándose este resultado dentro de lo
reportado para las fresas, 1,38 – 3,85 mg/g (Campos, 2006).
Un estudio realizado por Morillo reconoce que el extracto fenólico de
mashua puede inhibir la oxidación de Lipoproteína de Baja Densidad (LDL)
inducido por 2,2´-azo-bis (2-amidinopropane dihydrochloride (AAPH) y
Cu2+. Los resultados indican que los compuestos fenólicos del tubérculo
pueden neutralizar los radicales de peróxido. Se ha propuesto que el efecto
protector del extracto de mashua se basa en su solubilidad, un estudio
concluye que los compuestos fenólicos de la mashua representan un
excelente antioxidante en la dieta y pueden proteger contra la oxidación en
lípidos (Morillo, 2016).
II.1.2 NOMBRES COMUNES DE LA MASHUA
La mashua presenta innumerables nombres comunes que varían de
acuerdo al país y al idioma
Perú: Anu, Apiñu, Apina-Mama, isano, mashua, mashwa (Quechua), Anu,
anyu, isano, Mafua, Majua, mashua, Mashuar, Mauja, mashwa, Maswallo,
Maxua, Mazuko, (español), Allausu, isañu, Kkayacha (Aymara) (Chirinos,
2018)
Argentina: Sisaño (Aymara), Anu, isaño (Español); Bolivia: Isau, Isañu,
Kkayacha, Mishwa (aymara), Anu, isano, Ocaquisaño (Quechua), Anu,
apilla, Apina Mama, isano, Isañu, Mafua, Majua, mashua, Mashuar, Mauja,
mashwa, Maxua (Español) (Chirinos, 2018).
Chino: Kuai Jing Hua Lzan
10
Colombia: Panel (guambiano), Puel (Páez), cubios, Mafua, Majua, mashua,
Mashuar, Mauja, mashwa, Maxua, Navios, Navos (Español)
Ecuador: Mafua, Majua, mashua, Mashuar, Mauja, mashwa, Maxua
(Español)
Francés: Capucine Tubéreuse (Chirinos, 2018).
II.1.3 CARACTERÍSTICAS AGRONÓMICAS
La producción más alta se encuentra en las zonas de Suni y Puna al sur de
Perú y Bolivia, donde por lo general se cultiva en mezcla con otros
tubérculos. Es una especie de cortos días ya que necesita de 10 a 12 horas
de luz para desarrollar el tubérculo y el período vegetativo es de 175-245
días (6-8meses). Su crecimiento puede tolerar temperaturas bajas y resiste
el ataque de insectos y plagas. Este tubérculo es muy tolerante, por ello
puede cultivarse en suelos pobres sin uso de fertilizantes y pesticidas; aun
en estas condiciones, su rendimiento puede duplicar al de la papa. Sus
suelos requieren desde pH ligeramente acido de 5 a 6, aunque también se
desarrolla entre pH 5.3-7.5. Se asocia con olluco, oca y papas nativas por
su capacidad de control nematicida e insecticida (Pacco, 2015).
II.2. PLAGAS Y ENFERMEDADES
Uno de los principales atributos de este tubérculo es su tolerancia, algunos
artículos indican que no es susceptible a daño a través de plagas o
enfermedades. La mashua posee una gran cantidad de fitoquímicos, que
protegen no sólo el cultivo el crecimiento agresivo de mashua hace que sea
una muy buena cobertura del suelo adecuada para la protección del suelo
en las escarpadas laderas de los Andes. La tolerancia a plagas y
enfermedades, alta productividad y usos polivalentes, son características
que la hacen una planta muy atractiva para la agricultura orgánica (Grau,
2003).
11
II.3 DESCRIPCIÓN BOTÁNICA
Clasificación y descripción botánica del tubérculo Tropaeolum Tuberosum
Tabla 1. Clasificación y descripción botánica del tubérculo
DIVISIÓN ESPERMATOFILITS
Subdivisión
Clase
Súper orden
Orden
Suborden
Familia
Género
Especie
Nombre Científico
Angiosperma
Dicotiledóneas
Dicifloras
Geraniales (Gruinales)
Geraniínes
Tropaeolaceae
Tropaeolum
Tropaeolum tuberosum
Tropaeolum tuberosum
Nombres Comunes
“mashua”, “añu”, “navios”,
“isaño”, “isañu
Fuente: Repositorio institucional Puno – Perú 2015
II.3.1 COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LA MASHUA
Este tubérculo andino posee un alto valor nutritivo y un contenido de agua
comparativamente alta, que van desde 79 a 94% en la materia fresca o
comestible. La principal contribución nutricional de mashua es su alto
contenido de hidratos de carbono, en particular de almidón, y también de
los azúcares con un (20%) (Morillo, 2016).
El contenido de proteína del tubérculo mashua en la materia fresca es alto
(15%) y se aproxima a los valores de patata además de 77,37 mg / 100 g
de materia fresca de ácido ascórbico. Contiene todos los aminoácidos
esenciales excepto histidina; la población acostumbra a comer los
tubérculos hervidos como ingredientes sea en mermeladas o en sopas.
También posee propiedades medicinales potenciales para la fármaco-
12
industria, y tradicionalmente han sido utilizados como antibacteriales,
insecticidas, nematicidas (Aruquipa et al., 2017).
Las poblaciones indígenas de escasos recursos utilizan la mashua para
tratamientos antiinflamatorios de la próstata, lo que se atribuye a su
propiedad de reducir los niveles de testosterona. Se le atribuyen
propiedades curativas para el hígado y riñones, mejoría para los dolores
genitourinarios y excelente ayuda para combatir la anemia (Aruquipa et al.,
2017).
Tabla 2 Composición química de mashua.
COMPOSICIÓN UNIDADES RANGO
ENERGÍA
HUMEDAD
PROTEÍNA
CARBOHIDRATOS
FIBRA
CENIZAS
GRASAS
AZUCARES
POTASIO
FOSFORO
CALCIO
HIERRO
VITAMINA A
TIAMINA
RIVOFLAVINA
NIACINA
VITAMINA C
B- CAROTENO
EQUIVALENTE
(Kcal.)
(%)
(g)
(g)
(g)
(g)
(g)
(g)
(mg)
(mg)
(mg)
(mg)
(mg)
(mg)
(mg)
(mg)
(mg)
(µg)
35-52
79.2-93.8
1.1-2.7
7.0-10.5
0.5-1.5
0.6-1.1
0.5-0.9
5.37-9.33
1.28-1.76
0.61-0.83
10-13
0.8-1.1
09-12
0.1
0.12
0.67
77.5
10
Fuente: (Aruquipa , 2017)
13
II.4. USOS DEL TUBÉRCULO Tropaeolum tuberosum
La utilización de la mashua es variada en la alimentación, medicina y planta
ornamental. Los tubérculos son expuestos al sol para aumentar su
contenido de azucares antes de ser cocinados, igualmente es usada como
componente en sopas, postres y mermeladas. Mientras que las flores y
brotes tiernos son consumidos en ensaladas, cocidos o encurtidos en
vinagre; en las zonas rurales de los andes se prepara en forma de
sancochado, asada o como thayacha que consiste en exponer los
tubérculos por una noche a los efectos de la helada y al día siguiente se
comen, acompañados de miel de caña (Bonete, 2016).
