INFORME DE LABORATORIO BIOQUIMICA-201103

PRACTICA 4. ESTUDIO CINETICO DE LA UREASA

PRESENTADO POR:

JIMMY GARCIA MUÑOZ – Código 1033728232

FECHA DE REALIZACION DEL EXPERIMENTO: Abril 22 de 2016

GRUPO: 4

TUTOR DE LABORATORIO:ALBA PINZON

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA “UNAD”

CEAD JOSE ACEVEDO Y GOMEZ

BOGOTA D.C., Mayo 12 de 2016

INTRODUCCIÓN

En este laboratorio desarrollaremos la práctica número cuatro del curso Bioquímica, que trata de la identificación de la ureasa en leguminosas y tortas de oleaginosas.Las enzimas son proteínas que catalizan todas las reacciones bioquímicas. Además de su importancia como catalizadores biológicos, tienen muchos usos médicos y comerciales. Un catalizador es una sustancia que disminuye la energía de activación de una reacción química. Al disminuir la energía de activación, se incrementa la velocidad de la reacción. La mayoría de las reacciones de los sistemas vivos son reversibles, es decir, que en ellas se establece el equilibrio químico. Por lo tanto, las enzimas aceleran la formación de equilibrio químico, pero no afectan las concentraciones finales del equilibrio.

Prácticamente todas las reacciones químicas que tienen lugar en los seres vivos están catalizadas por enzimas. Las enzimas son catalizadores específicos, lo cual significa que cada enzima cataliza un solo tipo de reacción, y casi siempre actúa sobre un único sustrato o sobre un grupo muy reducido de ellos.

PRACTICA 4. ESTUDIO CINETICO DE LA UREASA

OBJETIVOS

- Comprender cuál es la funcionalidad de las enzimas.- Analizar la capacidad enzimática de la ureasa mediante reacciones

químicas bajo condiciones variables de temperatura, pH y concentración.

- Obtener destrezas en el manejo de material e instrumentos del laboratorio.

- Aplicar la bioseguridad durante las prácticas en el laboratorio.- Analizar e interpretar los resultados obtenidos durante las prácticas de

laboratorio.

MARCO TEORICOLas enzimas

Las enzimas son proteínas que catalizan reacciones químicas en los seres vivos, actúan como catalizadores, es decir, sustancias que, sin consumirse en una reacción, aumentan notablemente su velocidad. Su acción es acelerar las reacciones, lo que hace posible que en condiciones fisiológicas tengan lugar reacciones que sin catalizador requerirían condiciones extremas de presión, temperatura o pH.

Actividad enzimática

En una reacción catalizada por una enzima, la sustancia sobre la que actúa la enzima se llama sustrato. El sustrato se une a una región concreta de la enzima, llamada centro activo. El centro activo comprende el sitio de unión formado por los aminoácidos que están en contacto directo con el sustrato y un sitio catalítico, formado por los aminoácidos directamente implicados en el mecanismo de la reacción

Una vez formados los productos, la enzima puede comenzar un nuevo ciclo de reacción. Las enzimas, a diferencia de los catalizadores inorgánicos catalizan reacciones específicas. Sin embargo hay distintos grados de especificidad. La

enzima sacarasa es muy específica, rompe el enlace b-glucosídico de la sacarosa o de compuestos muy similares. Así, para la enzima sacarasa, la sacarosa es su sustrato natural, mientras que la maltosa y la isomaltosa son sustratos análogos. La enzima actúa con máxima eficacia sobre el sustrato natural y con menor eficacia sobre los sustratos análogos. Entre las enzimas poco específicas están las proteasas digestivas como la quimotripsina, que rompe los enlaces amida de proteínas y péptidos de diverso tipo.

Propiedades de las enzimas

Las propiedades de los enzimas derivan del hecho de ser proteínas y de actuar como catalizadores. Como proteínas, poseen una conformación natural más estable que las demás conformaciones posibles. Los cambios en la conformación suelen ir asociados en cambios en la actividad catalítica.

Factores que afectan la actividad enzimática

pH: Las enzimas poseen grupos químicos ionizables (carboxilos -COOH; amino -NH2; tiol -SH; imidazol, etc.) en las cadenas laterales de sus aminoácidos. Según el pH del medio, estos grupos pueden tener carga eléctrica positiva, negativa o neutra. Como la conformación de las proteínas depende, en parte, de sus cargas eléctricas, habrá un pH en el cual la conformación será la más adecuada para la actividad catalítica, este es el llamado pH óptimo.

