libroveterinaria

IIIFOROINTERNACIONALBIOLOGICOAGROPECUARIO

INDICEEXTENSOSEFECTO DE DOS NIVELES DE FORRAJE ARBREO TEPOZN (BUDDLEIACORDATA) ENELCOMPORTAMIENTOMICROBIOLGICORUMINALENCABRAS 1287

PREFERENCIA ALIMENTARIA EN CABRAS CRIOLLAS POR LA MISMA ESPECIE ARBREAYARBUSTIVAENAGOSTADEROSDELNUDOMIXTECO,MXICO 1293

ESTUDIO SOBRE LA CALIDAD BIOQUMICA Y FISICOQUMICA DE LECHE HERVIDA PORCONVECCINYENMICROONDAS. 1301

EVALUACIN DE LA CALIDAD DE LA CANAL DE DOS GRUPOS GENTICOS DE CONEJO 1309

ALIMENTACIN DE POLLOS DE ENGORDA CON GRANOS Y EXTRACTOS DE FENOGRECO TRIGONELLAFOENUMGRAECUM 1318

CALIDADNUTRITIVAYDIGESTIBILIDADDELAMORERA(MORUSNIGRA) 1328 LA CANOLA (BRASSICA NAPUS), ALTERNATIVA DE FORRAJE PARA PEQUEOS RUMIANTES.1335

EFECTO DE LA INCLUSIN DEL GRANO DE SORGO TRATADO CONU ENZIMA GLUCOAMILASADEASPERGILLUSNIGERENELCOMPORTAMIENTOPRODUCTIVOY MICROBIOLGICODEBORREGOS1342

SOLUBILIDADDELAPROTENAYENERGAMETABOLIZABLEVERDADERADEPASTA DEGIRASOLENDIETASPARAAVES 1343

IDENTIFICACIN BOTNICA Y TIPO DE HBITAT DE LA VEGETACIN ARBREA Y ARBUSTIVA CONSUMIDA POR CABRAS EN PASTOREO TRASHUMANTE EN LA REGINMIXTECA,MXICO. 1351

1287


COMPORTAMIENTOPRODUCTIVODEUNHATOCHAROLAISBAJOCONDICIONESDE TRPICOSECOENTAMAULIPAS,MXICO.1359

INFLUENCIADELASUPLEMENTACINCONSELENITODESODIOSOBREVARIABLES DIGESTIVASENCORDEROS1369

TENDENCIAS FENOTPICAS Y GENTICAS DE GANANCIA DIARIA DE PESO BECERROSNELOREDEREGISTROENMXICO 1378

EVALUACINDEINDICADORESDESUSTENTABILIDADPARALAGANADERABOVINA: ELCASODELACOSTADEACTOPAN,VERACRUZ,MXICO1387 CARACTERIZACIN Y PRODUCTIVIDADDEL SISTEMA DE PRODUCCIN DE POLLOS DETRASPATIOENCUAJINICUILAPA,GUERRERO.MXICO.1404

PAISAJES GANADEROS: IMPLICACIONES DE VALORACIN Y CALIDAD DE VIDA EN POBLACIONESDEVERACRUZ,MXICO.1419

RESULTADOS DE LA APLICACIN DE UNA ENCUESTA PARA PROYECTOS PRODUCTIVOSENGANADOBOVINOENSONORA,OTORGADOSALSECTORSOCIAL DEL2003AL2007. 1441

AVANCES DE INVESTIGACIN SOBRE LA EVALUACIN DE LA SUSTENTABILIDAD DE LOS AGROECOSISTEMAS DE PRODUCCIN DE LECHE, EN DOS COMUNIDADES DEL MUNICIPIODEAMECAMECA,MXICOATRAVSDEINDICADORES. 1450

DESARROLLO DE UNA HERRAMIENTA DE EVALUACIN PARA PROYECTOS PRODUCTIVOSENGANADOBOVINOENSONORA,PORMEDIODEUNAPLATAFORMA @LEARNINGSAETI2. 1461

FACTORES QUE INTERVIENEN EN LA PRODUCCIN Y COMERCIALIZACIN DE LAS AVESDEENGORDA.1469

1288


EFECTODELNIVELDEFSFOROENELCOMPORTAMIENTOPRODUCTIVODEPOLLOS DEENGORDAENINICIACIN1480 CONCENTRACINDELEVADURAS(SACCHAROMYCESCEREVISIAE)ADIFERENTES NIVELESDEMELAZACOMOSUSTRATO 1491 DESARROLLO DE UNA ESTRATEGIA DE MANEJO REPRODUCTIVO DEL JAGUAR

(PANTHER ONCA) EN EL PARQUE ZOOLGICO BOTNICO MIGUEL ANGEL DEQUEVEDO 1500

TASA DE GESTACIN POS INSEMINACIN ARTIFICIAL A TIEMPO FIJO EN VACAS SUIZO AMERICANO SUPLEMENTADAS CON GRASA DE SOBREPASO RUMINAL Y TRATADASCONCIDRMSBENZOATODEESTRADIOL 1508

DIFERENCIAS DE COMPORTAMIENTO REPRODUCTIVO ENTRE VACAS HOLSTEIN PURAS Y VACAS HOLSTEIN CRUZADAS CON JERSEY, SUECO ROJO Y MONTBELIARDEENELALTIPLANOMEXICANO1517

COMPARACINDEPERFILESREPRODUCTIVOSENTREVACASHOSLTEINCONYSIN PROBLEMASINFECCIOSOSUTERINOS1522

EFICIENCIA Y EXACTITUD DE L A DETECCIN DE ESTRO S EN GANADO BOS INDICUS CO MPARANDOL A OBSERVACI N CONTI NUA VERSUS OBSERVACI NOCASIONAL1529

VIABILIDAD BIOLGICA Y ECONMICA DE LA APLICACIN DE LA TRANSFERENCIA DEEMBRIONESCONPRODUCTORESDELESTADODETABASCO. 1541

COMPARACIN DE TRATAMIENTOS DE PROCESOS INFECCIOSOS UTERINOS POSPARTO EN PERFILES REPRODUCTIVOS DE VACAS LECHERAS EN EL TRPICO VERACRUZANO 1551

1289


EL HOSPITAL VETERINARIO PARA SITUACIONES DE DESASTRE EN CENTROS URBANOS,SUBURBANOSYRURALES.1558

CLASIFICACIN DE LAS ETAPAS DE EHRLICHIOSIS CANINA SEGN SUS CAMBIOS HEMATOLGICOS EN PERROS SEROPOSITIVOS A EHRLICHIA CANIS EN CD. OBREGN SONORA 1569

TERMI NOLOGA RADIOL GICA E I MAG ENOLGI CA DEL EQ UINO Y SU ADAPTACIO N A L A NO MENCLATURA ANAT MICA I NTERNACIO NAL

NOMINAANATMICAVETERINARIA 2005 1582UTILIZACIN DE CSCARAD DE NARANJA FRESCA COMO SUPLEMENTO DIRECTO ENELPASTOREODEVAQUILLASPARACARNEENCRECIMIENTO1590

INCIDENCIA DE MASTITIS SUBCLNICA EN LA SIERRA NORORIENTAL DEL ESTADO DEPUEBLA 1598

FRECUENCIADELADIARREAVIRAL BOVINAENCUATROMUNICIPIOSDELAZONA CENTRODELESTADODEVERACRUZ,MXICO1606

PCRMULTIPLEXPARADIAGNSTICODEBRUCELOSISYLEPTOSPIROSIS1617

SEROPREVALENCIA DE LEPTOSPIROSIS BOVINA EN LAS CHOAPAS, VERACRUZ 1631

INCIDENCIA Y ESPECIE DEL PARASITO PRESENTE EN UN HATO OVINO DE AMBIENTEPASTORILENSANTACRZQUECHULAC,PUEBLA1638

SEROPREVALENCIA DE RINOTRAQUEITIS INFECCIOSA BOVINA EN RANCHOS GANADEROSDELAZONANORTEDELESTADODEVERACRUZ,MXICO 1643

1290


SEROPREVALENCIA Y FACTORES DE RIESGO ASOCIADOS A LA PRESENCIA DE LEPTOSPIROSIS EN CUATRO MUNICIPIOS DE LA ZONA SUR DEL ESTADO DE VERACRUZ1651

SEROPREVALENCIADELANEOSPOROSISBOVINAENELCENTRODELESTADO DE VERACRUZ,MXICO1659 SEROPREVALENCIA DE NEOSPORA CANINUM EN TRECE MUNICIPIOS DE LA ZONA NORTEDELESTADODEVERACRUZ,MXICO. 1668

ANLISIS DEL POTENCIAL DEL ESTIRCOL DEL GANADO LECHERO EN LA REGIN CENTROSURDELESTADODECHIHUAHUA1679

LA LEY DE DESARROLLO RURAL SUSTENTABLE: SUS ALCANCES Y LIMITACIONES. 1688

VIGILANCIAEPIDEMIOLGICAENLAORDEADELGANADOPRODUCTORDELECHE ODEDOBLEPROPSITOENLAREGINNORTEDEVERACRUZ. 1701

ACTIVIDAD DE TRES ACEITES ESENCIALES DERIVADOS DE PLANTAS Y SUS COMPONENTESACTIVOSCONTRAESCHERICHIACOLI0157:H7 1724 ESTUDIO COMPARATIVO DEL GNERO KLEBSIELLA SP. PROCEDENTE DE DOS FUENTESDEAISLAMIENTO1737

CARACTERIZACIN DE LAS PRINCIPALES PLANTAS FORRAJERAS DE TIPO ARBREO Y ARBUSTIVO CONSUMIDAS POR CAPRINOS EN LA MIXTECA POBLANA 1749

CARACTERIZACION PRODUCTIVA DE BOVINOS EN EL SISTEMA DOBLE PROPOSITO 1757

1291


INDICEDECARTELESSIMPOSIUMVETERINARIARESPUESTA DE GANANCIA DE PESO AL CONSUMO DE HARINA DEL FRUTO DE PINZAN (PITHECELLOBIUM DULCE) POR OVEJAS EN PASTOREO EN AGOSTADERO ENELTRPICOSECO1566

CARACTERISTICAS REPRODUCTIVAS DE SEMENTALES PROSPECTOS DE RAZA SUIZO AMERICANO (BOS TAURUS) DE LA DEPRESIN CENTRAL DEL ESTADO, CHIAPAS. 1774

TICA, BIOETICA, DEONTOLOGIA Y BIENESTAR ANIMAL, COMO MODELOS DE CONDUCTAMORALYPROFESIONALPARAESTUDIANTESYPROFESIONALESDELA MEDICINAVETERINARIAYZOOTECNIA 1782

GENERACINYAPLICACINDEUNACADENADEREFERENCIADEADN(FLR)PARA LAIDENTIFICACINDEPOLIMORFISMOSENLASECUENCIAIS200DESALMONELLA TYPHI,MEDIANTELATCNICAPCRRSCA 1790

ANLISIS

HISTOPATOLGICO

DE

LA

INCIDENCIA

DE

ENFERMEDADES

RESPIRATORIASENLACOLECCINPERTENECIENTEALADIRECCINGENERALDE ZOOLGICOSYVIDASILVESTREDELACIUDADDEMXICO1801

DETERMINACINDEHELMINTOSGASTROINTESTINALESENCANINOSDOMSTICOS DIAGNOSTICADOSPORESTUDIOCOPROPARASITOSCPICO 1808

EMPLEODELSUEROLCTEOENLASUPLEMENTACINDEBECERROSLACTANTES 1818

LACOMERCIALIZACINDELACARNEDECONEJO YLAMUESTRAGASTRONMICA COMOALTERNATIVADEFOMENTOENELNEGOCIO 1827

1292


EFECTODEDOSNIVELESDEFORRAJEARBREOTEPOZN (BUDDLEIACORDATA )ENELCOMPORTAMIENTOMICROBIOLGICO RUMINALENCABRASEFFECTOFTWOLEVELSOFARBOREALFORAGETEPOZN(Buddleiacordata)INTHE MICROBIOLOGICALBEHAVIORRUMINALINGOATS PrezSatoM.,2GuerraMedinaC.E., 1BecerrilHerreraM.,1SonGuillermoE., 3Ruz SesmaB.,3MendozaNazarP.1EscobarHernndezR.,1EnrquezGarcaF.,1Castro 1 GonzlezN.P.,1GonzlezMrquezR. 1 UnidadAcadmicadeIngenieraAgrohidrulicaPEdeIngenieraAgronmicayZootecnia Email: [email protected] 2 CentroUniversitariodelaCostaSur,UniversidaddeGuadalajara 3 FacultadMedicinaVeterinariayZootecnia,UniversidadAutnomadeChiapas1