II.4.1 Anti-fertilidad
Reduce el deseo sexual al disminuir la cantidad de testosterona y
dihidrotestosterona en la sangre. Se cuenta que las tropas de los incas
llevaban la mashua como fiambre para olvidarse de sus mujeres. Estudios
demostraron que la administración de extracto de Tropaeolum tuberosum
hidroalcohólico a ratones machos de 21 días, tenía una acción directa sobre
el sistema reproductivo masculino, disminuyendo parámetros espermáticos
(número de espermatozoides y la motilidad de esperma) sin ejercer efectos
tóxicos en los ratones (Chirinos, 2018).
II.4.2 Actividad Antimicrobiana
La mashua además de ser tolerante a las heladas, también tiene capacidad
fungicida, nematicida e insecticida, debido a los glucosinolatos y sus
derivados los isotiocianatos presentes en toda la planta. El origen de estas
cualidades agronómicas, puede deberse a que el añu ha evolucionado en
las zonas más inhóspitas para la agricultura ya que los pobladores
precolombinos hicieron un uso eficiente de las tierras marginales (Bonete,
2016)
14
II.5 CLASIFICACIÓN BOTÁNICA
Según su coloración se pueden clasificar en:
Tubérculos de color uniforme generalmente blanco, amarillo o
anaranjado;
Tubérculos con pigmentos de antocianina ubicados sólo en las yemas;
Tubérculos muy coloreados en las yemas con antocianinas;
Tubérculos con yemas pigmentadas y con franjas longitudinales rojas o
moradas (Chirinos, 2018).
II.6 VARIEDADES DE MASHUA
Existen diferentes variedades y tipos de mashua. La gama de colores de
esta especie no es solo uno de sus atractivos, sino que puede indicar en
qué plato caerían mejor. Por ejemplo, se recomienda que las de color claro
se usen en sopas y las de color oscuro en postres (Junes, 2017)
Se ha contado que la mashua protege la producción de las papas nativas,
es común que alrededor de los cultivos de papas nativas, oca u olluco se
siembre mashua para así espantar a las plagas, ya que este tubérculo no
es lo que buscan los organismos invasores, de esta manera funciona como
un repelente natural, se estima que estas variaciones derivan de
cruzamientos naturales dados en las zonas altas andinas generando
diversas formas ya sean alargadas o fusiformes (Valdivieso, 2014).
15
Fig. 2 Variedades del tubérculo Tropaeolum tuberosum.
Fuente: Cultivariable; Ebay; Peruvian (Organic, 2017)
16
II.6 ANTOCIANINAS TOTALES DE LA MASHUA
El total de antocianinas investigadas en 3 genotipos de mashua negra DP
0224, ARB 5241, AGM 5109, oscilaron entre 45,5-131,9 mg / 100 g de PF,
El genotipo DP 0224 presentó el mayor contenido de antocianinas (131,9
mg / 100 g de PF) y el genotipo AGM 5109 fue el más bajo (Bonete, 2016)
Fig. 3 Genotipos de mashua negra
Fuente: (Chirinos et al, 2006)
17
II.7 ENSAYO ANTIMICROBIANO
Los ensayos antimicrobianos es una forma que tienen los laboratorios para
controlar los procesos infecciosos que se desarrollan en la vida diaria. El
primer paso es lograr el aislamiento de la bacteria u hongo que produce un
cuadro clínico mediante un cultivo. Se realizan entonces pruebas de
sensibilidad in vitro, en las que se puede establecer la respuesta a cualquier
tipo de antibiótico (OMS, 2015).
Existen aún agentes patógenos para los cuales la elección de una terapia
antimicrobiana continúa siendo experimental, porque estos agentes no han
desarrollado resistencia contra los antibióticos. La prueba de sensibilidad
adquiere mayor importancia para algunas especies de microorganismos
patógenos que no tienen una sensibilidad predecible (Wootton, 2014).
La medicina natural ha detectado el potencial de algunas plantas superiores
como terapia antiinfecciosa, para el uso de especies vegetales con base
científica y a su vez la OMS ha estimado que el 80% de los habitantes de
los países en desarrollo dependen de las plantas medicinales para
satisfacer las necesidades de la población, los países tercermundistas
poseen el primer lugar en los programas de estudio (OMS, 2015).
Se estableció un plan para la mejora en la salud de la población, esto
abarca que se prevenga y erradique las distintas enfermedades mediante
el uso de medicamentos alternativos obtenidos a base de plantas, los que
son de muy bajo costo y de alta disponibilidad (OMS, 2015).
18
II.8 RESISTENCIA MICROBIANA
La resistencia microbiana (R) ocurre cuando un microorganismo no es
controlado por elevadas dosis de antibiótico al que previamente es
sensible. Las bacterias, los virus y algunos parásitos pueden desarrollar
resistencia como un mecanismo de defensa o de competencia y ser
refractarios a los efectos de los antibióticos, los antivirales o a los
antiparasitarios respectivamente (Wootton, 2014).
Las bacterias que presentan susceptibilidad intermedia (I) tienen
respuestas variables frente a un antimicrobiano y puede ser susceptible y/o
resistente. Sin embargo, puede ser eliminada si el antibiótico se concentra
en el sitio de infección o se aumenta la dosificación (Wootton, 2014).
Se denomina cepa susceptible (S) o sensible a las bacterias que se ven
inhibidas por los antibióticos como consecuencia de la pérdida o
inactivación de sus mecanismos de defensa. Un tratamiento con la dosis
habitual del antimicrobiano puede detener la infección causada por la
bacteria si esta es susceptible (Wootton, 2014).
19
II.9 TAXONOMÌA Y CARACTERÌSTICAS DE LAS CEPAS EN ESTUDIO
II.9.1. Escherichia coli
Tabla 3.Taxonomía de Escherichia. coli.
REINO Bacteria
FILO Proteobacteria
CLASE Gammaproteobacteria
ORDEN Enterobacteriales
FAMILIA Enterobacteriaceae
GENERO Escherichia
ESPECIE E. coli (E. freundi)
Fuente: Migula – 2009
II.9.1 .1 Características generales de Escherichia coli
Son bacilos Gram negativos, no esporulados que producen indol a partir de
triptófano; además fermentan glucosa y lactosa con obtención de gas.
Como todas las bacterias Gram Negativos, el revestimiento de E. coli
consta de tres elementos la membrana citoplasmática, membrana externa
y un espacio periplásmico constituido por péptido-glucano. Esta última
estructura confiere a la bacteria su forma, rigidez y permite que esta sea
resistente a presiones osmóticas ambientales muy altas. (Beltelgeux, 2016)
Se dice que es una bacteria mesófila, su desarrollo óptimo se da en sangre
caliente. El límite de crecimiento se sitúa alrededor de 7 ºC, lo que indica
que en las industrias alimentarias la cadena de frío es esencial para evitar
el crecimiento de E. coli en los alimentos. La congelación tiene pocos
efectos sobre la población de E. coli en el alimento y no garantiza la
destrucción suficiente de bacterias viables para asegurar su inocuidad. Sin
embargo, la E. coli es sensible a temperaturas mayores a 70 ºC, por lo cual
20
son fácilmente eliminadas y es sumamente importante pasteurizar los
alimentos. (Beltelgeux, 2016).
