1
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
MODALIDAD: INVESTIGACIÓN
TEMA:
Estudio Farmacognóstico Fitoquímico, Preliminar de las Alga Parda
Sargassum ecuadoreanum en Santa Elena: Elaboración del
Detergente Líquido de Uso Tópico
TRABAJO DE TITULACIÓN PRESENTADO COMO REQUISITO PREVIO
PARA OPTAR POR EL GRADO DE QUÍMICO(A) Y FARMACÉUTICO (A)
AUTORES:
MEJIA CASTRO MEIBY MARINA
MEJIA CHELE JAVIER JOAQUIN
TUTOR:
Dr. QF. OSWALDO PESANTES DOMINGUEZ, MSc.
GUAYAQUIL – ECUADOR
2019
XII
Dedicatoria
A Jehová Dios por haberme escuchado todas mis oraciones y por darme la
fuerza la salud la perseverancia para lograr tener mi título universitario un camino
de muchos obstáculos, pero sobre todo de mucho aprendizaje.
A mi mama Martina castro te lo dedico con todo mi corazón mi amiga de
batallas que ha estado en todo momento conmigo dándome ese empujón que
necesito para no rendirme has llorado mis derrotas y has celebrado mis triunfos
y sobre todos nunca has perdido la fe en mí que es lo que me lleva en este
momento a convertirme en una profesional.
A mi papa Mauricio Mejía mi rey esto también te lo dedico a ti gracias por
confiar en mí y sobre todo gracias por el apoyo porque fuiste testigo de cuán
difícil fue el camino y fuiste ese empujo q necesitaba para seguir y verte lo
orgulloso que esta de mi eso lo vale todo.
A Iliana Mejía mi hermana, mi mejor amiga, te lo dedico y te lo agradezco porque
estuviste todo el tiempo conmigo llorando, enojándote cuando salía mal de
clases ,y saltando conmigo cuando sacabas buenas notas y verte en este
momento lo feliz que estas por mí no tienen precio .
A mi abuelo Héctor Mejía lo logramos abuelito tu confianza fue lo que me lleva
hoy a obtener este título se lo orgulloso que estabas de mí y se cuánto anhelabas
verme ya graduada la vida no permitió que lográramos vernos físicamente, pero
te llevo todo los días en mi corazón y cuando nos volvamos a encontrar te lo
contare todo.
A mi abuela Judith Borja la más orgullosa por ver a su nieta cumplir te llevo en
mi corazón como en mis pensamientos nunca olvido cuan orgullosa estabas de
mí y como lo comentabas con todas tus amistades
A mi abuela Marina Zambrano por todo su apoyo y a mis amigos a todos los
que confiaron en mí solo me decirle lo ¡logramos!!
MEIBY MARINA MEJIA CASTRO
XIII
Dedicatoria
Primeramente, dedico este logro alcanzado a DIOS sobre todo porque sin el
nada de esto fuera posible, ya que me dio la fuerzas y la voluntad para seguir
adelante durante todo este camino transitado de momentos difíciles con
obstáculos pero que al mismo tiempo lleno de mucho esfuerzo y dedicación
constancia y perseverancia para llegar al objetivo alcanzado en estas instancias
de mi vida.
Segundo dedico esta meta alcanzada a toda mi familia que estuvieron ahí para
Mí, apoyándome emocionalmente, brindándome esos consejos de seguir
adelante sin mirar atrás, gracias a mi padre que estuvo ahí siempre apoyando
en lo q más pueda bien la forma o manera de apoyarme en todo sentido de la
palabra, gracias a mi madre que está siempre hay conmigo ambos guiándome
para ser la persona que hoy en día soy, gracias hermana por todo tus consejo,
tus cuidados siempre estás ahí conmigo jamás dices no, siempre estas
predispuesta eres una gran hermana por no decir la mejor hermana.
Y por último no menos importante le dedico este triunfo a mi abuelito que a pesar
de que no está conmigo sé que estuvo y estará desde allá del cielo siempre a mi
lado cuidándome, protegiéndome y dándome esas fuerzas de seguir y jamás
darme por vencido por más grande que sea los obstáculos desde allá del cielo,
gracias a todos que estuvieron conmigo: amigos, familia, juntos logrando un
objetivo más en vuestras vidas.
JAVIER JOAQUIN MEJIA CHELE
XIV
Agradecimiento
Por esta nueva meta alcanzada le agradezco primero a Jehová Dios por darme
Fe, fuerza, salud y la constancia para seguir hasta lograr mis objetivos.
A mis padres por ser un gran apoyo en todo el momento de este camino
universitario han estados conmigo en las buenas y en las malas y sobre todo
dándome el apoyo necesario para seguir hasta el final
A mi compañero de tesis Javier Mejía que fue de gran apoyo en este trabajo de
titulación
A mi tutor Dr. Q.F. Oswaldo pesantes Domínguez y A mi tutora revisora Q.F.
María del Carmen Villacrés que estuvo apoyándonos y impartiendo sus
conocimientos al largo de proyecto.
a la Facultad de Ciencias Químicas como la Facultad de Ciencias Naturales y el
laboratorio UBA que nos ayudaron con sus instalaciones para poder trabajar y
llevar a cabo este trabajo de titulación .
MEJIA CASTRO MEIBY MARINA
XV
Agradecimiento
Agradecido con Dios porque él fue mi motor, mi apoyo incondicional para no
dejarme vencer de los obstáculos que se me presentaron durante mi carrera y
mi vida, gracias abuelito que sé que desde allá arriba me cuidas, también
agradezco a mi Padre Javier Mejia Aguilar, mi madre Dolores Chele Delgado,
mi hermana Maritza Mejia chele, mis tíos, mis tías toda mi familia que me han
apoyado en todo el lapso de mi carrera universitaria gracias por siempre estar
conmigo.
Gracias compañeros futuros colegas amigos, que me extendieron la mano
durante todo estos años, que siempre estuvieron en las buenas y sobre todo en
las malas conmigo.
Gracias queridos/as docentes que estuvieron aportando un granito de
conocimiento para que todo sea posible, gracias Dr. Oswaldo Pesantes por
conformar este equipo tan grandioso e increíble junto con mi compañera Meiby
Mejia gracias a ella y a todos las personas que estuvieron con nosotros
agradecerles infinitamente, MUCHAS GRACIAS A TODOS!.
JAVIER JOAQUIN MEJIA CHELE
XVI
ÍNDICE GENERAL
RESUMEN.......................................................................................................................XXI ABSTRACT.........................................................................................................................................................................XXII
INTRODUCCIÓN .......................................................................................................... 1
CAPITULO I: PROBLEMA ........................................................................................... 3
I.1. Planteamiento del problema ............................................................................. 3
I.2. Justificación e importancia .............................................................................. 4
I.3. Hipótesis ............................................................................................................ 4
I.4. Objetivos ............................................................................................................ 5
I.4.1. Objetivo general ................................................................................................. 5
I.4.2. Objetivos específicos ........................................................................................ 5
I.5. Operacionalización de las variables .................................................................... 6
CAPITULO II MARCO TEÓRICO ................................................................................. 7
II. 2. Antecedentes ................................................................................................... 7
II.2. ALGA PARDA Sargassum ecuadoreanum ..................................................... 9
II.3. Aspecto teórico ................................................................................................ 9
II.3.1. Origen de la especie Sargassum ecuadoreanum .................................... 9
II.3.2. Habitad…………………………...……………................................................9
II.3.3. Descripción botánica…………………………………………………………...11
II.4. Taxonomía ....................................................................................................... 12
II.5. Morfología ........................................................................................................ 12
II.6. Reproducción .................................................................................................. 12
II.7. Potencial nutritivo ........................................................................................... 13
II.8. Algas pardas Sargassum en la cosmética .................................................... 14
II.9. Cenizas ………………………………………..………………………………………14
II.10. Parámetros fisicoquímicos ........................................................................... 15
II.11. Humedad ........................................................................................................ 15
II.12. Análisis de cationes ...................................................................................... 16
II.13. Actividad antioxidante .................................................................................. 17
II.14. Tamizaje Fitoquímico .................................................................................... 17
II.15. Detergente líquido ......................................................................................... 18
CAPITULO III MATERIALES Y MÉTODOS ................................................................ 20
III.1. Tipo de investigación ..................................................................................... 20
III.2. Equipos, Aparatos, Materiales y Reactivos .................................................. 20
III.2.1. Equipos.......................................................................................................20
III.2.2. Materiales ................................................................................................ 21
XVII
III.2.3. Reactivos....................................................................................................22
III.3. Muestra .......................................................................................................... 23
III.3.1. Recolección del material vegetal ............................................................ 23
III.3.2. Preparación y secado de las algas pardas Sargassum ecuadoreanum
...........................................................................................................................................23
III.4. Metodología Experimental ............................................................................. 24
III.4.1. Metodología Experimental ...................................................................... 25
III.4.2. Alcaloides ................................................................................................ 25
III.4.3. Saponinas ................................................................................................ 27
III.4.4. Ensayo para mucilagos ........................................................................... 27
III.4.5. Ensayo de cumarinas .............................................................................. 28
III.4.6. Extracto alcohólico .................................................................................. 29
III.4.7. Humedad ...................................................................................................32
III.4.8. Cenizas...................................................................................................... . 32
III.4.9. Actividad Antioxidante DPHH (2,2-difenil-1-picrilhidrazilo) .................. 33