La mayoría de los enzimas son muy sensibles a los cambios de pH. Desviaciones de pocas décimas por encima o por debajo del pH óptimo pueden afectar drásticamente su actividad. Así, la pepsina gástrica tiene un pH óptimo de 2, la ureasa lo tiene a pH 7 y la arginasa lo tiene a pH 10.

Temperatura: En general, los aumentos de temperatura aceleran las reacciones químicas: por cada 10ºC de incremento, la velocidad de reacción se duplica. Las reacciones catalizadas por enzimas siguen esta ley general. Sin embargo, al ser proteínas, a partir de cierta temperatura, se empiezan a desnaturalizar por el calor. La temperatura a la cual la actividad catalítica es máxima se llama temperatura óptima. Por encima de esta temperatura, el aumento de velocidad de la reacción debido a la temperatura es contrarrestado por la pérdida de actividad catalítica debida a la desnaturalización térmica, y la actividad enzimática decrece rápidamente hasta anularse.

Efecto de los cofactores: A veces, un enzima requiere para su función la presencia de sustancias no proteicas que colaboran en la catálisis, estos son llamados cofactores. Los cofactores pueden ser iones inorgánicos como el Fe++, Mg++, Mn++, Zn++ etc. Casi un tercio de las enzimas conocidas requieren cofactores. Cuando el cofactor es una molécula orgánica se llama coenzima. Muchos de estas coenzimas se sintetizan a partir de vitaminas. Cuando los cofactores y las coenzimas se encuentran unidos covalentemente a la enzima se llaman grupos prostéticos. La forma catalíticamente activa de la enzima, es decir, la enzima unida a su grupo prostético, se llama holoenzima. La parte proteica de una holoenzima (inactiva) se llama apoenzima. La concentración del cofactor debe ser igual o mayor que la concentración de la enzima para obtener una actividad catalítica máxima.

La mayoría de los otros cofactores son coenzimas las cuales generalmente son compuestos orgánicos de bajo peso molecular, por ejemplo, las vitaminas del complejo “B” son coenzimas que se requieren para una respiración celular adecuada.

Concentración del sustrato: A mayor concentración del sustrato, a una concentración fija de la enzima se obtiene la velocidad máxima. Después de que se alcanza esta velocidad, un aumento en la concentración del sustrato no tiene efecto en la velocidad de la reacción.

Concentración de la enzima: Siempre y cuando haya sustrato disponible, un aumento en la concentración de la enzima aumenta la velocidad enzimática hacia cierto límite.

Clasificación de las enzimas según su actividad

Tipo de enzimas Actividad

HidrolasasCatalizan reacciones de hidrólisis. Rompen las biomoléculas con moléculas de agua. A este tipo pertenecen las enzimas digestivas.

Isomerasas Catalizan las reacciones en las cuales un isómero se transforma en otro, es decir, reacciones de isomerización.

Ligasas Catalizan la unión de moléculas.

Liasas Catalizan las reacciones de adición de enlaces o eliminación, para producir dobles enlaces.

Oxidorreductasas Catalizan reacciones de óxido-reducción. Facilitan la

transferencia de electrones de una molécula a otra. Ejemplo; la glucosa, oxidasa cataliza la oxidación de glucosa a ácido glucónico.

TansferasasCatalizan la transferencia de un grupo de una sustancia a otra. Ejemplo: la transmetilasa es una enzima que cataliza la transferencia de un grupo metilo de una molécula a otra.

UREASA

La ureasa es una enzima que cataliza la hidrólisis de urea a dióxido de carbono y amoníaco. La reacción ocurre de la siguiente manera: (NH2)2CO + H2O → CO2 + 2NH3 En 1926, James Batcheller Sumner demostró que la ureasa es una proteína. Es producida por bacterias, hongos y varias plantas superiores. En las plantas, la ureasa es un hexámero, consiste en seis cadenas idénticas- y se encuentra en el citoplasma. En bacterias, consiste en dos o tres subunidades diferentes. Para su activación, la ureasa necesita unir dos iones de níquel por subunidad.