Además la actividad de agua, la temperatura y el pH influyen en la
proliferación de E. coli. Las condiciones óptimas de desarrollo para estos
parámetros son de 7,2 y 0,99 respectivamente. El desarrollo de E. coli se
detiene a pH extremos inferiores a 3,8, o superiores a 9,5 y valores
inferiores a 0.94, el grado de acidez de un alimento puede contribuir para
factor de protección y garantizar su seguridad (Beltelgeux, 2016).
II.9.2 Staphylococcus aureus
Tabla 4 Taxonomía de Staphylococcus aureus
REINO Bacteria
FILO Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Bacillales
FAMILIA Staphylococcaceae
GENERO Staphylococcus
ESPECIE S. aureus
Fuente: Migula – 2009
II.9.2.1 Características generales de Staphylococcus aureus
Las células de S. aureus crecen en racimos semejantes a las uvas. Los
estafilococos son cocos Gram positivos que miden cerca de 1 μm de
diámetro, no móviles, aerobios facultativos y fermentadores de glucosa
(Gram, 2012).
21
El género Staphylococcus contiene más de 30 variadas especies y muchas
de éstas son habitantes naturales de la piel y las membranas mucosas; no
tienen otro hábitat, excepto cuando están involucradas en infecciones. El
principal reservorio de S. aureus es el ser humano, hallándose en los
portadores sanos, especialmente en las fosas nasales, así como en los
pacientes infectados. La colonización puede presentarse sobre la mucosa
nasal, faringe, epidermis intacta, úlceras crónicas cutáneas, heridas en fase
de cicatrización (Gram, 2012).
El S. aureus posee una gran capacidad para sobrevivir en un ambiente
adverso y, por la acción de sus determinantes de patogenicidad, su
principal contagio se produce por ingesta de alimentos contaminados con
la bacteria. En el ámbito laboral, la transmisión se produce por contacto con
personas, animales (zoonosis) o elementos contaminados (Migula, 2009).
Las infecciones por Staphylococcus tienen un período muy variado de
incubación las principales fuentes de infección son las personas infectadas,
menos frecuente los portadores asintomáticos, manos contaminadas y el
mecanismo de transmisión más importante es el contacto directo. Las
infecciones producidas por S. aureus, sensibles o resistentes a la
meticillina, tienen el mismo espectro clínico, las diferencias vienen dadas
por las implicaciones en el tratamiento y los mecanismos de prevención de
su transmisión (Gram, 2012).
II.9.2.2 Supervivencia ambiental
Sobrevive varias semanas en los cadáveres, en los tejidos, órganos de los
animales (carne); durante pocos días en la piel, en el suelo y en la superficie
de los objetos metálicos y de vidrio. Crece en soluciones salinas con una
proporción de hasta un 15% de cloruro sódico. No presenta formas
esporuladas de resistencia (Gram, 2012).
22
II.9.3 Cándida albicans
Tabla 5 Taxonomía de Cándida albicans
REINO Fungi
FILO Ascomycota
CLASE Saccharomycetes
ORDEN Saccharomycetales
FAMILIA Saccharomycetaceae
GENERO Candida
ESPECIE C. albicans
Fuente: Migula – 2009
II.9.3.2 Características generales de Cándida albicans
La cándida es uno de los géneros en hongos unicelulares también llamados
levaduras. Es la especie más significativa por su importancia clínica género
es Cándida albicans. Las infecciones causadas por estos hongos se
denominan micosis. La Cándida albicans es un comensal de las mucosas
humanas, sobre todo de la mucosa genital, digestiva y oral. (Morales, 2014)
Cándida Albicans se encuentra en las membranas superficiales y en las
mucosas en mínimas cantidades es indemne, pero cuando su crecimiento
aumenta drásticamente puede resultar devastadora para la salud, este
hongo se alimenta de azúcar, hidratos de carbono, comidas fermentadas
como la cerveza, el vinagre y los embutidos. El hongo Cándida genera
toxinas en el torrente sanguíneo que tiene un efecto devastador en el
sistema inmune y nervioso
(Santos, 2018).
23
II.9.3.3 Causas de Candidiasis
La gran parte de las especies de cándida son saprofitas y pueden formar
parte de la flora cutánea, con excepción de la Cándida albicans, que cuando
se encuentra en la piel es agente etiológico de una candidiasis primaria.
Hay muchos factores que predisponen a la infección candidiásica: unos
dependen del huésped y otros de las condiciones ambientales. (Morales,
2014).
Dentro de los primeros están los fisiológicos, los genéticos y los adquiridos.
Así los recién nacidos, las mujeres en el periodo premenstrual o
embarazadas, los pacientes con síndrome de Down, diabetes, linfoma,
leucemia, que toman antibióticos o corticoides o inmunosupresores o tienen
enfermedades debilitantes, tienen mayor facilidad para padecer esta
dermatosis (Cándida, 2018).
Entre los factores ambientales que favorecen la infestación se incluye: la
humedad, el calor, la maceración crónica (por ejemplo, de las comisuras en
los ancianos), las prótesis dentarias mal ajustadas, la fricción entre dos
superficies cutáneas (Candida, 2018).
Situaciones que alteren la flora intestinal o genital protectora, como
es la ingesta prolongada de antibióticos.
Situaciones que aumenten la cantidad de glucosa en sangre:
diabetes, sobrepeso, obesidad, ingesta excesiva de alcohol o
hidratos de carbono.
Humedad excesiva y prolongada.
Situaciones que disminuyan la función del sistema inmune: virus de
la inmunodeficiencia humana (VIH), trasplantes, quimioterapia, etc.
24
II.10 EXTRACTO VEGETAL
Se define como extracto a la concentración en la elaboración del proceso
vegetal con solventes alcohólicos, etanólicos o acuosos constituidos por
principio activo y compuestos pasivo gracias al proceso de maceración, los
principios activos(que son la parte activa de la planta, la que tiene acción
“terapéutica”) del vegetal pasan al disolvente (Ginkel, 2009).
II.10.1 Extractos secos
Actualmente se conoce como extracto seco a un extracto en el cual el
solvente se ha eliminado por completo y estos a su vez se reducen con
facilidad a polvo, permite fácil uso de empleo y dosis (Ginkel, 2009).
II.10.2 Extractos fluidos
Estos son elaborados en forma tal que el peso del extracto corresponde
exactamente al peso de la sustancia empleada desecada por el aire y
pulverizada (Ginkel, 2009).
II.10.3 Conservación de extractos
Consiste en el proceso mediante el cual se obtienen los principios activos
de una planta. Existen varios procedimientos para la obtención de las
sustancias activas de las plantas, dependiendo del tipo de principios activos
y su solubilidad (aceites esenciales, taninos, flavonoides), del uso final
(para alimentación, medicinas, cosmética), de la parte de la planta. La
Farmacopea Europea define los extractos como preparaciones de
consistencia líquida (extractos fluidos y tinturas) o sólida (extractos secos),
obtenidos a partir de drogas vegetales normalmente en estado seco
(Erasmus, 2014).