III.4.10. Espectrofotometría de absorción atómica para el ión (selenio) ...... 33
III.4.11. Espectrofotometría de absorción atómica para el ión (Zinc) ............ 33
III.4.12. Preparación y análisis del extracto vegetal......................................... 34
III.4.13. Análisis físico -químicos de detergente líquido .................................. 35
CAPITULO IV .............................................................................................................. 36
IV.1. Resultados ..................................................................................................... 36
IV.1.1. Determinación de los índices farmacognósticos de Sargassum
ecuadorianum .................................................................................................... 36
IV.1 2. Determinación de metabolitos secundarios por tamizaje fitoquímico. 36
IV.1.3. Determinación de los parámetros Físico- Químicos ............................ 36
IV.1.4. Humedad ................................................................................................. 38
IV.1.5. Cenizas .................................................................................................... 38
IV.1.6. Actividad Antioxidante ........................................................................... 38
IV.1.7. Espectrofotometría atómica del ion selenio ......................................... 39
IV.1.8. Espectrofotometría atómica del ion Zinc .............................................. 39
IV.1.9. Descripción de Propiedades Organolépticas del Jabón Líquido ....... 40
IV.1.10 Presentación de diferentes condiciones que se mantuvo al detergente
liquido ................................................................................................................. 41
IV.2. Discusión ....................................................................................................... 42
CONCLUSIONES ........................................................................................................ 43
RECOMENDACIONES ............................................................................................... 44
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS............................................................................ 45
VOCABULARIO .......................................................................................................... 47
XVIII
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla I Operacionalización de las variables ....................................................... 6
Tabla II Materiales ............................................................................................ 21
Tabla III Reactivo análisis fisicoquímico ........................................................... 22
Tabla IV Reactivos para elaboración de Detergente líquido……………………..22
Tabla V Actividad Antioxidante…………………………..………………………….33
Tabla VI Catión zinc…………………………………………………………….…….34
Tabla VII Componente de detergente líquido ................................................... 34
Tabla VIII Resultado tamizaje Srenning Fitoquímico ........................................ 37
Tabla IX Resultados de análisis de humedad................................................... 38
Tabla X Resultados de análisis de cenizas ...................................................... 38
Tabla XI Expresa el resultado selenio proporcionado por el laboratorio UBA .. 39
Tabla XII Expresa el resultado zinc proporcionado por el laboratorio UBA ...... 39
Tabla XIII Observación de diferentes condiciones organolépticas ................... 40
Tabla XIV Propiedades físicas y químicas del detergente líquido .................... 40
Tabla XV Resultado preliminar de estabilidad del detergente líquido ............... 41
XIX
ÍNDICE DE FIGURA
Figura 1 Muestra Sargassum ecuadoreanum recolectada en Ballenita ........... 11
Figura 2 Metodología experimental .................................................................. 24
Figura 3 Esquema para análisis de alcaloide .................................................. 26
Figura 4 Esquema del ensayo rápido de saponinas ......................................... 27
Figura 5 Esquema para detectar mucilagos .................................................... 27
Figura 6 Esquema para análisis de cumarinas ................................................. 28
Figura 7 Esquema para análisis de metabolitos de extracto alcohólico .......... 31
XX
ÍNDICE DE ANEXOS
Anexo A Pesado del Sargassum ecuadoreanum ............................................. 49
Anexo B Trituración del Sargassum ecuadoreanum...........................................49
Anexo C Pesado de la muestra ...................................................................... . 50
Anexo D Extracto acuoso .............................................................................. ..50
Anexo E Reactivos De Tamizaje Fitoquímico ................................................ ..52
Anexo F Extracto alcohólico .......................................................................... ..52
Anexo G Ensayos de Aceites esenciales ...................................................... ..53
Anexo H Antocianinas ..................................................................................... 54
Anexo I Cenizas .............................................................................................. 54
Anexo J Cenizas totales .................................................................................. 55
Anexo K Actividad antioxidante DPHH ............................................................ 57
Anexo L Catión selenio.................................................................................... 58
Anexo M Catión zinc........................................................................................ 59
Anexo N Elaboración de detergente líquido .................................................... 60
Anexo P Viscosidad Del detergente Liquido ................................................... 62
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS XXI
CARRERA QUÍMICA Y FARMACIA
UNIDAD DE TITULACIÓN
“Estudio Farmacognóstico Fitoquímico, Preliminar de las Alga Parda
Sargassum ecuadoreanum en Santa Elena: Elaboración del Detergente
Líquido de Uso Tópico”
Autores: JAVIER JOAQUIN MEJIA CHELE Y MEIBY MARINA MEJIA CASTRO
Tutor: Dr. OSWALDO PESANTES DOMINGUEZ, MSc.
RESUMEN
El presente trabajo de investigación tiene como finalidad el estudio farmacognóstico y
fitoquímico de las algas pardas Sargassum ecuadoreanum, en Ballenita, provincia de Santa
Elena. Para ello se realizaron pruebas como el tamizaje Fitoquímico, y la identificación de
metabolitos secundarios, tanto en extracto acuoso como en extracto alcohólico. Además de ello
se realizaron determinaciones de ceniza, humedad, antioxidantes (DPHH) y análisis de
cationes como el zinc y selenio, luego de los análisis preliminares de las algas y su
comprobación de actividad antioxidante. De acuerdo a lo establecido, se procedió a elaborar
detergente líquido a base de las algas pardas Sargassum ecuadoreanum, el mismo que fue
sujeto a estudios organolépticos y de estabilidad acelerada. El detergente líquido presentó
características aceptables de estabilidad. Las determinaciones químicas indicaron niveles altos
de zinc y actividad antioxidante. Concluimos que las algas pardas Sargassum ecuadoreanum
tienen beneficios que podrían ser utilizados en la industria cosmética.
PALABRAS CLAVES:
ALGAS PARDAS, Sargassum ecuadoreanum, ANTIOXIDANTE, TAMIZAJE FiTOQUÍMICO, DETERGENTE LÍQUIDO
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS XXII
CARRERA QUÍMICA Y FARMACIA
UNIDAD DE TITULACIÓN
"Preliminary Phytochemical Pharmacognostic Study of Brown Algae Sargassum
ecuadoreanum in Santa Elena: Preparation of Liquid Detergent for Topical Use"
Authors: Meiby Marina Mejia Castro y Javier Joaquin Mejia Chele
Advisor: Dr. OSWALDO PESANTES DOMINGUEZ, MSc.
The purpose of this work is to study the pharmacokinetic and phytochemical characteristics of
the brown algae Sargassum ecuadoreanum, in Ballenita, Santa Elena province. Phytochemical
screening and the identification of secondary metabolites were performed both in aqueous and
alcoholic extracts. Determinations of ash, moisture, and cation analysis such as zinc and
selenium were also made after preliminary analysis of the algae and verification of their
antioxidant activity by DPHH analysis. Liquid detergent based on Sargassum ecuadoreanum
brown algae was prepared and subjected to organoleptic and accelerated stability studies. The
liquid detergent presented acceptable stability. Chemical analyses detected high levels of zinc
and antioxidant activity. We conclude that the brow algae Sargassum ecuadoreanum have
benefits that could be useful in the cosmetic industry
KEY WORDS: BROWN ALGAE, Sargassum ecuadorianum, ANTIOXIDANT, FiTOCHEMICAL SIZE, LIQUID DETERGENT
1
INTRODUCCIÓN
Las algas pardas corresponden a un grupo muy grande de algas marinas, Su
pigmentación varía de amarillo pardo a pardo oscura y produce gran cantidad de
un mucus protector, son organismos que presentan en su composición química
cantidades apreciables de compuestos antioxidantes (1)
Los extractos de algas marinas presentan actividad antioxidante explicada
por varios mecanismos de acción; entre estos se encuentran la capacidad
atrapadora de radicales libres, la quelación de metales prooxidantes, los
mecanismos de donación y aceptación de electrones y la capacidad de
interrupción de la peroxidación lipídica (2)
Los antioxidantes naturales de las algas marinas se utilizan desde hace
muchos años atrás en las industrias alimentarias y cosmética, de tal manera que
la demanda de algas de producción de productos industriales se ha
incrementado en los últimos años. En países como China y Japón el cultivo de
algas se encuentra en expansión a nivel industrial y esto se ha extendido hasta
algunos países del continente americano incluyendo a Ecuador, ya que es un
recurso abundante que es utilizado de nuestras costas. (3)
Las algas pardas contienen varios compuestos inorgánicos y orgánicos que
son muy beneficiosos para la salud humana, se les atribuye propiedades
curativas de varias enfermedades como resfriado e influenza, esto posiblemente
debido a su alto valor nutricional. (3)
Estas especies de algas que han demostrado amplia versatilidad en su
composición química dentro de las cuales están las proteínas, carbohidratos,
lípidos, minerales y vitaminas, deben estar influenciados por factores
ambientales como temperatura, salinidad, localización, temporadas estacionales
y condiciones de almacenamiento.
2
Estudios recientes demuestran que las algas pardas tienen compuestos
potencialmente bioactivos capaces de producir varios metabolitos secundarios
con actividades biológicas importantes propiedades antivirales, antifúngicos,
antioxidantes y antibacterianas (4).
El campo cosmético e industrial de las algas se inicia a principio del siglo
XX. Los primeros productos elaborados con algas fueron cremas de afeitar,
maquillaje, champús, espumas, jabones y diversos productos de baños. Gracias
a su composición se benefician las personas ya que estos productos se reportan
como depurativos, suavizantes, hidratantes, tonificantes.
