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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE ODONTOLOGÍA
INSTITUTO SUPERIOR DE INVESTIGACIÓN Y POSGRADO
EFECTO INHIBITORIO DE CEPA ENTEROCOCCUS FAECALIS USANDO
PROPÓLEOS ECUATORIANOS, GLUCONATO DE CLORHEXIDINA E
HIPOCLORITO DE SODIO: IN VITRO
Trabajo de Investigación presentado como requisito previo a la obtención del Título de
Especialista en Odontopediatría.
AUTOR: Od. Johana Elizabeth Cerda Altamirano.
TUTOR: Dr. Fabricio Cevallos González
Quito, Enero 2017
iii
iv
APROBACIÓN DE TESIS
EFECTO INHIBITORIO DE CEPA ENTEROCOCCUS FAECALIS USANDO
PROPÓLEOS ECUATORIANOS, GLUCONATO DE CLORHEXIDINA E
HIPOCLORITO DE SODIO: IN VITRO
Quito, 23 de Enero del 2017
Dr. Alejandro Farfán Chacha
DIRECTOR DEL INSTITUTO DE INVESTIGACIÓN Y POSGRADO DE LA
FACULTAD DE ODONTOLOGÍA DE LA UNIVERSIDAD CENTRAL DEL
ECUADOR
Presente
De mis consideraciones
Los de abajo firmantes miembros del Jurado Calificador APROBAMOS la tesis titulada
EFECTO INHIBITORIO DE CEPA ENTEROCOCCUS FAECALIS USANDO
PROPÓLEOS ECUATORIANOS, GLUCONATO DE CLORHEXIDINA E
HIPOCLORITO DE SODIO: IN VITRO, cuyo AUTOR es la Od. Johana Elizabeth
Cerda Altamirano.
Dra. Elena Aillón
Presidente del Tribunal
Dra. Nilda Navarrete Dr. Fernando Aguilera
Miembro del Tribunal Miembro del Tribunal
v
DEDICATORIA
Todo lo puedo en Cristo que me fortalece, le doy toda gloria y honra a mi DIOS amado
por mostrarme que todo es posible para el que cree.
Mi amada familia que siempre está a mi lado, José, Cecilia, Byron, Paúl y Daniela,
gracias por su amor y apoyo incondicional. Al igual que mi amiga del alma Alexandra.
vi
AGRADECIMIENTOS
A mis padres, hermanos y cuñada
A la Universidad Central del Ecuador
Al Doctor Fabricio Cevallos González
Al Doctor Gustavo Tello
A la Doctora Rachide Acosta
vii
ÍNDICE DE CONTENIDOS
APROBACIÓN DE TESIS ............................................................................................. iv
DEDICATORIA ............................................................................................................... v
AGRADECIMIENTOS ................................................................................................... vi
ÍNDICE DE CONTENIDOS .......................................................................................... vii
ÍNDICE DE ANEXOS ..................................................................................................... x
ÍNDICE DE CUADROS ................................................................................................. xi
ÍNDICE DE TABLAS .................................................................................................... xii
ÍNDICE DE FIGURAS ................................................................................................. xiii
ÍNDICE DE GRÁFICOS .............................................................................................. xiv
Tema: Efecto inhibitorio de cepa enterococcus faecalis usando propóleos ecuatorianos,
gluconato de clorhexidina e hipoclorito de sodio: In vitro. ............................................ xv
RESUMEN ..................................................................................................................... xv
ABSTRACT .................................................................................................................. xvi
INTRODUCCIÓN ............................................................................................................ 1
CAPÍTULO I .................................................................................................................... 3
EL PROBLEMA .............................................................................................................. 3
1.1. Planteamiento del problema .................................................................................. 3
1.2. Justificación ........................................................................................................... 3
1.3. Objetivos ................................................................................................................ 4
1.3.1. Objetivo General............................................................................................. 4
1.3.2. Objetivos Específicos ..................................................................................... 4
1.4. Hipótesis ................................................................................................................ 5
1.4.1. Hipótesis de afirmación .................................................................................. 5
1.4.2. Hipótesis nula ................................................................................................. 5
CAPÍTULO II ................................................................................................................... 6
MARCO TEÓRICO ......................................................................................................... 6
2.1 Bacterias en patologías pulpares............................................................................. 6
2.1.1 Terapia pulpar en la dentición decidua ............................................................ 7
2.2 El Enterococcus faecalis ....................................................................................... 8
2.2.1. Características Microbiológicas ..................................................................... 8
2.3. Soluciones irrigantes intraconductos ..................................................................... 9
2.3.1 Características de las soluciones irrigantes ..................................................... 9
viii
2.4. Solución de hipoclorito de sodio ......................................................................... 10
2.4.1. Definición ..................................................................................................... 10
2.4.2. Características ............................................................................................... 10
2.4.3. Mecanismo de acción ................................................................................... 10
2.4.4. Concentración ............................................................................................... 10
2.4.5. Indicaciones .................................................................................................. 11
2.4.6. Efectos adversos ........................................................................................... 11
2.5. Solución de gluconato de clorhexidina ................................................................ 11
2.5.1 Definición ...................................................................................................... 11
2.5.2. Mecanismo de acción ................................................................................... 12
2.5.3. Concentración ............................................................................................... 12
2.5.4. Indicaciones .................................................................................................. 12
2.5.5. Efectos adversos ........................................................................................... 12
2.6. Propóleo ............................................................................................................... 13
2.6.1. Definición ..................................................................................................... 13
2.6.2. Historia ......................................................................................................... 14
2.6.3. Características ............................................................................................... 14
2.6.4. Mecanismo de acción ................................................................................... 15
2.6.5. Concentración ............................................................................................... 15
2.6.6. Indicaciones .................................................................................................. 15
2.6.7. Efectos adversos ........................................................................................... 16
2.6.8. Apicultura en Ecuador .................................................................................. 16
CAPÍTULO III ............................................................................................................... 18
METODOLOGÍA ........................................................................................................... 18
3.1. Tipo de Diseño de la investigación...................................................................... 18
3.2. Población de estudio ............................................................................................ 18
3.3. Selección y tamaño de la muestra........................................................................ 18
3.4.1. Criterios de Inclusión .................................................................................. 19
3.4.2. Criterios De Exclusión ................................................................................. 19
3.5. Operacionalización de Variables ......................................................................... 19
3.6. Materiales y Métodos .......................................................................................... 21
3.6.1. Equipos ......................................................................................................... 21
3.6.2. Materiales ..................................................................................................... 21
3.7. Procedimiento ...................................................................................................... 22
ix
3.7.1 Recolección del propóleo ecuatoriano de la región Costa y Sierra .............. 22
3.7.2 Obtención de los extractos hidro alcohólicos de los propóleos ecuatorianos de
la región Costa y Sierra al 50% .............................................................................. 24
3.7.3. Prueba microbiológica del extracto realizado .............................................. 25
3.7.4. Reactivación de cepa de Enterococcus faecalis ........................................... 26
3.7.5. Preparación del medio de cultivo ................................................................. 27
3.7.6. Preparación de los discos .............................................................................. 28
3.7.7. Antibiograma por difusión en un medio sólido ............................................ 29
3.7.8. Medición del efecto antimicrobiano ............................................................. 31
3.8. Forma y análisis para la obtención de los resultados .......................................... 31
3.9 Aspectos Bioéticos ............................................................................................... 31
CAPÍTULO IV ............................................................................................................... 33
RESULTADOS .............................................................................................................. 33
4.1. Discusión ............................................................................................................. 40
CAPÍTULO V ................................................................................................................ 44
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ............................................................. 44
5.1. Conclusiones ........................................................................................................ 44
5.2. Recomendaciones ................................................................................................ 45
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ........................................................................... 46
ANEXOS ........................................................................................................................ 58
x
ÍNDICE DE ANEXOS
Anexo N° 1. Certificado ................................................................................................. 58
Anexo N° 2. Certificado ................................................................................................. 59
xi
ÍNDICE DE CUADROS
Cuadro N° 1. Género de patógenos endodónticos comúnmente asociados a diferentes
formas de lesiones perirradiculares. ................................................................................. 7
xii
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla Nº 1. Operacionalización de variables ................................................................. 20
Tabla Nº 2. Halos de inhibición por grupo .................................................................... 34
Tabla Nº 3. Prueba de Normalidad ................................................................................ 35
Tabla Nº 4. Estadísticos descriptivos para el halo de inhibición por grupo .................. 36
Tabla Nº 5. Comparación de significancia entre pares .................................................. 38
Tabla Nº 6. Nivel de sensibilidad por grupo.................................................................. 40
xiii
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura N° 1. Abeja Apis Melífera ................................................................................. 13
Figura N° 2. Propóleo de la región Sierra ..................................................................... 23
Figura N° 3. Propóleo de la región Costa ...................................................................... 24
Figura N° 4. Propóleo en el mortero y pistilo ............................................................... 25
Figura N° 5. Propóleos pulverizado .............................................................................. 25
Figura N° 6. Propóleos en frasco ámbar ........................................................................ 25
Figura N° 7. Reactivación de cepa Enterococcus faecalis ............................................ 26
Figura N° 8. Turbulencia de muestra ............................................................................ 27
Figura N° 9. Preparación del medio de cultivo ............................................................. 27
Figura N° 10. Enterococcus faecalis ............................................................................. 28
Figura N° 11. Discos blancos agrupados ....................................................................... 28
Figura N° 12. Discos impregnados con soluciones ....................................................... 29
Figura N° 13. Difusión .................................................................................................. 29
Figura N° 14. Preparación del agar ............................................................................... 30
Figura N° 15. Colocación de discos en estufa ............................................................... 30
Figura N° 16. Muestra en la estufa ................................................................................ 30
Figura N° 17. Medición del efecto inhibidor ................................................................ 31
xiv
ÍNDICE DE GRÁFICOS
Gráfico N° 1. Diagrama de caja y bigotes para el halo de inhibición por grupo ........... 37
Gráfico N° 2. Media del halo de inhibición por grupo .................................................. 39
xv
Tema: Efecto inhibitorio de cepa enterococcus faecalis usando propóleos ecuatorianos,
gluconato de clorhexidina e hipoclorito de sodio: In vitro.