La ureasa de judías tipo Jack (Canavalia ensiformis) fue la primera enzima purificada y cristalizada, un logro de James B. Sumner en 1926, en un momento en que la mayoría de los científicos creían que era imposible cristalizar enzimas. Esto le valió a Sumner el Premio Nobel de Química en 1946. Hoy en día, la cristalización de proteínas ayuda a los científicos a descubrir su estructura y determinar cómo funcionan. Este conocimiento permite el diseño de las sustancias que interfieren en la acción de la enzima, tales como los medicamentos para la lucha contra el SIDA que inhiben la acción de las enzimas del VIH o de la evolución reciente hacia un posible tratamiento de la rabia.

PROCEDIMIENTOS

Al residuo agregar 10 ml de NaCl 1%

Pesar 5 g de muestra.

Extracción de la ureasa

Reunir los dos sobrenadantes y completar 25ml con NaCl 1%. Este es el extracto que contiene ureasa.

Pasarla a un Erlenmeyer, agregar 10 ml de NaCl 1%. Agitar 15 min

Centrifugar la suspensión a 2500rpm por 15 min

Transferir el sobrenadante a un balón aforado de 25ml

Repetir el procedimiento anterior 

Dejar en baño con hielo.

Determinación de la actividad a diferente pH, pH óptimo de una enzima. Método 1 

Preparar dos series de tubos:5 servirán de blanco5 para determinar el efecto de pH 

Rotular los tubos

Agregar los reactivos indicados en la tabla.

Incubar cada tubo a 50°C durante 5 min agitando

En los tubos blanco y problema

Registrar resultados

Pasar el residuo al mortero, agregar 10 ml de NaCl 1% frio, por 15 min.

Pesar 5 g del material vegetal

Método 2

Transferir el sobrenadante al balón aforado y completar a volumen con NaCl 1%.

Colocarlo en un mortero y macerar por 15 min con 20 ml de NaCl 1% previamente enfriado (agua-hielo)

Centrifugue por 10 min a 2500 rpm.

Transferir el sobrenadante a un balón aforado de 50ml

Centrifugue por 10 min a 2500 rpm.

Guardar el extracto enzimático refrigerado en un baño agua-hielo.

Mezclar bien el contenido de los tubos y colocalos en un baño termostatado entre 50 y 60°C por 10 min. 

Marcar 12 tubos y adicionar las soluciones indicadas en la tabla.

Dejar enfriar y leer la absorbancia a 630nm.

Si la absorbancia es mayor a 2.0 realizar la disolución adecuada, volver a leer.

Registrar resultados.

Preparar dos series de 5 tubos:5 blanco5 para determinar el efecto de pH

Método 3 – Primera Sesión. Determinación del efecto del pH, concentración de sustrato, temperatura sobre la velocidad de la reacción enzimática.

Determinación del efecto de pH

Colocarlo en un mortero y macerar por 15 min con 20 ml de NaCl 1% previamente enfriado (agua-hielo)

Rotular los tubos y adicionar las soluciones indicadas en la tabla.

Registrar los resultados

Incubar a 50°C por 25 min

Efecto de la concentración de sustrato en la velocidad de la reacción enzimática.   En 8 tubos de ensayo marcados, pipetear en cada uno las cantidades de reactivos indicados en la tabla.

Transferir el contenido de cada tubo a un Erlenmeyer marcado

Agregar a cada uno 3 gotas de indicador.

Titular con el HCl (normalidad conocida) y comparar con el blanco.

Pesar 5 g de muestra (harina de leguminosa)

Método 3 – Segunda Sesión. Extracción de la ureasa

Pasarla a un Erlenmeyer y agregar 10ml de NaCl 1%, agitar 15 min.

Centrifugar la suspensión a 2500 rpm por 15 min

Determinación de la actividad a diferentes temperaturas  

Transferir el sobrenadante a un balón aforado de 25 ml.

Al residuo agregar 10ml de NaCl 1% y repetir el procedimiento anterior.

Incubar cada tubo en diferentes baños a temperaturas indicadas en la tabla.

Agregar los reactivos y mantener las condiciones indicadas en la tabla.

Registrar los resultados.

Reunir los dos sobrenadantes y completar a 25ml con NaCl 1%. Este extracto contiene la ureasa.

En 5 tubos de ensayo marcados pipetear en cada uno las cantidades de reactivos según la tabla de la guía.

Mezclar y sacar los tubos del baño. Transferir cuantitativamente el contenido de cada tubo a un Erlenmeyer marcado

Titular con el HCl (normalidad conocida) y comparar las diferentes titulaciones con el blanco.