Las algas pardas contienen abundantes hidrocoloides o ficocoloides, dentro
de las cuales están los alginatos que son los más importantes ya que estos
ayudan a aumentar la viscosidad del producto y se aplican como agentes
espesantes, y gelificante (5)
3
CAPITULO I: PROBLEMA
I.1. Planteamiento del problema
Desde hace miles de años algunas especies de algas pardas se consumen
en Asia, las que son recogidas en poblaciones actuales de las costas y más
recientemente obtenidas de operaciones de acuicultura. En China, Japón y
Corea principalmente se cultivan diversas especies ya sea para el consumo
directo como para la obtención de alginato (6).
En las costas del Ecuador contamos con variedades de especies de algas
pardas del género Sargassum, que normalmente son desechadas. Estos
compuestos proporcionan resistencia y flexibilidad ya que forman geles en las
matrices intracelulares ayudándoles a resistir las tensiones provocadas por las
olas y las corrientes (6)
Las algas se vienen utilizando en la medicina tradicional China desde hace
milenios. Gracias a su gran diversidad biológica, las algas marinas suponen una
fuente de nuevos productos para usarse en la industria alimenticia y cosmética.
El sector de la cosmética marina se desarrolla desde hace 2 décadas con la
utilización de los hidrocoloides como agente texturizante. Más recientemente se
han incorporado extractos de algas en los productos cosméticos debido a sus
principios activos; por ejemplo, la acción anti-edad (6).
Las principales algas utilizadas en cosmetología son pardas y en menor grado
se usan las rojas. Los alginatos y derivados que poseen las algas pardas son el
componente utilizado en los diferentes productos cosmetológicos y entre las
especies más usadas se encuentra la Mocrocystis pyrifera y la Fucus vesiculosus
(8).
Las aplicaciones son variadas, fibras de alginato de calcio, de considerable
fuerza, son usadas por sus propiedades antibacterianas y hemostáticas.
Además, son fácilmente por el cuerpo humano, o se pueden retirar aplicando
solución salina de sodio. (9)
4
Estos mismos compuestos son los que hacen las algas pardas sean de gran
utilidad e interés económico ya que se pueden emplear como aglutinante,
espesantes y estabilizantes. En las industrias alimentarias están clasificadas
como aditivos alimenticios y sus componentes procesados cómo helado,
mermeladas, salsas y productos lácteos (10).
FORMULACION DEL PROBLEMA
¿El alga parda Sargassum ecuadoreanum presentará características
farmacognóstico y fitoquímica y propiedades antioxidantes, para su uso en la
industria cosmética?
I.2. Justificación e importancia
En la costa Ecuatoriana contamos con una gran variedad de algas pardas
localizadas en la provincia de Santa Elena – Ballenita. Este recurso actualmente
desapercibido, puede ser muy útil gracias a sus propiedades naturales. Su
desarrollo persistirá la expansión de su producción a niveles industriales también
será atractivo en la industria cosmética gracias a su contenido de aminoácidos,
vitaminas, sales minerales, oligoelementos o diversos metabolitos secundarios
que sirven para mantener un buen estado de la piel, ya que son directamente
accesibles a las células cutáneas.
A través de este diseño experimental se realizaran estudios
Farmacognóstico y fitoquímicos, para identificar sus propiedades antioxidantes
debido a que en Ecuador no encontramos mucha investigación científica sobre
dicha alga y los potenciales beneficios antioxidantes que pueden proporcionar.
I.3. Hipótesis
Las propiedades antioxidantes y los diversos metabolitos secundarios que
poseen las algas pardas Sargassum ecuadoreanum tendrán beneficios que
podrían ser utilizados en la industria cosmética.
5
I.4. Objetivos
I.4.1. Objetivo general
Analizar químicamente extractos de las algas pardas Sargassum
ecuadoreanum y explorar su utilidad potencial en la elaboración de un
detergente.
I.4.2. Objetivos específicos
Identificar metabolitos secundarios en las algas pardas Sargassum
ecuadoreanum.
Evaluar la capacidad antioxidante de las algas pardas Sargassum
ecuadoreanum.
Formular un detergente líquido a partir de extracto de las algas
Sargassum ecuadoreanum.
6
I.5. Operacionalización de las variables
Tabla I Operacionalización de las variables
Tipo Variables Conceptualización Indicador
Dependientes
Humedad Cantidad de líquido
presente en una droga vegetal
Porcentaje (%)
Densidad Cantidad de masa por unidad de volumen de
una sustancia
Celsius °c
Cenizas
Residuo inorgánico que se obtiene al incinerar
una droga vegetal
Porcentaje
(%)
Tamizaje fitoquímico
Determinar cualitativamente los
principales metabolitos
secundarios presentes en el material vegetal
Presencia
(+)
Ausencia (-)
Viscosidad Resistencia que ofrece
un líquido a fluir mPa.S
pH Escala de acidez y
basicidad Escala del 1
al 14
Actividad
antioxidante
molécula capaz de prevenir o retardar la
oxidación
mg/100 g
Análisis de cationes
determinar la cantidad o concentración en que se encuentra una sustancia
específica en una muestra
Porcentaje %
Independientes
Tiempo Tiempo necesario para
la recolección Min
Temperatura Temperatura necesaria
para el secado °c
Cantidad de muestra
Peso necesario para los
análisis y elaboración del producto.
g
Interviniente Zonas de
recolección Puntos de recolección
de las muestras
Fuente: autor(es)
7
CAPITULO II MARCO TEÓRICO
II. 2. Antecedentes
Las algas pardas pertenece a la clase Phaeophyceae, algas de color marrón
dorado que van desde pequeñas formas filamentosas hasta algas grandes y
complejas. De las 1.836 especies estimadas en aproximadamente 285 géneros,
menos del 1% se encuentran en hábitats de agua dulce. Debido a que existen
tan pocas algas marrones de agua dulce en todo el mundo y nuevos
descubrimientos continúan, aunque en la actualidad solo cinco de las siete
especies descritas han sido confirmadas en sitios de América del Norte. (9)
Para el desarrollo del presente trabajo de titulación, es necesario mostrar
investigaciones que mantengan mayor semejanza con la actual, dado a que es
importante conocer cuáles son las posibles características de las Algas Pardas
Sargassum ecuadoreanum a través de un estudio Farmacognóstico Fitoquímico,
para ello se nombrarán a los siguientes autores:
Según Burbano (11), en su trabajo de titulación llamado Determinación de las
características fisicoquímicas del alga parda Sargassum ecuadoreanum en la
zona intermareal, ubicada en Santa Elena, se determinó que son excelentes
dado a que se evidenciaron varios metabolitos secundarios, como alcaloides y
cumarinas consiguiendo ser usados en el área farmacéutica por su acción
farmacológica. Cabe mencionar que estas algas fueron encontradas con
mayores cantidades de agua, con un bajo porcentaje en grasas, las cuales,
según los autores fue menor al 1%, lo cual es considerado útil para las industrias.
También son de interés en la industria de alimentos, ya que también poseen un
alto valor nutricional.
8
Por otra parte, la autora García (12), en su trabajo de investigación llamado
Caracterización bromatológica de Macroalgas "Rodofítas, Clorofítas y Feofítas"
Marinas en las zona intermareal Rocosa del puerto de Manta, muestra que las
pardas en sí presentan un tono oscuro, por la presencia de una xantofila, el cual
es considerado como un colorante protector de la luz solar llamado fucoxantina,
protegiendo así el color de la clorofila a y c de los beta carotenos y otros
pigmentos. Como materia de reserva poseen polisacáridos. De la misma
manera, resulta esencial mencionar que según lo establecido por el autor la
cantidad de proteínas habitualmente es de 5-24% de peso. Por esta razón, las
algas son estimadas como fuentes ricas en proteínas.
La fucoxantina y la flavoxantina son algunas de las xantofilas más comunes
en estas algas. A su vez, se determina que la pared celular de estas algas
contiene una pequeña porción de celulosa y una gran cantidad de ácido algínico,
un polisacárido que se puede extraer y tiene un uso comercial. (11)
En América del Sur, Chile es visto como un país pionero en el estudio y el
cultivo de algas pardas, no solo para reponer las reservas de algas modificadas
o depredadoras en los bosques marinos, sino en cuidado y la preservación del
ecosistema marino a fin de mantener biodiversidad en la vida marina costera,
también se propone su uso como biorefinerías en la producción de
biocombustibles, además del interés en el valor agregado de sus materias
primas. “En la actualidad, el país se ve necesitado en aumentar el valor de las
materias primas, especialmente aquellas para las que recientemente se ha
comenzado a determinar su enorme valor, como las algas pardas que crecen en
la costa norte del país” (13).
9
II.2. ALGA PARDA Sargassum ecuadoreanum
Dentro de las algas pardas, hay un gran subgrupo de algas similares con
características comunes. Estas son algas laminares, también conocidas como
algas kelp. Todos parecen grandes "plantas marinas" que forman los "bosques"
de algas submarinas e incluyen alrededor de 30 géneros diferentes. Se
diferencian, en particular, que contienen una mayor cantidad de yodo. Las algas
más famosas que se usan en los alimentos son las algas Wakame, Kombu,
Arama Además de algas marinas, también distinguimos las algas Fucus, que no
se usan ampliamente en la cocina, pero a partir de las cuales se hacen aditivos
que permiten utilizar sus propiedades beneficiosas. (14)
De la pared celular la Phaeophyceae o algas pardas están formados por
polisacáridos sulfatados como los fucoidanos. Su morfología es muy diversa y
tienen una forma que van desde algas con tejidos especializados hasta algas
filamentosas de estructura sencilla. Son conocidas por su gran tamaño y por su
crecimiento rápido, su coloración se da por la presencia de pigmentos tales como
carotenoides (fucoxantinas). La clasificación taxonómica actual incluye a las
algas pardas conformadas por una sola clase, Phaeophyceae en la cual
comprende aproximadamente 250 géneros y entre 1500 a 2000 especies
descritas. (15)
II.3. Aspecto teórico
II.3.1. Origen de la especie Sargassum ecuadoreanum
El origen de las algas Sargassum, que llega masivamente a la costa
dominicana en el verano de 2015, ha sido controvertido, y la pregunta sigue sin
respuesta. El hecho de que estas dos especies parezcan mezcladas en la costa,
sugiere que la fuente de la invasión puede ser el Mar de los Sargazos, donde
coexisten dos algas. Como fue el caso de Nigeria en julio de 2012 (16).
