Taller de biotecnología

COMPROBACIÓN DE MATERNIDADHemos realizado un taller sobre el ADN.

La primera parte consistía en hacer unas pruebas con el ADN de 3 personas (2 madres y un hijo) para averiguar cual de ellas era la madre biológica del hijo.. Sobre la mesa había

unos botes que contenían el ADN de los sujetos.

o Bote M1: ADN Madre 1.o Bote M2: ADN Madre 2.o Bote H: ADN Hijo.o Bote ADN +.o Bote ADN – .o Gel .o Pinzas.o 5 trozos de papel.o Papel para limpiar las pinzas.

MATERIAL

Primero abrimos la bolsa que contenía un gel con forma cuadrada bañado en un liquido limpiador.

Colocamos el gel sobre un plástico que tenia unos pocillos en los que mas tarde introduciríamos los pequeños trozos de papel impregnados en ADN de cada sujeto.

Después de eso comenzamos por el bote M1. Para ello cogimos con las pinzas uno de los papeles y lo introdujimos dentro del bote durante 8 segundos hasta que se impregnó de liquido azul (ADN) y cuando estuvo lo suficiente oscuro lo introdujimos en el segundo pocillo. Repetimos la misma acción con los demás botes (M2,H,ADN+,ADN- ) en sus respectivos pocillos. Entre medias de cada muestra había que limpiar las pinzas con el liquido limpiador y las secábamos.

PROCEDIMIENTO

A continuación llevamos los cuadraditos de gel para hacerles electroforesis en agar:

Se colocaron los cuadraditos en la maquina de una manera determinada y mirando los pocillos al ion negativo. Se rellenó el hueco sobrante con un liquido transparente.

Después se conectó a la corriente eléctrica (100 V durante 30 minutos ).

Mientras esperábamos que acabara la electroforesis en agar realizamos la experiencia de AISLAR EL ADN DE UNA BACTERIA.

• Tubos L1 y L2.•Tubo E (Conteniendo la bacteria).• Tubo de seguridad (Conteniendo el tubo A).• Pipetas A, L1 y L2.

MATERIAL

Abrimos el tubo de seguridad y sacamos el tubo A[1] y a su vez abrimos el tubo E[2]. Con la pipeta A cogimos el líquido del tubo A, y con cuidado de que no salpicase lo introdujimos en el bote E [3][4], y bien cerrado lo removimos. Dándole unos suaves toques con los dedos [5] se formó una espumilla [6] .

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3

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METODOLOGÍA

Después usamos los botes L1 y L2 que contenían reactivos : L1 servía para romper la pared celular y después con L2 servía para romper la membrana celular y dejar suelto el ADN de la bacteria.

Con la pipeta L1 cogimos el liquido del tubo L1 y lo echamos en el tubo E y se volvió a remover con los dedos .

Toda la mezcla del tubo E se metió en un barril termostático a 37ºC durante 20 minutos para un baño termostático.

Cuando la electroforesis en agar acabó[1] se usó bromuro para teñir el ADN y mas tarde verlo con una luz ultravioleta.

El bote que contenía el bromuro estaba en un papel de plata[2] porque tiene que estar a oscuras ya que si no pierde sus propiedades[3]. Después de introducidas en el bromuro las muestras hay que dejarlas de15 a 20 minutos a las oscuridad.[4]. El aparato tiene un campo eléctrico y el ADN que introducimos en los pocillos, corre por el gel y se ve. Al tener el ADN carga negativa corre hacia el positivo y el positivo hacia el negativo. [5]

12 3

4 5

Por último se colocaron todos los geles sobre un aparato de rayos ultravioletas, para comprobar quien era la madre, con los rayos ultravioleta podíamos ver las secuencias de ADN de cada individuo.

Observándolo comprobamos que !la madre biológica era la

numero 2!

Pasamos de nuevo a acabar la práctica 2ª, cuando el baño termostático había acabado abrimos el bote E y con la pipeta L2 cogimos el liquido del tubo L2 y lo echamos en el tubo E, para finalizar lo agitamos con los dedos.

Lo volvimos a poner en el baño termostático a 60ºC durante dos minutos para que se rompiera la membrana y dejara libre el ADN. El alcohol, recién sacado del congelador, se vertió con cuidado en el bote E por las paredes y se comenzó a formar una mucosa:

!el ADN!