Resumen: Seevaluelefectodelainclusin(0,15y30%)deforrajearbreodeBuddleidacordataen el comportamiento microbiolgico ruminal en cabras. Se distribuyeron al azar 30 cabras criollascon un peso vivo promedio de 14 kg en tres tratamientos y fueron alojadas en corrales individuales durante 45 das. Se midi pH ruminal, concentracin de bacterias totales, celulolticas y protozoarios a los, 30 y 45 das del periodo experimental. El diseo experimental fue completamente al azar con mediciones repetidas a travs del tiempo. El nmero de bacterias fue estadsticamente analizado por intervalos de confianza. No hubo diferenciasentretratamientos(p>0.05)porlainclusindeB.cordataenladietasobreelpH ruminal, concentracin de bacterias totales, celulolticas y protozoarios. No se presentaron diferenciaentreperiodos(p>0.05)enningunavariable.LainclusindeB.cordataenladieta decabrasnoafectnegativamentelasvariablesmicrobiolgicasenesteestudio. Palabrasclaves:rumen,bacteria,protozoarios

Summary: There was evaluated the effect of the inclusion (0, 15 and 30 %) of arboreal forage of Buddleida cordata in the microbiological behavior ruminal in goats. 30 Creole goats were distributedatrandomwithanaliveaverageweightof14kginthreetreatmentsandtheywere lodgedinindividual corrals for 45 days.Was evaluated pH, concentration of cellulolytic and total rumen bacteria and protozoa to, 30 and 45 days of the experimental period. The experimentaldesignwascompletelyatrandomwithmeasurementsrepeatedacrossthetime. 1287


Thenumberofbacteriawasstatisticallyanalyzedbyintervalsofconfidence.Therewereno differences between treatments (p> 0.05) for the inclusion of B. cordata in the diet on pH ruminal, concentration of cellulolytic and total rumen bacteria and protozoa. They did not presenttothemselvesdifferencebetweenperiods(p>0.05)inanyvariable.Theinclusionof B. cordata in the diet of goats did not affect negatively the productive and microbiological variablesinthisstudy. Keywords:Buddleidacordata,bacteria,rumen,protozoa,goats

Introduccin Losrumiantessehanadaptadoavariossistemasalimenticiosdebidoaqueenelrumense encuentran diversas especies microbianas que incluyen bacterias, protozoarios y hongos (OrpinyJoblin,1997).Tambintienenlacapacidaddetransformaralimentosdebajacalidad en otros con alto contenido de protena. Lo anterior es posible debido a que los microorganismos ruminales sintetizan y secretan el complejo enzimtico 14 celulasa, lo cuallespermitenutrirsedeloscomponentesdelaparedcelular(ChurchyPond,1992). Enlossistemasdeproduccindecarnedecaprinos,losforrajespuedenconstituirde15a70 %deladieta.Sinembargolosforrajescomnmenteutilizadosenracionesintegralescomoel rastrojo de maz, paja de avena,de trigo y de cebada no estn disponibles durante todoel ao, disminuyendo considerablemente en pocas secas lo que ocasiona un incremento considerableensucosto,porloquedebenbuscarseforrajesalternosqueestndisponibles durantetodoelaocomoB.cordaata. La B. cordata tambin conocida en Mxico como tepozn o zumpantle es una especie arbrea que se desarrolla en altitudes desde los 1500 a 3600 msnm el cual puede ser utilizadacomofuentedeforrajeyaquemantieneunaproduccincontinuadefollajeloquele permitira contribuir en la produccin animal de zonas marginadas sin embargo los pocos estudios como forraje en caprinos que existen sobre esta planta, hace necesario una evaluacin de posibles efectos negativos que puedan daar al animal ya que existen estudios queindican la presenciade un glucsido fenilpropanoidellamado verbascsido,el cualtieneefectoparasiticidaenpeces(Dazetal.,2000)sinembargonosehareportadoen bacteriasruminales.Porloanteriorelobjetivodeestainvestigacinfueevaluarelefectode lainclusin de 0, 15 y 30 % deB.cordata en el comportamiento microbiolgicoruminalen cabras.

Materialesymtodos

Pararealizarelestudioseutilizaron30cabraslocales,conunpesovivopromediode14.0 2.0 kg de tres meses de edad las cuales fueron alojadas en corrales individuales. Los animales se distribuyeron aleatoriamente a tres tratamientos: T1 = dieta testigo (sin B. cordata)T2=dietatestigo+15%deB.cordataT3=dietatestigo+30%deB.cordata.En 1288


laTabla1semuestralacomposicindelasdietasexperimentales.LadeterminacindepH ruminal, concentracin de bacterias y protozoarios fue a los 30 y 45 das de iniciado el experimento. Tabla1.Ingredientesycomposicinqumicadelasdietasexperimentales(%BS). Ingrediente SinB.cordata Con15%deB. Con30%deB. cordata cordata Alfalfa 7 7 14 Rastrojodemaz Mazquebrado Pastadesoya 30 39 21 0 2 1 15 43 17 15 2 1 % 89.7 14.9 17.71 29.6 3.04 88.07 14.84 16.5 26.5 2.8 89.02 14.89 17.78 26.01 3.3 0 42 11 30 2 1

B.cordataMelazaa Mezclamineral

Composicinqumica MS PC FDA FDN Cenizasa

Calcio, 130 g Fsforo,50 g Sodio, 109 gCloro, 200 g Hierro, 4.30 g Magnesio, 3.33 g 1 Manganeso,200mgCobre,80mgCobalto,66.60mgYodo,4.0mgZing,8.0mgkg Estimacindelaconcentracindebacteriasruminales,protozoariosypHruminal Se determin de acuerdo con la metodologa descrita por Cobos et al. (2007), utilizando la tcnica del nmero ms probable (Harrigan y McCance, 1979). El crecimiento positivo fue confirmado despus de 24 h para bacterias totales y 10 d para bacterias celulolticas despus de ser incubados a 38 C. La concentracin de protozoarios se determin por conteo directo en cmara de Neubauer por medio de un microscopio a una magnificacinde40X(Dehority,1993).ParamedirelpHruminalseobtuvieron100mLdela partemediaventraldelrumenmedianteunasondacuatrohorasdespusdelaalimentacin porlamaana,inmediatamentedespusdeobtenerlosemidielpHconunpotencimetro porttil marca Orion 710A, calibrado a dos puntos con solucin buffer de pH 4.0 y 7.0, respectivamente. Los datos obtenidos se analizaron bajo un diseo completamente al azar con diez repeticiones por tratamiento (SAS, 2001). El nmero de bacterias totales y celulolticas fue estadsticamente analizado por intervalos de confianza descrito por Harrigan y McCance (1979). 1289


Resultados pHruminal

Nohubodiferenciasenelphruminalentrelostratamientos(p>0.05)enningnperiodo nienelpromedio.Seobservaquelosvaloresdephsonrelativamentebajossiseconsidera que el ph es un factor determinante en las fluctuaciones de las poblaciones bacterianas (tabla4). Tabla4.Phdellquidoruminalobtenidocuatrohorasdespusdelaalimentacin. Periodo 1 2 P r o m e d i o Sinb.Cordata 5 . 8 1 5 . 9 2 5 . 8 7 Con15%deb. Cordata 5 . 5 6 5 . 8 9 5 . 7 2 Con30%de b.Cordata 5 . 6 0 5 . 8 2 5 . 7 1 E e m 0 . 1 3 0 . 1 3 0 . 0 9 1

N o h u b o d i f e r e n c i a s s i g n i f i c a t i v a s ( p > 0 . 0 5 ) E e m = e r r o r e s t n d a r d e l a m e d i a

Concentracindebacterias

La concentracin de bacterias totales, celulolticas y protozoarios fue similar (p>0.05) para todos los tratamientos despus de los 30 y 45 das de evaluacin indicando que no hubo efecto negativo sobre los microorganismos ruminales por la inclusindeb.Cordataenlaracindecabras(tabla5).

Tabla 5. Concentracin de bacterias totales, celulolticas y protozoarios por ml de lquidoruminal. 1290


Periodo Bacteriastotales(1010clulasml 1) 1 2 Celulolticas(107clulasml1) 1 2 Protozoarios(104clulasml1) 1 2

Sinb.Cordata

Con15%deb. Con30%deb. Cordata Cordata 12.3 18.4 2.3 6.2 2.3 6.2 15.3 15.8 2.3 6.3 2.3 2.3

11.2 35.1 3.27 6.2 3.27 6.2

Nohubodiferenciassignificativas(p>0.05)

Discusin Sisetomaencuentaqueelrastrojodemaztieneunadisponibilidadvariableatravs delao,teniendoescasesenlapocasecas(cesnetal.,2007)mientrasquelaplantadeb. Cordatatieneunaproduccindeforrajedebuenacalidaddurantetodoelao(nahed,1998) porloquepuedeserutilizadocomounforrajealternoenlaalimentacindecabras.Estudios realizadosmencionanquelashojasdeb.Cordatatienenuncontenidopromediodefenoles de 1.8 % (ayala et al., 2006) que pueden afectar las concentraciones normales de microorganismos ruminales por su efecto parasitida que tienen en otras especies como los peces(dazetal.,2000),efectoqueenmicroorganismosruminalesnosehareportado.Los resultados obtenidos en este estudio muestran que la concentracin de bacterias totales, celulolticas y protozoarios se encuentran dentro de los valores reportados por la literatura (dehority, 2003b) lo que confirma la buena adaptacin de los m i c r o o r g a n i s m o s r u m i n a l e s a e s t e t i p o d e s u s t r a t o .

Conclusiones Los resultados obtenidos en este estudio indican que raciones para cabras en mantenimientoconnivelesdeinclusindehasta30%deB.cordatanoafectanegativamente el comportamiento productivo y microbiolgico, adems que puede sustituir a ingredientes comoelrastrojodemaz. 1291


Bibliografa Ayala, B. A Capetillo L. C Cetina G. R Sandoval C. CyZapata C. C. 2006. Composicin qumicanutricionaldearbolesforrejeros.UADY.Presentacinpreliminar.PP52.ISBN 9709422324 Cesn,V.A.,AliphatF.W.,RamrezV.B.,HerreraH.J.G.,MartnezC.D.2007.Ganadera lecherafamiliaryproduccindequeso.Estudioentrescomunidadesdelmunicipiode TetlatlahuacaenelestadodeTlaxcala,Mxico.Tc.PecMx.45:6176. Church,D.C.andW.G.Pond.1992.FundamentosdeNutricinyAlimentacindeAnimales. Ed.Limusa.Mxico.pp:5153. Cobos, M. A., PrezSato M., PiloniMartini J., Gonzlez S. S., Barcena J. R. 2007. Evaluation of diets containing shrimp Shell waste an inoculum of Streptococcus milleri onrumenbacteriaandperformanceoflambs.Anim.FeedSci.Technol132:324330 Dehority, A. B. 2003a. Laboratory Manual for Classification and Morphology of Rumen Cilia Protozoa.CRSPresBocaRatonLondon,Tokyo.pp.120. Dehority A. B. 2003b. Rumen microbiology.Nottingham University Press. PP 372. ISBN: 1 897676999 Diaz, S. B. R Jimnez E. M y Aur de O. A. 2000. Evaluacin del efecto parasitida de los estractos acuasos y metanlico de Buddleia cordata HBK (Tepozn) sobre Costia necratixentilapia(Oreochromissp)Vet.Mx.,31:189194. Harrigan, W. F., M. E. McCance. 1979. Mtodos de Laboratorio en Microbiologa de AlimentosyProductosLcteos.Ed.Academia,LenEspaa.pp.361366. Nahed,J.Snchez,D.Grande,D.PrezGil,F.1998.Evaluationofpromissorytreespecies for sheep feeding in The Highlands of Chiapas, Mexico. Animal Feed Science and Technology73(12):5969. Orpin, C. G. and K. N. Joblin. 1997. The rumen anaerobic fungi. In: The rumen Microbial Ecosystem. (P. N. Hobson and C. S. Stewart, eds.). Blackie Academic and Professional,Publishers,London.pp:140195. SAS. Institute Inc. 2001. Estatistical Analysis System, SAS, Users Guide Statistics. SAS Inst.,Cary,NC.