CUESTIONARIO:

1. Qué tipo de inhibición enzimática se presenta con el uso de metales pesados?

Con el uso de metales pesados se presenta una inhibición no competitiva reversible, mayormente se da por la presencia de iones de metales pesados como Ag+, Hg2+ o Pb2. Los metales pesados forman mercáptidos con los grupos sulfhidrilo (-SH) de las enzimas. El equilibrio que resulta inactiva la enzima, que requiere un grupo sulfhidrilo libre para su actividad. La inhibición puede ser eliminada removiendo el ion del metal pesado.

2. Qué representan los valores de Vm y Km?

Km: Constante de Michaelis-Menten, en donde la velocidad de la acción de una enzima es función de la cantidad de sustrato presente, la cantidad de enzima y las características de la enzima, la afinidad de la enzima por el sustrato y el poder catalítico del enzima.

Vm: Velocidad máxima, la cual estima el número de centros activos de la enzima o la velocidad que obtendríamos cuando toda la enzima se encuentra unida al sustrato.

3. Que entiende por metalo-enzimas? De ejemplos

Una metalo-enzima es una proteína enzimática que tiene un fuerte vínculo entre la parte proteica y un metal, donde el metal está incrustado dentro de la molécula. El metal se presenta en forma de un ión y su función principal es la de participar en las reacciones enzimáticas. El metal a veces juega un papel directo en la unión de los átomos; en otros casos trabaja para ayudar a estabilizar la proteína después de la reacción enzimática.

Ejemplos:

Fe (grupo prostetico hemo)

Hemoglobina, peroxidasa, catalasa, citocromo P-450, triptófano dioxigenasa, citocromo c.

Fe (no hemo) Pirocateasa, ferredoxina, hemeritrina, transferrina, aconitasa.

Cu Tirosinasa, aminooxidasa, lacasa, ascorbato oxidasa, ceruloplasmina, superóxido dismutasa,

plastocianina.Co (corrincoenzima-coenzima B12)

Glutamato mutasa, dioldehidrasa, metionina sintetasa.

Co (II) (no corrin) DipeptidasaZn(II) Carbónico anhidrasa,carboxipeptidasa, alcohol

dehidrogenasa4. Que sucede si se reemplaza el HgCl2 por CaCl2? Explique

5. Todas las enzimas tienen CySH en su sitio activo? Especifique cuales son los aminoácidos presentes en el sitio activo de las enzimas cuyos sitios activos usted conoce.

No todas las enzimas tienen CySH en su sitio activo,

Aminoácidos presentes en el sitio activo de las enzimas:

Serina: enzimas inhibidas por organofosfóricos

Histidina: enzimas inhibidas por clorometilcetonas

Cisteína: enzimas inhibidas por reactivos –SH

Lisina: enzimas que forman bases de Schiff

Aspartato y Glutamato: dependencia de pH

BIBLIOGRAFIA

Enzimas. Recuperado de: http://www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz1.htm#a

Investigación de la acción de la ureasa. Recuperado de: http://www.scienceinschool.org/print/1074

INTRODUCCIÓN

En este laboratorio desarrollaremos la práctica número ocho del curso Bioquímica, que trata de los carbohidratos y sus propiedades físico químicas, que serán determinadas mediante la aplicación de pruebas coloreadas. Como material biológico para realizar las pruebas de carbohidratos utilizaremos almidón pan y papa.

Los carbohidratos son unos de los principales componentes de la alimentación. Esta categoría de alimentos abarca azúcares, almidones y fibra. Los carbohidratos sirven para suministrarle energía al cuerpo, especialmente al cerebro y al sistema nervioso. Una enzima llamada amilasa ayuda a descomponer los carbohidratos en glucosa, la cual es usada por nuestro cuerpo como fuente de energía.

PRACTICA 8. PROPIEDADES FÍSICO QUÍMICAS DE LOS CARBOHIDRATOS

OBJETIVOS

- Comprender cuál es la estructura de los carbohidratos.- Reconocer los diferentes procesos metabólicos de los

polisacáridos.- Identificar la presencia de monosacáridos en las muestras, por

medio de reacciones químicas.- Obtener destrezas en el manejo de material e instrumentos del

laboratorio.- Aplicar la bioseguridad durante las prácticas en el laboratorio.- Analizar e interpretar los resultados obtenidos durante las

prácticas de laboratorio.

