Biopsia Líquida: Experiencia del Hospital Clínico ...basesbiologicascancer.com/wp-content/uploads/2017/03/3_Rebeca_Biopsia... · BIOPSIA LÍQUIDA: CÁNCER DE MAMA 1. VALIDACIÓN

Biopsia Líquida: Experiencia del Hospital Clínico Universitario de Salamanca

Rebeca Lozano Mejorada Hospital Clínico Universitario de Salamanca

CNIO-IBIMA Genitourinary Cancer Clinical Research Unit

BIOPSIA LÍQUIDA

BIOPSIA LÍQUIDA

• Único sistema aprobado por FDA CellSearch® Circulating Tumor

Cell System (VERIDEX)

Sensibilidad y

Especificidad Principio Volumen SP FDA Técnica

Alta Células epiteliales 7,5 mL SI Veridex

Alta S, Baja E RNA 5-10 mL NO RT-PCR

Buena S, baja E Tamaño celular 10 mL NO ISET

Alta, en investigación Células epiteliales 7,5 mL NO Microchip

Alta, en investigación Tamaño celular 7,5 mL NO Microfiltros

Alta Células epiteliales 100 µL NO Citometría de flujo

Caracterización molecular

BIOPSIA LÍQUIDA: CÁNCER DE MAMA

NUESTRO MÉTODO…

Aislamiento y caracterización genómica mediante

técnicas de citogenética molecular

(sistema automatizado MetaFer-MetaCyte)

Nos permite seleccionar células por tamaño y

alteraciones citogenéticas.

2011


- 80ºC

Extracción de SP y separación por gradiente de densidad (Ficoll).



Primera fase:

Contaje celular + detección de células genéticamente alteradas

> 7 μm



Primera fase:

Contaje celular + detección de células genéticamente alteradas

PTENCEP 10



Primera fase:

Contaje celular + detección de células genéticamente alteradas.

Segunda fase:

Extracción DNA en plasma.


1. VALIDACIÓN METODOLÓGICA DE LA TÉCNICA



• 30 pacientes con Cáncer de Mama Estadio IV

Alteraciones en PTEN en CTCs

mediante FISH

Alteraciones en el exon 20 de

PIK3CA en plasma mediante

HRM

Cizkova M, et al. Breast Cancer Research 2012.

15 controles

Edad, años Media Mediana Rango

61 61 43-77

Histología, N (%) CDI CLI Otros

24 (80) 4 (13.3) 2 (6.7)

Receptores de estrógenos, N (%) Positivos Negativos Desconocido

20 (66.7) 10 (33.3) 0 (0)

Receptores de progesterona, N (%) Positivos Negativos Desconocido

16 (53.3) 12 (40) 2 (6.7)

HER2, N (%) Positivo Negativo Desconocido

4 (13.3) 22 (73.4) 4 (13.3)

Metástasis. N (%) Viscerales No viscerales (gg, óseas)

18 (60) 12 (40)

Líneas de tratamiento previas, N (%) 2 3 ≥ 4

6 (20) 8 (26.7) 16 (53.3)

Tratamiento actual, N (%) Quimioterapia Hormonoterapia Terapias biológicas

19 (63.3) 9 (30) 2 (6.7)




• De las 30 pacientes analizadas

3 pacientes: No células > 7 μm.

27 pacientes: Células > 7 μm.

90%

10%

44%

56%

37%

63%

PIK3CA PTEN






90%

10%






90%

10%

PIK3CA Mut PIK3CA wt TOTAL

PTEN Del 5 (18,5%) 7 (26%) 12 (44,5%)

PTEN wt 5 (18,5%) 10 (37%) 15 (55,5%)

TOTAL 10 (37%) 17 (63%) 27 (100%)

62,9 %


N (%) PTEN Del N (%) PTEN Norm P (Χ2)

Histología CDI CLI Otros

8 (26.7) 3 (10) 1 (3.3)

16 (53.7) 1 (3.3) 1 (3.3)

NS

Receptores hormonales RE- RE+ RP- RP+ Desconocido

3 (10) 9 (30) 1 (3.3) 9 (30) 2 (6.7)

7 (23.3) 11 (36.7) 11 (36.7) 7 (23.3) 0 (0)

NS NS

Estado HER2 HER2- HER2+ Desconocido

9 (30) 1 (3.3) 2 (6.7)

15 (50) 1 (3.3) 2 (6.7)

NS

Metástasis Viscerales No viscerales

12 (40) 0 (0)

6 (20) 12 (40)

*0.000

Líneas de tratamiento 2 3 ≥ 4

2 (6.7) 1 (3.3) 9 (30)

18 (60) 7 (23.3) 7 (23.3)

NS


• Distribución según subtipo intrínseco (subrogado)