1292


PREFERENCIAALIMENTARIAENCABRASCRIOLLASPORLAMISMA ESPECIEARBREAYARBUSTIVAENAGOSTADEROSDELNUDO MIXTECO,MXICO

PREFERENCEFEEDINCREOLEGOATSBYTHESAMESPECIESTREEANDSHRUBIN RANGELANDSOFTHENUDOMIXTECO.MEXICO1 2 *FranciscoJavierFrancoGuerra GustavoGmezCastro JulioCesarCamacho 1 1 1 Ronquillo JorgeEzequielHernndezHernndez OscarA.VillarrealEspinoBarros y 1 MaraHernndezRos

*FacultaddeMedicinaVeterinariayZootecnia.BenemritaUniversidadAutnomade Puebla.4surNo.304,Col.Centro.Tecamachalco,PueblaC.P.75480.Mxico.Correo electrnico:[email protected] 2 DepartamentodeProduccinAnimal.FacultaddeVeterinaria.UniversidaddeCrdoba. CampusdeRabanales,14014.Crdoba,Espaa.

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RESUMEN EnlareginMixtecaoaxaqueasellevaacabopreferentementelacradeganadocaprino bajoelsistemadelibrepastoreotrashumantesiendoestaunadelasprincipalesactividades quegeneraningresoseconmicosalapoblacin(Franco,1999).Lavegetacinpresenteen la falda, parte media y alta de las montaas que conforman el paisaje del Nudo Mixteco donde pastorean caprinos y ovinos est constituido por estratos de especies holrticas y neotropicales diversas con potencial silvopastoril a la fecha no bien estudiado (Arias et al., 2004Francoetal.,2005).Porello,esimportanteconocerlaspreferenciasalimentariasdel ganado caprino durante la trashumancia en relacin con la frecuencia de aparicin de especiesarbreasyarbustivasydeltapizherbceoenlosdiferenteshbitatsqueconforman losagostaderosdeestaregin.Elpropsitodelpresenteestudiofuedeterminarelnivelde selectividad alimentaria de un hato caprino constituido por 963 animales en pastoreo trashumante en los distintos estratos vegetales de aquellas plantas cuya frecuencia de aparicin fue constante en cinco de los seis agostaderos de la Mixteca Baja y de la Costa Oaxaqueadondesellevoacaboestaexperiencia.Paradeterminarelniveldeselectividad seescogieronseisanimalesalazardediferenteedadysexo(tresmachosytreshembras) aplicndose el mtodo de observacin directa del pastoreo mediante el conteo y suma del conjunto de bocados dados a cada especie arbustiva y sus partes, as como al estrato herbceo en su conjunto (Snchez Rodrguez et al., 1993 Perevolotsky et al., 1998 Bartolometal.,1998)establecindoselosdistintosnivelesdepreferenciamedianteeltest decomparacindemedias(HSD)deTukeydelpaqueteStatisticayparaevaluarlosefectos 1293


delosfactoresagostaderoyespecieeinteraccindeambosysusrespectivosnivelessobre la variable dependiente no. de bocados dados se utilizo el procedimiento lineal general (GLM)delpaqueteSASemplendoseelmodelolineal:Yijk = m + ai + bj + ai bj +eijk,ypara conocerlamagnituddeparticipacindelasvariablesindependientessobrelaselectividadse estimaronloscomponentesdelavarianzamedianteelprocedimientoRMLdelpaqueteSAS. Debido a la existencia de un mosaico complejo de comunidades vegetales en el Nudo Mixteco donde pastorea el ganado caprino, solo siete especies arbreoarbustivas (14.5%) tuvieron una frecuencia de aparicin en cinco de los seis agostaderos de un total de 48 especies determinadas como las de mayor consumo en los tres periodos estacinales (verano,otooeinvierno)dndeseregistrestaexperiencia.Losresultadosdeesteestudio sealanquehayunamayorpreferenciaporaquellasleosascuyacoberturayfrecuenciade aparicinesabundante(Francoetal.,2005). Palabrasclave:evolucindelconsumo,no.debocados,leosas,cabras.

INTRODUCCI N Paraelpresenteao2009,segnelpronsticodeproduccindecarneencanaldecaprino (SIAPSAGARPA, 2009) el estado de Oaxaca seguir ocupando el 2 lugar con 4,483 toneladasdespusdelestadodeCoahuilaconunaproduccinesperadade5,133toneladas, participando en la produccin nacional ambos estados con el 11.8% y el 10.3% de lo pronosticado,respectivamente.Losprincipalesproductoressecircunscribenprimordialmente en zonas ecolgicas restrictivas con vocacin para este tipo de ganadera como son los estadosdelnortedelarepublicaCoahuila,NuevoLen,SanLuisPotosyZacatecas,cuyo perfil culinario bien definido es la produccin de carne de cabrito con un costo elevado al consumidorlaotrazonaselocalizaenlosestadosdelcentroysuroestecomosonPuebla, Oaxaca y Guerrero en la regin Mixteca los cuales una gran parte de la produccin es dedicada a la tradicional matanza de Tehuacan a finales de ao para la elaboracin de la carnedechito,elmoledecaderasymenudenciascotizndosetambinapreciosaltospara el consumidor (Len Zaragoza, 2004). Por todo lo anterior, es importante conocer la utilizacindelosrecursosnaturalesmedianteelestudiodelcomportamientoalimentariodel ganadocaprinoenlosdiferenteshbitatsdelareginparamejorarsuaprovechamiento.

MaterialyMtodos Elpresenteestudiosellevoacaboenlosagostaderosqueformanpartedelosbosquesde PinoEncino y EncinoPino dela Sierra Madre del Sur(Nudo Mixteco)localizados entre los 1658'y1725'latitudnorteylos9745'ylongitudoeste9803',conunaaltitudentrelos 1900 y 2380 msnm y con climas que van del templado subhmedo C(w) con lluvias en verano al semiclido subhmedo (A Cw) con lluvias en verano y otoo. De un rebao constituido por 963 caprinos, se escogieronal azar seis animales de diferente edad y sexo 1294


(tres machos y tres hembras). Se utiliz el mtodo de la observacin directa del pastoreo medianteelconteoysumadelconjuntodebocadosdadosacadaespeciearbrea,arbustiva yensuconjuntoalestratoherbceo(SnchezRodrguezetal.,1993Barrosoetal.,1995), establecindose3nivelesdepreferencia.Estetipodecontrolrealizadoabarco180minutos, estoes,unterciodeltiemporealdepastoreo.Losdatosobtenidossesometieronalanlisis estadstico,aplicandodesdeelanlisisdehomocedasticidaddevarianzahastalapruebaa posteriori de comparacin de medias de Tukey en el paquete Statitistica v 5.0 para determinar en las leosas de mayor selectividad y frecuencia de apracin si existen diferencias significativas. Para evaluar el efecto delos factoresagostadero yespecie y sus respectivos niveles sobre la variable dependiente (n de bocados) se empleo el procedimientoGLMdelpaqueteSASv6.04,aplicandoelsiguientemodelolineal:Yijk = m + ai + bj + ai bj +eijk,dondeYijk esigualalndebocadosdadosdelacabrak enlaespeciei enel agostaderoj m eslamediageneral ai eselefectodebidoalaespecievegetal bj eselefecto debidoalagostadero ai bj eselefectodebidoalainteraccinespecieagostaderoyeijk esel error.Paramedirlainfluenciadelosfactoreszona,especieeinteraccindeambassobrela variabilidad dela preferencia por las distintas especies arbreas y arbustivas se calcularon loscomponentesdevarianzamedianteelprocedimientoRMLdelpaqueteSASv6.04.

RESULTADOSYDISCUSIN Del total de 18 especies leosas ms preferidas en los seis agostaderos sujetos de este estudio, solo siete especies fueron consumidas repetidamente por el ganado caprino, debindose en gran medida por un lado, a su condicin endmica y por el otro, a su considerable densidad en los distintos agostaderos. Las siete especies arbreoarbustivas son:Quercusliebmannii,Cercocarpusmacrophyllus,Eysenhardtiapolystachya,Amelanchier denticulata, Acacia pennatula, Acacia farnesiana y Mimosa lacerata., ver Tabla 1. La evolucin en la preferencia del ganado caprino por el follaje de la especie arbrea Q. liebmannii, es similar durante los meses de julio y agosto, esto es, en los dos primeros agostaderos,asicomotambinentreelmesdeagostoyseptiembre(agostaderos2y3),y solo hubo diferencia significativa en el nmero de bocados entre los meses de julio y septiembre (agostaderos 1 y 3), disminuyendo su apetecibilidad durante el mes de septiembre(Figura1).Labajaapetecibilidadenelmesseptiembre(agostadero3)seexplica por un lado, a la escasa poblacin de arbustillos tiernos, adems la mayor altura de las ramas en los encinos viejos impide a las cabras acceder al follaje, y por el otro, la competencia de otras especies de leosas y del estrato herbceo en las preferencias del ganadocaprino,elcualdiversificasudieta,comolosealanSnchezRodrguezetal.(1993) yPerevolotskyetal.(1998),entreotros.

1295


TABLA 1. EVOLUCINDELAPREFERENCIAPORLAMISMA ESPECIEARBREAYARBUSTIVAENLOSDIFERENTESAGOSTADEROSYPERIODOSESTACINALESENUNAJORNADACOMPLETADEPASTOREO AGOSTADEROS YPERIODOS ESTACIONALES

(Z1)Verano (Z2)Verano (julio) NxBoc. (agosto) NxBoc.

(Z3)Otoo (septiembre) NxBoc.

(Z4)Otoo (octubre) NxBoc.

(Z5)Otoo (noviembre) NxBoc.

Quercus liebmannii Cercocarpus macrophyllus Eysenhardtia polystachya Amelanchier denticulata Acacia pennatula Acacia farnesiana Mimosa lacerata

a ab b 651 64.41 417 47.09 336 96.69 a 1309

988 46.30a 2098 ab 1498

a

406 72.99b 1404

b

135.93ab 1899 b 1403

114.17 2421 67.18 604 5.27 8b a

74.14 1807 163.7 425 40.42b 2120 b b

103.76 1448 97.07b

150.70

241.74

a 1754

178.27b 1670 a 2877

8 4.53b 587 1.69 7

125.48

168.20a 1130

132.45

Valoresenlasfilascondistintaliteralsondiferentes(P2%),fueronloscompuestosmsefectivosmostrando completareduccindelabacteria(34logs)demanerainmediata(0minutos).Muysimilaral anterior,elaceitedeyerbalimnysuprincipalcomponente,citral(ambos>2%),presentaron unainhibicintotaldeE.colienterohemorrgicainmediatamente(0minutos),mientrasqueel aceite de canela (>2%) y su componente principal, aldehdo cinmico, presentaron una completa reduccin bacteriana a la hora. Los resultados indicaron que la sobrevivencia microbiana dependi de la concentracin del antimicrobiano as como del tiempo de incubacin. Estos resultados evidencian una fuerte actividad antimicrobiana de estos componentes derivados de plantas contra E.coli O157:H7. Esta evaluacin tambin demuestra que los aceites esenciales sus derivados pueden actuar como protectores de alimentoscontrabacteriaspatgenas. PALABRAS CLAVES: aceites esenciales, actividad, antibacterial, compuestos

antimicrobianos,patgenosalimenticios.

