Un MEdio de Cultivo Ideal

BiologaIII Medio Electivo

BiologaIII Medio Electivo

Un MEdio de Cultivo IdealEsterilizado Perfecto

Objetivo:Este proyecto lo he realizado para poder lograr distintos objetivos. Uno de ellos y el principal es el determinar el procedimiento ms adecuado y efectivo al momento de crear un ambiente esterilizado para cultivar bacterias. Otros objetivos, por el cual he realizado este experimento son: lograr una manipulacin adecuada al momento de manejar objetos esterilizados. Tambin aprender a mantener un ambiente limpio para trabajar el medio de cultivo y experimentar distintos procedimientos para cultivar bacterias.

Introduccin:Lasbacteriasson microorganismos constituidos por una sola clula. Es seguro que nadie las ve, las huele o las siente pero estn escondidas en todos lados[footnoteRef:1]. [1: http://www.profesorenlinea.cl/Ciencias/BacteriasDesarrollo.htm]

En la cita anterior nos podemos dar cuenta de que las bacterias son clulas invisibles y peligrosas al mismo tiempo. Existen diferentes mtodos con los cuales podemos ver y darnos cuenta de qu bacterias son las que nos rodean. Uno de los mtodos es el cultivo de bacterias. Tenemos una variedad de medios de cultivo en donde las podemos cultivar. Una forma casera es hacer una mezcla entre caldo Maggie y gelatina, la cual no fue eficiente, ya que se contaminaba el medio de cultivo. Otros medios de cultivo se pueden hacer con reactivos qumicos como el medio Luria-Bertani (LB) o el medio Terrific Broth (TB). Adems de necesitar un medio de cultivo ideal, las bacterias necesitan caractersticas adecuadas para poder desarrollarse. Una de ellas es el ambiente, ya que las bacterias con cierta temperatura se desarrollan con mayor facilidad[footnoteRef:2]. [2: http://facultad.bayamon.inter.edu/yserrano/crecimiento%20microbiano.htm]

Existe una variedad de medios que sirven para el cultivo de bacterias, y por ese mismo motivo es que tuve que investigar y encontrar el ms adecuado para mi proyecto. El medio de cultivo que escog es el medio Luria-Bertani (LB), que segn lo investigado es una sustancia ideal para el cultivo de cepas de E.coli[footnoteRef:3]. [3: http://www.rubilabor.com/productos-y-servicios/categoria/promociones-y-ofertas/24/medio-de-cultivo-lb-luria-bertani/175/]

Las cepas de E.coli compone el 80 % de la flora intestinal, su funcin es de proteger a la flora intestinal de cualquier bacteria patgena (causante de enfermedades) y participa en la produccin de vitamina K. La gran mayora de las cepas E.coli son inofensivas pero estas cepas tambin tienen algunas que pueden ser patgenas, las cuales pueden causar enfermedades en el hombre tales como, gastroenteritis infantil, entero agregativas, enterotoxignicas, patgenas extra intestinales, entre otras[footnoteRef:4]. [4: http://salud.kioskea.net/faq/6720-e-coli-escherichia-coli-cepas-patogenas-sintomas-y-diagnostico]

Este tipo de patologas pueden ser transmitidas de muchas maneras tales como, la carne vacuna cruda o insuficientemente cocida, carne contaminada por contacto con materias fecales, frutas y verduras frescas lavadas con agua contaminada, zumos de fruta no pasteurizados, leche cruda y la ms comn y habitual es la de llevarse las manos sucias a la boca.Para realizar esta investigacin realic tres procedimientos con el objetivo de poder lograr un ambiente de cultivo esterilizado. Ocupando diversas estrategias para mantener el lugar de trabajo en perfectas condiciones: limpio y desinfectado.Este informe detalla, analiza y explica los procedimientos usados para lograr los objetivos planteados. El cmo y por qu se realizaron los cambios y distintos procedimientos para el logro de los objetivos.

Procedimiento Experimental:Para que este experimento fuese efectuado de manera correcta, consider: 3 La Capsulas de Petri Olla a presin Peptona trpsica de casena Extracto de levadura NaCl LB agar Alcohol Paraflin Papel craft Agua oxigenada Matraz Vaso de precipitadosLos pasos a seguir son: Para comenzar tuve que tomar ciertas precauciones. Como este proyecto est enfocado en un ambiente esterilizado, siempre hay que mantener un ambiente limpio y desinfectado. Para poder lograrlo necesite alcohol junto con la toalla nova para limpiar la mesa en donde manipul las cpsulas de Petri ya esterilizadas. Un detalle muy importante que tuve que tener en cuenta, es que en la mesa de trabajo tena que haber un mechero, el cul debe permanecer encendido en todo momento para evitar que se generen bacterias en el aire. Nunca olvid lavarme las manos y siempre tuve la precaucin de no contaminrmelas.

