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2012
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA
FACULTAD DE INGENIERÍA
E.A.P. INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL
Actividades Bioquímicas de los Microorganismos.
Metabolismo General
CURSO: Laboratorio deMicrobiología.
DOCENTE: Blgo. Mblgo. Carlos Azañero Díaz
GRUPO: “C”
ALUMNA: Aburto Rodríguez Ruddy
2 Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General
I. INTRODUCCIÓN:
La identificación de un aislamiento bacteriano puede realizarse
utilizando diferentes combinaciones de características y diferentes
criterios en la evaluación de similitudes.
Los ensayos bioquímicos tradicionalmente utilizados, llamadas pruebas
bioquímicas convencionales, generalmente determinan la actividad de
una vía metabólica (conjunto de reacciones químicas) a partir de un
sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al
crecer transforma o no.
Existen diferentes sistemas que facilitan la realización de tales ensayos,
porque proponen el mejor conjunto de pruebas bioquímicas para la
identificación de un grupo bacteriano, porque simplifican la
interpretación de un resultado utilizando un valor numérico, porque
proveen los reactivos prontos para su uso o porque son totalmente
automatizables.
Las pruebas o ensayos bioquímicos, son pruebas simples que se han
desarrollado para demostrar en forma clara una determinada
característica bioquímica como presencia o ausencia de una determinada
actividad enzimática, grupo de enzimas o determinada vía metabólica,
crecimiento a una determinada temperatura, crecimiento en presencia de
inhibidores, etc. No significan de ninguna manera un estudio profundo
del metabolismo bacteriano.
II. OBJETIVO:
Demostrar e interpretar la acción degradativa de un microorganismo
sobre un determinado sustrato contenido en un medio de cultivo
específico.
3 Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General
•Se divide la placa petri en tres sectores. Con el asa de siembra en punta coger el cultivo puro bacteriano 1.
•Colocar en el centro de la placa un punto del cultivo, así también para el 2 y 3.
•Rotular e incubara 37ºC por 10 horas.
III. MATERIALES:
Para la práctica de laboratorio con respecto al Metabolismo General
utilizamos los siguientes materiales:
Material biológico:
Cultivo puros bacterianos de:
1. Bacillus subtilis
2. Escherichia coli
3. Proteus vulgaris
4. Pseudomonas fluorescentes
5. Saccharomyces cerevisiae
Placas Petri con agar almidón
Tubos de ensayo con caldo glucosa rojo fenol incluida una
campana de Durham
Tubos de ensayo con agar gelatina
Tubos de ensayo con caldo de urea
Placas Petri con agra tributirina
Material del laboratorio:
Asa bacteriológica calibrada
Asa bacteriológica en punta
Mechero de alcohol
IV. METODOLOGÍA:
DEGRADACIÓN DEL ALMIDÓN
5.1 Hidrolisis del almidón:
4 Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General
•Sembrar por suspensión el cultivo bacteriano 1 en un tubo con caldo de glucosa.
•Sembrar de la misma forma anteriormente descrita al tubo 2 y 4.
•Rotular e incubara 37ºC por 10 horas. Observar los tubos en cuanto al cambio de color y formación de gases.
•Sembrar por picadura profunda en tubos con agar gelatina los cultivos puros bactrianos 2 y 3.
•Rotular e incubara 37ºC por 10 horas.
•Despues de la incubación colocar ambos tubos a refrigeración por 2horas.
•Sembrar por estria en superficie en tubos con agar uera inclinando los tubos 2, 3 y 4.
•Rotular e incubara 37ºC por 10 horas.
•Observar la formación o no de un color rojo cereza
•Se divide la placa en tres sectores. Con el asa de siembra en punta coger el cultivo puro bacteriano 2.
•Colocar en el centro de la placa un punto del cultivo, así también para el 3 y 5.
•Rotular e incubara 37ºC por 10 horas.