AUTOR: Od. Johana Elizabeth Cerda Altamirano.
TUTOR: Dr. Fabricio Cevallos González.
RESUMEN
La evolución de la Odontología ha permitido el uso de una serie de soluciones que
controlen los microorganismos que circundan la cavidad oral tal es el caso del
Enterococcus faecalis para cuyo control es muy común el uso del hipoclorito de sodio,
sin embargo el presente estudio propone la utilización del propóleo ecuatoriano de la
región Costa y Sierra al 50%, comparándolos con el gluconato de clorhexidina al 2% e
hipoclorito de sodio al 1% en la inhibición de la cepa Enterococcus faecalis. La
muestra de estudio de la cepa se determinó en 70 repeticiones y se dividió en 5 grupos
cada uno: dos grupos con extracto hidroalcohólico de propóleo ecuatoriano al 50%
siendo: G1 propóleo de la región Costa, G2 propóleo de la región Sierra, G3 gluconato
de clorhexidina al 2 %, G4 hipoclorito de sodio al 1 %, G5 control. El medio de cultivo
fue Muller Hinton más 2% de sangre. Posteriormente se preparó una solución de
Enterococcus faecalis al 0,5 McFarland, que se inoculó por siembra en superficie en
cajas de agar a los que se colocó discos de papel impregnados en las soluciones
investigadas, se incubó durante 48 horas y se medió el halo de inhibición. Se aplicó la
prueba Kruskal-Wallis con un nivel de significancia del 5%. Se concluye que el efecto
inhibidor del propóleo ecuatoriano registró halos de inhibición sobre el Enterococcus
faecalis bastante bajos y muy por debajo del gluconato de clorhexidina al 2% e
hipoclorito de sodio al 1%.
Palabras clave: antimicrobiano, Enterococcus faecalis, propóleo.
xvi
Title: Inhibitory effects of enterococcus faecalis using ecuadorian propolis, chlorhexidine
gluconate and sodium hypochlorite in vitro.
AUTHOR: Johana Elizabeth Cerda Altamirano.
TUTOR: Fabricio Cevallos González.
ABSTRACT
The evolution of Dentistry has allowed using a series of solutions for controlling oral
bacterial populations, as is the case of Enterococcus faecalis, which is commonly
controlled using sodium hypochlorite. However, this study proposes using Ecuadorian
propolis from its coastal and mountainous regions, at a 50% concentration, and
comparing the results against those obtained using 2% chlorhexidine gluconate and 1%
sodium hypochlorite, in terms of inhibiting Enterococcus faecalis growth. The study
sample was determined at 70 repetitions and divided into 5 groups, two of which
consisted of 50% Ecuadorian propolis water-alcohol extract. The groups were labeled as
follows: G1 propolis from the coastal region; G2 propolis from the mountainous region;
G3 2% chlorhexidine gluconate; G4 1% sodium hypochlorite; and G5, the control
group. The culture medium was Müller Hinton with 2% blood. Then, the study prepared
a solution of Enterococcus faecalis at 0.5 McFarland, which was inoculated in petri
dishes with paper discs steeped in the study solutions. The samples were incubated for
48 hours, after which we proceeded to measure the corresponding inhibition halos. The
Kruskal-Wallis test was applied with a 5% level of significance. The conclusion is that
Ecuadorian propolis registered a low level of inhibition against Enterococcus faecalis –
far below that of 2% chlorhexidine gluconate and 1% sodium hypochlorite.
KEYWORDS: antibacterial, enterococcus faecalis, propolis.
1
INTRODUCCIÓN
La caries severa temprana de la infancia es una devastadora infección dental que
afecta la salud oral (1). Las lesiones de caries no tratadas pueden avanzar a la pulpa y
producir infecciones del conducto radicular, formación de abscesos, fractura dental, y
pérdida dental (2). La microbiota de la caries temprana de la infancia es compleja e
incluye microorganismos ácidos tolerantes (3) al igual que las bacterias gram negativas
que contribuyen a la progresión de lesiones de caries profundas por consiguiente
infecciones en la pulpa y el conducto radicular de los dientes primarios (4).
En la lesión periapical crónica una de sus características es el desbalance entre la
resistencia del huésped con el número y la virulencia de microorganismos
intraradiculares existentes (5). Los avances tecnológicos en endodoncia ha facultado la
identificación del principal ecosistema bucal que desarrolla o no las lesiones
periapicales crónicas (6). En la infección polimicrobiana presente en necrosis pulpar y
lesión periapical crónica de los dientes permanentes predominan microorganismos
anaerobios (7). Así el Enterococcus faecalis se destaca en los estudios con
metodologías in vitro e in vivo porque se caracteriza por la formación de biopelículas
dentro de los dientes con y sin tratamiento de endodoncia (8,9).
Para disminuir la cantidad de bacterias intraradiculares es importante la irrigación
durante la endodoncia porque ayuda a eliminar (por remoción, disolución, o ambas)
(10,11,12). El irrigante más común y estándar es el hipoclorito de sodio en el
tratamiento de conductos a pesar de sus efectos adversos y tóxicos (13). Por
consiguiente se inicia la búsqueda de productos alternos como es el propóleo producido
por abejas, que se caracteriza por ser antibacteriano, antiinflamatorio, analgésico,
antioxidante, entre otras; la aplicación como irrigante podría mejorar el tratamiento de
endodoncia al reducir los efectos secundarios en comparación con el hipoclorito de
sodio (14).
Existe una tendencia en el mundo del uso de productos alternativos dentro de la
fitoterapia, sobre todo en países en vías de desarrollo particularmente para el Ecuador
gracias a su biodiversidad. El propóleo es una interesante propuesta como irrigante de
endodoncia además para el manejo de algunas patologías orales.
2
Teniendo como referencia los resultados beneficiosos se plantea realizar la presente
investigación con el propósito de determinar el efecto inhibitorio del propóleo
ecuatoriano de la región Costa y Sierra al 50%, el hipoclorito de sodio al 1% y el
gluconato de clorhexidina al 2% frente al Enterococcus faecalis in vitro, para identificar
el compuesto que nos permitirá brindar un tratamiento óptimo y eficaz para los
pacientes, además analizar la factibilidad de su producción y utilización para contar con
otras alternativas de tratamiento en Odontología.
Cabe mencionar que el presente estudio tiene como finalidad buscar un irrigante para
el tratamiento de endodoncia en la inhibición frente el Enterococcus faecalis al
considerar que el tipo de microorganismos son los mismos, tanto en piezas permanentes
como en las primarias, dejando abierto un campo de investigación que a futuro permita
realizar investigaciones más profundas para dientes primarios.
3
CAPÍTULO I
EL PROBLEMA
1.1. Planteamiento del problema
En Endodoncia se pretende inhibir las comunidades microbianas complejas y
compuestas de una gran variedad de bacterias con diferentes requisitos ecológicos y
potencial patógeno, siendo una de las etapas más importantes la irrigación de los
conductos radiculares para lo cual las soluciones que usualmente se utilizan en la terapia
pulpar presentan ciertas limitaciones. Muchos de ellos no cumplen con la función de
inhibir los microorganismos patógenos persistentes como el Enterococcus faecalis.
Esta situación da origen a la presente investigación para contribuir a los estudios que
determinan que al utilizar una solución irrigante en la terapia pulpar a base de
compuestos naturales como el extracto de propóleo con una actividad antimicrobiana
contra una amplia gama de microorganismos patógenos, se podrá evitar riesgos tóxicos
y lesiones a los tejidos circundantes al potenciar el efecto antibacteriano frente al
Enterococcus faecalis. Además el propóleo en Odontología se ha utilizado como agente
de recubrimiento pulpar, medio de almacenamiento para dientes avulsionados,
prevención de caries e hipersensibilidad dentinal (15).
En concordancia con lo anteriormente establecido el problema planteado fue de la
siguiente manera:
¿Cuál es el efecto inhibitorio entre el hipoclorito de sodio al 1%, el gluconato de
clorhexidina al 2% y el propóleo ecuatoriano al 50% de la región Costa y Sierra sobre la
cepa del Enterococcus faecalis?
1.2. Justificación
El Enterococcus faecalis es la especie más frecuente en el conducto radicular y los
dientes tratados con prevalencias que llegan hasta el 90% de los casos (16,17) con el
cual se probó la eficacia del efecto antibacteriano de los irrigantes que estaban
planteados. De la revisión bibliográfica la mayoría de estudios se enfocan en la
4
utilización del propóleo como solución irrigante de conductos radiculares en dientes
permanentes en consecuencia sería de mucha importancia que exista medicación
alternativa y natural para disminuir la microbiota de los conductos radiculares en dientes
primarios. En contraste existen investigaciones referente a las soluciones irrigantes de
conductos radiculares como Beckling A, señaló que el hipoclorito de sodio produjo un
daño periapical debido a la extrusión del mismo (18). En relación al gluconato de
clorhexidina se mencionó en cuanto a sus desventajas, la incapacidad de disolver tejido
pulpar necrótico (19). Por otra parte, Mattigatti et al., mostraron que la actividad
antimicrobiana del propóleo contra E. faecalis y C. albicans, parece ser una solución
irrigante efectiva contra microorganismos persistentes en conductos radiculares (20).