Resumen Foodborne pathogens are a threat to public health worldwide. They are disseminated via foods and adversely affect the food industry, agriculture, consumers and the national economy. Enterhemorrhagic E. coli (EHEC) produce two kinds of toxins, Shigalike toxin 1 (Stx1) and Shigalike toxin 2 (Stx2) which isalso known as Shigatoxigenic or Verotoxigenic strain. EHEC is one of the most important foodborne bacteria and its affectation is very important to human health, mainly for the presence of HemolyticUremic Syndrome (HUS) whichcauseahighdamageinchildren.Becausemanyconsumersprefernaturalcompounds over synthetic additives, research on plantderived safe compounds for their antimicrobial activities against foodborne pathogens is gaining widespread acceptance. The purpose of the present study was to evaluate the antimicrobial activities of essential oils (oregano, cinnamon, lemongrass) and their active components (carvacrol, cinnamaldehyde, citral) againstEscherichia coliO157:H7. Three concentrationsof the test substances (0.3%, 0.2% and 0.1%) were prepared by dissolving/suspending in sterile phosphatebuffered saline (pH34 7.0).Theseformulationswerethenaddedtothetestbacterialcultures(10 CFU/ml),mixed 1726


thoroughly,andincubatedat37C.Thesurvivingbacterialpopulationswereenumeratedat0, 1, 3, 5 and 24 hours. All test compounds showed potential in vitro antimicrobial activity against all pathogens tested. In general, S. enterica was more susceptible to the plant antimicrobialsthanwasL.monocytogenes.Allantimicrobialsinducedcompletereduction(34 logs)ofE.coliO157:H7at1hour.OreganooilanditsmaincompoundCarvacrolillustrated the most effective bactericidal activity against the pathogen immediately (0.2%). Next, the most effective ones were Lemongrass oil and its principal compound Citral which show complete reduction at o minutes, too (0.2%), and finally, presented great bacterial activity wereCinnamonoilandcinnamaldehydeshowedcompletereductionat1h.Microbialsurvival dependedonboththeconcentrationofantimicrobialsandtheincubationtime.Theresultsof this study demonstrate strong antimicrobial activities of edible plant compounds against foodbornepathogensandhavethepotentialtoprotectfoodsagainstsuchpathogens. KEY WORDS: Essential oils, antibacterial activity, antimicrobial compounds, foodborne pathogens.

TEXTO: Introduccin:

EscherichiacolipertenecealfamiliadelasEnterobacteriaceas,esunbacilogramnegativoelcualpresentaflagelos.Otracaractersticaquepresentaesqueesqueseclasificacomouna bacteriaanaerobiafacultativa,oxidasanegativaypositivaalindol.Entreotrascaractersticas, la mayora de las E. coli fermentan sorbitol, pero la cepa O157:H7, clasificada como enterohemorrgica,nolohace,ademsquenocreceencaldosatemperaturasidealesparao estas bacterias que son a 45.5 C. Tampoco produce glucoronidasa por lo que a las

pruebas diagnsticas diferenciales en MUG negativa. Dentro de sus mecanismos patognicos, esta cepa es reconocida por la formacin de algunas citotoxinas entricas como lo son Verotoxignicas Shiga o toxinas parecidas a la toxina Shiga. Las cepas se identifican serolgicamente por sus antgenos de superficie, el lipopolisacarido o Antgeno O,yporelantgenoflagelarH.(Yousef,2003)

E.coliO157:H7produceenterocolitishemorrgicaenhumanosyanimales(Griffin,1991).Secreequesolo100clulaspuedendesencadenarlainfeccinyelperododeincubacindura de 3 a 4 das durante los cuales produce sus toxinas en el intestino. (Yousef, 2003) Cordovez,etal(1992)realizaronunestudioclnicoepidemiolgicoenChile,paradeterminar 1727


si la enterohemorrgica E. coli estaba asociada al Sndrome HemoliticoUremico (SHU) en nios encontrando que esta afeccin est altamente relacionada con la presencia del patgeno. SehareportadolapresenciadeE.coliO157:H7envarioshospederos,taleselcasodeun reporte en de dicho patgeno en heces de cerdo (Feder et al, 2003) quienes recolectaron muestras de excremento en los Estados Unidos y detectaron la presencia de los genes txicos eaeA,Stx1,yStx2 pormediodelapruebadePCR.Otrosestudioshancomprobado queelpatgenosehapodidoaislardeobjetosinanimadoscomolosonlasfuentesdeagua paraconsumodebovinos(Rice,2000)eincluso,sehademostradolainfeccindepersonas quevisitanesetipodeexplotaciones(Crump,etal,2002),yaquesonlosbovinosunosde losprincipalesreservoriosdelaenfermedad.(Griffin,1991).Sinembargo,sonlosalimentos el destino final para ingerir este patgeno como los son algunos vegetales como la alfalfa (radish alfalfa) (Itoh et al, 1998), o bien directamente de la carne cruda de animales infectados(Lekowskaetal,2002)comolacarnemolida(Agaougluetal,2000)ylacarnede pollo.(Doyle,1987) Recientemente,elusodeloscompuestosextradosdeplantashasidounagranalternativa para eliminar este tipo de patgenos, tal es el caso de uso de algunos aceites esenciales como el eugenol, el timol y el mentol y su actividad antimicrobiana en la desinfeccin y preservacindefresas(Wangetal,2007)obienotrosaceitesesencialescomoelcarvacrol (unodelosprincipalesextractosdelaceitedeorgano)ensuusocontraE.coliO157:H7en condicionesdealmacenamiento.(Duetal,2008) El principal objetivo de esta investigacin fue evaluar la actividad antimicrobiana de tres aceites esenciales (organo, yerba limn y canela) y sus principales compuestos activos (carvacrol,citralyaldehdocinmico)contralacepaverotoxigenicaEscherichiacoli0157:H7 procedentesdeanimales,alimentosyhumanos. MaterialesyMtodos: Preparacindemediosycultivosbacterianos: Las cepas de E.coli enterohemorrgica fueron evaluadas. Los medios de cultivos utilizados fueronprimeramenteCaldodeTripticasadeSoyacon0.6%deextractodelevadura.Todas lasmuestrasfuerondiluidasconaguapeptonada,comosolucinbuffer.Yfinalmenteparasu enumeracin,lasbacteriasfueronsembradasenAgardeTripticasadeSoya. ExtraccindelDNAbacteriano: 1728


La Extraccin del material gentico bacteriano y el diseo de los cebadores fueron de acuerdoalasinstruccionesquemuestraBlancoatal(2004).Conlaintencinderecuperarel DNA bacteriano, se recolectla bacteria delcultivo de Agar con tripticasa de soya. Se suso pendi en 250 l de agua esteril y se incub a 100 C por 5 minutos. El sobrenadante fue

recolectadopararealizarlatcnicadePCRdescritaabajo.Losiniciadoresutilizadosfueron Stx1 Forward: CGCTGAATGTCATTCGCTCTGC, Stx1 Reverse:

CGTGGTATAGCTACTGTCACC, Stx2 Forward: CTTCGGTATCCTATTCCCGG, Stx2 Reverse:CTGCTGTGACAGTGACAAAACGC(EurofinsMWG/operon). RealizacindelaReaccinenCadenadelaPolimerasaMltiple: Siguiendo las instrucciones efectuadas por Blanco at al (2004), se tomaron 7 l de sobrenadante de DNA y se mezclaron con 150 ng de cada iniciador 0.2 mM de cada desoxinucleotido(dATP,dGTP,dCTPydTTP)10mMdeTrisHCl(pH8.8)1.5mMdeMgCl 50 mMKCl y 1 Ude Biotaq DNA Polimerasa para una reaccin de volumen final de 30l.o LascondicionesdePCRfueroniniciarconunadesnaturalizacin2minutosa94 Cseguida o o o de35ciclosde94 Cporunminuto(desnaturalizacin),55 Ca66 Cporunminuto(primera o alineacin)y72 Cporunminuto(sntesisdeDNA).Lavisualizacindelasamplificaciones

fue realizadapor medio de electroforesis engel utilizando agarosa al 2% preparada enun bufferdeTBA(89mMTris,89mMcidobrico,2.5mMEDTA)con5ldebromurodeetidio, elcualfuesometidoaunaintensidadde130Vpor40minutosparaamplificarelsegmento deseado.Posteriormentelosgelesfueronvisualizadosaluzultravioleta. ActividadantimicrobianadelosaceitesesencialescontraE.coliO157:H7: SepreparuncocteldetrescepasquefueronpositivasalastoxinasStx1yStx2 porreaccin en cadena de la polimerasa (PCR). (Fig. 1) Los compuestos antimicrobianos (aceite de organo, aceite de canela, aceite de hierba limn) as como sus componentes principales (carvacrol,aldehdocinmicoycitral,respectivamente)fuerondisueltosenunbufferdeagua salinaestrilfosfatada.Enseguidaserealizarondilucionesseriadasa0.3%,0.2%,y0.1%en tubos de micro centrifuga (90l). Consecutivamente, se muestrearon los organismos3 4 aadiendosucorrespondientecantidadacadatubo(10l10 10 CFU/ml).Lostubosse

mezclaronvigorozamenteusandovortex(30segundos)ysesembraroninmediatamenteyseo incubarona37 C.Laspoblacionesbacterianassobrevivientesfueronenumeradasa1,3,5y

24horas.

1729


Figura 1. Gel de poliacrilamida con bromuro de etidio el cual muestra la presencia de los genesprecursoresdelastoxinasShigaStx1 (302pb)yStx2 (516pb)lascualesaparecenen todosloscarrilesdel2al10,exceptoenel9enelcualsoloapareceelStx1.Loscarriles11y 12 contienen los controles negativos mientras que los carriles 1 y 13 muestran los marcadoresmoleculares(DNAladder100pb).

Resultados: 1) Todos los compuestos utilizados presentaron actividad antimicrobiana contra E. coli O157:H7. 2)Elaceitedeorganoysuprincipalcomponente,carvacrol(>2%),fueronloscompuestos msefectivosmostrandocompletareduccindelabacteria(34logs)demanerainmediata (0minutos).(Fig.2yFig.5) 3)Muysimilaralanterior,elaceitedeyerbalimnysuprincipalcomponente,citral(ambos >2%), presentaron una inhibicin total de E. coli enterohemorrgica inmediatamente (0 minutos).(Fig.3yFig.6) 4) Por otro lado, el aceite de canela (>2%) y su componente principal, aldehdo cinmico, presentaronunacompletareduccinbacterianaalahora.(Fig.4yFig.7) 5)Losresultadosindicaronquelasobrevivenciamicrobianadependidelaconcentracindel antimicrobianoascomodeltiempodeincubacin. 1730


Fig.2.Representacingrficadelaactividadantimicrobianadelaceitedeorganocontrala cepaenterohemorrgicaE.coliO157:H7.

Fig.3.Representacingrficadelaactividadantimicrobianadelaceitedecanelacontrala cepaenterohemorrgicaE.coliO157:H7.

1731


Fig. 4. Representacin grfica de la actividad antimicrobiana del aceite de Yerba limn contralacepaenterohemorrgicaE.coliO157:H7.

Fig. 5. Representacin grfica de la actividad antimicrobiana del Carvacrol contra la cepa enterohemorrgicaE.coliO157:H7.