0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

PIK3CA PTEN

Luminal

HER2

TN

Desconocido

5 casos con asociación entre

deleción de PTEN y mutación LUMINAL de PIK3CA

Cizkova M, et al. Breast Cancer Research 2012 Jones N, et al IJC, 2012

Kalinsky K, et al. Clin Cancer Res 2009


2. VALIDACIÓN CLÍNICA DE LA TÉCNICA

Total pacientes: 76

Pacientes evaluables: 70

Pacientes excluidas: 6

Muestra no valorable

Pacientes con Cáncer de Mama Localizado (Estadios I-III)

BIOPSIA LÍQUIDA: CÁNCER DE PRÓSTATA

• AR-V7

A NOVEL CAPILLARY NANO-IMMUNOASSAY FOR ASSESSING ANDROGEN RECEPTOR SPLICE VARIANT 7 IN PLASMA. CORRELATION WITH CD133 ANTIGEN EXPRESSION IN CIRCULATING TUMOUR CELLS. A PILOT STUDY IN PROSTATE

CANCER PATIENTS.

García J.L, Cruz J.J, et al. Clin Trans Oncol 2017. In Press Antonorakis ES, et al. N Engl J Med 2014


• CD 133

Guzel E, et al. Cancer Res Frontiers 2015 Reyes EE, et al. J Transl Sci 2015

Pal SK, et al. Clin Genitourin Cancer 2015


• AR and PTEN

Claessens et al, Nat Rev Urol 2014

Dehm SM, Endoc Related Cancer 2011

Ferraldeschi R, Eur Urol 2015


• N: 72 Prostate Cancer patients

FACS


CANCER PATIENTS.

Localized PCa

Metastatic PCa (CRPC, Castration-näive)

CD45- CD34-

García J.L, Cruz J.J, et al. Clin Trans Oncol 2017. In Press

CD133+

FISH

AR

PTEN


• AR-V7


CANCER PATIENTS.


1. Cell lines

VCaP (Positive control)

PC3 (Negative control)


• AR-V7


CANCER PATIENTS.


1. Cell lines

2. Healthy donors

3. PCa patients

VCaP (Positive control)

PC3 (Negative control)


AR-V7 –

N:51 (%)

AR-V7 +

N:21 (%)

TOTAL

N:72 (%)

p-values

GLEASON SCORE

GS ≤ 6 8 (16) 2 (9,5) 10 (14)

GS 7 12 (23) 8 (38) 20 (28) NS

GS ≥ 8 29 (57) 9 (43) 38 (53)

Not available 2 (3,9) 2 (9,5) 4 (5,5)

CRPC

Yes 30 (59) 15 (71) 45 (62) NS

No 21 (41) 6 (29) 27 (37)

M1

Yes 38 (74) 18 (86) 56 (78) NS

No 13 (25) 3 (14) 16 (22)

Localization

Bone Only 20 (53) 6 (33) 26 (46) NS

Lymph node only 3 (7,9) 1 (5,6) 4 (7,1)

Bone and LN 10 (26) 6 (33) 16 (29)

Visceral 5 (13) 5 (28) 10 (18)

Treatment

Local 9 (18) 2 (9,5) 11 (15) NS

ADT 13 (25) 2 (9,5) 15 (21)

Abi/Enza 12 (24) 3 (14) 15 (21)

Chemotherapy 13 (25) 12 (57) 25 (35)

Corticosteroids 4 (7,8) 2 (9,5) 6 (8,3)

PSA (Median) 14,7

(0,04 – 3160)

672,50

(2,7 – 1349)

23

(0,04 – 3160)

p<0.05

CD133+ (Median) 3

(0 – 1922)

7

(1 – 81)

4

(0 – 1922)

NS

81% Gleason ≥ 7

71% CRPC

86% M1

Median PSA (672 Vs 14)

Median CD133+ (7 Vs 3)

AR-V7+ 29 %



• CD133+ 96% patients (69/72)

In half of patients (37/72 51%) ≥ 4 CD133+

• AR amplification 60 cases analyzed

≥ 4 CD133+ 30 AR amplification (81%)

• PTEN deletion 59 cases analyzed

≥ 4 CD133+ 27 PTEN deletion (72%)


CANCER PATIENTS.


BIOPSIA LÍQUIDA: CONCLUSIONES La detección y aislamiento de CTCs nos permite no sólo cuantificar, si no

también estudiar alteraciones genómicas específicas.

En CMM se ha realizado la validación metodológica de la técnica MetaFer-MetaCyte para la detección de CTCs por tamaño y alteraciones moleculares.

Análisis de alteraciones en dos genes implicados en la misma cascada de señalización, como son PTEN y PIK3CA.

Sus alteraciones pueden tener efectos aditivos o sinérgicos a través de las rutas funcionales no canónicas.

En cáncer de próstata se ha realizado la validación metodológica de una técnica novedosa y relativamente sencilla para la detección de AR-V7 en plasma.

Existe asociación entre el status de AR-V7 y la presencia de células CD133+, amplificación del AR y deleción de PTEN.

BIOPSIA LÍQUIDA

EXPERIENCIA:

“Conocimiento de algo, o habilidad para ello… que se adquiere al haberlo realizado, vivido, sentido o sufrido una o más veces.”

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