Por lo tanto, el presente estudio demostró que existen productos alternativos dentro
de la fitoterapia, como el propóleo que se podría potencializar su uso para la terapia
pulpar en dientes primarios, en comparación con otras soluciones irrigantes. Además
no existen estudios previos realizados en el país para determinar el efecto del propóleo
ecuatoriano al 50% de la región Costa y Sierra. Por consiguiente, el propósito principal
de esta investigación es efectuar un análisis comparativo sobre la efectividad
antibacteriana de las soluciones irrigantes de conductos radiculares en Endodoncia.
1.3. Objetivos
1.3.1. Objetivo General
Comparar el efecto de propóleo ecuatoriano al 50%, el gluconato de
clorhexidina al 2% y el hipoclorito de sodio al 1% en la inhibición del
Enterococcus faecalis.
1.3.2. Objetivos Específicos
Determinar el efecto inhibidor del propóleo ecuatoriano al 50% de la región
Sierra sobre el Enterococcus faecalis.
Determinar el efecto inhibidor del propóleo ecuatoriano al 50% de la región
Costa sobre el Enterococcus faecalis.
5
Comparar el promedio de los diámetros de halo de inhibición del Enterococcus
faecalis entre el propóleo ecuatoriano al 50% de las regiones Costa y Sierra, el
hipoclorito de sodio al 1% y el gluconato de clorhexidina al 2%.
1.4. Hipótesis
1.4.1. Hipótesis de afirmación
El extracto de propóleo ecuatoriano al 50% es efectivamente similar su efecto
inhibidor antibacteriano del Enterococcus faecalis en comparación al hipoclorito de
sodio al 1% y el gluconato de clorhexidina al 2%.
1.4.2. Hipótesis nula
El extracto de propóleo ecuatoriano al 50% tiene menor efecto inhibidor
antibacteriano de Enterococcus faecalis en comparación al hipoclorito de sodio al 1% y
el gluconato de clorhexidina al 2%.
6
CAPÍTULO II
MARCO TEÓRICO
2.1 Bacterias en patologías pulpares
En la infección polimicrobiana presente en la dentición primaria y permanente con
necrosis pulpar y lesión periapical crónica predominan microorganismos anaerobios
gram-negativos (7). En algún momento los microorganismos planctónicos desintegran
el tejido, lo que genera la colonización dentro de la cámara pulpar y formación de
biopelículas intraradicular (21,22). Por lo que se puede concluir que los
microorganismos y la microflora son etiologías más frecuente para las lesiones
periradiculares y patologías pulpares (23). En odontología muchos estudios que utilizan
diferentes metodologías in vivo e in vitro demuestran la importancia de las bacterias
anaeróbicas y endotoxinas gram-negativas en la etiología de las lesiones periapicales
crónicas (24,25).
La aplicación de nuevas técnicas de tratamiento de Endodoncia en los dientes
permanentes, determinó la microbiota presente y contribuyó en el desarrollo de mejores
materiales. Sin embargo, en la dentición decidua este progreso no se produjo de igual
manera. De modo que en escasos estudios se observó la falta de evidencia científica en
relación a soluciones irrigantes en los dientes primarios, además se considera en dientes
permanentes y primarios la microbiota intraradicular la misma (26).
7
Cuadro N° 1. Género de patógenos endodónticos comúnmente asociados a diferentes
formas de lesiones perirradiculares.
Fuente Siqueira, 2002
2.1.1 Terapia pulpar en la dentición decidua
En los dientes primarios la pro observación de la infección es de gran importancia
debido a las características óseas y la proximidad del germen del diente sucesor a las
raíces del diente deciduo que contribuyen a la propagación de la infección (27). No
obstante, al analizar los exámenes complementarios radiológicos durante el proceso
terapéutico en los dientes temporales se observa la compleja anatomía intra radicular
con curvas muy marcadas y varios canales accesorios que impiden una adecuada
inhibición microbiana durante la preparación mecánica, principalmente en la irrigación
intra conductos (28). Por consiguiente, los cambios estructurales y la permeabilidad
alterada a nivel apical pueden ser producto de una incompleta irrigación de los
conductos accesorios y el foramen apical, que posteriormente podrían ser colonizados
por microorganismos al diseminar hacia a los túbulos dentinales, generando lesiones
óseas en conductos radiculares en molares deciduos ubicadas en toda la superficie
radicular (29).
Lesión perirradicular
crónica *
Absceso perirradicular agudo
*
Bacteroides Porphyromonas Enterococcus Actinomyces
Treponema Treponema Actinomyces Propionibacterium
Prevotella Fusobacterium Streptococcus
Porphyromonas Bacteroides Candida
Fusobacterium Prevotella Propionibacterium
Peptostreptococcus Streptococcus Staphylococcus
Streptococcus Peptostreptococcus Seudomonas
Eubacterium
Actinomyces
Campylobacter
Referencias
****Happonen 1986, Sjogren 1988
Infecciones primariasInfecciones secundarias o
persistentes ***Infecciones extraradiculares ****
* Sunqvist 1976, 1992, Baumgartner 1991, Gomes 1996, Haapasalo 1986, Le Goff 1997, Machado 2000, Rocas 2001,
Siqueira 2000
** Machado 2000, Rocas 2001, Siqueira 2001
***Molander 1998, Peciuliene 2000, Sunqvist 1998, Waltimo 1997, Siren 1997
8
Por consiguiente, para lograr el éxito en la tratamiento de endodoncia tanto en
dientes primarios como permanentes es necesario efectuar el desbridamiento completo y
la desinfección eficaz en el espacio intraradicular (30). Sin embargo, el fracaso en la
terapia pulpar se relaciona con la permanencia microbiana, como el Enterococcus
faecalis que se propaga en las piezas deciduas intra y periradicularmente (31). En
consecuencia, el éxito del tratamiento de conductos será la inhibición de este
microorganismo sin alterar los tejidos adyacentes, considerando las características de las
soluciones irrigantes, ya que su efecto será limitado por la diseminación microbiana
intra radicular (32).
2.2 El Enterococcus faecalis
2.2.1. Características Microbiológicas
El Enterococcus faecalis es una bacteria anaerobia facultativa gram positiva que está
muy relacionada con las infecciones apicales. Los factores de virulencia son poco
conocidos y su hábitat natural es el tracto gastrointestinal humano, también se puede
encontrar aislado en la cavidad oral en ciertas ocasiones (33,34). Entre los diferentes
aislamientos bacterianos clínicos de infecciones endodónticas es la única especie que ha
sido ampliamente estudiada por su capacidad de formar biopelículas tanto en la raíz de
dientes tratados y no tratados con el tratamiento de conductos (8,9). De modo que estos
rasgos de virulencia demuestran que el E. faecalis puede presentar desde infecciones
asintomáticas hasta su persistencia en los tratamientos de terapia pulpar (35,36). Por lo
que se afirma que este microorganismo presenta una prevalencia de 24% a 77% en
dientes principalmente asociados con el fracaso endodóntico (37), puesto que la mayoría
de soluciones irrigantes antimicrobianas no ingresan en las capas de bacterias formadas
internamente en una biopelícula, por consiguiente solo inhiben las capas periféricas y
una vez que el efecto del agente antibacteriano ha disminuido las bacterias persistentes
podrían formar nuevas capas de biopelícula (38).
El Enterococcus faecalis, se asocia con las diferentes formas de patologías
perirradicular incluyendo infecciones endodónticas primarias y persistentes. Además se
ha identificado como una de las especies bacterianas más difíciles de erradicar de los
conductos radiculares infectados (39). Los microorganismos se encuentran en
posiciones estratégicas dentro del canal radicular que contiene el tejido pulpar necrótico
9
y son difíciles de erradicar en los dientes primarios, debido a la morfología del conducto
es compleja y contiene numerosas ramificaciones e irregularidades anatómicas (40). En
consecuencia, la irrigación con soluciones desinfectantes es una etapa primordial
durante la preparación mecánica.
2.3. Soluciones irrigantes intraconductos
Se debe considerar que la mayoría de las soluciones irrigantes son bactericidas y
eliminan los residuos del interior del conducto, en consecuencia disminuyen el sustrato
para los microorganismos además limitan su supervivencia (41).
2.3.1 Características de las soluciones irrigantes
Para limpiar y desinfectar eficazmente el sistema de conductos radiculares, el
irrigante debe ser capaz de desinfectar y penetrar en la dentina y sus túbulos, ofrecer
efecto antibacteriano de larga duración (sustantividad), retirar la capa de barrillo y ser
antigénico, no tóxico, ni cancerígeno. Además, no debe presentar efectos adversos sobre
la dentina tampoco deberá alterar la capacidad de sellado de los materiales de
obturación (42). Al igual que debe ser relativamente barato, cómodo de aplicar y no
causar cambios cromáticos en los dientes tratados (42). Otras propiedades deseables
para un irrigante ideal incluyen la capacidad de disolver el tejido pulpar e inactivar
endotoxinas (43).
De modo que la utilización de irrigantes durante la preparación químico mecánica
dependerá de la consistencia de dichos compuestos, que pueden presentarse en forma
líquida o viscosa y su uso se dará durante y después de la preparación intraradicular,
cumpliendo con el objetivo principal de disminuir la cantidad de bacterias
intraradiculares mediante la remoción, disolución o ambas, durante la instrumentación
mecánica (10,11,12). Otra característica importante que presentan estos compuestos es
mantener lubricados e hidratados las paredes del conducto radicular (44,45,46).
Posteriormente se complementa con la preparación del conducto mediante la
instrumentación manual o rotacional para lograr la obturación final (47,48).