5.2 Fermentación de la glucosa:
DEGRADACIÓN DE SUSTANCIAS NITROGENADAS
5.3Licuefacción de la gelatina:
5.4 Hidrólisis de la urea:
DEGRADACIÓN DE SUSTANCIAS LIPIDICAS 5.5 Hidrólisis de los lípidos:
5 Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General
V. RESULTADOS:
6.1 Hidrolisis del almidón:
6.2 Fermentación delaglucosa:
Microorganismos Glucosa
Acido Acido/gas
Bacillus subtilis no
Escherichia coli si
Proteus vulgaris si
1
2
3
6.2 Fermentación de glucosa:
Tubo 1: viró a color naranja
Tubo 2: viró a color amarillo oscuro
Tubo 3: viró a color amarillo
6 Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General
6.3 Licuefacción de Gelatina e Hidrólisis de Urea:
6.4 Hidrólisis de la Tributirina:
VI. DISCUSIÓN:
Según Alfred Jörgensen - Fermentación Industrial:
Los polisacáridos, como el almidón son demasiado largos para ser
transportados al interior de la célula. Los microorganismos excretan
Microorganismos Gelatina Ureasa
Escherichia coli Negativo Negativo
Proteus vulgaris --- Positivo
Pseudomonas
fluorescentes Positivo Negativo
6.3 Licuación de la gelatina:
Tubo 2: viró a color blanco
Tubo 4: viró a color verde lechoso
6.4 Hidrólisis de la urea:
Tubo 2: viró a color naranja
Tubo 3: viró a color rojo
Tubo 4: viró a color naranja intenso
6.3 Licuación de la gelatina:
Tubo 2: viró a color blanco
Tubo 4: viró a color verde lechoso
6.4 Hidrólisis de la urea:
Tubo 2: viró a color naranja
Tubo 3: viró a color rojo
Tubo 4: viró a color naranja intenso
6.5 Hidrólisis de tributirina:
Sector 2: el cultivo creció
Sector 4: el cultivo creció
Sector 5: comió todo lo que encontró a su alrrededor
. Cultivo 2: Escherichia coli
Crecimiento del cultivo
. Cultivo 4: Psudomonas fluorescentes
Comió todo lo que se encontróalrrededor suyo.
. Cultivo 5: Staphylococcus aureus
Crecimiento del cultivo
2
4 5
7 Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General
amilasas que hidrolizan esos polímeros hasta oligosacáridos o
monosacáridos que pueden usarse como sustratos para crecer.
Las colonias de bacterias que atacaron el almidón estánrodeadas por
una zona incolora que fue el resultado obtenido en el laboratorio.
Ambos resultados están relacionados. En la hidrolisis de almidón, se
inocularon con la placa con Agar y almidón al microorganismo, estos
fueron (1) Escherichia coli, (2) Bacillus subtilis y (3) Proteus vulgaris; la
observación fue que el (2) Bacillus subtilis fue resistente al colorante y
pudo hidrolizar al almidón formándose un halo transparente
alrededor del almidón. La solución de lugol se le agrega para observar
la reacción de los microorganismos y la capacidad que estos
microorganismos tienen para producir una enzima que hidrolice al
almidón.
http://es.scribd_doc/actividad_microbiana.com
La urea es un compuesto orgánico nitrogenado que se transforma por
algunos microorganismos del suelo, los cuales producen la enzima
ureasa. Como resultado de esta actividad microbiana el nitrógeno es
liberado al suelo en forma inorgánica. Cuando esta reacción ocurre en
medio de cultivo se alcaliniza y el indicador permite percibir
visualmente el cambio en acidez del medio. En la prueba de la
hidrolisis de urea utilizamos tres cultivos puros (2)Escherichia coli,
(3)Proteus vulgarisy(4)Pseudomonas fluorescentescon urea y rojo fenol
como indicador. La liberación de amonio eleva el pH, intenso color
rojo lo cual sólo se observó en la muestra (3).