10
Las algas pardas o llamadas también phéophytes son casi exclusivamente
marinas porque solo se conocen unas pocas especies de agua dulce. Son muy
numerosos en las costas rocosas, donde se desarrollan en la zona costera, es
decir en la zona que va desde el punto de pleamar al de bajamar y sub- costa,
especialmente en aguas frías, agitadas y bien ventiladas. Las algas pardas se
reproducen en estas áreas costeras, donde finalmente forman verdaderos
"bosques submarinos" que proporcionan un ambiente muy favorable para
muchos animales marinos ya sean vertebrados o invertebrados. (16)
Su mayor diversidad se encuentra en las latitudes polares, boreales y
templadas, también se pueden encontrar en aguas tropicales y subtropicales, el
ejemplo más famoso de las cuales son las altas concentraciones de algas pardas
de las especies de Sargassum, que caracterizan el mar de los Sargazos. (16)
II.3.2. Habitad
Las algas viven tanto en cuerpos de agua como en un ambiente deshidratado,
en rocas desnudas, aguas termales, nieve y glaciares. Para sobrevivir, necesitan
una baja concentración de nutrientes, baja intensidad de luz y bajas
temperaturas, cuando las algas son los principales géneros colonizadores
durante la formación de un nuevo entorno. Las plantas marinas se encuentran
en el fondo marino con varias fanerógamas marinas como Thalassia testudinum,
Syringodium filiforme, Halodule wrightii y Halophila decipiens. (12)
Las algas pardas son casi exclusivamente marinas. Solo unas pocas especies
de ocho géneros crecen en agua dulce. Estos son organismos bentónicos que
viven en lo profundo de los ecosistemas acuáticos. Algunas especies de
sargazos son pelágicas, es decir su crecimiento se da cerca de la superficie. Las
especies de agua dulce están presentes en el hemisferio norte, con la excepción
de Ectocarpus siliculosus. (12)
11
Esta especie cosmopolita suele ser marina, aunque ha sido descubierta en
cuerpos de agua dulce en Australia. Phaeophycea marina son componentes de
la flora costera marina, son distribuidas a partir de zonas subpolares hasta el
ecuador. Su mayor diversidad se encuentra en las aguas frías de la zona
templada. Los quelpos, en su mayoría aquellas especies de Laminariales,
conforman bosques en las entrañas de la zona templada, con la excepción del
Ártico. Las especies pelágicas de Sargassum forman grandes áreas en el
famoso Mar de los Sargazos del Atlántico. (12)
II.3.3. Descripción botánica
Alga parda (Sargassum ecuadoreanum) es una planta marina de color café
oscuro, ramas alargadas, delgadas y flácidas, hasta 70 cm de largo que se
fragmentan con el oleaje, fronde alterna, las láminas angosto-elípticas,
lanceoladas u oblogo-elipticas de 3-5 cm de longitud, las márgenes dentadas,
con vesículas globosas presentes, de 0,5 cm de diámetro. (Facultad de Ciencias
Naturales,2019)
Figura 1 Muestra Sargassum ecuadoreanum recolectada en ballenita
12
II.4. Taxonomía
La taxonomía de las Algas Pardas Sargassun ecuadorianum, es la siguiente:
Reino: Chromista
Phylum: Ochrophyta ò Heterokontophyta
Clase: Phacophycidae
Subclase: Fucophycidae
Orden: Fucales
Familia: Sargassaceae
Género: Sargassum
Especie: Sargassum ecuadoreanum W.R Taylor
II.5. Morfología
La especie Sargassum ecuadoreanum tiene un color marrón claro o café y
una longitud de 23 a 27.5 cm. Su base es un pecíolo ligeramente alargado y poco
conocido. Algunas ramas lisas con hojas delgadas de 4.5 cm de largo y 3.5 mm
de ancho están realzadas por un montículo o tejido falso de algas. Sus bordes
están notablemente cortados, con dientes de 1 mm de largo. La vena central se
palpa cerca de la parte superior de las hojas. Además, sus vesículas son lisas y
esferoidales con un diámetro de 4 mm. (12)
II.6. Reproducción
Las algas pardas tienen la capacidad de reproducirse sexual y asexualmente,
mostrando una gran generación alterna, es decir, las especies se alternan entre
generaciones de esporofitos y gametofitos, completando así su ciclo de vida en
dos fases, tales como diploide y otro haploide (17)
13
La generación diploide esporofítica y la meiosis ocurren en los esporangios
durante la formación de zoosporas específicas para la reproducción de algas. A
su vez, la reproducción asexual se logra mediante la fragmentación del astrágalo;
Las especies más desarrolladas, que flotan en la superficie del mar, se restauran
por completo mediante la fragmentación de una de sus partes, la más efectiva
durante su reproducción, como en el caso de la especie Sargassum natans. (17)
II.7. Potencial nutritivo
Las algas son una buena fuente de nutrientes, ya que posee de proteínas,
vitaminas, minerales y fibra dietética. Por consiguiente, las algas de fibra
dietética son particularmente ricas en fracción soluble. Si se comparan las algas
con vegetales terrestres, se puede evidenciar que existen otros componentes
saludables, como los ácidos grasos y las moléculas biológicamente activas. Por
ello, se dice que las algas sintetizan varios metabolitos secundarios con actividad
antioxidante, antiinflamatoria, anticancerígena y antidiabética. (18)
La calidad de los nutrientes de las algas y el alto contenido de compuestos
biológicamente activos que tienen un efecto beneficioso sobre la salud son dos
razones importantes para el aumento de su consumo. Además, las algas tienen
propiedades relacionadas con las estructuras de proteínas, lo que les permite
ser incluidas en productos de carne y pasta, al tiempo que mantienen o mejoran
su calidad sensorial, nutritiva y saludable. (18)
Las algas marinas se consideran uno de los alimentos más ricos y nutritivos.
La peculiaridad es que contienen una cantidad significativa de aminoácidos,
proteínas, fibras, minerales y compuestos fenólicos que le dan a esta especie
actividad antioxidante., incluso si es rico en polisacáridos y que la mayoría de
ellos no pueden ser consumidos, debido a que son parte de la fibra dietética. (19)
14
La fracción proteica en las algas cambia a lo largo del año, al igual que las
especies. Las algas rojas y verdes generalmente contienen entre 10 y 47% de
proteína en peso seco. En contraste, las algas pardas cubren niveles más bajos,
que van del 3 al 15%. (19).
II.8. Algas pardas Sargassum en la cosmética
Los extractos de algas pueden ser utilizado en cosmética gracias a sus
cualidades hidratantes, nutrientes, tonificantes, anti-radicales o anti-edad como
principios activos entre 0,2-2%. También como colorantes, aromatizantes o
conservantes que se pueden integrar como aditivos al menos del 0,2%. Gracias
a sus características gelificantes y espesantes se pueden emplear como
excipientes entre 2-20%, también se reporta sus aplicaciones entran en la
formulación de geles antiinflamatorios, agentes revitalizadores para el cabello
tanto en las lociones capilares, lociones suavizantes y geles protectores
solares. (20)
II.9. Cenizas
El contenido total de cenizas presente en las algas da idea de la proporción
de minerales presentes en las mismas. El contenido de minerales en las algas
en general adquiere valores significativamente altos. (21)
La determinación de las cenizas dentro de las algas da una aproximación a
las cantidades de minerales que se encuentran dentro de las algas, debido que
las algas tienen valores altos significativamente y si se realiza una comparación
con productos de origen animal o plantas terrestres las algas se convierten en
uno de los productos alimenticios más completos en minerales por delante de
los antes mencionados. (21)
La variación de los minerales depende exclusivamente del tipo de planta que
se analice, a su geografía, estación del año y los factores ambientales que la
rodean, por esto es de mucha utilidad el uso de cenizas para la elaboración de
cosméticos ya que su gran cantidad y variedad de minerales favorecen al buen
15
cuidado de la piel si se realiza una producción y uso adecuado de las algas
pardas Sargassum se obtienen un producto natural que brinde beneficios para
cada tipo de piel en el consumidor. (20)
II.10. Parámetros fisicoquímicos
Las propiedades físico‐químicas de las algas, tales como las propiedades de
hidratación, vienen determinadas por la cantidad de fibra presente en ellas y por
el tipo de fibra (soluble o insoluble). (22)
Se podrá determinar las propiedades de hidratación de las algas mediante la
fibra que se obtenga, determinando la capacidad de retención de líquido y
capacidad de hinchamiento del alga (22)
La capacidad de retención se mide a través de la cantidad de agua que pueda
retener el alga en cada gramo de muestra, tomando a consideración la
temperatura, tiempo y velocidad de centrifugación es posible calcular La
capacidad de hinchamiento e a través del tamaño de volumen que obtenga el
alga por cada gramo de muestra al momento de esta hidratarse en condiciones
de tiempo y temperatura establecidas, estas dos herramientas se utilizan
generalmente para la obtención de la capacidad de retención de aceite. (22)
Tanto la capacidad de hinchamiento como la capacidad de retención son
propiedades importantes en la elaboración de cosmético (22).