MARCO TEORICO

Carbohidratos

Los carbohidratos son moléculas formadas por carbono, hidrógeno y oxígeno (C, H, O) e incluyen algunas de las moléculas más relevantes en la vida de los organismos, como son la glucosa, que es universalmente utilizada por las células para la obtención de energía metabólica, el glucógeno contenido en el hígado y el músculo, que forma la reserva de energía más fácilmente asequible para las células del organismo y la ribosa y desoxirribosa que forman parte de la estructura química de los ácidos nucleicos. Por otra parte los carbohidratos son moléculas importantes en la biósfera, en donde la celulosa, que forma la porción principal de la estructura de las plantas, es la molécula orgánica más abundante del planeta y la encontramos en nuestra vida diaria bajo la

forma de madera o las fibras de algodón, acetato y rayón de nuestras ropas; así también el azúcar de mesa donde la sacarosa, es un disacárido con el que endulzamos nuestros alimentos y se produce anualmente en cantidad de millones de toneladas.

Los carbohidratos son polihidroxi aldehídos o cetonas y sus polímeros existen en tres categorías principales distinguibles por el número de unidades de azúcar que los forman: monosacáridos, oligosacáridos y polisacáridos. Los polisacáridos liberan a la hidrólisis centenares o millares de monosacáridos; mientras que los oligosacáridos producen de dos a l0 monosacáridos y los monosacáridos mismos son las unidades mínimas de los carbohidratos que ya no se pueden hidrolizar. Se les llama carbohidratos debido a que su estructura química semeja formas hidratadas del carbono y se representan con la fórmula Cn (H2O)n.

Los carbohidratos tienen diversas funciones en el organismo destacan: su papel como combustible metabólico (1 g de carbohidrato produce 4 Kilocalorías); como precursores en la biosíntesis de ácidos grasos y algunos aminoácidos y; como constituyentes de moléculas complejas importantes: glucolípidos, glucoproteínas, nucleótidos y ácidos nucleicos.

Clasificación de los carbohidratos

Según el número de moléculas que tengan los glúcidos se los puede dividir en cuatro grandes grupos:

- Monosacáridos: Son carbohidratos que no pueden hidrolizarse, en moléculas mas sencillas y se encuentran constituidos por una sola unidad de polihidroxialdehido o cetona, siendo el monosacárido más abundante en la naturaleza la D-glucosa, azúcar de 6 carbonos. Su fórmula empírica general es CH20. Se subdividen en Pentosas y Hexosas:

Las Pentosas

Xilosa Se encuentra como componente en la madera

Ribosa Es un constituyente de los ácidos nucleicos

Arabinosa Forma parte de las gomas, mucilagos y pectinas (de este grupo, estas son las únicas que normalmente ingerimos dentro de mermeladas y dulces)

Las Hexosas (son 24 pero, solamente 4 tienen importancia biológica)

D-glucosa aparece en los frutos maduros, sangre y tejidos animales. Esta constituye el azúcar del organismo, es muy soluble en agua, y es el carbohidrato que transporta la sangre y el que principalmente utilizan los tejidos.

D-manosa Siempre aparece combinado en la naturaleza. Nunca libre por tanto preferimos no enunciar ningún componente.

D-galactosa Aparece en lípidos complejos. El hígado puede convertirla en glucosa y después en energía.

D-fructosa Se lo denomina azúcar de frutas. Aparece libre en la miel y en los jugos de frutas. Tiene un sabor muy dulce.

- Disacáridos: S un tipo de glúcidos formados por la condensación (unión) de dos azúcares monosacáridos iguales o distintos mediante un enlace O-glucosídico (con pérdida de una molécula de agua) pues se establece en forma de éter siendo un átomo de oxígeno el que une cada pareja de monosacáridos, mono o dicarbonílico, que además puede ser α o β en función del -OH hemiacetal o hemicetal. Los más comunes son maltosa, lactosa y sacarosa:

Maltosa: Aparece en la malta o cebada germinada y es muy soluble en agua.

Lactosa: Es el azúcar de la leche y es poco soluble en agua.

Sacarosa: Es el azúcar de mesa. Se obtiene de la caña de azúcar y de la remolacha, y como todos saben, es muy soluble en agua.