25
II.11 MÉTODOS PARA EVALUAR LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Los métodos para evaluar la actividad antibacteriana están clasificados, en
tres grupos principales: Métodos de difusión, métodos de dilución y
bioautografía, un cuarto método es el análisis conductimètrico, el cual
detecta el crecimiento microbiano como un cambio en la conductividad
eléctrica o impedancia del medio de cultivo. De este último no se
profundizará en esta revisión (Ramirez, 2009).
Las técnicas de difusión han sido ampliamente usadas para evaluar
extractos de plantas con actividad antimicrobiana. En general se propone
usar los métodos de difusión (en papel o en pozo) para estudiar
compuestos polares, y los métodos de dilución para sustancias polares y
no polares (Ramirez, 2009).
II.11.1 Métodos de difusión
El método de difusión en agar, está apoyado por datos clínicos y de
laboratorios; y presenta la ventaja que sus resultados son altamente
reproducibles. La técnica está basada en el método originalmente descrito
por Bauer et al.,2009 (método de Kirby-Bauer). Este método de difusión en
disco o en pozo fue estandarizado y es actualmente recomendado por el
Subcomité de Ensayos de Susceptibilidad de NCCLS National Committee
for Clinical Laboratory Standards, de Estados Unidos. El fundamento de
esta determinación es establecer, en forma cuantitativa, el efecto de un
conjunto de sustancias, ensayados individualmente, sobre las cepas
bacterianas que se aíslan de procesos infecciosos (Ramirez, 2009).
El método se basa en la relación entre la concentración de la sustancia
necesaria para inhibir una cepa bacteriana y el tamaño o diámetro del halo
de inhibición de crecimiento en la superficie de una placa de agar con un
medio de cultivo adecuado y sembrado homogéneamente con la bacteria a
ensayar y sobre la cual se ha depositado un disco de papel filtro de 6 mm
de diámetro, o se ha sembrado en pozo impregnado con una cantidad
conocida de la sustancia (Ramirez, 2009).
26
II.11.2 Métodos de dilución
El método de dilución en agar o en caldo como test de susceptibilidad
microbiana es utilizado para determinar la concentración mínima
bactericida (MBC) y la Concentración Mínima Inhibitoria (MIC), la cual es
definida como la concentración más baja de sustancia que puede inhibir el
crecimiento visible de un microorganismo después de incubar por 24 horas,
y la (MBCs) como la concentración más baja que puede prevenir el
crecimiento de un organismo después de subcultivar en un medio libre del
compuesto evaluado. Estas variables son una herramienta para investigar
nuevos antimicrobianos (Ramirez, 2009).
En la técnica de dilución en caldo, son utilizados tubos o microplacas para
microdilución que contienen concentraciones crecientes del extracto
vegetal. El organismo en estudio es inoculado en los diferentes tubos o
pozos de las microplacas y la MIC es determinada después de la incubación
(Ramirez, 2009).
II.11.3 Determinación de la MIC
La cuantificación de la actividad in vitro de los antimicrobianos se evalúa
habitualmente mediante algunas de las variantes de los métodos de
dilución. La MIC se ha establecido como "gold Standard" frente a otros
métodos que evalúan susceptibilidad antimicrobiana; además de confirmar
resistencias inusuales, da respuestas definitivas cuando el resultado
obtenido por otros métodos es indeterminado. Se puede realizar en
microdilución para lo cual se escogen las placas que tienen 96 pocillos (12
mm x 8 mm), en las que se estudia en cada una de ellas, el mismo
microorganismo, 8 antimicrobianos y 11 diluciones la última columna se
suele utilizar como control de crecimiento o viceversa (Ramirez, 2009).
Las placas de microdilución deben sellarse con adhesivo para evitar la
evaporación del medio de cultivo cuando se incuben. Tras la incubación se
observa la turbidez o se procede a la adición del bromuro de 3-(4,5-dimetil-
2-tiazolil)-2,5- difeniltetrazolium (MTT). Las células vivas y
metabólicamente activas son capaces de reducir el MTT, de color amarillo
27
en solución a formazán, compuesto insoluble que precipita en forma de
cristales violeta, evidenciando de esta forma actividad metabólica
(Ramirez, 2009).
II.11.4 Difusión en agar (Técnica de Kirby & Bauer)
La técnica de difusión en agar, presenta varias ventajas como:
es fácil de efectuar y de gran reproducibilidad
bajo precio
no requiere equipo especial
sus resultados son fácilmente interpretados por los clínicos
es muy flexible a la hora de escoger los antibióticos a probar.
Dentro de sus desventajas está el hecho de que brinda sólo información
cualitativa, la técnica de difusión en agar es cualitativa y sus resultados se
pueden interpretar únicamente como sensible, intermedio o resistente, y
está diseñada específicamente para bacterias de crecimiento rápido domo
los Staphylococcus sp. O los integrantes de la familia
Enterobacteriaceae (Herrera, 1999).
En esta técnica el inóculo bacteriano es llevado a una concentración igual
a la del estándar 0,5 de McFarlane, se aplica sobre la superficie de una
placa seca de agar Müeller-Hinton que tenga un pH entre 7, 2 y 7,4 medido
a temperatura ambiente y una vez solidificado el medio de cultivo. La cepa
se debe inocular sobre la superficie del medio sólido de cultivo (Caamaño,
2015)
La cepa se debe inocular sobre la superficie del medio de forma tal que se
logre un crecimiento confluente. Una vez realizado esto, en un plazo no
mayor de 15 minutos, se procede a colocar los discos o las pastillas con el
antibiótico (Herrera, 1999).
28
Si se emplean placas de petri de 100 mm de diámetro, el número máximo
de discos a colocar es de 5, Luego la placa se incuba a 37ºC en aire
ambiente y por un periodo no mayor a las 18 horas excepto para los
aislamientos de Staphylococus sp y Enterococcus sp, para los cuales se
recomienda una incubación de 24 horas, principalmente para lograr una
mejor detección de la resistencia a la oxacilina y a la vancomicina.
Cada plato es observado en una luz indirecta y cada halo de inhibición es
medido utilizando un caliper o en su defecto una regla graduada en la forma
adecuada. En el caso de que no se presente un halo, no se debe reportar
0 mm, se debe reportar 6 mm, ya que ese es el diámetro del disco. Los
diámetros alrededor de cada disco son medidos y su interpretación se basa
en guías publicadas cada cierto tiempo, por la NCCLS (National Committee
for Clinical Laboratory Standards) y el organismo es reportado como
sensible, intermedio o resistente al antibiótico testado (Herrera, 1999).
Cada antibiótico tiene su halo de inhibición específico y éste depende del
tamaño de la molécula del antibiótico y su polaridad; de esta forma existen
antibióticos con un peso molecular bajo como la penicilina, que tendrá
mucha capacidad para migrar, por lo tanto, su halo, en el caso de una cepa
sensible tendrá un diámetro muy amplio (Herrera, 1999).