10
De manera que la evidencia científica menciona que los irrigantes que se pueden
utilizar en la terapia pulpar son hipoclorito de sodio, gluconato de clorhexidina,
propóleo y la diferencia va a radicar en las distintas concentraciones las cuales se
detallan a continuación.
2.4. Solución de hipoclorito de sodio
2.4.1. Definición
La Asociación Americana de Endodoncia ha definido al hipoclorito de sodio como
un compuesto halogenado, de color amarillento pálido, extremadamente alcalino (49).
El compuesto fue introducido por Walker en 1936 al ser utilizado como solución
irrigante intraconducto a una concentración del 5% en dientes con pulpas necróticas
(50).
2.4.2. Características
El hipoclorito de sodio es la solución de irrigación más empleado debido a su amplio
espectro de actividad frente a los microorganismos, además ejerce una acción
proteolítica al disolver los restos orgánicos como el tejido necrótico (49). La eficiencia
de la desinfección por NaOCl está relacionada con su tiempo de contacto con los
agentes patógenos (51). Además es un potente agente antibacteriano, con alto poder
citotóxico (52).
2.4.3. Mecanismo de acción
El hipoclorito de sodio al presentar un pH alto, se le atribuye su principal
característica antimicrobiana ya que altera la estructura de la membrana citoplasmática
y produce modificaciones en el metabolismo celular. Al ejercer su acción proteolítica, la
disolución del tejido y la velocidad de disolución del hipoclorito de sodio es
directamente proporcional a su concentración (53).
2.4.4. Concentración
11
En el tratamiento de endodoncia esta solución se emplea en distintas
concentraciones, como el líquido de Dakin (0,5% de cloro activo), solución de Milton
(1% de cloro activo) y concentraciones medianas (2,5% de cloro activo) además altas
concentraciones como la soda clorada (4-6% de cloro activo). La propiedad
antimicrobiana es proporcional a la concentración del fármaco así como su toxicidad
(54).
2.4.5. Indicaciones
La AAPD (American Academy Pediatric Dentistry) indicó en la guía de tratamiento
que la solución irrigante más utilizada en la terapia pulpar de dientes primarios y
permanentes inmaduros es el hipoclorito de sodio al 1% (55). Además mencionó que las
soluciones desinfectantes irrigantes como hipoclorito de sodio al 1% y / o gluconato de
clorhexidina son para asegurar la descontaminación bacteriana óptima de los canales
radiculares (56).
2.4.6. Efectos adversos
El hipoclorito de sodio no diferencia entre el tejido vital y necrótico (57). Además es
irritante y tóxico para los tejidos periapicales al sobrepasar el ápice, en ciertos casos
puede ser cáustico en los tejidos circundantes, posee también ciertos inconvenientes
como la tinción y corrosión de los instrumentos (58). Se ha demostrado en estudios que
este compuesto es incapaz de eliminar el barrillo dentinario ni tampoco la totalidad de la
microbiota intraradicular. En consecuencia, se recomienda la utilización de esta
solución junto a otros compuestos como el gluconato de clorhexidina (58).
2.5. Solución de gluconato de clorhexidina
2.5.1 Definición
El gluconato de clorhexidina pertenece al grupo de los agentes químicos
bisguanidicos, es de naturaleza dicatiónica y está compuesto por una molécula simétrica
de dos grupos biguanida con cuatro anillos de clorofenilo unidos con un puente central
de hexametileno (59).
12
2.5.2. Mecanismo de acción
Su mecanismo de acción le permite atacar un amplio rango de microorganismos
mediante el daño de la pared bacteriana, aumentando su permeabilidad, otorgándole un
efecto bacteriostático a bajas concentraciones y bactericida en altas concentraciones
(60). En estudios previos se mencionó que la estructura molecular de bisguanida
catiónica está asociada con el mecanismo antimicrobiano, lo que produce la destrucción
celular debido a la filtración de componentes intracelulares a través de la membrana
citoplasmática (61).
2.5.3. Concentración
En estudios realizados sobre la eficacia antibacteriana de esta solución a diferentes
concentraciones, siendo al 2% más eficaz que al 0,12% in vitro, de forma que la eficacia
antibacteriana depende claramente de su concentración (62).
2.5.4. Indicaciones
La clorhexidina se ha utilizado en terapia periodontal, implantología y cariología
durante muchos años para controlar la placa dental (63). Su empleo como irrigante
endodóntico se basa en su efecto antimicrobiano eficaz y duradero, que procede de la
unión con la hidroxiapatita (64). Se ha adoptado por esta solución al 2% como irrigante
final por su sustantividad, lo que le permite interactuar con la dentina y una actividad
antimicrobiana sostenida, especialmente en el retratamiento endodóntico (65). Cabe
mencionar que esta solución también ha sido utilizada como colutorio dental, pues
posee capacidad anti placa en comparación con otros antisépticos similares (66).
2.5.5. Efectos adversos
El uso de la clorhexidina tiene dos efectos secundarios primordiales: las personas
pueden experimentar una pérdida temporal del gusto y desarrollar manchas en los
diente, prótesis y superficie de la lengua (67). Por otra parte, Ozan mostró tras su
estudio de efectos del uso de enjuagues sobre microorganismos orales y fibroblastos
13
gingivales humanos, que la clorhexidina presenta efectos citotóxicos moderados sobre
estos elementos celulares (68). En otros estudios señalaron que el efecto tóxico de la
clorhexidina, desafortunadamente no se limita a las bacterias, sino que puede ser nociva
para otras células como leucocitos polimorfonucleares, macrófagos, células epiteliales,
eritrocitos y al ser aplicado directamente sobre una herida quirúrgica en la cavidad oral
puede alterar y retrasar su cicatrización (69).
2.6. Propóleo
En búsqueda de nuevas alternativas de tratamiento se han realizado varios estudios
que investigan el uso de diferentes sustancias, como las de origen natural para el
reemplazo de los irrigantes convencionales y así aprovechar las diversas propiedades y
evitar efectos secundarios. Entre los productos naturales estudiados se encuentra el
propóleo, se han atribuido varias propiedades terapéuticas, por lo cual se podría aplicar
para solucionar diversos problemas de la salud oral (15).
2.6.1. Definición
Es una sustancia resinosa de origen natural elaborada por las abejas, las mismas que
la utilizan en la construcción y restauración de las colmenas (70). El término propóleo
proviene del griego ¨pro¨ significa delante, y ¨polis¨ significa ciudad es decir defensa de
la ciudad y actúa como mecanismo de protección frente a la amenaza de los otros
insectos (71).
Figura N° 1. Abeja Apis Melífera
14
Fuente: Johana Cerda
2.6.2. Historia
El uso del propóleo remota desde hace tiempo atrás donde los sacerdotes del antiguo
Egipto lo utilizaban para elaborar medicinas, ungüentos y cremas de embalsamar (72).
Posteriormente en el siglo XI, Avicena manifestó que esta sustancia posee
características benéficas sobre heridas, al facilitar su limpieza. Además estudios de
chinos, hindúes, romanos, persas, incas señalaron actividad frente a infecciones febriles
y los franceses en los siglos XVIII y XIV lo usaron para el tratamiento de llagas (73).
Después del descubrimiento de ciertos antibióticos como la penicilina y evidenciar
sus efectos negativos, resurge la iniciativa de utilizar productos alternativos naturales
como el propóleo en diferentes tratamientos de salud (74). En consecuencia su
utilización se ha mantenido durante siglos hasta estos días, en que se están realizando
varias investigaciones científicas sobre el empleo de preparados a base de propóleos en
los campos de la medicina y odontología.
2.6.3. Características
El propóleo es una mezcla compleja, las abejas Apis Melífera lo obtienen por adición
de cera y secreciones salivales al material resinoso, gomoso o balsámico que recolectan
de yemas, brotes y heridas de diversas plantas (75). Una vez recogidos, este material se
enriquece con la saliva y secreciones que contienen enzimas y se utiliza en la
construcción, adaptación y protección de las colmenas (76). Se compone de resina y
bálsamos (50-60%), polen (5-10%), otros componentes como aminoácidos, minerales,
vitaminas A, B y bioquímicos de gran actividad sustancia conocida como
bioflavonoides (vitamina P), al igual que los fenoles, y compuestos aromáticos (77). La
composición varía según su origen de recolección, así como también de la raza de las
abejas que lo producen al igual que su alimentación, influyendo de esta manera en el
efecto antibacteriano, tomando en cuenta que en el caso del Ecuador es un país con
diversas zonas geográficas y podemos obtener variedad de propóleos (78).
15
En varios estudios que se han realizado para probar que el propóleo presenta
propiedades biológicas y para mejorar la salud, entre las cuales están: propiedades
antimicótica, antiviral, antiinflamatoria, analgésica, antioxidante y antitumoral (14). En
la presente investigación se considera al propóleo por su actividad antibacteriana, la
cual se le atribuye principalmente a los flavonoides (79).
2.6.4. Mecanismo de acción
Su efecto antibacteriano se da por sus componentes cinámicos y flavónicos, que
modifican la estructura en especial la membrana e inhabilitan la motilidad bacteriana y
al combinarlo con otros antibióticos se puede presentar una sinergia (78). Por otro lado,
su efecto antiinflamatorio se da gracias al ácido cafeico fenetil ester presentes en el
propóleo porque presenta citotoxicidad contra ciertas células tumorales y actividad
antitumoral (80).