1732


Fig.6.RepresentacingrficadelaactividadantimicrobianadelAldehdocinmicocontrala cepaenterohemorrgicaE.coliO157:H7.

Fig. 7. Representacin grfica de la actividad antimicrobiana del Citral contra la cepa enterohemorrgicaE.coliO157:H7. Discusin: La efectividad de los aceites esenciales utilizados en este trabajo contra E. coli O157:H7, muestran la gran oportunidad de poder escoger este tipo de productos naturales contra aquellos patgenos que afectan los alimentos. Este trabajo coincide en gran parte con la investigacin realizada por Burt (2003) en la cual prob la eficacia antimicrobiana de los aceitesesencialescomocarvacrol,aldehdocinmico,eugenol,timol,entreotros,encontra 1733


de E. coli O157:H7, Listeria monocytogenes, Salmonella Typhimurium, Shigella dysenteria,

BacilluscereusyStaphylococcusaureus.Losresultadosfuerontanfavorablescomonuestrotrabajo y adems ellos reportaron el sinergismo que pueden producir la combinacin de algunosdestoscomoelcarvacrolconeltimoloelaldehdocinmicoconeleugenol.Citral y otros aceites esenciales fue trabajado por Kim et al (1995) quienes demostraron la gran actividad antimicrobiana contra E. coli O157:H7, aunque mencionan que Citral fue ms efectivocontraVibriovulnificus. Otros trabajos realizados in vitro, aunque no especifican que trabajaron con la cepa O157:H7,demostraronquealusarlosaceitesesencialescontraE.coliyotrascepasgran negativas,losresultadosobtenidosonverdaderamentedeseables.Taleselcasodeltrabajo realizadoporOlasupoetal(2003)quienesprobaronlaactividadantimicrobianadelcarvacrol y del aldehdo cinmico, entre otros aceites esenciales contra E. coli y Salmonella

Typhimurium y dichos aceites demostraron, al igual que nuestra investigacin un potencialmuygrandecontraestosenteropatgenos.Similarmente,Lpezetal(2007)utilizaronaceite decanela,aceitedecanelaytimol,yresalta,principalmentelagranactividadantimicrobiana que present el aceite de canela contra estas enterobacterias, difiriendo un poco con nuestros resultados en donde el aceite ms efectivo fue el de organo. Esto puede ser posibleaquelacepaqueellosutilizaronnoeralacepadeE.coliO157:H7,sinosolamenteE.

colispp.La mayora de los trabajos, muestran la eficacia de estos componentes pero utilizndolos sobre alimentos, parte en la cual nosotros estamos por publicar. Sin embargo muestran la gran eficacia de de estos aceites como es el caso Belletti et al (2008) quienes probaronla eficacia del Citral sobre ensalada lista para comer adquirida de los supermercados, la cual fueinfectadaconE.coliyeliminadaeficazmentedespusalaplicarelantimicrobiano.Dela mismaforma,Kisko((2005)usocarvacrolyaceitecinmicoparainactivarE.coliO157:H7en jugodemanzanaendondemencionaninteresantesdatosacercadelareduccinbacteriana que producen estos aceites a bajas dosis (0.25 1.25 mM) incluso mencionan que la combinacin de carvacrol con pcymene podra tener tambin un accin sinrgica en la prevencinyconservacindejugosdemanzananopasteurizados. Por otro lado, se han realizado trabajos sobre lneas celulares infectadas con E. coli Eck 26/75 como el realizado por Dusan et al (2006) quien infecto clulas intestinales con ste patgenoyestudiolaefectividadantimicrobianadelalgunosaceitesesencialesquenosotros 1734


utilizamos tales como el aceite de organo y el aceite de canela, similar a nuestro trabajo, aunquecondiferentecepa,ellosreportaronunamuybuenactividadantimicrobianaofrecida porestosdosproductosnaturales. Creemos, que al ser estos aceites esenciales ricos en polifenoles, actan contra la membrana celular de la bacteria, sus protenas y su DNA, realzando de esa forma su actividad antimicrobiana. Burt et al (2007) reportan que el uso del carvacrol incrementa la produccindelaprotena60(HeatShockprotein60)lacualinhibelasntesisdeFlagellina enlaE.coliO157:H7,produciendoassieliminacin. Conclusiones: Los resultados presentes en esta investigacin mostraron que el uso de los aceites esenciales y sus principales componentes, tal como con el aceite de Organo y carvacrol, aceitedecanelayaldehdocinmico,yelaceitedehierbalimnycitral,puedeninactivarala enterobacteria E. coli serotipo O157:H7, destruyndolo e inhibiendo su crecimiento a despus de una hora de su inoculacin. Al parecer el de mayor efecto, en relacin a la concentracindelosantimicrobianosfueelaceitedeorganoyelcarvacrol. Tambin se marc que la actividad antimicrobiana de estos componentes incrementa proporcionalmenteconlaconcentracinyeltiempodeincubacin. Elusodeestetipodeantimicrobianostieneunfuturomuyprometedor,porloqueseinvitaa que se continen realizando trabajos semejantes a est, ya sea in vitro o sobre alimentos, lneas celulares eincluso enanimales administrando este tipo de compuestos como aditivo paraalimentodeusopecuario.

Agradecimiento: La investigacin realizada en el laboratorio de la Dra. Ravishankar fue apoyada por el ColegiodeAgriculturayCienciasdelaVida(CollegeofAgricultureandLifeSciences)dela UniversidaddeArizona,Tucson,AZ,U.S.A. SeagradecealM.S.LibinZhuporsuasistenciatcnicaenestetrabajo. Bibliografa Agaoglu,S.M.T.YavuzM.BerktasandH.Gdcoglu.2000.DetectionofEscherichiacoli O157:H7inretailgroundbeef,rawgroundbeefpattiesandrawmeatballssoldinVan. EasternJ.ofMedec.5(2):7375. 1735


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ESTUDIOCOMPARATIVODELGNEROKLEBSIELLA SP.PROCEDENTE DEDOSFUENTESDEAISLAMIENTOCOMPARATIVESTUDYOFGENUSKlebsiella sp.FROMTWOSOURCESOFISOLATION JaviePiloniMartini([email protected])*,LuciaLpezReyes**,MoissCarcao Montiel**, GuadalupeMTorresCardona* *UniversidadAutnomadelEstadodeHidalgo(UAEH),(01771)7172000ext.46104611, C.P.43600. **BenemritaUniversidadAutnomadePuebla(BUAP),(01222)2295637(01222)22955 00,Fax:(01222)2295636,C.P.72570. Resumen ElgneroKlebsiellacuentaconcincoespecies:K.pneumoniae,K.oxytoca,K.planticola,K. terrgena y K. mobilis, son bacilos Gram negativos, aerobios y anaerobios facultativos, sin movilidad. El gnero Klebsiella se ha encontrado en el intestino, vas respiratorias y vas urinarias como patgenos oportunistas en humanos. Tambin se ha aislado de races de algunos pastos, cereales y exudados radiculares. En este trabajo se realiz el estudio comparativodebacteriasdelgneroKlebsiellaspp.aisladasdedosfuentes:infeccionesde humanos y de la rizsfera del teocintle en base a pruebas bioqumicas, niveles de fijacin biolgicadenitrgenoyresistenciaaantibiticos.EnlaidentificacindeKlebsielladeorigen clnicoseaislaron49bacteriasdelascualesun65.3%fueronK.pneumoniaey34.7%fueron K.oxytoca.EnKlebsielladeorigenagrcolasecaracterizountotalde54bacteriasun7.4% fueron K. pneumoniae y un 92.6% K. oxytoca. Posteriormente, se le realiz el ensayo de reduccindeacetilenoabacteriasdeKlebsielladeorigenclnicoobservandoqueun12.8% tuvieronlacapacidaddereduciracetilenoenetileno,mientrasqueenelcasodelascepasde origen agrcola el 80% de estas mostraron dicha capacidad. Los ensayos de antibiosis mostraronquelascepasclnicaspresentaronnivelesderesistenciamayoresalascepasde origen agrcola. Los resultados revelaronque dichas poblaciones son diferentestantoen la identificacin, fijacin de nitrgeno como en la concentracin mnima inhibitoria (CMI) en algunosantibiticos. Palabras clave: Klebsiella sp., Pruebas bioqumicas, Fijacin de nitrgeno y concentracin mnimainhibitoria.

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Abstract The genus Klebsiella has five species: K. pneumoniae, K. oxytoca, K. planticola, K. terrigenous and K. mobilis, are Gram negative, aerobic and facultative anaerobes, without mobility. The genus Klebsiella has been found in the gut, respiratory and urinary tract infectionsasopportunisticpathogensinhumans.Ithasalsobeenisolatedfromrootsofsome grasses, cereals and root exudates. This work was carried out a comparative study of bacteria of the genus Klebsiella spp. isolated from two sources: human infections and teocintle rhizosphere, based on biochemical tests, levels of biological nitrogen fixation and antibioticresistance.IntheidentificationofKlebsiellaclinicaloriginwereisolated49strainsof which 65.3% were Klebsiella pneumoniae and 34.7% were Klebsiella oxytoca. In Klebsiella from agriculture was characterized a total of 54 strains 7.4% were K. pneumoniae and K. oxytoca 92.6%. Subsequently, it made the acetylene reduction assay Klebsiella strains of clinical origin observing that 12.8% were able to reduce acetylene to ethylene, while in the caseofagriculturaloriginstrains80%oftheseshowedthatcapacity.Antibiosistestsshowed that isolates showed higher levels of resistance to strains of agricultural origin. The results revealedthatthesepopulationsaredifferentintheidentification,nitrogenfixationandinthe minimuminhibitoryconcentration(MIC)insomeantibiotics. Key words: Klebsiella sp., Biochemical tests, Nitrogen Fixation and Minimal Inhibitory Concentration.

Introduccin ElgneroKlebsiellaspp.esunbaciloGramnegativode0.3ma1.0mdedimetroy0.6a 6.0 m de largo. Sus clulas son capsulares, inmviles, aerobias y anaerobias facultativa (Grimont et al., 1992). Este gnero cuenta con cinco especies las cuales son: K. pneumoniae,K.oxytoca,K.planticola,K.terrigenayK.mobiliscuyadiferenciacinsedacon base a caractersticas genticas, morfolgicas y bioqumicas (Grimont et al., 1992 Kellyet al.,1985).EntrelasespeciesdeKlebsiellaK.pneumoniaeyK.oxyticasonlosdiaztrofosde vidalibremejorestudiados.Sinembargo,existenpocosdatosquerelacionenlaspoblaciones de Klebsiella asociados con plantas con poblaciones de Klebsiella asociadas a humanos (Bergersen, 1980 Raziin, 1984). La atmosfera contiene un 79% de nitrgeno el nutrimento ms limitante para el crecimiento de los organismos, el cual en el aire existe como un gas inerte N2 (Foth, 1987) algunas especies de bacterias pueden convertirlo en amoniaco y hacerlo til para las plantas mediante la fijacin biolgica de nitrgeno (Foth, 1987). Las bacteriascapacesdefijarnitrgenosonconocidascomodiaztrofosintegradosporalgunos gneros como: Enterobacter, Escherichia, Erwinia, Azospirillum, Citrobacter y Klebsiella 1739