En una primera accin tuve que usar delantal blanco, mesa de trabajo limpia y desinfectada con alcohol y manos esterilizadas. Luego prosegu con la limpieza de las cpsulas de Petri. En primer lugar las limpi con agua y jabn para eliminar las mugres que podran tener. Luego, con la ayuda de un vaso precipitado con agua oxigenada, enjuague cada una de las placas, para as eliminar cualquier resto de suciedad. Cuando las cpsulas estaban limpias las puse en una bandeja con toalla nova y las dej secar. Cuando ya estaban secas las envolv todas juntas con papel craft y amarr este papel con scotch.

El tiempo es algo muy importante en este proyecto por ese mismo motivo tuve que aprovecharlo y organizarlo muy bien.

Mientras que las cpsulas se estaban secando, empec a trabajar en el medio de cultivo, para as ganar tiempo. La mezcla la realic en el matraz. Como en mi proyecto quiero hacer tres placas, necesit 200ml de la mezcla. Comenc pesando cada reactivo, para luego ponerlos en el matraz.Necesitamos: NaCl 2g Peptona trpsica de casena 2g Extracto de levadura 1g LB agar 3g

Cuando cada reactivo ya estaba pesado y depositado en el matraz, proced a colocar 200ml de agua oxigenada y revolv hasta que todo se haya disuelto. Para terminar tap el matraz con un pedazo de papel craft y lo asegur con lana.

Cuando tuve la mezcla y las cpsulas listas, las auto-clav. Primero coloqu agua en una olla, pero muy poca, slo la necesaria para generar suficiente vapor. En el interior de la olla coloqu un pote de plstico y sobre l puse las placas envueltas en papel, esta forma las placas no tocaron el agua pero recibieron el vapor del agua. Tambin puse el matraz sobre el pote con la mezcla. Esto lo dej por 20 minutos para que el auto- clavado fuese exitoso.

Llegu al momento ms importante, en donde no deba cometer ningn error. Cuando ya pasaron los 20 minutos, proced a sacar las capsulas y el medio de cultivo de la olla, teniendo siempre la precaucin de lo caliente que estaban todos los materiales. Muy importante fue que mis manos estuvieses siempre desinfectadas con alcohol. Prosegu sacando el papel craft que utilic para envolver las cpsulas y coloque cada cpsula junto con el medio de cultivo que estaba en el matraz sobre la mesa previamente desinfectada y con el mechero prendido. Esper a que todo se enfriara.

Cuando las cpsulas y el matraz estaban a una temperatura manipulable, comenc a colocar el medio de cultivo al interior de las cpsulas, directamente del matraz. Luego las tap dejando un pequeo espacio con el objetivo que saliera el vapor generado por la mezcla. Dej que las sustancias se solidificaran en ese mismo lugar.

Cuando el medio de cultivo ya estaba solidificado, cerr totalmente las placas. Luego us parafix para sellar las placas. Cort tres pedazos de parafix y procede a cerrar las cpsulas. Siempre tuve en cuenta tener mis bellas manos desinfectadas.

Una vez que las placas estaban listas, las coloqu en una incubadora a una temperatura de 20 grado. Esta es la temperatura ideal para el desarrollo de bacterias.

Esper 24 horas para observar las placas y ver los resultados.

Registro de Datos:Procedimiento Nro. 1: -Temperatura ambiental: 20 grados aprox.CpsulasDa 1TemperaturaAmbientalDa 2TemperaturaAmbientalDa 3

Control 1Se pueden ver pequeas manchas blancas que son bacterias, por la mitad y el contornoYa no son pequeas manchas blancas sino que ya crecieron y han salido hongos.Limpio las placas eliminando el medio de cultivo, inicio un nuevo procedimiento

Infectada 1Se ven muchas manchas blancas (bacterias) y tambin hongos.Adems de seguir viendo las manchas blancas han aparecido manchas rojas y hongosLimpio las placas eliminando el medio de cultivo, inicio un nuevo procedimiento

Infectada 2Al igual que la infectada uno se ven manchas blancas y hongos.Se ven los mismos cambios que en la infectada uno, manchas blancas, hongos y manchas rojas.Limpio las placas eliminando el medio de cultivo, inicio un nuevo procedimiento

Observacin:Comenc mi experimento con el objetivo de comparar placas infectadas y placas totalmente esterilizadas, lo que no result y me llev a reenfocar mi proyecto, con el objetivo de lograr una esterilizacin perfecta.

Procedimiento Nro. 2: -Temperatura Ambiental: 10 grados aprox.CpsulasDa 1TemperaturaAmbientalDa 2Temperatura20 gradosDa 3Temperatura20 grados

Control 1(Procedimiento normal)No se ve ninguna bacteria en la cpsula.Est limpiaHan salido entre 5 a 6 manchas blancas por el entorno de la cpsulaLas manchas blancas se han esparcido en la placa y ya estn en todos lados.