2.6.5. Concentración
Se llevó a cabo estudios de investigación en Kenia para demostrar la susceptibilidad
microbiana intraradicular con la utilización de propóleos de tres regiones (81), en donde
se lo disolvió a tres diferentes concentraciones de etanol: 30%, 50% y 70%, obteniendo
mejores resultados este último con un mayor efecto antibacterial. Por otra parte Mayta-
Tovalino y col. (82) realizaron un estudio in vitro en Perú para determinar el efecto
antibacteriano del extracto etanólico de propóleo al 10% y 30%, frente al Streptococcus
mutans y Staphylococcus aureus y obtuvieron como resultado que el propóleo al 30%
tuvo mayor efecto antibacteriano que al 10%. Verma et al., (15) utilizaron el propóleo
al 25% solubilizado en agua del que contienen la mayor parte de los flavonoides,
vitaminas, aminoácidos, y otros compuestos solubles en agua sin cera. Además
mencionaron que el efecto bacteriostático depende de la concentración del propóleo en
el extracto aplicado. Cabe señalar que Najafi et al., encontraron que la actividad natural
del propóleo no se ve afectada al combinarla con agua, ya que la mayoría de su
composición como flavonoides no se alteran (83).
2.6.6. Indicaciones
16
A consecuencia existe una tendencia creciente a buscar remedios naturales como
parte de la terapéutica médica y dental, que se ha denominado como fitoterapéuticos
(84). Debido a múltiples beneficios y propiedades el uso del propóleo se ha extendido
en el campo de la medicina y odontología, probándolo como: desinfectante en
tratamiento de conducto y cavidades en operatoria dental (85) (86) , protector pulpar
directo (87), colutorio (88), úlceras (89), candidiasis (90), gingivitis (91), periodontitis
(92), pulpitis (93), conservante de dientes avulsionados (94), prevención de caries (95),
irrigante subgingival (92) e hipersensibilidad dentinal (96).
En consecuencia, el uso del propóleo como irrigante en la terapia pulpar en la
odontología pediátrica aún no se ha explotado ampliamente en los dientes primarios
(97), por este motivo se llevó a cabo la presente investigación.
2.6.7. Efectos adversos
El propóleo ha presentado escasas evidencias de reacciones alérgicas como
¨hipersensibilidad de tipo dermatitis de contacto, estomatitis, eczema perioral, edema
labial, dolor bucal, descamación de los labios y disnea¨ (98). Solo se ha determinado
que un grupo mínimo de personas presentan algún tipo de reacción alérgica frente al
propóleo y sus componentes u otras sustancias apícolas (99). Por lo cual es importante
realizar pruebas de sensibilidad antes de suministrar o iniciar un tratamiento con esta
solución. Las personas que presentan este tipo de alergia son aquellas que no toleran las
abejas o a sus picaduras, o tienen afecciones respiratorias (100).
2.6.8. Apicultura en Ecuador
Los porcentajes en la producción en la apicultura en el Ecuador se encuentra
dedicado principalmente en la obtención de miel al 90% y tan solo el 3% al propóleo, a
partir de los años 70s fueron introducidas al país abejas africanizadas, las zonas de
mayor cantidad de colmenas fue la zona Andina con la primordial floración fue el
Eucaliptus glóbulos. En el país es la Federación Nacional de Apicultores del Ecuador
(FENADE), organización reconocida por el Ministerio de Agricultura, Ganadería,
17
Acuacultura y Pesca, con la finalidad de fomentar y desarrollar la actividad apícola. Los
miembros que conforman la federación son ocho asociaciones: ¨Cotacachi, Pichincha,
Tungurahua, Las Acacias Loja, San Pedro de Vilcabamba, Valle de los Chillos,
Machachi y Tabacundo¨ (101). Por la ubicación geográfica y biodiversidad de la flora y
la variedad climática del Ecuador presenta características únicas que favorecen a la
fabricación de productos apícolas como el propóleo (102).
Por otra parte, a los irrigantes empleados en la investigación se pueden comparar su
eficacia y el efecto antibacteriano en relación al hipoclorito de sodio por su capacidad
de disolución y presentar una relación directamente proporcional a la concentración y
toxicidad (43). Además esta solución irrigante no puede diferenciar entre los tejidos
vitales y necróticos durante la disolución, por lo que se podría atribuir el daño periapical
debido a la extrusión del hipoclorito de sodio (103).
La clorhexidina es la segunda opción de irrigación utilizado tanto en los dientes
primarios y permanentes. Tiene efectos antibacterianos y menor citotoxicidad, pero la
desventaja es la incapacidad de disolver tejido pulpar necrótico (104). Por otra parte, los
productos naturales que se introdujeron tiempo atrás para curar enfermedades
recientemente se consideran alternativas disponibles, la apiterapia es uno de esos
enfoques que está siendo explorado en todos los campos de la medicina incluyendo la
odontología. Incorpora el uso medicinal de productos de la abeja como el propóleo,
polen, jalea real, y su veneno. El propóleo es un producto natural que ha obtenido un
mayor interés debido a su actividad antimicrobiana contra un amplio gama de
microorganismos patógenos (105). Teniendo en cuenta el considerable potencial del
propóleo como un agente antimicrobiano, como se evidencia en la literatura, el presente
estudio se realizó para corroborar su efecto y beneficios.
18
CAPÍTULO III
METODOLOGÍA
3.1. Tipo de Diseño de la investigación
Por la unidad de estudio la investigación fue de tipo experimental, cuantitativo por
cuanto se conoció las diferencias de la variable dependiente (Enterococcus faecalis
ATCC 29212) en muestras de cepa en el laboratorio (in vitro).
3.2. Población de estudio
La población de estudio de la presente investigación fue infinita, estuvo constituida
por el Enterococcus faecalis ATCC 29212.
3.3. Selección y tamaño de la muestra
La muestra fue probabilística por muestreo simple al azar al obtener la cepa
Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Se estima el tamaño de la muestra, mediante la siguiente fórmula:
𝑛0 = 𝑝(1 − 𝑝) (𝑍
𝑒)2
Donde
p= probabilidad de ocurrencia, en este caso 23%
Zα/2 = Constante que indica el nivel de confianza, que al 95% sugiere trabajar con el
valor de 1,96.
e= error permitido, en este caso un error del 10%.
Dando el tamaño de muestra estándar requerido de:
𝑛0 = 0,23 ∗ (1 − 0,23) (1,96
0,1)2
𝑛0 = 68,65
Por lo que se realizó el control sobre 70 muestras que fueron organizadas
aleatoriamente en cinco grupos de experimentación de 14 unidades cada una.
19
GRUPO 1: Cultivo de cepa de Enterococcus faecalis al que se le adicionó
extracto hidro alcohólico de propóleo de la región Costa al 50%.
GRUPO 2: Cultivo de cepa de Enterococcus faecalis al que se le adicionó
extracto hidro alcohólico de propóleo ecuatoriano de la región Sierra al 50%.
GRUPO 3: Cultivo de cepa de Enterococcus faecalis al que se le adicionó
hipoclorito de sodio al 1%.
GRUPO 4: Cultivo de cepa de Enterococcus faecalis al que se le adicionó
gluconato de clorhexidina al 2%.
GRUPO 5: Cultivo de cepa de Enterococcus faecalis al que se le adicionó suero
fisiológico (grupo control negativo).
3.4.1. Criterios de Inclusión
Cepa crio preservada Enterococcus faecalis ATCC 29212 viables.
Medio de cultivo agar sanguis viable.
Extracto hidro alcohólico de propóleo ecuatoriano al 50% de la región Sierra y
Costa.
Gluconato de clorhexidina al 2%.
Hipoclorito de sodio al 1%.
3.4.2. Criterios De Exclusión
No se consideran halos de inhibición incompletos o traslapados.
Cepas bacterianas que no correspondan al Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Irrigantes de conductos radiculares caducados.
Extracto hidro alcohólico de propóleo ecuatoriano a una concentración distinta
de las señaladas al estudio.
3.5. Operacionalización de Variables
Las variables que intervienen en el presente proyecto de investigación se describen a
continuación en la siguiente matriz:
20
VARIABLE DEFINICIÓN OPERACIONAL TIPO CLASIFICACIÓN INDICADOR
CATEGÓRICO
ESCALA DE
MEDICIÓN
Hipoclorito de sodio Es un compuesto halogenado se utiliza como
solución irrigante en terapia pulpar con capacidad
para disolver el material orgánico (13).
Independiente Cualitativa Nominal
Concentración al 1% 1 = si
2 = no
Propóleo Es una sustancia resinosa de color pardo rojizo o
amarillo verdoso producida por las abejas a partir
de resinas vegetales, contiene fundamentalmente,
cera y aceites esenciales y es una sustancia muy
compleja (88).
Independiente Cualitativa Nominal
Concentración al
50% 1 = si
2 = no
Gluconato de
clorhexidina
Pertenece al grupo de los agentes químicos
bisguanidicos, es de naturaleza dicatiónica y está
compuesto por una molécula simétrica de dos
grupos biguanida con cuatro anillos de clorofenilo
unidos con un puente central de hexametileno
(68).
Independiente Cualitativa Nominal
Concentración al 2%
1 = si
2 = no
Suero fisiológico Es la sustancia cristaloide estándar, es levemente
hipertónica respecto al líquido extracelular y tiene
un pH ácido. (68)
independiente Cualitativa Nominal
Concentración al
0,9% 1 = si
2 = no
Enterococcus faecalis Es una bacteria anaerobia facultativa Gram
positiva que está fuertemente asociada con las
infecciones endodónticas (106).
Dependiente Cuantitativa discreta
Razón
Halo de inhibición
en milímetros
calculado con la
reglilla.
(<) 8 mm = 0
(>) 8 mm = 1
Tabla Nº 1. Operacionalización de variables
21
3.6. Materiales y Métodos
Equipos, materiales e instrumentales para la evaluación microbiológica de las
soluciones irrigantes.
3.6.1. Equipos
Agitador automático.
Estufa.
Jarra Gaspak.