II.11. Humedad
El contenido de agua en los alimentos naturales varía entre un 60 y un 95%.
En los tejidos vegetales y animales, el agua puede encontrase en dos formas
generales: “agua libre” Y “agua ligada”. El agua libre o absorbida, que es la forma
16
Predominante, se libera con gran facilidad. El agua ligada se halla combinada o
absorbida. (23)
Existen varias razones por las cuales, la mayoría de las industrias de
alimentos determinan la humedad. La principal causa es, que no se desea
adquirir materia prima con agua en exceso ya que, facilita el desarrollo de los
microorganismos afectando la calidad de los alimentos. Siendo así, que la
determinación del contenido en agua es un control importante en las diferentes
etapas de la fabricación de alimentos (23)
II.12. Análisis de cationes
En las algas pardas, el ácido algínico es uno de los principales constituyentes
de las paredes celulares, se encuentra con otros polisacáridos, diferenciándose
por la propiedad de insolubilidad en el agua y por encontrarse asociado con
varios cationes: zinc, calcio, magnesio y sodio. (24)
Los cationes no son más que cargas eléctricas positivas, por ende han perdido
electrones, y reflejan una oxidación de las moléculas. Dentro de la especie de
las algas pardas se encuentra inmerso el ácido algínico como principal
constituyente sobre las paredes celulares del alga. Se encuentran otro tipo de
polisacáridos, de las cuales se hace una diferencia debido a la poca resistencia
a ser inseparable dentro del agua y a su vez porque se relacionan con diferentes
tipos de cationes. (24)
Los cationes livianos están inmersos de forma natural en las algas, y pueden
ser intercambiados con iones metálicos si se aplica un proceso de adsorción.
Para realizar un análisis de cationes es necesario establecer un método general
para el análisis de las sustancias de manera preliminar, luego es necesario
realizar la determinación de cationes por técnicas sensibles y específicas. (23)
17
II.13. Actividad antioxidante
Se han encontrado antioxidantes fuertes en los últimos años en algunas
especies de algas pardas debido a su contenido de poli fenoles, como los
fluoroglucoles, que contienen radicales libres que neutralizan la actividad
oxidativa. Científicos japoneses descubrieron recientemente que estos
compuestos tienen actividad 5-lipogenasa. Estos compuestos tienen actividad
antibacteriana, son inhibidores moderados de la monoaminooxidasa y pueden
contribuir a su fuerte actividad antidepresiva. (25)
El fucano es un polisacárido sulfatado aislado de algas pardas que ha
demostrado un efecto inhibitorio sobre el crecimiento celular en varios modelos
experimentales. Estas acciones antioxidantes pueden ayudar a neutralizar los
efectos del estrés oxidativo en los organismos vivos, teniendo en cuenta los
efectos de este tipo de estrés en muchas enfermedades crónicas, muchas de las
cuales están relacionadas con el envejecimiento. (25)
II.14. Tamizaje Fitoquímico
El tamizaje fitoquímico constituye una de las técnicas que nos ayuda a
determinar cualitativamente los principales grupos de constituyentes químicos
presentes en la planta.
El tamizaje fitoquímico nos permite identificar qué tipo de plantas son útiles y
cuales son dañinas según muestras comparativas entre vegetales y otras formas
de vida, permitiendo así la relación botánica. La función de métodos de
investigación, sistematización y análisis químico permiten la creación de la
fitoquímica, ciencia que nos brinda información acerca de los diferentes
productos químicos naturales que poseen las plantas los cuales pueden ser
extraídos, purificados y separados para su uso. (26)
Es una de las partes medias de la investigación fitoquímica, donde se podrá
determinar las cualidades de los grupos químicos dentro de una planta y a partir
18
De allí, elaborar la extracción para el aislamiento de los grupos químicos de
mayor importancia para lo que se pretende desarrollar. (26)
El tamizaje fitoquímico permite la extracción de los componentes químicos
naturales que se requieran para la elaboración de los cosméticos, y a su vez
poder determinar que grupos químicos son dañinos para no afectar el producto
de manera negativa ya que estos pueden afectar la piel en diferentes grados
según el componente, Nos brinda toda la información necesaria para poder
determinar qué beneficios naturales podrá tener el producto a desarrollar, la
viabilidad del mismo y seguridad de las prestaciones que brinda cada
compuesto, cabe recalcar que el tamizaje Fitoquímico no es más que una
orientación la cual debe ser interpretada de forma correcta, para su buen uso.
(26)
II.15. Detergente líquido
La tecnología ha evolucionado para mejorar este producto y seguir el principio
para el que fue creado: la higiene del consumidor y su bienestar con sus
texturas, colores y aromas, que en algunos casos pueden tener funciones
adicionales, como la hidratación. Se pueden encontrar en forma sólida, en forma
de barra o en forma líquida. (27)
El detergente líquido generalmente contiene tensioactivos que, cuando se
aplican a una superficie sucia en combinación con agua, mantienen
efectivamente las partículas de suciedad en suspensión, de modo que cuando
se enjuagan, limpian la superficie que es el cuerpo u objetos humanos. Es decir,
barren los elementos que componen la "suciedad". (27)
19
Esta línea de productos incluye jabones antibacterianos que se han utilizado
durante décadas en millones de hogares, escuelas, lugares de trabajo y oficinas
en todo el mundo. Este tipo de jabón contiene ingredientes antimicrobianos, cuya
función principal es controlar la contaminación por microorganismos, lo que
conduce a la prevención de enfermedades como infecciones de la piel y
gastrointestinales, entre otras. (27)
20
CAPITULO III MATERIALES Y MÉTODOS
III.1. Tipo de investigación
La presente investigación es de tipo exploratoria y cuantitativa, se llevó a cabo
en el Laboratorio del Productos naturales, Programa de Gestión de la facultad
de Ciencias Químicas de la Universidad de Guayaquil. Este estudio se basa en
la determinación farmacognóstico y fitoquímico para determinar los metabolitos
secundarios, su actividad antioxidante y sus componentes físicos y químicos que
poseen en su estructura, para luego proceder a formular un detergente líquido
a base de algas parda Sargassum ecuadoreanum que pueden servir a nivel
industrias cosmética en nuestro país.
La investigación es también cuantitativa debido a que dentro de los análisis
se realizarán determinaciones porcentuales de humedad, cenizas y tamizaje
fitoquímico entre otros para responder la hipótesis de trabajo.
La viscosidad, acción antioxidante y la detección de los cationes zinc y
selenio en el detergente liquido se realizaron en el laboratorio UBA (Analitycal
laboratories).
III.2. Equipos, Aparatos, Materiales y Reactivos
III.2.1. Equipos
Estufa
Mufla
Balanza
Fuente: autor(es)
2121
III.2.2. Materiales
Tabla II Materiales
Nombre Función Tipo de material
Embudo de vidrio
Instrumento empleado para Canalizar líquidos y materiales sólidos granulares en recipientes con bocas estrechas.
Vidrio.
Vaso precipitado
Preparar o calentar sustancias y traspasar líquidos
Vidrio
Fiola Contener y medir líquidos. Vidrio.
Frasco de reactivo
guardar sustancias para almacenarlas los hay ámbar y transparentes
Vidrio.
Probeta milimetrad
a
Es un instrumento volumétrico, que permite medir volúmenes
Vidrio.
Pipeta Es un instrumento volumétrico de laboratorio que permite medir la alícuota de líquido con bastante Precisión.
Vidrio
Mechero de alcohol
Sirve para calentar sustancias con alcohol. Metal.
Pinza Esta herramienta sirve para sujetar los tubos de ensayos
Metal
Tubo de ensayo
Es un tubo cilíndrico pequeño utilizado en la contención de muestras líquidas y también para calentar
Vidrio
Matraz Recipiente de cristal donde se mezclan las soluciones químicas
Vidrio
Vidrio de reloj
Se usa para pesar sustancias solidas o desecar pequeñas cantidades en disolución.
Porcelana
Crisoles Recipiente de porcelana es un material de laboratorio utilizado principalmente para calcinar sustancias
Porcelana
Mortero con pilón
Se usa para moler o reducir el tamaño de las Sustancias.
Porcelana
Gradilla Es utilizada para sostener y almacenar gran cantidad de tubos de ensayo,
Plástico
Papel Filtro
Filtro para las impurezas insolubles y permitir el paso de la solución a través de sus poros. Papel
22
III.2.3. Reactivos
Tabla III Reactivo análisis fisicoquímico
REACTIVOS: ANÁLISIS
FISICOQUÍMICOS
Ácido Clorhídrico Al 10 %
Agua Destilada
Ácido Nítrico
Reactivo de Dragendorff
Reactivo de Bouchardat
Reactivo de Wagner
Ácido Sulfúrico
Anhídrido Acético
Cloroformo
Hidróxido de Sodio
Alcohol Etílico
Fehling A
Fehling B
Reactivo de Benedict
Limaduras de Magnesio
Ácido Clorhídrico
Benceno
Fuente: autor(es)
Tabla IV Reactivos para elaboración de detergente líquido
Reactivos para elaboración de detergente
líquido Antibacterial
Texapón 70 (Lauril éter sulfato de sodio)
Comperland (cocodietanolamina)
Sal industrial
Agua destilada
Glicerina
Concentrado de algas Sargassun
ecuadoreanum
23
III.3. Muestra
III.3.1. Recolección del material vegetal
Las algas pardas Sargassum ecuadoreanum fueron recolectadas en la
Provincia de Santa Elena – Ballenita en febrero del 2019. Se recolectaron 5 kilos
en varios envases herméticos para posteriormente realizar una clasificación
botánica en el Instituto de investigaciones de recursos naturales (IRN) de la
Facultad de Ciencias Naturales para su respectiva taxonomía botánica.