- Oligosacáridos: Son moléculas constituidas por la unión de 2 a 10 monosacáridos cíclicos, pueden ser lineales o mediante enlaces de tipo glicosídicos; concretamente enlaces aceticos. El enlace glicosídico es un enlace covalenteque se establece entre grupos alcohol de dos monosacáridos, con desprendimiento de una molécula de agua. Generalmente unidos a proteínas (glicoproteínas) y lípidos (glicolípidos):

Trisacáridos: La rafignosa se encuentra en las legumbres.

Tetrasacáridos: La esteaquiosa, el más estudiado, se encuentra en las semillas de soja.

- Polisacáridos: Son biomoléculas que se encuadran entre los glúcidos y están formadas por la unión de una gran cantidad de monosacáridos y cumplen funciones diversas, sobre todo de reservas energéticas y estructurales. Los polisacáridos son cadenas, ramificadas o no, de más de diez monosacáridos. Los polisacáridos son polímeros, cuyos monómeros constituyentes son monosacáridos, los cuales se unen repetitivamente mediante enlaces glucosídicos. Estos compuestos llegan a tener un peso molecular muy elevado, que depende del número de residuos o unidades de monosacáridos que participen en su estructura. Este número es casi siempre indeterminado, variable dentro de unos márgenes, a diferencia de lo que ocurre con biopolímeros informativos, como el ADN o los polipéptidos de las proteínas , que tienen en su

cadena un número fijo de piezas, además de una secuencia específica. Entre ellos están:

Almidón: Este se encuentra en los vegetales en forma de granos, ya que son la reserva nutritiva de ellos. Aparecen en la papa, arroz, maíz, y demás cereales.

Glucógeno: Se encuentra en los tejidos animales, donde desempeña la función de reserva nutritiva. Aparece en el hígado y en los músculos.

Celulosa: Cumple funciones estructurales en los vegetales.

Inulina: Aparece en los tubérculos de dalia, en alcauciles, ajos y cebollas.

Liquenina: Aparece en los musgos y líquenes.

Mucopolisacáridos: Cumplen función de sostén, nutrición y comunicación intercelular.

Enlace glucosídico:

La unión covalente entre la cadena peptídica y las moléculas de carbohidratos se establece mediante dos tipos de enlaces glucosídicos N-glucosídico y O-glucosídico, dependiendo de que el carbohidrato se una a un átomo de nitrógeno o a uno de oxígeno, respectivamente. El enlace N-glucosídico, presente en la mayoría de las proteínas, se forma entre una asparagina de la cadena polipeptídica y el carbohidrato N-acetilglucosamina, mientra que el O-glucosídico se forma entre una serina o treonina y el carbohidrato, el cual es con frecuencia N-acetilgalactosamina. Muchas glucoproteinas poseen ambos tipos de enlaces y varios de ellos tienen un número diverso de oligosacáridos unidos.

PROCEDIMIENTOS

Anote sus observaciones

Colocar 5 g de un azúcar en cada tubo (rotular) .

Parte A: Solubilidad

Añadir 2ml de agua a cada tubo. Agitar fuerte por 1 min y dejar reposar 30 seg.

Anote sus observaciones

Repita el procedimiento anterior, utilizando otros tubos. Agregar 2 ml de alcohol etílico en lugar de agua.

En un cuadro cualifique cualitativamente las muestras. 

Prueba B. Prueba con los reactivos de Tollens y Fehliing 

Realice un montaje de baño María y caliente a 60°C 

Preparar soluciones de cada azúcar al 10%

Adicionar 1 ml de reactivo de Tollens a cada tubo.

Verificar que la temperatura del baño maria se mantenga en 60°C.

Tomar 1ml de cada solución y llevarla a diferentes tubos (rotuladas)

Colocar los tubos dentro de un vaso de precipitados y llevarlos al baño maria por 5 min.

Anote sus observaciones 

Repita los pasos anteriores, usar 0.5ml del reactivo A de Fehling y 0.5 ml del reactivo B de Fehling (en lugar de Rx Tollens).

Anote sus observaciones 

Anote sus observaciones

Preparar una solución concentrada de almidón en agua.

Parte C: Polisacáridos

Calentar suavemente hasta que se forme engrudo. Dejar enfriar.

Añada 2 gotas de solución de yodo o de reactivo de lugol.

Repita esta prueba utilizando el reactivo de lugol en una rebanada de papa o de pan.

Anote sus observaciones 

Carbohidratos. Recuperado de: http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/002469.htm

Bioquímica elemental de los hidratos de carbono http://www.zonadiet.com/nutricion/bioquimica.htm