Cámara de flujo laminar
Refrigerador.
Balanza.
Incubadora.
Computadora.
Cámara fotográfica digital.
3.6.2. Materiales
Extracto hidro alcohólico de propóleo ecuatoriano al 50% de la región Sierra y
Costa.
Gluconato de clorhexidina al 2%.
Hipoclorito de sodio al 1%.
Cepa crio preservada de Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Agar sangre.
Caldo de agar Muller Hinton.
Caldo de agar al 0,5 McFarland.
Cajas petri.
Tubos de ensayo.
Probetas.
Mechero.
Matraz de Erlenmeyer.
Gradilla.
22
Puntas de pipetas estériles.
Discos de papel filtro estériles de 6 mm de diámetro.
Guantes.
Mascarilla.
Hisopos estériles.
Gorro desechable.
Lapiceros.
Esferos.
Gafas protectoras.
Uniforme blanco completo.
3.7. Procedimiento
3.7.1 Recolección del propóleo ecuatoriano de la región Costa y Sierra
Los propóleos ecuatorianos de la Costa y Sierra fueron recolectados mediante
condiciones de higiene establecidas, el propóleo ecuatoriano Serrano se obtuvo por
parte de la casa comercial ¨Apícola Margarita¨, ubicada en el Valle de Sangolquí,
provincia de Pichincha, cantón Rumiñahui. Se encuentra a una altitud de 2,539 metros
sobre el nivel del mar. La recolección fue a partir de las trampas de cajón de las
colmenas del apiario, a las que se les hizo de manera aséptica un raspado con espátula
que se depositó en bolsas estériles, posteriormente se pasó el contenido por un tamiz
estéril para retirar restos vegetales e insectos que pudieran afectar la extracción
finalmente el propóleo se mantuvo en congelación a una temperatura de -20 a -400
C.
23
Figura N° 2. Propóleo de la región Sierra
Fuente: Johana Cerda
La estación para la recolección del propóleo fue en verano en los meses de febrero y
marzo del año 2016, se indicó que no hay una estación del año específica para obtener
el propóleo ya que se realiza cuando se da mantenimiento a las colmenas y esto ocurre
una vez al año. La variedad de abeja es la Apis Melífera. La vegetación de la zona
comprende en su gran mayoría de eucalipto, además frutos (aguacate) cítricos (limón),
diente de león, trébol, acacias en algunas variedades y vegetación propia de la zona.
El propóleo ecuatoriano de la región Costa se obtuvo por parte de la casa comercial
¨Apiario Apiget¨ ubicado en la provincia de Esmeraldas, cantón Esmeraldas, parroquia
Atacames. La altura oscila entre 100 metros sobre el nivel del mar y la vegetación llega
hasta unos 200 metros sobre el nivel del mar. De igual manera se recolecto el propóleo
de las colmenas mediante un raspado con espátula que se depositó en bolsas estériles y
se almacenó en forma natural al medio ambiente, en un lugar seco y sin exposición al
sol. La variedad de abeja es la Apis Melífera. La estación de recolección fue en verano
de hace dos años. La vegetación de la zona comprende: frutales (limón, mandarina,
guaba, mango) frutos (guanábana, aguacate, pechiche), maderables (caoba, mambla,
Fernán Sánchez, laurel, pachaco, tachuelo, guayacán,) pasto y montes silvestres. La
zona por su floración se denomina multiflora.
24
Figura N° 3. Propóleo de la región Costa
Fuente: Johana Cerda
El transporte de las sustancias que se depositó en frascos de vidrio color ámbar
estériles debidamente rotulados para su posterior procesamiento en el laboratorio de
Análisis Clínico y Bacteriológico de la Facultad de Ciencias Química de la Universidad
Central.
3.7.2 Obtención de los extractos hidro alcohólicos de los propóleos ecuatorianos de
la región Costa y Sierra al 50%
El extracto hidro alcohólico de los propóleos ecuatorianos de la región Costa y Sierra
al 50% se obtuvieron de la siguiente manera:
Se pesaron 50 gramos de propóleos sólido sobre una balanza semianalítica luego se
eliminó las impurezas, se congeló la masa del propóleo a una temperatura de -20 a -40
°C por 48 horas, se procedió a pulverizar la masa del propóleo con el uso del mortero y
pistilo para facilitar la extracción de los principios activos, luego se preparó la solución
hidroalcohólica (alcohol potable). La solución fue colocada en un frasco ámbar tapado
herméticamente y protegido de la luz a temperatura ambiente para su maceración por 15
días, la misma que fue agitada eventualmente. Después se filtró la solución mediante el
uso de papel filtro, se extrajo las impurezas y gran parte de la resina. La solución se
estandarizó para 50% (de principio activo, solución madre macerada y filtrada) aforando
con solución hidro alcohólica al 50% para el estudio fue envasado, etiquetados en
frascos color ámbar y conservados alejados de la luz y en un lugar fresco.
25
Figura N° 4. Propóleo en el mortero y pistilo
Fuente: Johana Cerda
Figura N° 5. Propóleos pulverizado
Fuente: Johana Cerda
Figura N° 6. Propóleos en frasco ámbar
Fuente: Johana Cerda
3.7.3. Prueba microbiológica del extracto realizado
Una vez realizado los extractos hidro alcohólico de propóleos de la región Costa y de
la Sierra al 50%, se realizó una prueba microbiológica para descartar la presencia de
bacterias. El procedimiento comprendió en la extracción de propóleo con un hisopo
estéril que se sembró en agar PSA y se incubó por 48 horas, a una temperatura de 35°C
26
+ - 20°C. Transcurrido el tiempo, se evidenció la ausencia de bacterias en los extractos
hidro alcohólico de propóleos de la región Costa y de la Sierra al 50%.
En cuanto al gluconato de clorhexidina al 2% y el hipoclorito de sodio al 1% no se
realizó pruebas microbiológicas porque son soluciones con registros sanitarios
correspondientes y en relación al suero fisiológico como control fue utilizada la
elaborada por el laboratorio de Análisis Clínico y Bacteriológico de la Facultad de
Ciencias Química de la Universidad Central.
3.7.4. Reactivación de cepa de Enterococcus faecalis
La metodología se fundamenta en Álvarez, 1995 (107) en la realización de la parte
microbiológica a continuación descrita. El cultivo de la cepa Enterococcus faecalis
ATCC 29212, se realizó en el laboratorio de Análisis Clínico y Bacteriológico de la
Facultad de Ciencias Química de la Universidad Central, bajo la supervisión de la
especialista en ingeniería química, antes de realizar el cultivo de la cepa crio preservada.
La cepa Enterococcus faecalis ATCC 29212 utilizada se mantenía en congelación -200
C, se deja 48 horas en la estufa a 35 0
C, luego de este tiempo se sembró en agar sangre
que se incubó 24 horas en las mismas condiciones. Posteriormente se preparó el inóculo
de 0.5 de McFarland, se colocó de 4 a 5 colonias que se suspendieron en 5 ml de caldo
de cultivo y se comparó visualmente la turbidez de la suspensión con el estándar. La
equivalencia es a 4 x 107
unidades formadoras de colonias (UFC) por ml en el caso del
Enterococcus faecalis para la suspensión que se realizó la investigación.
Figura N° 7. Reactivación de cepa Enterococcus faecalis
Fuente: Johana Cerda
27
Figura N° 8. Turbulencia de muestra
Fuente: Johana Cerda
3.7.5. Preparación del medio de cultivo
En base de la metodología de Álvarez 1995 (107), para la preparación de las placas
de agar Müller Hilton se pesó 16.5 gr del medio de cultivo que se disolvió en agua
destilada llevando a ebullición posteriormente se colocó en la autoclave por 15 min a
1210
C y 1.1 atmósfera de presión, transcurrido este tiempo se enfrió el medio de cultivo
aproximadamente a 500
C y se repartió en las cajas petri para su solidificación y
utilización.
Figura N° 9. Preparación del medio de cultivo
Fuente: Johana Cerda
28
Figura N° 10. Enterococcus faecalis
Fuente: Johana Cerda
3.7.6. Preparación de los discos
Los discos de papel blanco estériles de 6mm, a los que se impregna con 20 ul (micro
litros) de las soluciones irrrigantes; grupo 1: extracto hidro alcohólico de propóleo de la
región Sierra al 50%, grupo 2: extracto hidro alcohólico de propóleo de la región Costa
al 50%, grupo 3: gluconato de clorhexidina al 2%, grupo 4: hipoclorito de sodio al 1%,
grupo 5: el grupo control fue utilizado para comprobar si este tenía actividad
antimicrobiana en relación a las sustancias empleadas.
Se impregnó cada uno de los discos, con la ayuda de una pipeta automática, con
puntas estériles que contienen 20 ul (micro litros); la colocación se la efectuó
individualmente mediante pinza flameadas, se aseguró el contacto con la superficie del
agar.
Figura N° 11. Discos blancos agrupados
Fuente: Johana Cerda
29
Figura N° 12. Discos impregnados con soluciones
Fuente: Johana Cerda
3.7.7. Antibiograma por difusión en un medio sólido
Al tener el inóculo reconstituido, se procedió a sumergir el hisopo de algodón en la
suspensión microbiana que se eliminó el exceso al rotar contra la pared del tubo. El
escobillón preparado se pasó por la superficie del agar en varias direcciones, con el fin
de sembrar uniformemente el medio de cultivo, y se dejó secar por diez minutos. Se
procedió a colocar los discos preparados con las diferentes soluciones y finalmente se
lleva las cajas a la estufa por 24 horas 350
C + - 2.