Control 2(Procedimiento nuevo)No se ven seales de bacterias en la cpsulaAl igual que el control 1 se ven manchas alrededor de la cpsula pero no en el centroTambin ha aumentado la cantidad de manchas blancas y salen hongos

Infectada 1Tampoco se ven manchas lo que me lleva a pensar que hay otra variable influyendoSe ven machas blancas y hongos por toda la cpsula en el centro y en el contorno de la capsulaHan aparecido manchas rojas y la cantidad de hongos y manchas blancas han aumentado

Observacin:En el da 1 las tres placas estn completamente limpias, incluso la que estaba infectada, esto me llevo a deducir que la temperatura estaba influyendo en el crecimiento de bacteria por lo que tuve que poner las cpsulas en una incubadora. En el da 2 se ven en el control 1 y 2 manchas blancas en el contorno de la cpsula (teniendo en cuenta de que el control 2 tiene un procedimiento distinto). Lo que me lleva a concluir que el procedimiento no es el errneo sino la manipulacin que le estoy dando.

Procedimiento Nro. 3: -Temperatura ambiental: 10 grados aprox.CapsulasDa 1Temperatura20 gradosDa 2Temperatura20 grados

Control 1No se ven manchas blancas, est limpioApareci una pequea mancha en al contorno de la cpsula

Control 2Al igual que en el control 1 no hay bacteriasSolo se ve una pequea mancha pero en el centro de la cpsula

Control 3No hay seales de bacterias ni de hongosAl igual que las ltimas dos cpsulas solo hay una pequea manchas.

Observaciones:El experimento sale tal como lo esperaba, las placas no se contaminan y he encontrado el procedimiento, los pasos y las precauciones adecuadas para lograr una esterilizacin correcta.

Anlisis:

En un principio, la primera idea que tuve para este proyecto fue comparar dos jabones, uno anti-bacterial y un jabn comn y corriente. Para esto utilic caldo Maggie y gelatina, para crear un medio de cultivo en donde pude cultivar las bacterias. Realic este procedimiento dos veces, los cuales no me resultaron, ya que el medio de cultivo no era el indicado, esto fue porque los materiales estaban contaminados y adems porque la manipulacin que le estaba dando no era la indicada.Este error me llev a reenfocar mi proyecto, buscando un nuevo objetivo. Determinar el procedimiento ms adecuado y efectivo al momento de crear un ambiente esterilizado para cultivar bacterias. As comenc a realizar un procedimiento nuevo, para el cual ocupe un nuevo mtodo de cultivo, llamado medio Luria-Bertani (LB)[footnoteRef:5]. [5: http://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/1805/4.MATERIAL_METODOS.pdf?sequence=5]

En el procedimiento nro. 1, utilic tres distintas cpsulas: control 1, infectada 1 y infectada 2 (vase en registro de datos). El procedimiento normal constaba de colocar las placas y el medio de cultivo al interior de la olla a presin y auto-clavarlas, para luego sacarlas y colocarlas en una mesa desinfectada e introducir en cada cpsula el medio de cultivo para despus trabajarlas segn sus caractersticas.Durante los tres das que las placas fueron evaluadas. El control 1, cpsula que no fue contaminada, se contamin. Se podan ver bacterias tanto como en centro y en el contorno de la cpsula. En la infectada 1 y 2, las cpsulas se vieron ms infectadas que el control 1. Se vean hongos y bacterias por todos lados. Pero esto no era el resultado que esperaba, sino que el control 1 estuviera completamente limpio.Al analizar el error que tuve en el procedimiento, me di cuenta que existan dos variables que podan estar influyendo en el resultado de este mismo. La primera variable podra ser el procedimiento que utilic, tal vez no era el adecuado o no estaba cumpliendo la funcin de auto-clavar. O simplemente la manipulacin que le di a las cpsulas no fue la adecuada, no tome las precauciones de limpieza, no me lave las manos o no desinfecte la mesa de una manera correcta.A consecuencia de esto, pens en un nuevo procedimiento, con la esperanza de lograr mi objetivo, pero al mismo tiempo me enfoqu en la segunda variable: la manipulacin de las placas. Para as dar origen al procedimiento nro. 2, en donde utilic tres placas: control 1 (procedimiento normal), control 2 (procedimiento nuevo), infectada 1. El procedimiento que ocupe para el control 2, fue el de alterar los pasos del procedimiento 1. En el procedimiento nuevo coloque el medio de cultivo en el control 2 y la coloque en el interior de la olla, para que al momento de sacarla al exterior no tuviera que abrirla y arriesgarme a que se contaminara.Al pasar un da y revisar cada placa, me di cuenta que, tanto como el control 1, control 2 e incluso en la infectada 1, no exista ninguna seal de bacterias. Esto me hizo reflexionar y empec a analizar que pudo causar esto. Compare el procedimiento 1 con el procedimiento 2 y descubr que la nica diferencia era el cambio de temperatura ambiental. En el procedimiento 1 la temperatura era de 20 grados aproximadamente y en el procedimiento 2 la temperatura ambiental cambi a casi 10 grados aproximadamente. Como bien sabemos las bacterias son microorganismos y estos se reproducen mejor y ms rpido a temperaturas cerca de los 37 grados y si la temperatura llega a disminuir el crecimiento tambin disminuye.[footnoteRef:6] [6: http://www.profesorenlinea.cl/Ciencias/BacteriasDesarrollo.htm]

