Ingeniería de Biorreactores

Curva de Calibración para azúcares reductores

Método del ácido dinitrosalicílico para determinar azúcares reductores (DNS)

Preparación del reactivo DNS:

1. En un vaso de precipitados de 250 mL coloque en 50 mL de agua destilada.

2. Añada 20 mL de hidróxido de sodio 2N.

3. Agreque 1 g de Ac. 3,5-dinitrosalicílico.

4. Después de que todo el material se ha disuelto, agregue 30 g de tartrato doble de

sodio y potasio y agite hasta que se disuelvan.

5. Vierta cuantitativamente en un matraz aforado de 100 mL.

6. Afore con agua desionizada a 100 mL

7. Guarde en frasco ámbar para proteger de la luz.

Diluciones para la curva de calibración

1. Prepare una solución de glucosa con una concentración de 1g/L.

2. En tubos de ensaye perfectamente etiquetados coloque 0, 1, 2, 3,…, 10 mL de esta

solución y complete a 10 mL con agua destilada.

3. Someta cada una de las diluciones al método del DNS para la determinación de

azúcares reductores.

Técnica del DNS:

1. En tubos de ensaye perfectamente etiquetados, colocar 1 mL de la solución de

muestra.

2. Agregue 1 mL del reactivo DNS.

3. Desarrollar la coloración, colocando los tubos en un baño de agua en ebullición por

5 minutos exactamente.

4. Enfriar los tubos en un baño de agua fría y agregar 10 mL de agua desionizada.

5. Determinar la absorbancia del color obtenido a 540 nm, contra un blanco de agua

destilada, tratado de igual forma que las muestras.

6. Se prepara una curva de calibración con estándares de glucosa con

concentraciones desde 0 a 1 g/L.

Conc.

g/L 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0

A @

540 nm

Curva de calibración para biomasa

Diluciones para la curva de calibración

1. Prepare una suspensión de levadura de panificación con una concentración de 1 g/L

en medio de cultivo estéril y frío

2. En tubos de ensaye perfectamente etiquetados coloque 0, 1, 2, 3,…, 10 mL de esta

suspensión y complete a 10 mL con medio de cultivo estéril y frío.

3. Mida la absorbancia de cada dilución a 650 nm utilizando el medio de cultivo estéril y

frío como blanco.

4. Grafique concentración de biomasa vs absorbancia y obtenga la ecuación de la curva

de calibración.

Conc.

g/L 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0

A @

650 nm