(Razzin, 1984 Roper y Ladha, 1995). Muchas cepas de Klebsiella fijan nitrgeno cuando crecen en forma anaerobia, propiedad que no se encuentra en otras bacterias entricas (BrockyMadigan,1991).LamayoradelasbacteriasdelgneroKlebsiella,adiferenciade lasEnterobacteriasySerratiasonsensiblesalacefalotina(Davisetal.,1990).Bacteriasde K. pneuminiae y K. oxytoca son naturalmente resistentes a las aminopenicilinas y las carboxipenicilinas y susceptibles a otros antibiticos lactmicos (Grimont et al., 1992). El objetivo de este trabajo fue realizar un estudio comparativo entre bacterias del gnero Klebsiellasp.aisladasdefuentesclnicasconbacteriasdelgneroKlebsiellasp.aisladasde fuentesagrcolasenpruebasbioqumicas,fijacindenitrgenoyresistenciaaantibiticos. MaterialesyMtodos Las bacterias de origen clnicas se obtuvieron de las muestras proporcionadas por el laboratorio de Microbiologa Mdica, de pacientes del servicio interno del Hospital Universitario de Puebla. Una vez obtenidas las muestras, se procedi a sembrar, directamentedelrecipientequecontenanlosdiferentesexudados,encaldoMacConkey.Las condiciones de crecimiento de las bacteriasfueron durante 24h a 32C, detectando un vire del indicador de color purpura a amarillo. Para proceder a su purificacin se sembr en el medio Hino y Wilson suplementado con adonitol como fuente de carbono selectivo para el crecimiento de Klebsiella sp. Posteriormente, se procedi a hacer una siembra en medio gelificadodeMacConkeyparaconfirmarlapurezadelcultivoparasuposterioridentificacin. Las bacterias de origen agrcola con las que se trabajo forman parte de la coleccin del Laboratorio de Microbiologa de suelo del C.I.C.M. de la Benemrita universidad Autnoma de Puebla. Aisladas por el Q. F. B. Heraclio Osorio Tepeyahuitl (Osorio, 1998). La identificacin del gneroKlebsiella se realiz pruebas bioqumicas y morfolgicas primarias como:movilidad,catalasa,citocromo,indol,rojodemetilo,VogesProskauer,lisina,arginina, urea, crecimiento alas temperaturas 4C, 10C y 44.5C as como la tincin Gram. Para la determinacin de la actividad reductora de acetileno (ARA). La actividad de la enzima nitrogenasa fue determinada por la tcnica de reduccin de acetileno. Se empleo un cromatgrafo de gases con detector de ionizacin de flama, columna de 2m X 1/8 y un soportedePoropakNde80100mallasconvelocidaddeflujodeairede300mL/min.Las bacterias seleccionadas se sembraron en medios de cultivo para Klebsiella y se incuban a 32C durante 24h, a los frascos viales con capacidad de 10 mL estriles y con 5 mL del cultivosecambiaronlostaponesdealgodnportaponesdehulereversiblesysereemplaz el35%deaireporgasacetilenoparallevaracaboelensayodereduccindeacetilenoenel cromatgrafo de gases (Bergersen, 1980 Mascara et al., 1988). A los aislados representativos deladiversidadpoblacionalse le determinolos niveles de resistencia a14 antibiticos naturales: Cefalosporina (Cf), Penicilina (Pn), Gentamicina (Gm), Kanamicina (Km), Neomicina (Nm), Estreptomicina (Sp), Sisomicina(Si), Tetraciclina (Tc), Cloranfenicol (Cm), Fosfomicina (Fm), Polimixina (Pm), Vancomicina (Vm), Espectinomicina (Sp) y Amikacina (Ak). Se realizaron diluciones seriadas al triple en disolventes adecuados para 1740


obtener concentraciones entre (2 g/mL a 2048 g/mL de cada uno de los antibiticos en medios para el crecimiento de Klebsiella (Bergersen, 1980) adicionado de peptona de casena ajustando la poblacin bacteriana a 50 UK (Unidades Klett). Posteriormente, se sembraronlasplacasconayudadeunmultiinoculadordeStter,partiendodeprecultivosde 18h de incubacin para determinar la concentracin del antibitico a la cual no se observa crecimiento. Como control se incubaron placas de agar sin antibitico y con el solvente empleadoparalasolubilizacindelmismo.Eldiseoestadsticofuecompletamentealazar, se hizoun anlisis de varianzadelos datos con GLM y la comparacin de medias se hizo conlapruebadeTukey(SAS,1998). Resultados Setrabajoconuntotalde103bacteriasdeKlebsiellasp.,(Cuadro1)54bacteriasdeorigen agrcola y 49 bacterias fueron de origen clnico, la caracterizacin de las 103 bacterias indicanque36correspondenalaespeciedeK.pneumoniaesiendoun34.9%y67bacterias correspondenalaespecieK.oxytocaqueequivaleaun65.1%.Delas54bacteriasdeorigen agrcola cuatro fueron identificadas como K. pneumoniae y 50 como K. oxytoca lo que representa un 7.4% y 92.6% respectivamente. Por otro lado, de las 49 bacterias de origen clnico32correspondenalaespecieK.pneumoniae querepresentaun65.3%siendolas17 restantes34.7%ycorrespondealaespecieK.oxytoca. Tabla1.FrecuenciayporcentajedelaidentificacindebacteriasdelgneroKlebsiellasp.de origenclnicoyagrcola. Bacteriasclnicas BacteriasAgrcolas Total(%) Klebsiellapneumoniae 32(65.3%) 4(7.4%) 36(34.9%) Klebsiellaoxytoca 17(34.7%) 50(92.6%) 67(65.1%) Klebsiellasp. 49(100%) 54(100%) 103(100%)Se utilizaron como referencia cepas de Klebsiella pneumoniae (13883), K. oxytoca (13182), K. planticola (33531)yK.terrigena(33257).

Enelensayodeladeterminacindelaactividadreductoradeacetileno(ARA)abacteriasde Klebsiella sp. de origen clnico (Cuadro 2), solo el 12.8% de las bacterias ensayadas, tuvieronlacapacidaddereducirelacetilenoaetileno,mientrasqueel87.2%delasbacterias restantes no se les detecto dicha actividad. Se encontraron valores cuya media de tres repeticionesvande0.55a43.17nM/metileno/h/mLdemediodecultivo. Tabla2.ReduccindeacetilenodeseisbacteriasdelgneroKlebsiellasp.deorigenclnico. No.debacterias nM/metileno/h/mL* K121 43.124.77a K143 38.577.66a K155 21.921.74b K153 12.781.74b K142 12.432.40b 1741


K119

0.550.52c

*=promediodetresrepeticionesseguidodesudesviacinestndar,seutilizelmtodoestadsticodeTukey. Letrasigualesdentrodelamismacolumnanodifierenestadsticamenteap0.05.

Al evaluar la actividad ARA en 16 bacterias de Klebsiella sp. de origen agrcola como se observa en el cuadro 3, un 80.0% de las bacterias tuvieron la capacidad de reducir el acetileno a etileno,los valores promedio van de 0.38 a 72.69 nM/etileno/h/mL de medio de cultivo.

Tabla3.Reduccindeacetilenode16bacteriasdelgneroKlebsiellasp.deorigenagrcola. No.debacterias nM/metileno/h/mL* TB50 72.697.29a TB51 56.022.73ab TB486 48.986.52bc TB52A 47.958.60bc TB52 42.472.40bcd TB85 38.237.43bcde TB93 32.7114.2cdef K174 24.552.26def TB95 22.167.64efg K175 19.546.95fgh TB51A 14.835.44fghi TB87 5.610.47ghi TB91 5.173.87ghi TB88 4.382.06ghi TB92 3.82.38hi TB83 0.380.23i*=promediodetresrepeticionesseguidodesudesviacinestndar,seutilizelmtodoestadsticodeTukey. Letrasigualesdentrodelamismacolumnanodifierenestadsticamenteap0.05.

Para la determinacin de la concentracin mnima inhibitoria (CMI) en el cuadro 4 se presentanlosantibiticosempleados,cuyadivisinenaminoglucsidos,lactmicosyotros

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antibiticos es manifestada. Tambin se presenta la abreviatura para denominar dichos 1 antibiticosylaconcentracinengmL queseemplearonpararealizarelensayo. Cuadro 4. Antibiticos empleados para la determinacin de la concentracin mnima inhibitoria(CMI)abacteriasdelgneroKlebsiellasp.deorigenclnicoyagrcola. CONCENTRACIN ANTIBITICOS ABREVIATURAS g/mL AMINOGLUCSIDOS Estreptomicina Sm 21024 Kanamicina Km 2512 Gentamicina Gm 2256 Neomicina Nm 2128 Espectinomicina Sp 21024 Amikamicina Ak 2128 Sisomicina Si 2128 Vancomicina Vm 2512 LACTMICOS Pn Cf OTROS Fm Cm Tc Pm

Penicilina Cefalosporina

22048 22048

Fosfomicina Cloranfenicol Tetraciclina Polimixina

22048 22048 22048 2128

Sedeterminoelporcentajeydistribucindelaresistenciaa14antibiticosentre16bacterias de Klebsiella sp. de origen clnico (cuadro 5) dentro de los antibiticos el grupo de aminoglucsidos se pudo determinar que en el caso de la sisomicina en un 56.2% de las 1 bacterias inhibieron su crecimiento a una concentracin de 16 g mL . Sin embargo, el 43.7% de las bacterias restantes inhibieron su crecimiento a una concentracin de 256 g 1 mL ,enamikacinael56.2%delasbacteriasinhibieronsucrecimientoaunaconcentracin 1 de32gmL ,enneomicinaun62.4%delasbacteriasapruebainhibieronsucrecimientoa 1 una concentracin de 128 g mL , en el caso de la gentamicina el 56.2%delas bacterias 1 analizadas presentaron una inhibicin de crecimiento a g mL , en el caso de la espectinomicina un 37.4 de las bacterias presentaron sensibilidad a una concentracin de 1 1024 g mL , sin embargo el 62.5% restante mostraron resistencia a este antibitico 1 concentracin mayor o igual a 2048 g mL , en kanamicina un 43.6% de las bacterias 1 presentaronunasensibilidadaunaconcentracinde256gmL ,mientrasqueel56.2%de lasbacteriasrestantespresentaronresistenciaaunaconcentracinmayoroiguala2048g 1 mL yenestreptomicinaun68.6%delasbacteriasaanalizarpresentaronunainhibicinde 1743

IIIFOROINTERNACIONALBIOLOGICOAGROPECUARIO1 crecimiento a una concentracin de 512 g mL . Dentro de los antibiticos lactmicos para la cefalosporina el 87.5% de las bacterias ensayadas fueron sensibles a una 1 concentracinde64gmL ,enelcasodelapenicilinael56.1%inhibieronsucrecimientoa 1 una concentracin de 2048 g mL , mientras que el 43.7% restante fue resistente a una 1 concentracin mayor a 2048 g mL . Otros antibiticos como polimixina, el 100% de la 1 bacteriaspresentaronunainhibicindesucrecimiento2gmL ,enelcasodelatetraciclina 1 el49.9%inhibisucrecimientoaunaconcentracinde4gmL ,sinembargoel50.1%de 1 lasbacteriasrestantespresentaronunaresistenciaa512gmL enelcasodelcloranfenicol un56.1%delasbacteriaspresentaronsuinhibicindecrecimientoaunaconcentracinde 1 128 g mL y por ltimo la fosfomicina en ese antibitico un 68.7% fue resistente a una 1 concentracinmayoroiguala2048gmL .Elporcentajeyladistribucindelaresistenciaa 14antibiticosentre16bacteriasdeKlebsiellasp.deorigenagrcola(cuadro6).Dentrode los antibiticos aminoglucsidos se puede apreciar que la sisomicina el 93.7% de las 1 bacteriaspresentaronsensibilidadaunaconcentracinde16gmL ,amikacinaun93.7% 1 de las bacterias fueron sensibles a una concentracin de 32 g mL , mientras que en 1 espectomicina un 68.7% presentaron sensibilidad a una concentracin de 256 g mL , en vancomicinael100%delasbacteriaspresentaronresistenciaaunaconcentracinmayoro 1 igual a 1024 g mL , mientras que la kanamicina, mostr que un 81.2% de las bacterias 1 mostraronsensibilidadaunaconcentracinde64gmL yestreptomicinaun87.4%delas 1 cepaspresentaronunainhibicindecrecimientoenunaconcentracinde128gmL .Para los antibiticos lactmicos como en el caso de la cefalosporina el 100% de las bacterias 1 fueronsensiblesaunaconcentracinde8gmL ,enelcasodelaspenicilinasel62.3%de 1 lasbacteriaspresentaronunainhibicindecrecimientoaunaconcentracinde256gmL . En otros antibiticos como la polimixina, el 100% de las bacterias fueron sensibles a una 1 concentracinde2gmL ,enelcasodecloranfenicolel100%delasbacteriasinhibieron 1 sucrecimientoaunaconcentracinde128gmL ,mientrasqueenlatetraciclinael93.7% 1 de las bacterias presentaron sensibilidad a una concentracin menor o igual a 1 g mL , mientrasqueenlafosfomicinael31.2%delascepasfueronsensiblesaunaconcentracin 1 de 2048 g mL , mientras que el 68.7%5de las cepas restantes presentaron resistencia a 1 esteantibiticoaunaconcentracinmayora2048gmL