Figura N° 13. Difusión
Fuente: Johana Cerda
30
Figura N° 14. Preparación del agar
Fuente: Johana Cerda
Figura N° 15. Colocación de discos en estufa
Fuente: Johana Cerda
Figura N° 16. Muestra en la estufa
Fuente: Johana Cerda
31
3.7.8. Medición del efecto antimicrobiano
La interpretación y lectura de los resultados del efecto antibacteriano de las
diferentes soluciones ante el Enterococcus faecalis, se determinó a través de la técnica
de medición de halos de inhibición que conformaron alrededor de cada uno de los
discos colocados en las placas, previamente impregnados con las sustancias
antimicrobianas seleccionadas para posteriormente medirlos; con la ayuda de una regla,
el cual determinó las medidas de los halos en milímetros. Se registró los resultados en la
hoja de recolección de datos.
Figura N° 17. Medición del efecto inhibidor
Fuente: Johana Cerda
3.8. Forma y análisis para la obtención de los resultados
Los datos de la medición directa de los halos de inhibición se organizaron en una
planilla en Microsoft Excel identificando el grupo y probeta de ensayo. Los datos
fueron transportados al programa SPSS 22. Se realizó una estadística descriptiva y se
procedió al análisis inferencia para probar la hipótesis, mediante la prueba de Kruskal-
Wallis según los datos no cumplieron con el principio de distribución normal, con un
nivel de significancia del 5%.
3.9 Aspectos Bioéticos
En referencia a los aspectos bioéticos, la presente investigación no consideró en su
población y muestra la participación de seres humanos, por el contrario lo que se utilizó
32
fueron soluciones irrigantes en el tratamiento de endodoncia (propóleo, hipoclorito de
sodio y gluconato de clorhexidina) y colonias de microorganismos (Enterococcus
faecalis ATCC 29212).
Bajo esta consideración:
a) Al valorar el beneficio que generará esta investigación, estará directamente
relacionada con la microbiología, trascendente a la gestión del odontólogo
especialista en la rama de odontopediatría, así como también a los pacientes que
puedan servirse de esta técnica para el tratamiento óptimo lo cual redundará en
beneficio de la salud bucal de los usuarios y de la población en general y atenuar
las complicaciones de los tejidos adyacentes al verse afectados por la
colonización bacteriana lo que puede generar una respuesta inmune por parte de
los tejidos periodontales.
b) La investigación no se realizó en seres humanos ya que no exigió el
consentimiento informado de personas.
c) La presente investigación no exigió medidas de protección de derechos,
seguridad, libre participación, entre otros.
d) Al no trabajar con seres vivos no existió riesgos, ni exposición peligrosa de
ellos; más bien los beneficios potenciales servirán para el desarrollo de la
gestión odontológica.
e) Por trabajar en microorganismos se utilizó los protocolos de bioseguridad
establecidos en el laboratorio de Análisis Clínico y Bacteriológico de la
Facultad de Ciencias Química de la Universidad Central del Ecuador,
laboratorio en el que se realizará la investigación con rigurosidad científica.
f) Se garantiza la idoneidad ética y experticia técnica profesional del director de
tesis así como del autor del presente proyecto, asegurado a través del record
profesional y académico.
33
CAPÍTULO IV
RESULTADOS
El diámetro del halo de inhibición se organizó en una hoja de cálculo en Microsoft
Excel 2010, haciendo notar el número de muestra y el grupo al que pertenecía, tal como
se observa en la tabla 2.
34
Tabla Nº 2. Halos de inhibición por grupo
EXTRACTO HIDRO ALCOHÓLICO DE PROPÓLEO
REPETICIÓN PROPÓLEO DE LA REGIÓN SIERRA PROPÓLEO DE LA REGIÓN COSTA GLUCONATO DE
CLORHEXIDINA
HIPOCLORITO DE
SODIO
SUERO
FISIOLÓGICO
1 10 8 25 19 6
2 8 8 23 18 6
3 8 7 24 19 6
4 7 7 24 16 6
5 9 6 24 17 6
6 8 7 22 17 6
7 8 7 26 18 6
8 8 8 22 19 6
9 10 7 23 18 6
10 7 7 24 20 6
11 8 7 24 18 6
12 8 7 24 19 6
13 8 7 25 17 6
14 9 7 23 15 6
Promedio 8 7 24 18 6
Para los grupos experimentales (extracto hidro alcohólico de propóleo, tanto de la región Costa como de la Sierra), se registraron halos
de inhibición bastante bajos, apenas por encima del control negativo (suero fisiológico) y muy por debajo de los controles positivos
(gluconato de clorhexidina e hipoclorito de sodio).
35
Tabla Nº 3. Prueba de Normalidad
Pruebas de normalidad
Kolmogorov-Smirnov Shapiro-Wilk
Estadístico gl Sig. Estadístico gl Sig.
PROPÓLEO DE
REGIÓN SIERRA 0,337 14 0,000 0,827 14 0,011
PROPÓLEO DE LA
REGIÓN COSTA 0,391 14 0,000 0,713 14 0,001
GLUCONATO DE
CLORHEXIDINA 0,219 14 0,068 0,926 14 0,267
HIPOCLORITO DE
SODIO 0,185 14 0,200 0,940 14 0,418
gl: grados de libertad (tamaño de las muestras) Fuente: Ing. Juan Carlos Tuqueres
Elaborado por: Johana Cerda
En la prueba de normalidad de Kolmogorov Smirnov con corrección de Lilliefors, así
como en la de Shapiro-Wilk, los valores del nivel de significación (p) en las muestras de
propóleo de las regiones Costa y Sierra fueron inferiores al valor 0,05 (95% de
confiabilidad), con lo que pudo inferirse que no provienen de una población con
distribución Normal, entonces para comparar entre las diversas sustancias fue necesario
hacerlo con pruebas de hipótesis NO paramétricas (Kruskal Wallis y U Mann Whitney)
Con apoyo del programa SPSS 22, se estimaron los estadísticos descriptivos, los
mismos que pueden observarse en la tabla siguiente.
36
Tabla Nº 4. Estadísticos descriptivos para el halo de inhibición por grupo
HALOS (mm)
GRUPO N Media
Desviación
estándar
Error
estándar
95% del intervalo de
confianza para la
media
Mínimo Máximo
Límite
inferior
Límite
superior
EXTRACTO DE
PROPÓLEO
SIERRA
14 8,29 ,914 ,244 7,76 8,81 7 10
EXTRACTO DE
PROPÓLEO
COSTA
14 7,14 ,535 ,143 6,83 7,45 6 8
GLUCONATO
DE
CLORHEXIDINA
14 23,79 1,122 ,300 23,14 24,43 22 26
HIPOCLORITO
DE SODIO 14 17,86 1,351 ,361 17,08 18,64 15 20
SUERO
FISIOLÓGICO 14 6,00 0,000 0,000 6,00 6,00 6 6
TOTAL 70 12,61 7,102 ,849 10,92 14,31 6 26
Fuente: Ing. Juan Carlos Tuqueres
Se registraron valores medios muy distintos entre los cinco grupos y en cada uno de
ellos, dispersiones bajas o razonables, lo que da cuenta de la homogeneidad de los
resultados.
37
Gráfico N° 1. Diagrama de caja y bigotes para el halo de inhibición por grupo
Fuente: Ing. Juan Carlos Tuqueres
El diagrama permite observar la baja dispersión de los valores intergrupos y la
diferencia de los valores medianos intragrupos, adicionalmente se observó una
distribución constante para el control negativo (suero fisiológico), por lo que se lo
descartó del análisis comparativo (en este caso mediante la prueba de Kruskal Wallis).
Precisamente la Prueba de Kruskal-Wallis estimó una significancia p<0,0001, con lo
que se concluyó que existen diferencias respecto a la tendencia central de las
poblaciones. No todas las medias de las muestras son similares, algunas son diferentes,
para determinar cuales son similares o diferentes se hace la prueba dos a dos, como se
indica en la siguiente tabla:
38
Tabla Nº 5. Comparación con prueba de dos a dos.
Grupos
Diferencia
de medias
(I-J)
Error
estándar
Significancia
(p)
95% de intervalo de
confianza
Límite
inferior
Límite
superior
Propóleo de
región Costa
Propóleo de
región Sierra -1,143 ,347 ,010 -2,12 -0,17
Gluconato de
clorhexidina -16,643 ,347 ,000 -17,62 -15,67
Hipoclorito
de sodio -10,714 ,347 ,000 -11,69 -9,74
Propóleo de
región Sierra
Gluconato de
clorhexidina -15,500 ,347 ,000 -16,47 -14,53
Hipoclorito
de sodio -9,571 ,347 ,000 -10,54 -8,60
Gluconato de
Clorhexidina
Hipoclorito
de sodio 5,929 ,347 ,000 4,96 6,90
Fuente: Ing. Juan Carlos Tuqueres
Los valores de significancia en todos los pares fueron p<0,00, con lo que se concluye
que todos los grupos son distintos entre sí, siendo el de mejor rendimiento el grupo de
gluconato de clorhexidina, seguido por el hipoclorito de sodio, luego el propóleo de la
región Sierra y finalmente el propóleo de la región Costa.
39
Gráfico N° 2. Media del halo de inhibición por grupo
Fuente: Ing. Juan Carlos Tuqueres
Se puede concluir que ni el propóleo de la región Sierra, ni el de la región Costa son
efectivos frente al microorganismo investigado.