III.3.2. Preparación y secado de las algas pardas Sargassun ecuadoreanum
Las algas fueron lavadas con agua destilada para eliminar cualquier residuo.
Posteriormente se dejó al ambiente por 24 horas, luego se colocó en la estufa a
40 °C por 24 horas para eliminar residuo de humedad, después se trituró con la
ayuda de un mortero y pilón de porcelana hasta lograr un polvo uniforme. El polvo
fue guardado en un envase de plástico protegido de luz y humedad.
24
Recolección de la Muestra del alga parda Sargassum ecuadoreanum
Lavado de la muestra
Proceso de secado a temperatura
ambiente por 24 horas
Proceso de secado en estufa a 40ºC
durante 24 horas.
Trituración de la muestra
Obtención del extracto acuoso y
alcohólico
Screnning fitoquimico
Análisis de humedad , cenizas
Análisis de antioxidantes DPHH.
Elaboración de el jabón liquido Antibacterial
Análisis de estado físico químicos del
jabón líquido Antibacterial
Estudio de viscosidad .
Interpretación de resultados
Conclusiones y
III.4. Metodología Experimental
Figura 2 Metodología experimental
Fuente: autor(es)
25
III.4.1. Metodología Experimental
Estos análisis se realizaron en el Laboratorio de fitoquímica y farmacognóstico
de la Universidad de Guayaquil Facultad de Ciencias Químicas Se realizaron
los siguientes extractos acuosos y alcohólicos del alga parda Sargassun
ecuadoreanum.
Para el extracto acuoso se pesó aproximadamente 10 gramos de la muestra
seca y se le añadió la fase liquida (60 ml) de agua destilada e inmediatamente
se procedió a filtra y se dividió para realizar los correspondientes ensayos.
Para el extracto alcohólico se pesó aproximadamente 8 gramos de la muestra
seca y se colocó 10 ml de alcohol. Esta suspensión se filtró y se tomó de este
extracto las alícuotas correspondientes para los ensayos que se explicara a
continuación:
III.4.2. Alcaloides
Método de Dragendorff
Se tomó una alícuota del extracto acuoso (0.5 ml), se agregó 5 gotas de HCl al
10%, se homogenizó y adicionó 4 gotas del reactivo de Dragendorff. Como
resultado un precipitado anaranjado marrón será interpretado como positivo.
Composición de reactivo Dragendorff: se mezcla 8 g de nitrato de bismuto
pentahidratado en 20 ml de ácido nítrico al 30 % con una solución de 27.2 g de
yoduro de potasio en 50 ml de agua
Reacción de Wagner
Se tomó una alícuota del extracto acuoso (0.5 ml) se agregó 5 gotas de HCl al
10%, se homogenizó y adicionó 4 gotas del reactivo de wagner, un precipitado
color marrón fue interpretado como resultado positivo
Composición de reactivo Wagner: disolver 1.27 g de yodo (resublimado) y 2
gotas de yoduro de potasio en 20 ml de agua; aforar la solución con 100 ml de
agua destilada.
26
Se formará una opalescencia
blanca que será interpretado
como positivo
Reactivo de
Wagner
Reactivo de
Mayer
Finalmente, de 2 a 4 gotas del reactivo
de:
Luego 5 gotas de HCl al 10 % y
homogenizar
En 4 tubos se adiciona a 0.5 del extracto acuoso
Reacción de Bouchardat
Se tomó una alícuota del extracto acuoso (0.5 ml) se agregó 5 gotas de HCl al
10%, se homogenizó y adicionó de 2 a 4 gotas del reactivo de Bouchardart,
Como resultado Un precipitado marrón fue interpretado como resultado positivo.
Mayer
Se tomó una alícuota del extracto acuoso (0.5 ml) se agregó 5 gotas de HCl al
10%, se homogenizó y adicionó 4 gotas del reactivo. Una opalescencia blanca
que será interpretado como positivo.
Composición de reactivo de Mayer: disolver 1,3 g de cloruro mercúrico y 5 g
de yoduro de potasio por cada 100 ml de agua destilada.
Figura 3 Esquema para análisis de alcaloide
Fuente: Autor(es)
Se formará un precipitado marrón será interpretado
como positivo
Reactivo de
Bouchard
Se formará un precipitado anaranjado marrón será interpretado
como positivo.
Reactivo de
Dragendorff
Se formará un
precipitado flatulento
marrón será interpretado
como positivo
Alcaloides
27
Mucilagos
1. En un tubo de
ensayo se adiciona 2 ml de extracto acuoso
2. Se enfría a 5 grado centígrados
3. Si la solución tomo consistencia
gelatinosa el ensayo se considera positivo
III.4.3. Saponinas
Ensayo para Saponinas
Se tomaron 3 ml del extracto acuoso y se agito vigorosamente. La presencia de
saponinas se indica por una espuma persistente caso contrario será interpretado
como negativo
Figura 4 Esquema de ensayo rápido de saponinas
Fuente: Autor(es)
III.4.4. Ensayo para Mucilagos
Una alícuota (2ml) del extracto acuoso se lo somete a una temperatura de 5
grados centígrados por 10 minutos. El ensayo se considera positivo caso
contrario reportar negativo.
Figura 5 Esquema para detectar Mucilagos
Fuente: Autor(es)
1. Se mide 3 ml de extracto acuoso y se agita
vigorosamente
3. Caso contrario se reportara negativo
2. La presencia de saponinas se indica por una
espuma persistente
Sa
pon
ina
s
28
III.4.5. Ensayo de Cumarinas
Se coloca en un tubo de ensayo 4 ml de extracto acuoso de la muestra del alga
parda Sargassum ecuadoreanum, luego se cubre el tubo con un papel filtro
humedecido con 1 gota de solución de NaOH 10%. Se lo lleva a baño de maría
por 5 minutos. Se retira el papel filtro y se lo lleva a una cámara ultravioleta. La
presencia de cumarinas será representada por una fluorescencia amarilla,
verdosa, rosada, purpura o azul como positiva.
Se coloca en un tubo de ensayo de 4 ml de extracto acuoso
Cumarinas
Luego se cubre el tubo con un papel
filtro humedecido en solución de Na(OH)
al 10 %
Se observa la presencia de una florescencia amarilla, verdosa, rosada que se reporta como positivo
Se coloca el tubo en baño maría por varios minutos a continuación se retira el papel filtro del tubo y se expone a la luz ultravioleta
Figura 6 Esquema para análisis de cumarinas
Fuente: Autor(es)
29
III.4.6. Extracto alcohólico
III.4.6.1. Ensayo para Taninos
Se tomó una alícuota de 1 ml el extracto alcohólico en un tubo de ensayo y se
añadió 5 gotas de cloruro férrico al 5%. La prueba es considerada positiva al dar
coloración azul, verde, parda o negra.
III.4.6.2. Ensayo para Glucósidos
Para determinar la presencia de glucósidos en la muestra, se tomó 2 ml del
extracto alcohólico en un tubo de ensayo y se adicionó 1 ml de reactivo de
Fehling A y 1 ml del reactivo de Fehling B, se lleva la reacción a baño maría. La
formación de precipitado color ladrillo indica positivo a la prueba, pero si el
ensayo es un precipitado se mantiene de color azul será negativo.
III.4.6.3. Ensayo para Glucósidos cardiotónicos
Se toma 1 ml del extracto alcohólico en un tubo de ensayo y se adicionó 1 ml de
reactivo de Benedict, se lo lleva a baño maría por 5 minutos. La formación de
precipitado color amarillento - naranja indica positivo el ensayo, pero si el
precipitado se mantiene un color azul será negativo el ensayo.
III.4.6.4. Ensayo para aceites esenciales
Para determinar la presencia de aceites esenciales se tritura una parte de las
especies vegetal fresca. La presencia de olor indica que los aceites esenciales
se han liberado. Poner de 3 g de la muestra fresca triturada en 1 tubo y hervir
con agua, observar si hay incremento en el aroma o formación de gotas
aceitosas lo cual interpreta como reacción positiva.
30
III.4.6.5. Ensayo para Flavonoides
Para determinar la presencia de flavonoides en la muestra, se toma 1 ml del
extracto alcohólico en un tubo de ensayo y se adiciona limadura de magnesio.
Luego se añade 0.5 ml de HCl concentrado una coloración roja será reacción
positiva para flavonoides
III.4.6.6. Ensayo para Triterpenos y/o esteroides
Para la determinación de triterpenos y esteroides se toma 5 ml del extracto
alcohólico y se lleva a evaporación (sequedad) de 1 a 2 minutos luego se añade
20 gotas de anhídrido acético más 10 gotas de H2SO4 concentrado. Cambio de
coloración tonos vivos de purpura, rosa, verde, azules se considera como
reacción positiva.