En el caso de la vancomicina, que tiene una molécula muy grande y muy
hidrofóbica, su halo de inhibición será muy pequeño. De esta manera, no
se puede afirmar, que, para una cepa determinada, ésta es más sensible a
la penicilina que a la vancomicina, sólo porque el primero tenga un halo de
inhibición mucho mayor. Una vez incubado por 24 horas, si el halo
encontrado es menor de 20 mm, la cepa se considera resistente y debe ser
confirmado realizando una prueba más específica que nos informe hasta
dónde llega esa concentración (Herrera, 1999).
29
CAPÍTULO III. MARCO METODOLÓGICO
II.1 METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN
La investigación que se empleará en este estudio será de tipo: empírico y
experimental.
II.2 VARIABLES DEPENDIENTE
Variedad de la especie vegetal
Extractos
II.3 VARIABLE INDEPENDIENTE
Actividad antibacteriana
III.4 MATERIALES DE LABORATORIO
Espátulas
Papel filtro
Crisoles
Matraces Erlenmeyer 100 ml
Pipetas graduadas 2 ml
Regla
Beakers 50, 100 ml
Agitadores
Embudos
Probetas 250 ml
Papel filtro libre de cenizas
Desecador
III.4.1 EQUIPOS DE LABORATORIO
Estufa
Balanzas
Reverberos
Baño maría
Autoclave
30
III.4.2 REACTIVOS
Éter etílico
Agua destilada
III.4.3 AGARES
Escherichia coli - Agar MacConkey
Staphylococcus aureus – Agar Manitol salado
Cándida albicans – Agar Dextrose Sabouraud
III.4.3 CEPAS MICROBIOLÓGICAS
E. coli ATCC 5922
S. aureus Aislamiento clínico
C. albicans Aislamiento clínico
31
Residuo solido
Durante 15 días, a temperatura
ambiente cubierto de la luz.
III.5 ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DEL TUBÉRCULO Tropaeolum
tuberosum EN SUS DIFERENTES VARIEDADES
III.5.1 Recolección y selección del material vegetal
El material vegetal elegido para este estudio fue el tubérculo Tropaeolum
tuberosum del cual se utilizó el tubérculo entero para preparar el extracto.
Para este trabajo se eligió el método de maceración en alcohol por la
posibilidad que los metabolitos de interés sean solubles en este solvente.
Para la preparación de los extractos alcohólicos (etanol 90 %) se tomó 60
g del tubérculo completo y se dejó reposar 15 días en 300 ml de solvente
manteniendo el recipiente en la oscuridad. Después fueron filtrados a través
de un papel de filtro Whatman número 1 y evaporados a sequedad
formando un extracto alcohólico seco para reconstituir. La Fig. 3 muestra la
representación esquemática de recolección y selección de material vegetal.
Filtrar
Fig. 4 Recolección y selección del material vegetal.
Material vegetal 60g
Medir volumen y
determinar la
concentración
Extracto etílico
Recolección de la planta
32
III.6 PARÁMETROS FÍSICO-QUÍMICOS
La NRSP (Norma Ramal de Salud Pública) determina los parámetros
descritos a continuación:
III.6.1 CARACTERÍSTICAS ORGANOLÉPTICAS:
III.6.1.1 Determinación del olor:
Se tomó una tira de papel secante de aproximadamente 1 cm. de ancho
por 10 cm. de longitud y se introdujo un extremo en la muestra de ensayo.
Se olió y se determinó si correspondía con las características del producto.
III.6.1.2 Determinación del color:
Se tomó un tubo para ensayos limpio y seco, se llenó hasta las tres cuartas
partes con la muestra de ensayo y se observó el color, la transparencia, la
presencia de partículas y la separación en capas. Se informó el resultado.
III.6.2 Sólidos totales:
De la muestra de ensayo previamente homogenizada se transfirió 2
ml a una cápsula de porcelana seca y previamente tarada; la cápsula
se colocó en un baño de agua y se evaporó hasta que el residuo
estuvo aparentemente seco, posteriormente se pasó a una estufa a
una temperatura de 105°C durante 3 horas. Se retiró la cápsula de la
estufa, se colocó en una desecadora hasta que alcanzó la
temperatura ambiente y se pesó. Se repitió el proceso anterior, pero
empleando solo 60 minutos de secado, las veces necesarias, hasta
obtener una masa constante.
Los sólidos totales (St) (g/100 ml) se calcularon mediante la fórmula
siguiente:
�� = (�� − �)
� � 100
33
Donde:
Pr....................masa de la cápsula más el residuo (g).
P.....................masa de la cápsula vacía (g).
V.....................volumen de la porción de ensayo (ml).
100..................factor matemático.
III.7 OBTENCIÓN DEL EXTRACTO ALCOHÓLICO
Tabla 6 Obtención de los extractos de las variedades de mashua
ESPECIES
DE
Tropaeolum
tuberosum
PARTE A
ESTUDIAR
EXTRACTOS A
EVALUAR
Rosada
Tubérculo
completo
Extracto Etanólico
Amarilla
Tubérculo
completo
Extracto Etanólico
Negra
Tubérculo
completo
Extracto Etanólico
Se reunió la especie vegetal descrita en la Tabla 6, sub-siguiente se puso
a secar el tubérculo completo y una vez seco se disminuyó el tamaño de
partícula de forma manual. Para obtener los extractos se adicionó 300/ml
34
del solvente (etanol 90%) se agregó 60 g de la especie vegetal y se dejó
en maceración durante 15 días con movimiento diario.
Los extractos se los conservó como un extracto concentrado y se almacenó
a temperatura ambiente, hasta el momento de ser analizado.
Se calculó el peso de los extractos y su equivalencia en gramos (g/ml). Con
ellos se evaluó la actividad antimicrobiana contra bacterias y hongo, a la
concentración detallada en Resultados.
III.8 EL MÉTODO KIRBY-BAUER (MÉTODO DE DIFUSIÓN EN AGAR).
La actividad antimicrobiana de los extractos alcohólicos del tubérculo
Tropaeolum tuberosum fue probada tomando como modelo de organismo
gram-positivo, Staphylococcus aureus, gram-negativo E. coli y el hongo
Cándida albicans.
Las bacterias fueron aisladas por el laboratorio de microbiología II de la
Facultad de Química y Farmacia y mantenidas en Agar Müller Hilton (MH).
Los microorganismos usados fueron seleccionados bajo los siguientes
criterios:
Representan diferentes tipos de microorganismos
Son agentes patógenos para humanos, por su relación con los
diferentes cuadros clínicos que causan enfermedades
Crean resistencia con mucha facilidad
Este ensayo antimicrobiano se realizó mediante el método de difusión en
placas de agar.
Se usó como control positivo de inhibición los antimicrobianos en discos
Gentamicina 30 µl y Fluconazol a 10µl, los extractos fueron aplicados en
filtros blancos en volúmenes de 10, 20 y 40 µl y como control negativo
etanol 70 %.
35
Las placas se incubaron a 37ºC durante 24 horas para E. coli y
Staphylococcus aureus y durante 48 horas para el hongo Cándida albicans.
Se inoculó la superficie de los agares MacConkey (E. Coli), Manitol salado
(Staphylococcus aureus), Dextrosa Sabouraud (Cándida albicans) con la
cepa respectiva. Luego se vertieron 10, 20 y 40 µL de cada uno de los
extractos etanólicos en cada uno de los discos de papel filtro (Whatman No.