http://es.scribd_doc/actividad_microbiana.com
La gelatina es una proteína que se obtiene por hidrólisis parcial del
colágeno y proporciona un sustrato útil para determinar la acción de
las enzimas proteolíticas de los microorganismos.La hidrólisis de la
proteína es importante porque se obtienen aminoácidos y producen
amoníaco, fosfatos útiles para el suelo. En la licuación de gelatina, se
inocularon dos tubos de microorganismos, (2)Escherichiacoli y
(4)Pseudomonas fluorescentes, el tubo que contenía la siembra de E. Coli
no hidrolizó, el gel se mantuvo gelificado. El que contenía la siembra
dePseudomonas fluorescentes, si hidrolizó, dio positivo, la licuefacción se
dio a la perfección.
La urea (H2N – CO – NH2) se escinde en 2NH3 + CO2
Proteína + H2O polipéptidos + H2O aminoácidos
8 Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General
VII. CONCLUSIÓN:
La liberación de amonio (compuesto de la urea), eleva el pH, intenso
color rojo rosado.
El agar nutriente al cual se ha añadido almidón como única fuente de
carbohidratos, formando una especie de nutriente para
microorganismo.
Muchas bacterias liberan exoenzimas que hidrolizan la gelatina, si uno
de estos organismos se inocula en un tubo de gelatina nutritiva, la
gelatina cercana a las bacterias serán hidrolificadas y pasarán del
estado coloidal al estado cristaloide (aminoácido).
La fermentación se refiere a la degradación anaeróbica del
carbohidrato y que almacena gran cantidad de energía, esta capacidad
desprende a las enzimas de microorganismos.
VIII. CUESTIONARIO:
1. Mencione cual es la razón de añadir indicadores ácido base a algunos medios de cultivo. Ejemplos:
El ácido reacciona con la glucosa a mayor concentración de glucosa
en un medio de cultivo se verán con mayor facilidad los resultados.
El Escherichia colitiene la capacidad para crecer en un medio simple
definido pues su capacidad para crecer en un medio simple
definido significa que es capaz de sintetizar todos los componentes
celulares a partir de una única fuente de carbono, en este caso la
glucosa.
Ejemplo:
Medio definido para Escherichia coli (glucosa 4-10gr)
Medio definido para Leuconostoc mesenteroides (glucosa 25 gr)
Medio de cultivos para Escherichia coli y L. mesenteroides
(glucosa 15 gr)
9 Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General
2. Mencione las diferencias formas de siembra realizadas en cada uno de los procedimientos y en que se diferencian
IX. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:
Broock–Biología de los Microorganismos, 10 décima edición, página
162, capitulo 6 -Crecimiento Microbiano.
Tecnica de siembra Descripción
Tecnica por puntura
Fue utilizada para realizar:
Hidrolisis de almidón; la cual fue coloreada al final.
Hidrólisis de la tributirina, en esta se observó su crecimiento microbiano.
Tecnica por suspensión
Fue utilizada para realizar:
Fermentación de la glucosa; la cual solo se observó la variación de color.
Técnica por picadura profunda:
Fue utilizada para realizar:
Licuación de la gelatina; donde se introdujo una asada con el cultivo hasta el fondo del tubo de ensayo.
Técnica estria masiva
Fue utilizada para realizar:
Hidrólisis de la urea; la cual se realizó una estria en la superficie del calvo urea.
10 Actividades Bioquímicas de los Microorganismos. Metabolismo General
Broock, Biología de los Microorganismos, 8 Ed, Prentice-Hall, 1999
Wolin, m. tratado de microbiología, 20ed, editorial interamericana,
México (1973) p.p. 901
http://www.doschivos.com/display.asp?id=45&f=13547
http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/morfologiayestructurabact
eriana.pdf
http://imb.usal.es/practicas2/p2/practicas2.pdf