Adicionalmente, se realizó un análisis cualitativo, para lo cual se construyó la
siguiente escala:
Resistente: d < 10mm
Intermedio: 10 ≤ d <15
Sensible: d > 15
(Fuente: Adaptación documento ISP Chile)
8,29 7,14
23,79
17,86
6
EXTRACTO DE
PROPOLEOSIERRA
EXTRACTO DE
PROPOLEOCOSTA
CLORHEXIDINA HIPOCLORITO SUERO
FISIOLÓGICO
Comparación de Medias
40
Tabla Nº 6. Nivel de sensibilidad por grupo
Fuente: Ing. Juan Carlos Tuqueres
Tanto el gluconato de clorhexidina como el hipoclorito de sodio, se mostraron en un
100% de los casos como sensibles, en tanto que el propóleo de la región Costa en un
100% se mostró resistente, el propóleo de la región Sierra, en un 14,3% presentó
sensibilidad intermedia (algo mejor que el de la región Costa).
4.1. Discusión
En esta investigación se comparó el gluconato de clorhexidina al 2%, el hipoclorito
de sodio al 1% y las soluciones de propóleos ecuatorianos al 50% de la región Sierra y
Costa para la inhibición del Enterococcus Faecalis, resultando la solución más efectiva
la clorhexidina al 2%. Concordando con los estudios de Bornaz et al., en el cual
demostraron la acción antibacteriana sobre el E. faecalis (108,11). Además Paiva et al.,
obtuvieron en sus estudios el 96,5% de eliminación del microorganismo intraradicular
en comparación con clorhexidina, ya que constataron la propiedad de sustantividad (11),
sin embargo, Vinicíus et al., afirman que no desintegra tejido orgánico y su costo es
elevado, en contraste al hipoclorito de sodio que es de bajo costo, fácil acceso y es
considerado el gold estándar (109,12).
Mientras que un estudio in vitro de Vinod, presentó una diferencia significativa en la
inhibición bacteriana al comparar tres soluciones desinfectantes en la terapia pulpar:
GRUPO
Sensibilidad
Total Resistente Intermedia Sensible
Propóleo de
región Costa
F 14 0 0 14
% 100,0% 0,0% 0,0% 100,0%
Propóleo de
región Sierra
F 12 2 0 14
% 85,7% 14,3% 0,0% 100,0%
Gluconato de
clorhexidina
F 0 0 14 14
% 0,0% 0,0% 100,0% 100,0%
Hipoclorito de
sodio
F 0 0 14 14
% 0,0% 0,0% 100,0% 100,0%
Suero Fisiológico F 14 0 0 14
% 100,0% 0,0% 0,0% 100,0%
41
hipoclorito de sodio al 5,25%, Biopure MTAD y gluconato de clorhexidina al 2%
después de 5 minutos, siendo el hipoclorito y el Biopure más eficaces que la
clorhexidina (110), corroborando con los datos de Borges et al., en el que se determinó
que la clorhexidina es una alternativa a parte del hipoclorito de sodio en casos de ápice
abierto y pacientes con alergia al mismo. Mencionando también sus efectos adversos
como la acción persistente de la disolución del tejido (111).
Por otro lado, Serper A. et al., (112) concluyó que el gluconato de clorhexidina es
más citotóxica que el hipoclorito de sodio. Sin embargo, el estudio de Yasuda et al.,
determinaron que la clorhexidina es menos citotóxico que el hipoclorito de sodio y el
EDTA (113). Estudios de Ahangari et al., en el 2008 utilizaron NaOCl al 0,05-3%
atribuyendo su efecto antimicrobiano al ácido hipocloroso (114), al igual que Kumar et
al., en el 2011, demostraron el efecto inhibitorio de esta solución sobre E. faecalis con
una concentración baja de 0,1% (115). Sin embargo, Laxmi T. en el 2013, mencionó
que este agente irrigante no es selectivo entre el tejido necrótico y vital, presenta sabor
desagradable y debilita la estructura dental
(116). Al igual que Evans et al.,
mencionaron que el NaOCL al entrar en contacto con el Enterococcus faecalis en un
ambiente alcalino libera proteínas, provocando una resistencia a este microorganismo
(117).
La odontología actualmente continua en la búsqueda de agentes naturales, que sean
compatibles con los tejidos, que va de la mano con la fitoterapia que es una ciencia que
ha evolucionado, enfatizando el uso de extractos naturales como el propóleo ecuatoriano
que podría alcanzar una aplicación terapéutica potencial en esta área de la salud (118).
Malhotra et al., en el 2014 utilizaron el propóleo como agente irrigante intracanal eficaz
en la erradicación de E. faecalis y C. albicans. Por lo tanto, el propóleo puede ser un
avance para los problemas de la endodoncia en especial en casos de fracasos (119). En
el estudio de Verma et al., en la India utilizó el agua soluble derivada del extracto de
propóleo al 25% como irrigante del canal radicular en dientes primarios (85),
concluyendo que la inhibición del E. faecalis con extracto de propóleo fue mayor que
en la solución salina. De igual manera en la presente investigación se utilizó el extracto
de propóleo y resultó su efecto inhibitorio mayor que el suero fisiológico. Además se
encontró que la solución de propóleo era eficaz para eliminar completamente E. coli
como sugirieron Valera et al., (120).
42
En el presente estudio se decidió utilizar el propóleo al 50 % debido a la evidencia
disponible que va desde 10 % al 70% y realizando un porcentaje promedio se determinó
dicho valor. Según los resultados de las investigaciones de Moreno et al., mencionaron
que las mezclas en la composición del propóleo presentan alta variabilidad de acuerdo
al origen geográfico y las épocas de recolección (121). Con esto se concuerda que en la
presente investigación al comparar el propóleo ecuatoriano de dos regiones, se obtuvo
mejores resultados con el propóleo serrano en la inhibición del E. faecalis en relación al
propóleo costeño.
Por otra parte, la literatura de Scazzacchiaet et al., atribuyeron las propiedades
antimicrobianas al propóleo por la presencia de flavonoides, lactonas, saponinas,
fenoles, triterpenos, ésteres de ácido cafeico y a una flavona conocida como galangina;
además, se ha demostrado que estos componentes probablemente afectan el ADN
bacteriano a través de la RNA polimerasa (122). Sin embargo, Lima en el 2007, reportó
resultados contradictorios al evaluar un extracto chileno de propóleo al 50% y estableció
que no poseía actividad significativa in vitro frente a E. faecalis entre otros
microorganismos comparado con la clorhexidina y el hidróxido de calcio (123). En este
estudio de investigación también se utilizó extracto de propóleo al 50% y a diferencia
del estudio de Lima, se evidenció el efecto de inhibición sobre el Enterococcus faecalis.
En cuanto a los resultados de esta investigación el mejor rendimiento fue el grupo de
gluconato de clorhexidina, seguido por el hipoclorito de sodio, luego el propóleo de la
región Sierra y finalmente el propóleo de la región Costa. Con lo que se puede atribuir
que los resultados de la investigación dependen de la zonificación de las diferentes
regiones ecuatorianas debido a la multiflora y biodiversidad de cada zona geográfica.
Además el extracto de propóleo previamente purificado presentó menor efecto
inhibitorio frente a E. faecalis con las otras soluciones comparadas. Estas diferencias
pueden interpretarse como resultado no sólo de la naturaleza de los compuestos,
también de las complejas interacciones químicas involucradas en los efectos biológicos
de un producto natural como el propóleo (124).
Los resultados de la investigación al comparar dos regiones de la Costa y Sierra,
proponen al propóleo ecuatoriano como una alternativa de uso odontopediátrico en el
43
área de endodoncia, dado el efecto frente al Enterococcus faecalis que es uno de los
patógenos más resistentes a los desinfectantes y medicaciones intraconducto en la
terapia endodóntica. Por lo tanto es necesario realizar estudios complementarios sobre la
composición química del propóleo para identificar los compuestos líderes presentes en
esta mezcla.
44
CAPÍTULO V
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
5.1. Conclusiones
El efecto inhibidor del propóleo ecuatoriano al 50% registró halos de inhibición
sobre el Enterococcus faecalis bastante bajos, apenas por encima del suero
fisiológico y muy por debajo del gluconato de clorhexidina al 2% e hipoclorito
de sodio al 1%.
La inhibición del propóleo ecuatoriano al 50% de la región Sierra sobre el
Enterococcus faecalis registró halos de inhibición bastante bajos.
El efecto inhibidor del propóleo ecuatoriano al 50% de la región Costa sobre el
Enterococcus faecalis registró halos de inhibición muy bajos, seguidos del
propóleo serrano.
La capacidad inhibidora sobre el Enterococcus faecalis del gluconato de
clorhexidina al 2% registró halos de inhibición mayores a las otras soluciones
irrigantes con un promedio de diámetro del halo de 24 mm, siguiendo con el
hipoclorito de sodio al 1% con un promedio de 18 mm y respecto al propóleo
ecuatoriano al 50% de la región sierra registró halos de inhibición mayores a los
de la región Costa en 8 y 7 mm respectivamente.
45
5.2. Recomendaciones
La presente investigación muestra el efecto inhibidor de cinco soluciones
irrigantes dando que el extracto hidro alcohólico del propóleo ecuatoriano de la
región Costa y Sierra registran halos de inhibición bastante bajos por lo tanto es
necesario realizar nuevas investigaciones que consideren los resultados
encontrados como fundamento para la posible elaboración de productos de uso
odontopediátrico para la irrigación intraconductos en la endodoncia en dientes
primarios.
El futuro uso del propóleo ecuatoriano en áreas como la odontología incidiría
directamente en los costos de la terapia pulpar al ser de bajo costo de
adquisición, un producto natural y en consecuencia al evitar lesiones en los
tejidos circundantes y de efectos adversos a la calidad de vida del paciente.
46
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ANEXOS
Anexo N° 1. Certificado de traducción Abstract
59
Anexo N° 2. Certificado de resultados en la Experimentación
60
Anexo N° 3. Certificado del material utilizado
61
Anexo N° 4. Certificado del manejo de desechos infecciosos