42) y se colocaron sobre las superficies de cada agar. Todos los
experimentos se llevaron a cabo por triplicado; la actividad antimicrobiana
de los extractos fue determinada mediante la medición del diámetro del halo
de inhibición en milímetros y en distintas direcciones (0º, 45º, 90º, 135º,
180º)
III.8.1 FÁRMACOS DE REFERENCIA.
Se utilizaron Gentamicina 30 µl/ml y Fluconazol a 10µl/ml como controles
positivos de actividad antimicrobiana.
III.8.2 MEDIOS DE CULTIVO.
Las cepas liofilizadas se reactivaron en tubos de agar inclinado con agar
Nutritivo (bacterias) y agar Sabouraud-Dextrosa (levadura) y se incubaron
por 24 horas a 37° C excepto la levadura que se incubó por 48 horas.
36
CAPÍTULO IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
IV.1 DETERMINACIÓN DE SÓLIDOS TOTALES
Los extractos de las especies vegetales varian en su concentración para
poder realizar comparaciones entre distintos estudios estos se deben
evaluar en base a concentración ( Tabla 7).
Tabla 7 Resultado de la Determinación de sólidos Totales
Extr
acto
s
Peso de
cápsul a vacía
(g)
Cápsula +
muestra, 2 horas
(g)
Cápsula +
muestra, 3 horas
(g)
Cápsula +
muestra, 2 horas
(g)
Cápsula +
muestra, 2 horas
(g)
R1 30,19 32,01 31,28 30,28 30,27
R2 33,16 34,98 33,27 33,26 33,26
R3 33,86 35,68 33,97 33,97 33,97
A1 24,05 25,87 24,28 24,25 24,25
A2 27,47 29,29 27,64 27,62 27,62
A3 25,85 27,67 26,01 26,01 25,97
N1 20,33 22,15 20,49 20,47 20,42
N2 21,69 23,51 21,90 21,88 21,60
N3 20,36 22,18 20,56 20,51 20,47
* R: Rosada, A: Amarilla, N: Negra
En la Tabla 7 se realizaron muestras por triplicado para sólidos totales y se
determinó que la que contenía menor número en humedad después de un
día en estufa revisando cada 3 y 2 horas fue el extracto de mashua Negra.
37
IV.2 DETERMINACIÓN DE LOS PARÁMETROS FISICOQUÍMICOS.
Se evaluaron características organolépticas y se determinó los sólidos
totales los resultados obtenidos por las diversas variedades observar
(Tabla 8)
Tabla 8 Resultado de la Determinación de parámetros físico-químicos
EXTRACTOS DE
Tropaeolum tuberosum, VARIEDAD
CARACTERÌSTICAS ORGANOLÈPTICAS
SÒLIDOS TOTALES
(g/100 ml)
DESVIACIÒN ESTÀNDAR
(g/100 ml)
ROSADA
Color: amarillo
Olor: Inodoro
32,34
± 1,96
AMARILLA
Color: amarillento
Olor: Inodoro
25,81
± 1,69
NEGRA
Color: café oscuro
Olor: dulce
20,72
± 0,67
El rendimiento de sólidos totales en la Tabla 8 fue de 32,3 g ̷ µl para la
variedad rosada, 25,8 g ̷ µl para la variedad amarilla y menor 20,7 g ̷ µl para
la variedad negra lo cual demuestra que la mashua de color negra está
dentro del rango determinado para sólidos totales y menor desviación
estándar con mayores características organolépticas.
38
IV.3 DETERMINACIÓN DEL RENDIMIENTO DE LOS EXTRACTOS
Para la estandarización de los procedimientos de producción se tomo
nota de los volúmenes de solvente recuperados (Tabla 9).
Tabla 9 Resultados de la Determinación de rendimiento de los extractos
EXTRACTOS
ALCOHÓLICOS
PESO DE
MUESTRA
INICIAL
VOLUMEN
DEL
SOLVENTE
INICIAL
PESO DE
MUESTRA
FINAL
VOLUMEN
SOLVENTE
FINAL
variedad rosada 60,2 mg 300 ml 58,5 mg 45 ml
variedad amarilla 60,1 mg 300 ml 57,1 mg 38 ml
variedad negra 60,3 mg 300 ml 58,3 mg 35 ml
En la Tabla 9 el -rendimiento de los extractos también fue variado, entre 35
ml para la variedad negra, 38 ml para la amarilla y 45 ml para la variedad
rosada, dando menor ml en volumen final de solvente.
IV.3 PESOS DE PRINCIPIOS ACTIVOS EN FILTRO
Para facilitar la comparación de la concentración de sustancias usadas en
el ensayo biológico se determinaron los pesos de principios activos
utilizados en el antibiograma (Tabla 10).
39
Tabla 10 Resultados de los pesos de principios activos en papel filtro de antibiograma
VARIEDAD
SUSTANCIA SECA EN FILTRO
10 µl 20 µl 40 µl
Rosada 3,23 µg 6,46 µg 12,92 µg
Amarilla 2,58 µg 5,16 µg 10,32 µg
Negra 2,07 µg 4,14 µg 8,28 µg
El cálculo de las concentraciones de nuestro vegetal utilizado para el
ensayo microbiológico indicó que los extractos de la variedad rosada fueron
los más concentrados, seguidos por los extractos de la variedad amarilla,
mientras que fue menor para la variedad negra ver Tabla 10, en la Fig. ---
podemos ver las cajas aisladas con cada uno de los extractos.
40
IV.4 ANÁLISIS DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DEL EXTRACTO
DEL TUBÉRCULO Tropaeolum tuberosum
IV.4 .1 Ensayo 1
De acuerdo a los datos expresados en la siguiente (Tabla 11) se pudo
observar que el extracto etanólico inicial de Tropaeolum tuberosum carece
de actividad antimicrobiana a concentración 3,2 μg/ml y que no se detecta
actividad antimicrobiana las variedades rosada y amarilla.
Tabla 11 Determinación de la actividad antimicrobiana con los controles
positivos
CONTROL
POSITIVO
CEPAS RESULTADOS DIÀMETRO
DEL HALO
DE
INHIBICIÒN
Gentamicina E. Coli S 21 mm
Gentamicina S. aureus S 20 mm
Fluconazol C.albicans R 15 mm
*S=sensible I=intermedio R=resistente
Es interesante observar que el extracto de mashua negra, pero no los de
las variedades amarilla y rosada, presentaron actividad antibacteriana
frente a cepas de E. coli y S. aureus. Esta actividad antibacteriana aparece
más prominente si se toma en consideración que la concentración de
sustancia seca en los filtros de los antibiogramas era en realidad menor en
el extracto de mashua negra comparado con los extractos de las especies
amarilla y rosada.