III.4.6.7. Ensayo de Resina
Para detectar este tipo de compuesto se adicionó a 2 ml de la solución alcohólica
10 ml de agua destilada. La aparición de un precipitado o turbidez indicó un
ensayo positivo
III.4.6.8. Ensayo de Borntrager para quinonas
Para la presencia de quinonas en 1 ml a extracto alcohólico se adiciona 1 ml de
hidróxido de potasio al 5 % se agita la mezcla y se deja en reposo hasta su
separación se considera positivo la reacción si la fase acuosa (alcalina superior)
se colorea de rosado o rojo.
31
Figura 7 Esquema para análisis de metabolitos en el extracto alcohólico
Fuente: Autor(es)
32
III.4.7. Humedad
Determinación de Humedad, este análisis se realizó en el Laboratorio UBA,
donde se empleó la metodología descrita por la institución
Para los calculó se empleó la expresión:
% 𝐻𝑢𝑚𝑒𝑑𝑎𝑑 = ( 2−𝑀1
𝑀2−𝑀
HG: porcentaje en peso por desecación (%)
M2: masa de la capsula con la muestra en ensayos (g)
M1: masa de la capsula con la muestra de ensayo desecada (g)
M: masa de la capsula vacía (g)
100: factor matemático para cálculo.
III.4.8. Cenizas
Pesar 8 g del alga parda Sargassum ecuadoreanum triturado y tamizado en un
crisol de porcelana a temperatura hasta carbonizar y posteriormente incinerar en
un horno mufla a una temperatura de 600 °C, durante 5 horas. Enfriar el crisol
en una desecadora y pesar, repitiéndose hasta masa constante. Al enfriar el
crisol el residuo es de color blanco o casi blanco.
Para calcular los resultados se aplica la expresión:
Dónde:
𝑀2−𝑀1 ) ∗ 100
𝑀2−𝑀
C: porcentaje de cenizas totales en base hidratada
M: masa del crisol vacío (g)
M1: masa de crisol con la porción de ensayo (g)
M2: masa del crisol con la ceniza (g)
100: factor matemático para cálculo porcentual
) ∗ 100
C = (
33
III.4.9. Actividad Antioxidante DPHH (2,2-difenil-1-picrilhidrazilo)
Determinación de antioxidante DPHH (2,2-difenil-1-picrilhidrazilo), este análisis
se realizó en el Laboratorio UBA, donde se empleó la metodología descrita por
la institución
Inicialmente se hizo un ensayo en Cromatografía de Capa Fina (CCF) de cada
una las fracciones con el fin de realizar un análisis cualitativo antioxidante. Se
ensayaron mezclas de varios eluyentes en diferentes proporciones, entre ellas
hexano/acetato de etilo y cloroformo/metanol, hasta encontrar el sistema que
reprodujera una mejor separación de los compuestos. Posteriormente se reveló
con una solución de DPPH al 0.2% en metanol (positivo: manchas amarillas
sobre fondo violeta)
Tabla V Actividad Antioxidante
Actividad antioxidante
DPHH ( mg/kg)
Fuente: Autor(es)
III.4.10. Espectrofotometría de absorción atómica para el ión selenio
La determinación de ion atómica del catión selenio por espectrofotometría de
absorción atómica, se realizó en el Laboratorio UBA, donde se empleó la
metodología descrita por la institución.
III.4.11. Espectrofotometría de absorción atómica para el ión zinc
Determinación de ion atómica del catión zinc por espectrofotometría de
absorción atómica, se realizó en el Laboratorio UBA, donde se empleó la
metodología descrita por la institución
34
Tabla VI Catión zinc
CATIO N Zinc
Zinc 0.188 – 3 mg/kg
Fuente: Jonh Suárez (2017)
III.4.12. Preparación y análisis del extracto vegetal
Colocar 5 g de muestra previamente humedecida con alcohol de 96º luego cubrir
con alcohol de la misma concentración. Taparlo para evitar la contaminación.
Obtener el percolado a las 24 y 48 horas. (28)
III.4.12.1. Elaboración de detergente líquido
Tabla VII Componente de detergente líquido
COMPONENTES UNIDADES
Comperland Kd
COCODIETANOLAMINA) 2 g
Texapón 70% (LAURIL ÉTER SULFATO
DE SODIO) 15 g
Agua des-ionizada 78.5 ml
Sal Industrial 1.5 g
Glicerina 2 ml
Concentrado de Sargassun
Ecuadorianum 1.5 ml
Fuente: Autor(es)
35
III.4.12.2. Procedimientos del detergente Líquido 100 ml
1. Se mezcló la mitad del Agua destilada con el Texapón (70%) en. Luego
se adicionó el Comperland KD en la mezcla del Texapón.
2. Se agregó la sal Industrial a la otra mitad de Agua destilada y se mezcló
hasta disolución completa.
3. Luego se incorporó la mezcla 2 en la 1ra mezcla hasta obtener una mezcla
homogénea.
4. Se colocó al principio activo1, 5 del Sargassum ecuadoreanum.
5. Se agregó la Glicerina para darle suavidad al jabón líquido.
6. Se dejó reposar unas horas hasta que el producto tome consistencia y la
espuma se reduzca.
III.4.13. Análisis físico -químicos de detergente líquido
Modo de Empleo
Aplique en manos húmedas o secas directamente y sin diluir.
Lave las manos total y profundamente
Enjuague con agua corriente
Seque
Propiedades Físico-químico
Aspecto Líquido Ligeramente Viscoso
Color Verde Oscuro
Olor Herbal
Temperatura: 50°C
PH (100%) 25°C RANGO 5-7
Densidad (25°C) g/cm3 0.90 – 1.10
Viscosidad (25°C) mPa.s. 10.000-15.000 UBA
36
CAPITULO IV
IV.1. Resultados
En este capítulo se detallará en tablas, los datos experimentales y los
resultados obtenidos en las diferentes pruebas realizadas en algas pardas
Sargassum ecuadorianum. Estos fueron.
IV.1.1. Determinación de los índices farmacognósticos de Sargassum ecuadorianum
Se detalla los resultados obtenidos de los ensayos físicos-químicos en las
algas pardas (Sargassum ecuadorianum). Estos fueron realizados en la facultad
de Ciencias Químicas en el Laboratorio de Productos naturales y Laboratorios
UBA.
IV.1.2. Determinación de metabolitos secundarios por tamizaje fitoquímico
La planta posee una gran diversidad de compuestos evidenciando un gran
potencial farmacológico, Estos componentes dieron una reacción positiva en los
extractos, dentro de los cuales tenemos alcaloides, cumarinas, saponinas,
glucósidos, glucósidos cardioticos, flavonoides, triterpenoides, esteroides,
mucilagos, antocianinas, taninos (Tabla VII).
IV.1.3. Determinación de los parámetros Físico- Químicos
A la especie se determinaron los parámetros fisicoquímicos: humedad
residual, cenizas totales, viscosidad, análisis catiónicos actividad antioxidante.
37
Tabla VIII Resultado tamizaje Fitoquímico
Extracto acuoso
Ensayo Metabolito Resultados Semicuantificación
Dragendorff Alcaloides Positivo +
Mayer Alcaloides negativo -
Bouchardat Alcaloides negativo -
Wagner Alcaloides Positivo +
Espuma saponina positivo ++
Na(OH) al 10%
Cumarina positivo +
Extracto alcohólico
Ensayo Metabolito Resultados Semicuantificación
Lieberman burchard
Triterpenoides Positivo +++
Lieberman burchard esteroides Positivo ++
Mucilagos Positivo ++
Hidróxido de potasio al 5% Borntrager Negativo -
antocianinas positivo ++
Cloruro férrico al 5% Taninos Positivo +
Aceites esenciales
Positivo +
Shinoda Flavonoides Positivo +
Fehling Glucósidos Positivo ++
Benedict Glucósidos cardiotónicos
positivo +
Fuente: Autor(es)
38
IV.1.4. Humedad
Tabla IX Resultados de análisis de humedad
PLANTA UNIDADES RESULTADOS
Sargassum ecuadoreanum
% 6.60
Fuente: autor(es)
En la muestra triturada y pulverizada, el contenido de humedad fue 6.62%
(tabla VIII).La humedad nos permite conocer la estabilidad de la materia prima,
Si existe un exceso de agua en una droga esto puede provocar crecimiento
bacteriano, la presencia de hongos o insectos y el deterioro, seguido de la
hidrólisis de los principios activos.
IV.1.5. Cenizas
Tabla X Resultados de análisis de cenizas
PLANTA UNIDADES RESULTADOS
Sargassum ecuadoreanum
% 51.0
Fuente: Autor(es)
En la muestra pulverizada y seca el contenido de cenizas totales fue de 51%
(tabla IX). Las cenizas totales nos indican el contenido de sales minerales en la
planta. Es importante porque la materia mineral puede ser valiosa en las
actividades metabólicas del consumidor
39
IV.1.6. Actividad Antioxidante
Se realizó el análisis de esta planta, en muestra pulverizada siguiendo la
metodología DPPH que se encuentra en él Se muestra en la tabla IV. Los
antioxidantes son sustancias que pueden impedir, retrasar o inhibir las
oxidaciones catalíticas y los procesos que inducen a la formación de radicales
libres.
IV.1.7. Espectrofotometría atómica del ion selenio
Tabla XI Resultado selenio proporcionado por el laboratorio UBA.
