Inactivacin de bacterifagos lcteos por sanitizantes y
desinfectantes. Cynthia Fontes Candia.
Diapositiva 2
Introduccin Los bacterifagos (fagos) son parsitos
intracelulares obligados que se multiplican al interior de las
bacterias, haciendo uso de sus maquinarias biosintticas. Fagos
virulentos que infectan bacterias de acido lctico aun son un
problema en productos fermentados.
Diapositiva 3
Fuentes de los fagos en las plantas: Los ingredientes aadidos a
la leche. Bpms de los empleados. Limpieza ineficaz de los equipos.
El aire ambiente. La mayora de los fagos que infectan las BAL
resisten la pasteurizacin y en ocasiones altas presiones.
Diapositiva 4
Desinfectantes y sanitizantes. Muchos desinfectantes y
sanitizantes comerciales se han utilizado en los ltimos aos para
controlar la contaminacin microbiana pero su eficacia en fagos aun
es desconocida. Los desinfectantes que estn en contacto con
alimentos deben cumplir varios criterios: Niveles de residuos
mnimos. Baja toxicidad. Eficacia antimicrobiana. Mnimo de reduccin
de 3log de bacterias o virus en 5min. En uno de alta demanda es
necesario una reduccin de 5log en 3s.
Diapositiva 5
Objetivo. Medir la eficacia de los desinfectantes en contacto
con los alimentos tradicionales y comerciales en virus que afectan
a las bacterias acido lcticas en un escenario con condiciones
adversas utilizando un protocolo estandarizado.
Diapositiva 6
Materiales y mtodos. Cepas, virus y condiciones de crecimiento.
Fago P008 fue seleccionado como representante del grupo
lactococcal. Estos por se los mas comunes en formulaciones lcticas.
Se eligi tambin p1532 porque se demostr que es resistente a
tratamientos de calor. Fago 2972 se eligi como referencia para los
fagos de estreptococos. Y fagos B1 fueron los representantes de los
fagos lactobacillius.
Diapositiva 7
Condiciones de crecimiento Las cepas bacterianas se cultivaron
en M17 a 30C para cepas lactoccocal y LM17 a 42C para las cepas
estreptoccicas. Las cepas de lactobacillus se cultivaron en MRS a
37C. Se realizo el conteo en placa.
Diapositiva 8
Desinfectantes. Se eligieron 21 desinfectantes. La concentracin
qumica usada fue la recomendada en la ficha tcnica de cada
sanitizante. Todos los desinfectantes concentrados se diluyeron en
agua endurecida para una concentracin deseada de 300mg/kg
CaCO3
Diapositiva 9
Diapositiva 10
Protocolo de inactivacin de fagos. Todos los productos qumicos
fueron probados contra el virus P008 en presencia de suero de
leche. Se seleccionaron y se probaron los desinfectantes ms
eficaces contra el virus P008 pero en la presencia de leche. Los
desinfectantes con los cinco mejores resultados de inactivacin
fueron probados en sus mas bajas concentraciones efectivas contra
un conjunto de ocho virus en la presencia de 1 % de leche o de
suero de leche ( v / v ).
Diapositiva 11
Control Para cada experimento se proceso un control de agua
dura (control positivo, con virus) para ver el potencial de
inactivacin. Los controles negativos tambin fueron procesados para
ver la esterilidad de las soluciones utilizadas. Durante cada
experimento se titularon las soluciones madre de fagos para
verificar la validez del control positivo.
Diapositiva 12
Anlisis estadstico. Se realizaron 3 repeticiones de cada
experimento. Para el analisis de eficiencia relativa todos los
desinfectantes se compararon con Oxi-D, ya que es el mas utilizado
por la industria lechera. Los datos se analizarob bajo un
ANOVA
Diapositiva 13
Resultados No fueron efectivos en la inactivacin del virus P008
( P 5log reducidas en todos los tiempos y []. *Compuestos de amonio
cuaternario. * cidos aninicos Inactivacin del fago POO8 en
suero.
Diapositiva 14
Resultados Los desinfectantes redujeron el virus POO8 por lo
menos 4log a su respectiva concentracin mas baja y tiempos de
contacto de 2min. En sus concetraciones altas redujeron cerca de
5log Inactivacin del fago POO8 en leche.
Diapositiva 15
Resultados Todos los desinfectantes fueron muy eficaces,
reduciendo >4log. El tiempo de contacto no afecto en la
inactivacin. P=0,19 *Fago estreptococica 2972 Todos los
desinfectantes fueron eficaces en contra de ellos. p>0,18. El
P54 fue mas resistente por lo que el tiempo de contacto es
significativo P=0,02 *P54 *P001 *1358 Se inactivo con una reduccin
de >4log por dos minutos por la mayora de los desinfectantes
excepto Oxi-D que alcanza solo a reducir 2.6log despus de 2min.
*Fago lactococus AF6 Todos los desinfectantes fueron eficaces
excepto el anionicos-B que solo redujo 3log despus de 15min. *Fago
Lactobacillus B1 Fueron mas resistentes a los desinfectantes
utilizados *Fagos lactococcal CB13 y p1532. Inactivacin de un
conjunto de fagos por los desinfectantes mas eficaces.
Diapositiva 16
Discusiones. Es conveniente la utilizacin de compuestos de
amonio para la desinfeccin de platas que presenten contaminacin por
los fagos estudiados. Se deben de tomar en cuenta diversos factores
para la eleccin del desinfectante como: Disponibilidad regional.
Eficacia contra microorganismos. Su estabilidad en el tiempo
Toxicidad y olores.
Diapositiva 17
El tiempo de contacto del desinfectante es una variable
significativa ya que es una medida utilizada en inactivacin de
microorganismos. Pero no se puede discriminar ningn desinfectante
ya que todos redujeron al menos 2log dentro de los 2 primeros
minutos. Si un desinfectante presenta poca eficiencia, es posible
la combinacin con otro para aumentar su rendimiento.
Diapositiva 18
Los compuestos de amonio cuaternarios son muy eficaces pero se
debe de tratar con precaucin ya que los residuos de estos pueden
contaminar la leche e inhibir las bacterias iniciadoras. Hace
algunos aos el acido peracetico se percibe como el nico
desinfectante eficaz contra fagos. Pero se debe de verificar si es
apto para la industria alimentaria. Se debe de monitorear si los
fagos tratados continuamente con desinfectantes presentan un
aumento en su resistencia.