41
Fig. 5 Control Positivo en C. albicans
Fig. 6 Actividad contra C. albicans
Fig. 7 Control Positivo en E. coli
Fig. 8 Actividad contra E. coli
42
Fig. 9 Control Positivo en S. aureus
Fig. 10 Actividad contra S. aureus
20 mm
La evaluación de la actividad antimicrobiana se realizó con 10 l de los
extractos (Tabla 12)
Tabla 12 Resultados del ensayo de la actividad antimicrobiana con los
extractos etanólicos de Tropaeolum tuberosum
VARIEDAD CEPAS UNIDAD
( 10 µl)
Rosada
E. coli
S. aureus
C. albicans
R
R
R
Amarilla
E. coli
S. aureus
C. albicans
R
R
R
Negra
E. coli
S. aureus
C. albicans
I
I
R
*S=sensible I=intermedio R=resistente
43
La actividad antimicrobiana fue parcial para la variedad negra por lo que se
decidió volver a repetir el ensayo, pero a volúmenes de 20 y 40 μl con solo
18 horas de incubación (Tabla 12).
IV.4 .2 Ensayo 2
Se pudo observar que el extracto etanólico inicial de Tropaeolum
tuberosum carece de actividad antimicrobiana a volúmenes de 20 y 40 μl,
para las variedades rosada y amarilla.
La variedad negra presentó una inhibición bacteriana a volúmenes de 20 y
40 a las 18 horas. Los halos de inhibición con un vernier dieron los
siguientes resultados: (Tabla 13).
Tabla 13 Segundo ensayo de la actividad antimicrobiana con los extractos
etanólicos de Tropaeolum tuberosum
VARIEDAD CEPAS UNIDAD
(20 µL)
UNIDAD
(40 µL)
Rosada
E. Coli
S. aureus
C. albicans
R
R
R
R
R
R
Amarilla
E. Coli
S. aureus
C. albicans
R
R
R
R
R
R
Negra
E. Coli
S. aureus
C. albicans
S
S
R
S
S
R
*S=sensible I=intermedio R=resistente.
44
Fig. 11 Actividad antimicrobiana en C. albicans frente a los extractos de mashua n: Negra; R: rosada; A;
amarilla
Fig. 12 Actividad antimicrobiana en C. albicans frente a los extractos de mashua n: Negra; R: rosada; A;
amarilla
Extr
acto
alc
oho
ólic
o d
e M
ash
ua
40
l
Extr
acto
alc
oho
ólic
o d
e M
ash
ua
40
l
45
Los resultados del Ensayo 2 confirmaron resultados del Ensayo 1 ninguna
de las tres variedades de mashua presento actividad antifúngica en contra
de C. albicans, aunque esta pregunta permanece abierta ya que la cepa de
C. albicans usada fue un aislamiento clínico resistente al Fluconazol.
Nuevos ensayos con cepas definidas de género Cándida se requieren para
aclarar esta pregunta.
Fig. 13 Actividad antimicrobiana en S. aureus frente a los
extractos de mashua n: Negra; R: rosada; A; amarilla E
xtr
acto
alc
oho
ólic
o d
e M
ash
ua
40
l
46
IV.5 CONCLUSIONES
Los valores más altos de sólidos totales se obtuvieron en la variedad rosada
(32,34g ̷ 100 ml), mientras que para la variedad amarilla se obtuvo un valor
intermedio de (25,89 g ̷ 100 ml) y el valor menor se obtuvo en la variedad
negra (20,12 g ̷ 100 ml).
Estos parámetros cumplen con el rango establecido para drogas vegetales.
Los resultados obtenidos mediante el método de difusión de la técnica de
Kirby & Bauer demuestran que los extractos del tubérculo Tropaeolum
tuberosum en sus variedades de (jachir isañu) Rosada y (killu isañu)
Amarilla en sus tres repeticiones y dos ensayos realizados no presentaron
actividad antimicrobiana en ninguna de las concentraciones contenidas en
10, 20, 40 µl frente a cepas bacterianas de E. coli, S. aureus ni actividad
fúngica frente a C. albicans.
El ensayo inicial con 10 µl de extracto etanólico de la variedad negra dió
resultados inhibitorios intermedios.
El ensayo confirmativo con 20 y 40 µl indica claramente sensibilidad de E.
coli y S. aureus. Los resultados indican que la hipótesis planteada fue
correcta para los extractos etanólicos de mashua.
47
IV. 6 RECOMENDACIONES
Se recomienda usar cepas ATCC certificadas y estándares.
También se recomienda ampliar el estudio microbiológico aplicando
el método de CIM: Concentración inhibitoria mínima y se recomienda
la elaboración y evaluación de un fitofármaco.
Los resultados prometedores de este estudio justifican la ampliación
de los ensayos para incluir otras especies bacterianas y fúngicas.
Estudios de continuación deben identificar los metabolitos
responsables de la actividad antimicrobiana.
48
IV.8 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1 Aruquipa, R., Trigo, R., Bosque, H., Mercado, G., & Condori, J.
(2017). El Isaño (Tropaeolum tuberosum) un Cultivo de Consumo y
Medicina Tradicional en Huatacana para el Beneficio de la Población
Boliviana. RIIARn, 3(2), 146–151.
https://doi.org/10.1038/bmt.2010.149.
2 Majowicz SE, Scallan E, Jones-Bitton A, Sargeant JM, Stapleton J,
Angulo FJ, Yeung DH, Kirk MD. Global incidence of human Shiga
toxin-producing Escherichia coli infections and deaths: a systematic
review and knowledge synthesis. Foodborne Pathog Dis. 2014.
11:447-55. doi: 10.1089/fpd.2013.1704. PMID: 24750096
3 Bernal, R., & Guzman, U. (1984). Antibiograma Y Discos
Normalización De La Técnica De Kirby-Bauer. Biomedica, 4(3 y 4).
https://doi.org/10.7705/biomedica.v4i3-4.1891.
4 De Oliviera Santos, GC et al. 2018. Candida infections and
therapeutic Strategies: mechanisms of action for traditional and
alternative Agents. J. Agric. Food Chem. 54: 7089: 7097.
5 Cardozo, O., & Cortez, J. (2018). Estudio Farmacognóstico Y
Fitoquímico Preliminar Del Tubérculo De Tropaeolum tuberosum
Spp Tuberosum (Ruíz & Pavón, Kuntze), Mashua Variedad Negra.
Tesis, facultad de Ciencias Quimicas, Universidad de Guayaquil.
Enlace: http://repositorio.ug.edu.ec/handle/redug/33609
6 Campos D, G Noratto, R Chirinos, C Arbizu, W Roca, L Cisneros-
Zevallos. 2006. Antioxidant capacity and secondary metabolites in
four species of Andean tuber crops: native potato (Solanum sp.),
mashua (Tropaeolum tuberosum Ruiz & Pavón), Oca (Oxalis
tuberosa Molina) and ulluco (Ullucus tuberosus Caldas). J of the
Science of Food and Agriculture. 86: 1481-1488.
https://doi.org/10.1002/jsfa.2529
7 Chirinos, R. et al. (2006). High-Performance Liquid Chromatography
with Photodiode Array Detection (HPLC−DAD)/HPLC−Mass
Spectrometry (MS) Profiling of Anthocyanins from Andean Mashua
49
Tubers (Tropaeolum tuberosum Ruız & Pavon) and Their
Contribution to the Overall Antioxidant Activity. J Agric Food Chem
54:7089-7097.