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Tabla 5. Porcentaje y distribucin de la resistencia a 14 antibiticos entre 16 bacterias del Antibiticos 1 2 4 16 16 CMI 18.7 50.0 43.7 25.0 12.5 12.5 6.2 8 32 64 64 128 32 g/mLg/mL CMI 6.2 93.7 37.5 6.2 18.7 6.2 35.7 93.7 31.2 68.7 37.5 18.7 6.2 31.2

256 512 1024 2048 >2048 512 1024 2048 >204

Sisomicina Amikacina Neomicina Gentamicina Espectinomicina Vancomicina Kanamicina 81.2 31.2 6.2 Estreptomicina 31.2 18.7 37.5 6.2 Cefalosporina 25.0 75.0 50.0 12.5 25.0 Penicilina 6.2 6.2 6.2 Polimixina 100 Tetraciclina 93.7* 6.2 43.7* Cloranfenicol 43.7 12.5 6.2 18.7 Fosfomicina 6.2 gneroKlebsiellasp.deorigenclnico.CMI=ConcentracinMnimaInhibitoria

6.2 7.5 6.2 43.7 37.5 37.5 37.5 6.2 18.7 6.2 18.7 12.5 6.2 62.5 100 100 6.2 6.2 6.2 56.2 18.7 6.2 12.5 25.0 6.2 18.7 12.5 6.2 6.2 12.5 31.2 18.7 12.5 6.2 12.5 31.2 6.2 6.2 43.7

6.2 6.2 50.0 18.7 6.2

37.5 37.7 6.2

6.2 31.2 68.7 12.5 68.7

=Mayoroigualalaconcentracinsealada

*=Menoroigualalaconcentracinsealada

Tabla 6. Porcentaje y distribucin de la resistencia a 14 antibiticos entre 16 bacterias del gneroKlebsiellasp.deorigenagrcola.CMI=ConcentracinMnimaInhibitoria

=Mayoroigualalaconcentracinsealada

*=Menoroigualalaconcentracinsealada

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Discusin LosresultadosdelaidentificacindelasbacteriasdeKlebsiellasp.obtenidosen este trabajo fueron tomados como base loscriterios de Grimont (1992) y de Holt (1994). Sin embargo, se sabe que las pruebas bioqumicas no son el 100% confiableparalaidentificacindelasespeciesbacterianas(AustinyPriest,1992). Sehanrealizadoestudios,dondemsdel50%delasbacteriasdeKlebsiellasp. aisladasdeorigenagrcolamuestranlacapacidaddefijarelnitrgeno,noaslas bacteriasdeorigenclnicoyaquemenosdel30%fijannitrgeno(Haahtelaetal., 1990).Loanterioressemejantealosresultadosobtenidosenestetrabajoyaque el80%delasbacteriasdeKlebsielladeorigenagrcolafueroncapacesdereducir acetilenoaetileno,mientrasquesolamenteel12.8%delasbacteriasdeKlebsiella sp. de origen clnico ensayadas presentaron dicha actividad. La fijacin de nitrgenoesunadelascaractersticasclarasparadiferenciaraisladosdefuentes agrcolas y de fuente clnica (Haahtela et al., 1990). K. pneumonie nuestra actividad nitrogenasa a temperaturas de 20 a 37C., mientras que K. terrigena muestrasuactividadatemperaturasquevande14a20C.Estaesunaactividad muyimportanteparalacaracterizacindelasdosespecies(Haahtela,1985).Las bacterias asociadas a la fijacin de nitrgeno viven enla superficiedelasraces dondeellassebeneficianporlosexudadosdelasplantas(Haahtelaetal.,1985). LasbacteriasentricasdelgneroKlebsiellafrecuentementepuedenseraisladas delasuperficiedelasracesdevariasplantas,lasbacteriasfijadorasdenitrgeno son clasificadas como asociativas fijadoras de nitrgeno (Haahtela et al., 1985). Bacterias de K. pneumoniae, K. terrigena, Enterobacter agglomerans y Azospirillum lipoferum entre otras han sido propuestas como inoculantes diaztroficos en asociacin con algunas plantas y se han detectado efectos variables en produccin de materia seca y fijacin de nitrgeno (Haahtela et al., 1987). Existen diaztrofos tales como Azospirillum, Enterobacter, Azotobacter y Klebsiella asociadas a la rizsfera y a las races de arroz, sorgo, maz, trigo y pastosforrajerosentreotros.K.planticola,inoculadaenalgunosvegetalestienela capacidad para sobrevivir y ser dominante en las races de estos vegetales, ademslabacteriaprotegealasracesdeloshongospatgenos.Porlotanto,K. planticola puede ser recomendada como biofertilizante para vegetales bsicamente de invernadero (Yemtsev, 1994). Klebsiella de origen clnico posee gran resistencia a antibiticos en comparacin a las bacterias de Klebsiella no clnicas (Talbot et al., 1980). Semejantes son los resultados reportados en este trabajo,yaquesepudoobservarquelosaisladosdefuentesclnicasfueronms resistentesquelosaisladosdefuentesagrcolas,paraelcasodeestreptomicina, ampicilina, cloranfenicol, kanamicina, tetraciclina, neomicina y gentamicina como 1746


se muestra en los cuadros (5 y 6). Adems Talbot et al., 1980 determinaron la resistencia a antibiticos entre cepas deKlebsiella aisladas de fuentes clnicas y fuentes agrcolas. Se considera que la resistencia a antibiticos por bacterias coliformes en el caso de Klebsiella puede ser una seria complicacin en el tratamiento de enfermedades de humanos y animales. Los resultados obtenidos paralaresistenciaalos diferentes antibiticos en bacterias deKlebsiella sp. nos permite determinar la existencia de un patrn diferencial de resistencia a los antibiticos dependiendo del sitio de aislamiento de las bacterias, como lo mencionan algunos autores (Baldani et al., 1982 Dbereiner y Baldani, 1979 LpezReyes et al., 1989). Los microorganismos que viven en el suelo se enfrentan a diversas interacciones, como la inhibicin por la presencia de sustancias antibiticas que en su mayora han sido detectadas a partir de aislamientosdelsuelouotroshbitatnaturales(Brocketal.,2004Gottlieb,1976 Tarkkanenetal.,1992),porloqueesprobablequejueguenunpapelimportante enlasinteraccionescompetitivasenelsuelo(Alexander,1980Gottlieb,1976),por lotantonoessorprendentequeotrosmicroorganismosresistanatalesantibiticos enelsueloenparticularenlarizsfera(Baldanietal.,1982Brow,1961Rhodes Robert y Skinner, 1982). Las cepas deKlebsiella sp. presentan diferencia enlos niveles de resistencia a los antibiticos dependiendo de la zona de aislamiento (PriegoFlores, 1995), adems en otros estudios se ha demostrado que hay una alta incidencia de bacterias resistentes a antibiticos en la rizsfera y en races lavadasyesterilizadas(DbereineryBaldani,1979LpezReyesetal.,1989).Se handetectadosgenesderesistenciaenplsmidosy/oplsmidostransposonesde forma que se pueden trasfrir fcilmente entre diferentes cepas y especies bacterianas,recientementesehandescritootrosmecanismosmedianteloscuales los genes pueden ser trasmitidos, en este caso, participan en el proceso unas piezasdematerialgenticodenominadosintegrones(Martnez,1997).Aisladosde bacterias de K. pneumonie son caractersticamente resistentes a ampicilina y carbenicilina, pero la mayora de los aislados son susceptibles a otras drogas. Adems K. oxytoca tiende a ser ms susceptible a carbenicilina (Kelly et al., 1985). Conclusiones La diversidad gentica de de las bacterias del gnero Klebsiella aisladas de fuentes clnicas y de fuentes agrcolas mostraron ser similares a la de otras especies reportadas en otra literatura y revelaron que dichas poblaciones son diferentes as como en ensayos dela fijacin de nitrgeno y enla concentracin mnimainhibitoriaaalgunosantibiticos. 1747


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CARACTERIZACINDELASPRINCIPALESPLANTAS FORRAJERASDETIPOARBREOYARBUSTIVOCONSUMIDAS PORCAPRINOSENLAMIXTECAPOBLANA*Hernndez,HJE.,Villarreal,EBO.,Franco,GFJ.,Camacho,RJC.YJurez,FCE. FacultaddeMedicinaVeterinariayZootecnia.BenemritaUniversidadAutnoma dePuebla.4Sur304Tecamachalco,Puebla.Mxico.C.P.75480.Telfono.(222) 2861241.Correoelectrnico:[email protected]. Resumen La Mixteca poblana ubicada al sur del estado, es una regin de grandes contrastes sociales, econmicos, polticos yambientales. rea constituida por 53 2 municipiosenunasuperficiede11025Km .LoscaprinosenlaMixtecaPoblana bajo el sistema de pastoreo extensivo sedentario, ramonean estas arbreo arbustivas durante todo el ao, sin conocer el productor las caractersticas fenolgicas y alimenticias de su potencial forrajero en la regin. El objetivo del trabajofue:caracterizarlasprincipalesplantasforrajerasdetipoarbreoarbustivo queconsumeelganadocaprinoenlaMixtecaPoblana.Laspartesdelasplantas consumidas por los caprinos al observarse, fueron recolectadas efectuando el corte en aquellas ramas que presentaban flor, fruto y hoja con unas tijeras de jardinera marca Truper (modelo S40), una vez colectadas se herborizaban en papel peridico, y en grupos de cinco ramillas se amarraban en la tabla prensa para ser enviadas al Herbario y Jardn Botnico de la BUAP para su caracterizacin taxonmica. El resultado de la caracterizacin taxonmica, nos muestraquedelas22arbreasyarbustivasconsumidasporelganadocaprino,el 36.4%corresponden ala familiaMimosaceae, 18.1%a laFabaceae, 13.6%a la Burseraceae,9.1%alaCaesalpiniaceaeylasrestantesseisfamiliasconsolouna especie (Anacardiaceae, Asteraceae, Rhamnaceae, Rutaceae, Julianaceae y Tiliaceae). El 54.5% de las leosas que consumen las cabras (12 especies) pertenecenalagranfamiliadelasleguminosas,loquerepresentaunsuministro constantedeprotenanaturalparaelganadoenlasdistintaspocasdelao. Summary The Mixteca Poblana located south of the state, is a region of great contrasts social,economic,politicalandenvironmental.Areaconsistsof53municipalitiesin 1750


2 an area of 11 025 km . Goats in the Mixteca Poblana under extensive grazing systemsedentary,thesetreeshrubgrazethroughouttheyear,withoutknowingthe producer phenological and nutritional characteristics of forage potential in the region.Theobjectivewastocharacterizethemainfoddertreelikeshrubthatgoats consumedintheMixtecaPoblano.Theplantpartseatenbythegoatstobeseen, werecollectedbymakingthecutonthosebranchesthathadflower,fruitandleaf withscissorsgardeningTruperbrand(modelS40),oncecollectedareherbarium innewspaper,andingroupsoffivetwigstiedtogetheratthepresstabletobesent to the Herbarium and Botanic Garden BUAP for taxonomic characterization. The result of the taxonomic characterization, shows that of the 22 tree and shrub species consumed by goats, 36.4% related to the family Mimosaceae, 18.1% of the Fabaceae, 13.6% of the Burseraceae, Caesalpiniaceae 9.1% and the remaining six families with only one species (Anacardiaceae, Asteraceae, Rhamnaceae, Rutaceae, Julianaceae and Tiliaceae). The 54.5% of wood consumed by goats (12 species) belong to the large family of legumes, which representsasteadysupplyofnaturalproteinforlivestockinthedifferentseasons.