Planta Unidades Resultados
Sargassum
ecuadoreanum <0.1 mg/kg
Fuente: Laboratorio UBA (2019)
IV.1.8. Espectrofotometría atómica del ion zinc
Tabla XII Resultado del ion zinc proporcionado por el
laboratorio UBA
Planta Resultados Unidades
Sargassum
ecuadoreanum 2.60 mg/kg
Fuente: Laboratorio UBA (2019)
40
IV.1.9. Descripción de Propiedades Organolépticas del Jabón Líquido
Tabla XIII Observación de diferentes condiciones organolépticas
Propiedades Organolépticas
Aspecto Liquido
Ligeramente
viscoso
Color Verde oscuro
Olor Herbal
Fuente: autor(es)
Se encontró que los parámetros organolépticos del jabón líquido no tienen
estándares de referencia que sirva para comparación se observa que los
carácter organolépticos tienen valor propio y características dependientes de
cada especie analizada.
Tabla XIV Propiedades físicas y químicas del detergente líquido
PROPIEDADES FÍSICAS VALOR DE LA MEDICIÓN
pH 7,30
Densidad 26 °C 1,03
Peso Especifico 0.998
PROPIEDADES QUÍMICAS
Viscosidad 990 mPa.S
Fuente: Laboratorio UBA (2019)
41
Los valores determinados en el estudio del jabón líquido Sargassum
ecuadoreanum están acorde a las especificaciones de la metodología OMS, con
un valor de pH 7.30. Este valor está cercano a otros productos en el mercado
para limpieza cutánea que tiene pH 7.40.
IV.1.10 Presentación de diferentes condiciones que se mantuvo al
detergente liquido
Tabla XV Resultado de estudio preliminar de estabilidad del detergente líquido.
PROPIEDADES ORGANOLÉPTICAS
ESTUFA A 50 °C
Propiedad Días 0 Día 15 Día 30
Aspecto
Liquido
ligeramente
viscoso
Liquido
ligeramente
viscoso
Liquido
ligeramente
viscoso
Color Verde
oscuro
Verde
oscuro
Verde
oscuro
Olor Herbal Herbal Herbal
PROPIEDADES
FISICOQUÍMICAS Densidad 1.03 1.035 1.040
pH 6.90 6.90 6.90
Viscosidad 990 992 992
Fuente: Autores
Las preparaciones de detergente líquido fueron sometidas a almacenamiento
a 50 grados centígrados para simular condiciones externas y evaluar cualquier
efecto negativo sobre el producto. Las propiedades fisicoquímicas (densidad,
pH, viscosidad permanecieron en condiciones) valores similares por los 30 días
que duró el ensayo a 50 grados centígrados (Tabla XIV)
42
IV.2. Discusión
Nuestras observaciones concluimos que nuestra especie algas pardas Sargassum ecuadoreanum contiene un alto contenido de zinc a nuestros conocimientos este es el primer reporte indicando la presencia de zinc en este tipo de algas referencial.
Así mismo en cuanto a la fuente de compuestos con actividad antioxidante del alga parda Sargassum ecuadoreanum se logró identificar que las algas poseen una cantidad en mayor cantidad que las algas marinas Bryothamnion triquetrum y Halimeda opuntia. (29)
Con respecto a la presencia de selenio en las algas rojas al catión selenio las algas Phaeophyta las más conocidas en nuestro país son Macrocystis pyrifera (huiro), Lessonia nigrescens (huiro negro), Durvillaea antarctica (cochayuyo). Las algas rojas o Rhodophyta que son el segundo grupo más grande de algas y son las más primitivas correspondiente a un grupo muy grande de algas marinas contienen una cantidad superior de selenio en comparación con la algas Sargassum ecuadoreanum (30)
Finalmente en cuanto al porcentaje de humedad de algas pardas sargassum spp se conoce que posee 11.17 ± 0.08 g/100g, en cuanto al zinc, esta especie de alga se mantiene con 0.98 ± 0.04. (31) Por otra parte, con respecto al desarrollo del presente trabajo investigativo, el alga Sargassum ecuadoreanum posee 51.0% de humedad, mientras que en zinc posee 2.60 mg/Kg. (30)
43
CONCLUSIONES
Se identificó la clasificación taxonómica del alga, determinando que
corresponde a Sargassum ecuadoreanum, a la especie Sargassum
ecuadoreanum W.R Taylor, mismo que fue certificado por el Instituto de
investigaciones de recursos naturales (IIRN) de la facultad de Ciencias
naturales.
Con el desarrollo del proceso de investigación, en cuanto a los
resultados obtenidos, se determina que las algas pardas tienen una
cantidad significativa de antioxidantes que puede ser de gran uso para la
industria cosmética, siendo ricas en metabolitos segundarios, dado a que
según los estudios aplicados en las algas Sargassum ecuadoreanum, se
evidenció saponina, Cumarina, triterpenoides, esteroides, mucílagos,
antocianinas, taninos, aceites esenciales, flavonoides, glucósidos,
glucósidos cardiotónicos.
Con la aplicación de la metodología DPPH, para determinar
antioxidantes, se encontró que las algas poseen una cantidad de 347.22
g/100mg, mostrándose establecida dentro de los rangos.
De acuerdo con los resultados obtenidos, según con el estudio del
selenio y el zinc, se logró evidenciar su existencia en las algas pardas
Sargassum ecuadoreanum, dando como resultado que el Selenio es
encontrado en menor cantidad de <0.1 mg/Kg, mientras que el Zinc es
encontrado con 2.60 mg/Kg.
Con respecto al análisis del detergente líquido, durante tres
sesiones, se determinó que el mismo se encuentra dentro de los rangos
establecidos en cuanto a sus parámetros, tales como propiedad, aspecto,
44
color, olor, densidad, pH y viscosidad, ya que en dichas sesiones no se
presentaron variaciones que pudieran alterar la elaboración del mismo.
RECOMENDACIONES
Se recomienda realizar estudios de estabilidad a largo plazo al
detergente líquido a base de algas pardas Sargassum ecuadoreanum.
Efectuar estudios sobre las acciones farmacológicas que poseen
las algas pardas Sargassum ecuadoreanum de esta manera se probará
conocer el comportamiento y el beneficio de la salud en las personas.
Desarrollar los estudios microbianos al detergente líquido para
transformarlo en un detergente líquido Antibacterial ya que en nuestro país
no son utilizadas para ningún fin y se estarían desperdiciando sus demás
propiedades.
Continuar con los análisis de metales pesados para una
investigación más completa.
45
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ingrediente funcional. Rev Chil Nutr. 2012 Diciembre; 39(196-202).
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47
VOCABULARIO
Alcaloides.- Los alcaloides son sustancias orgánicas nitrogenadas con propiedades básicas, de origen vegetal en su mayoría y acción fisiológica enérgica
Alginatos.- Es un polisacárido aniónico presente ampliamente en las paredes celulares de las algas marinas pardas. También es producido por algunas especies bacterianas.
Cumarinas.- Las cumarinas constituyen una clase de metabolitos secundarios, ampliamente distribuidos en el reino vegetal, pudiendo también ser encontrados en hongos y bacterias.
Esporófitas.- Es la fase más larga y conspicua de estos organismos y generalmente es perenne, cuando las condiciones ambientales le son favorables; esta fase es vital porque se producen numerosos esporangios que nacen en las hojas o en apéndices modificados de las mismas
Flavonoides.- Están ampliamente distribuidos en las plantas y funcionan como pigmentos, moléculas señalizadores y defensores frente a infecciones y lesiones.
Compuesto bioactivos.- Tipo de sustancia química que se encuentra en pequeñas cantidades en las plantas y ciertos alimentos (como frutas, verduras, nueces, aceites y granos integrales).
Saponinas.- Las saponinas pertenecen al grupo de fitoquímico, una de
las numerosas estructuras que se descubren en las fuentes vegetales. Estas sustancias presentan una serie de características, tales como no ser nutritivas, además de ofrecer protección frente a agentes externos
Taninos.- Los taninos son compuestos fenólicos que poseen propiedades astringentes y antiinflamatorias, por lo tanto, son muy útiles ante diarrea
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o gastroenteritis. Además, tienen acción antioxidante que protegen a las células ante los radicales libres y permiten reducir el riesgo de enfermedades degenerativas.
Triterpenos.- Este grupo de principios activos está constituido por numerosos compuestos, estructuralmente muy similares, derivados mayoritariamente del epoxiescualeno
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ANEXOS
Anexo A. pesado del Sargassun ecuadorianum fresco
Anexo B. trituración de la muestra desecada
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Anexo C. Pesado de la muestra pulverizada
Anexo D. Extracto Preparación de alcohólico
51
Anexo D2. Filtración del extracto alcohólico
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Anexo E. Reactivos De Tamizaje Fitoquímico
Anexo F. Extracto acuoso con reactivo:
1. Dragendorff 2. Mayer 3. Bouchardat 4. Wagner
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Anexo G. Ensayos de Aceites esenciales
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Anexo H. Antocianinas
Anexo I. Pesado para cenizas
55
Anexo I2. PREPARACION PARA CENIZAS
Anexo J. Cenizas totale
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Anexo: Taxonomía De La Alga Parda sargassum ecuadoreanum
57
Anexo K. actividad antioxidante DPHH
58
Anexo L. Catión selenio
59
Anexo M. Catión zinc
60
Anexo N. Materiales para el detergente liquido
Anexo N1. Preparación de Extracto De Sargassum ecuadoreanum
Anexo N2. Mezcla de Texapón con agua destilada
61
Anexo N3. Mezcla de Comperlan y detergente liquido
Anexo N4. Detergente liquido final
62
Aneo P Viscosidad Del Jabón Líquido