8 CHUA, W. P. (2015). “evaluación del efecto y cocción de mashua.
puno – perú.http://repositorio.unap.edu.pe/handle/UNAP/2415.
9 Altemimi A, Lakhssassi N, Baharlouei A, Watson DG, Lightfoot DA.
2017. Phytochemicals: Extraction, Isolation, and Identification of
Bioactive Compounds from Plant Extracts. Plants (Basel); 6). pii:
E42. doi: 10.3390/plants6040042. PMID: 28937585
10 Espín, S., Villacrés, E., & Brito, B. (2004). Caracterización Físico-
Química, Nutricional y Funcional de Raíces y Tubérculos Andinos.
Composición química y valor nutricional de las RTAs. Raíces y
Tubérculos Andinos: Alternativas para la Conservación y Uso
Sostenible en el Ecuador. Capitulo IV, 92–116. Retrieved from
http://cipotato.org/wp-
content/uploads/2014/06/RTAs_Ecuador_04.pdf
11 Moré E; M. Fanlo; R. Melero; R. Cristóbal. 2013. Guía para la
producción sostenible de plantas aromáticas y medicinales. Centre
Tecnológico Forestal de Catalunya, Programa Erasmus de la Unión
Europea. Enlace: http://apsb.ctfc.cat/docs/GUIA%20PAM-
CASTELLAfinal.pdf
12 Grau, A., Ortega, R., Nieto, C., & Hermman, M. (2003). Mashua
(Tropaeolum tuberosum Ruız & Pav.). Promoting the conservation
and use of underfertilized and neglected crops. International Potato
Center, Lima, Peru/International Genetic Resources Institute
(IPGRI), Rome, Italy.
13 Oliveira D, Borges A, Simões M. 2018. Staphylococcus aureus
Toxins and Their Molecular Activity in Infectious Diseases. Toxins
(Basel). 19; 10(6). pii: E252. doi: 10.3390/toxins10060252. PMID:
29921792
50
14 Herrera Marco Luis. 1999. Pruebas de sensibilidad antimicrobiana:
Metodología de laboratorio. Rev. méd. Hosp. Nac. Niños (Costa
Rica). 34( Suppl ): 33-41. Available from:
15 Morillo, A.; Morillo, Y.; Tovar, Y. 2016. Caracterización molecular de
cubios (Tropaeolum tuberosum Ruíz y Pavón) en el departamento
de Boyacá. Rev. Cienc. Agr. 33(2):32-42. doi:
http://dx.doi.org/10.22267/rcia.163302.50
16 Cruz S, P Díaz, G Mazón, D Arias, M Calderón y A Herrera. 2017.
Genoma de Candida albicans y resistencia a las drogas. Salud
Uninorte. Barranquilla (Col.) 2017; 33 (3): 438-450.
17 Chirinos, L. (2018). EFECTO HIPOGLUCEMIANTE DE DOS
VARIEDADES DE MASHUA (Tropaeolum tuberosum Ruiz y Pavón):
NEGRA Y AMARILLA EN RATAS WISTAR DIABÉTICAS
INDUCIDAS POR ALOXANO. Lima- Peru.
http://repositorio.unap.edu.pe/bitstream/handle/UNAP/7219/Laura_
Chirinos_Yeny_Torres_Miramira_William.pdf?sequence=1&isAllow
ed=y
18 INIAP. (2010).
19 OMS. (2015). Estrategia Mundial de la OMS para Contener la
Resistencia a los Antimicrobianos. Acta Agronomica Sinica (China),
41(2), 251–262. https://doi.org/10.3724/SP.J.1006.2015.00251.
20 Pacco, W. (2015). Evaluación del Efecto del Soleado y la Cocción
en la Capacidad Antioxidante del Puré Deshidratado de Mashua
(Tropaeolum tuberosum R. et P.). Tesis, facultad de Ciencias
Agrarias, Universidad Nacional del Altiplano, Puno, Peru. Enlace:
http://repositorio.unap.edu.pe/handle/UNAP/2415
21 Beltran, A.F. & Mera, J.G. (2013). Elaboración del Tubérculo Mashua
(Tropaeolum tuberosum ) Troceada en Miel y Determinación de la
Capacidad Antioxidante. Tesis, facultad de Ingenieria Quimica,
Universidad de Guayaquil. Retrieved from
51
http://repositorio.ug.edu.ec/bitstream/ redug/3504/1/1095.pdf.
22 Suquilanda, M. B. (2012). Producción Orgánica de Cultivos Andinos,
Manual de la FAO (Food and Agriculture Organization of the United
Nations), pagina 126. Enlace:
http://www.mountainpartnership.org/fileadmin/user_upload/mountai
n_partnership/docs/1_produccion_organica_de_cultivos_andinos.p
df
23 Maugeri G, Lychko I, Sobral R, Roque ACA. 2019. Identification and
Antibiotic-Susceptibility Profiling of Infectious Bacterial Agents: A
Review of Current and Future Trends. Biotechnol J. 14(1):e1700750.
doi: 10.1002/biot.201700750. PMID: 30024110
24 Junes, R. (2017). Evaluación de la actividad antioxidante in vitro y
efecto regenerador in vivo de una crema cosmética con extracto
liofilizado de mashua (Tropaeolum tuberosum R & P). Tesis, facultad
de Farmacia y Bioquimica, UNMSM, Lima, Peru.
25 Ramirez, L. S. y Marin D. (2009). Metodologias para evaluar in vitro
la actividad antibacteriana de compuestos de origen vegetal.
Scientia et Technica 42: 263-268.
26 Bonete. (2016). Estudio de cuatro tubérculos y raíces tuberosas no
tradicionales. Unibe, 37- 67.
27 Manrique, I. (2013). Tropaeolum tuberosum Ruíz & Pav . Colección
de germoplasma de mashua conservada en el Centro Internacional
de la Papa (CIP). 122.
28 Ruiz, J. R., & Roque, M. (2009). Antimicrobial activity of four plants
from Peruvian north-east. Ciencia e Investigación - Unmsm, 12(1),
41–47.
52
IV.9 APÉNDICES O ANEXOS
ANEXO 1 Obtención de los extractos
Fig.14 Filtrado de los extractos de la variedad Rosada y amarilla
Fig. 15 Filtrado de los extractos de la variedad Negra
53
Fig.16 Extractos de las variedades del tubérculo Tropaeolum tuberosum
54
ANEXO 2 Determinación de sólidos totales
Fig. 17 Cápsulas en baño maría Fig.18 Cápsula después de 40
minutos en baño maría.
Fig. 19 Cápsulas en estufa
A= mashua Negra
B= mashua Amarilla
A= mashua Rosada
55
ANEXO 3 Inicio de la parte experimental
Fig. 20 Agares E. coli, S. aureus, C. albicans
Fig. 21 Micropipeta para los µl de los extractos
Fig.22 Cajas Sembradas con discos de extracto
56
TABLAS
Tabla 14 Resultados de los parámetros estadísticos de las variedades del tubérculo
Variedad de mashua
Promedio
Desviación estándar
Rosada
32,5
± 1,96
Amarrilla
25,95
± 1,69
Negra
20,83
± 0,67