Introduccin Comoesconocido,larelacinsueloplantaanimalhombreesfundamentalparael desarrollodelasdistintascomunidadesbiticasdentrodeunecosistemaydeesta interaccin, las plantas son la clave de la vida que existe en la tierra, sin ellas muchosorganismosvivientesdesapareceran,yaquelasformasdevidasuperior dependen directa o indirectamente de las plantas para alimentarse (Hodgson e Illius.1996). Es importante mencionar que las primitivas especies de cultivos fueron vegetales de constitucin herbcea o subleosa, que el indgena las consumacomoalimentoademsdelarelacindeestasplantasconelconsumo por parte de los animales en la compaa y subsistencia del hombre ( www.sisbi.unse.edu.ar/6as/Gentilent).Loanteriorhallevadoalasplantasdeforma general y en especial a las arbustivas y rboles, ha desarrollar mecanismos de adaptacin fsicos y qumicos antiherbvoro y mecanismos fisiolgicos para enfrentarseconxitoasuambientenatural(Belovskyetal.,1991).Elusodelos rbolesenlossistemasdeproduccionesagropecuarias,sobretododondeexiste escasez de lluvias y recursos importados, es esencial para su adecuado funcionamiento (rskov, 2005). As, la Mixteca Poblana cuenta con una riqueza natural de plantas arbreas y arbustivas, muchas de ellas pertenecientes a la familia de las leguminosas (Rzedowsky, 1994 Franco, 1999 Arroyo, 2007 HernndezHernndez, 2006). Estas arbreas cuando su cobertura y diversidad es abundante en el agostadero, los pequeos rumiantes sobretodo los caprinos muestran un comportamiento ramoneador altamente selectivo y variado contrario 1751


al comportamiento generalista cuando hay escasez y poca diversidad (Franco et al., 2003). Al contar con esta variedad de arbreoarbustivas como forraje consumidoporelganadocaprinoenlareginMixteca,esfundamentalconocerlas por el potencial alimenticio a estos pequeos rumiantes en ese ambiente silvopastoril en que se explotan. El trabajo tuvo como principal objetivo: caracterizar las principales plantas forrajeras de tipo arbreoarbustivo que consumeelganadocaprinoenlaMixtecaPoblana. MaterialesyMtodos El presente trabajo se desarrollo en las comunidades de Maninancingo y Tehuaxtla,pertenecientesalmunicipiodePiaxtla,enlaMixtecaPoblanaubicadas en la parte sur del estado. Localizadas en los paralelos 17 59 00" 1812 30" latitud norte y en los meridianos 9810 54" 9821 36" longitud occidental. Las comunidades tienen una altitud de 1180 msnm la flora es selva baja caducifolia espinosa, xerfita, matorral con izotes y arbreoarbustiva, encontrndose pequeasreasboscosasdeencinoypastizales. Suclimaesclidosubhmedoconlluviasenveranoysemisecomuyclido,con precipitacionespluvialesde350alos800mm,conunatemperaturapromediode 23C(INEGI2000).Losmaterialesutilizadosfueron:prensaparaherborizar,papel peridico, plumones, etiquetas para identificar, libreta de apuntes, cmara digital fotogrfica, 5 caprinos/UPF (unidades de produccin familiar) caprina y la encuesta realizada tipo Raj (1980) a 15 productores de las UPF de las comunidadesdeManinalcingoyTehuastla. Elmuestreosellevoacabodurante nueve meses con una frecuencia semanal, de Febrero a Octubre del 2005 abarcando distintos periodos estacinales, las partes de las plantas fueron recolectadas al observarse (mtodo in situ) directamente de los 5 caprinos marcados/UPF, efectundose el corte de aquellas ramas que presentaban hoja, flor y/o fruto con unas tijeras de jardinera marca Truper (modelo S40), para etiquetarse con su nombre comn y colocarse en la tablaprensa, para posteriormente llevarlas al herbario y Jardn Botnico de la Benemrita UniversidadAutnomadePuebla,parasuidentificacinyclasificacintaxonmica como parte principal de la caracterizacin de este potencial forrajero de tipo arbreoarbustivo, su fenologa, usos y partes vegetativas preferidas por el caprino. Finalmente los datos se procesaron estadsticamente a travs de los programas de Excel y SPSS 10.0 para Windows, para obtener los resultados a travsdeestadsticadescriptiva.

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ResultadosyDiscusin Comoresultadodelaencuestaaplicada,secompruebaquelasplantasarbreasy arbustivasconpotencialforrajeroenlaalimentacindeloscaprinossonconocidas demanerahabitualyempricaporlosproductoresdeestareginMixteca,algunas por su valorforrajero, otras por su valor medicinaly otras por usos (comestibles, maderables y artesanales entre otros). Sin embargo, como era de esperar, su conocimiento en el mbito cientfico de tipo taxonmico y nutricional es poco conocido.Detalforma,quedelas22especiesleosasidentificadasyclasificadas seencuentro10familiasdistintas(verTabla1),dondelamayoradelasespecies seconcentroen2familiasconel54.5%,siendoestaslafamiliaMimosaceaecon el36.4%ylafamiliaFabaceaeconel18.1%restante(grafica1),correspondiendo ambas familias al taxn de las leguminosas, esta situacin se asemeja a lo reportadoporFranco(1999)enagostaderosdelaMixtecaoaxaqueaconun33% yHernndezAcosta(2004)enunbosquetropicalvenezolano,reportandoun30% delasleguminosasdeltotaldelasleosasconsumidasporelganadocaprinoen ambasregionesdetalforma,quedeestaslomsapetecibleyatractivoparasu consumo son sus hojas, generalmente como brotes y los frutos muy maduros despusdecaeralsuelo(RicoArce,2001). Tabla 1. Nombres vernculos, cientficos y familias de las plantas arbreas y arbustivasmscomunesconsumidasporloscaprinosenlascomunidadesestudiadas delaMixtecaPoblana. Nombrecomn Familia Nombrecientfico Coco Anacardiaceae Cyrtocarpaprocera Capitaneja Asteraceae Verbesinacrocata Copalilloocopal Burseraceae Burseracopallifera Cuajioterojo Burseraceae Burseramorelensis Cuajioteamarillo Burseraceae Bursera fagaroides var. elongata Rompebotaorompebotas Caesalpiniaceae Sennawizliseniivarpringlei Picantilloosonajita Fabaceae Diphysafloribunda Sinnombrecomn Fabaceae Diphysasuberosa Cubatablanca Mimosaceae Acaciacochliacantha Huizacheohuisache Mimosaceae Acaciafarnesiana Tehuistle Mimosaceae Acaciapicachensis Mezquitemorado Mimosaceae Prosopislaevigata Pochote Rutaceae Zantoxyllosp. Brasil Caesalpiniaceae Haematoxylonbrasiletto Coatillo Fabaceae Eysenhardtiapolystachya Paloderatn Fabaceae Gliricidiasepium 1753


Paloblanco Huispancle rojo guxindani Barbadechivo Tullidora Copal Calahuate

Mimosaceae o Mimosaceae Mimosaceae Rhamnaceae Julianaceae Tiliaceae

Acaciacoulteri Acaciamacilenta Havardiaacatlense Karwinskiamollis Amphipterigiumadstringens Heliocarpustomentosus

Grfica1.Distribucinporcentualdelasespeciesarbr easyarbustivasporfamilias que consumen los caprinos en las comunidades de Maninancingo y Tehuaxtla, mpio dePiaxtla.

Elgrfico2nosmuestralosresultadosencuatrotiposdeestratos,deacuerdoa susporcentajesynumerodefamiliastaxonmicamente,segnloconsideraronlos productoresdelareginmixtecaalserencuestados.

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Grafico2.Loscuatroestratosdelostaxonesfamiliares, susporcentajesysuvalorforrajerootorgadoporlos productoresdelaMixtecaPoblana. 100% 80% 60% 40% 6 20% 7 0% Nmerodefamilias Porcentajes Calificacin productor Alto 55% 8 7% 19% 19% 9 10

1 2 2

Bajo

Mediano

Medianoalto

La grafica anterior, nos muestra que el porcentaje ms cuantioso fue para el estrato bajo donde seincluye un total de 6familias taxonmicas (Anacardiacea, Rutaceae, Tiliaceae, Rhamnaceae, Poaceae y Julianaceae) con un 55%, sin considerarelpastonativollamadobramilla(Rhynchelytrumrepens)pornoserun forraje de tipo arbreoarbustivo enla Mixteca a pesar de ser consumible por el ganadocaprinoenelreadeestudio.Finalmente,lasleguminosasalcanzaronel mayor puntaje (10), en cuanto a su valor forrajero otorgado por el productor al calificarse este potencial forrajero de tipo arbreoarbustivo, caracterstica similar encuentra Arroyo (2007) al identificar y clasificar 9 plantas forrajeras de tipo leoso, de las cuales 6 alcanzaron el puntaje ms alto en promedio (9.83) otorgadoporlosproductoresdeesaregin.Porultimoesimportantesealar,que la estadstica descriptiva en proporcin a la media y desviacin estndar de los indicadores analizados se muestra una media de 8.50 para la calificacin del productor, alcanzando una DE de 1,29 lo cual es significativa en relacin al numero de la escala estimada del puntaje mnimo y mximo valorado por el productoralforrajeleosoqueconsumeelcaprinodelaMixtecaPoblana.

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Tabla2.Mediaydesviacinestndardealgunascaractersticasdelpotencial forrajeroconsumidoporelcaprinodelaMixtecaPoblana. N Mnimo Mximo Media DE Estratos 4 4 4 4 . Numerode familias 4 1 6 2.75 2.2174 Porcentaje deestratos 4 7 55 25% 20.7846 Calificacin del 4 7 10 8.50 1.2910 productor

Conclusiones La Mixteca Poblana cuenta con una gran diversidad de recursos forrajeros explotablesparalacaprinoculturadelaregin,detalformaquealcaracterizarse taxonmicamente, se conoce los nombres comunes y cientficos en especial de familias con un alto porcentaje de protena natural (leguminosas) favoreciendo el aporte nutricional de los caprinos en condiciones silvopastoriles. Adems, esta caracterizacin mostr cuatro estratos en que se encuentran estas leosas (estratobajo,mediano,medianoaltoyalto),locualfavoreceendiferentespocas del ao la sustentabilidad del ecosistema, y finalmente al calificar el productor el potencial forrajero leoso que tiene en su unidad de produccin, proporciona un datovaliosoenelcomportamientoalimenticiodesuganadocaprinoparaestudiar afuturosuvalornutricionalqueaportaesaalimentacindelaMixteca`Poblana. Bibliografa Arroyo, S. 2007. Clasificacin del potencial forrajero arbreoarbustivo de importancia para la caprinocultura en el municipio de Piaxtla, en la Mixteca Poblana.TesisdeLicenciatura.FMVZBUAP.Tecamachalco,Puebla.Mxico. Belovsky, G. E., Schimtz, O. J., Slade, J. B. y Dawson, T. J. 1991. Effects of spines and thorns on Australian arid zone herbivores of different body masses. Oecology.88:521528. Franco Guerra. F. J. 1999. Estrategias de Pastoreo y Aportaciones a la Optimizacin dela Explotacin Caprina en la Mixteca Oaxaquea. Mxico. Tesis doctoral.Crdoba,Espaa.pp.17.

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