Gracias a esta informacin, encontr el por qu las bacterias no se desarrollaban, lo que me llev a poner cada cpsula en una incubadora, en donde el ambiente se mantendra a una temperatura de 20 grados aproximadamente.Al pasar el da 2 al interior de la incubadora y ver los resultados, encontr que en la placa infectada 1, las bateras haban crecido notablemente. Esto me llevo a confirmar que la temperatura si fue un factor que impidi el crecimiento. Por otro lado, en los controles 1 y 2, si se encontraron bacterias, pero en esta ocasin eran menos que en el procedimiento 1. Tanto en el control 1 y 2 la poca cantidad de bacterias (entre 5 a 6), solo se encontraban por alrededor y no en el centro de la cpsula.Si nos enfocamos en el control 1 del procedimiento 2 (procedimiento normal), solo se encontraron bacterias en el contorno de la placa. Si analizamos el control 2 del procedimiento 2 (procedimiento nuevo), las bacterias al igual que el control 1 solo se encontraron en el contorno de la placa. Si analizamos este resultado, podemos darnos cuenta que tanto el procedimiento normal y el nuevo, son eficientes y que la variable que deca: el procedimiento que utilic no es el adecuado, es incorrecta. Pero si analizamos bien los lugares en donde las bacterias se desarrollaron, podemos ver que solo fueron en el contorno de la cpsula y que el centro est completamente limpio. Si volvemos a analizar la segunda variable, la manipulacin que se le da a las placas no es la adecuada y lo relacionamos con el actual resultado, podemos llegar a inferir y confirmar que esto es cierto, debido a que como ya reiter en el control 1 y 2 del procedimiento 2, las bacterias se encuentran en el contorno, sea que esa bacteria ingreso por la orilla o los pequeos espacios que quedan al tapar la cpsula, por un tema de manipulacin poco higinica. Esto me lleva a replantearme y crear un tercer procedimiento, el procedimiento nro. 3, en donde utilic 3 cpsulas, control 1, control 2 y control 3, todas con el protocolo normal, para as poder obtener un resultado ms exacto.Despus de analizar cada error que encontramos en los resultados del procedimiento 1 y 2, comenz chequeando la temperatura ambiental y en el momento que hice el procedimiento 3 era de 10 grados aproximadamente por lo que tuve que colocar las cpsulas en la incubadora. Adems tuve extrema precaucin con mis manos y con todo lo que rodeaba a la cpsula para as no contaminarlas.Al ver las placas el da 1 pude notar que tanto en el control 1, 2 y 3 no haba seal de bacterias, pero para poder tener un resultado ms exacto espere un da ms. Al segundo da, en cada placa se vea un pequeo punto blanco en el contorno de la cpsula, pero en general estaba muy limpia, a pesar de esa pequea bacteria, todo lo dems estaba libre de contaminacin. Finalmente el objetivo lo haba logrado, encontr el procedimiento correcto y la forma correcta de manipular cada placa, logrando un resultado perfecto para poder as tener un ambiente totalmente esterilizado.

Conclusin:A pesar de todo lo experimentado, los errores y los logros, pude llegar a mi objetivo principal, el cual era determinar el procedimiento ms adecuado y efectivo al momento de crear un ambiente esterilizado para cultivar bacterias. No fue fcil encontrar el procedimiento, adems de tener que pasar por una ardua investigacin e invertir tiempo experimentando, tambin tuve que relacionar y entender distintos factores que pudieran estar influenciando mis resultados, tales como la temperatura, los materiales a usar y la higiene. En este proyecto no fue fcil llegar al camino correcto, ya que tuve que hacer varias investigaciones. Muchas veces uno descubre cosas por ensayo y error y gracias a ellos uno puede corregir lo que hizo, para as lograr el objetivo propuesto con xito. Me cuesta creer que en un comienzo el objetivo de mi proyecto era totalmente distinto al actual y con el transcurso de los resultados y errores, este objetivo se modific.Gracias a esto aprend una variedad de cosas, ahora s cmo lograr una manipulacin adecuada frente a objetos esterilizados, s que precauciones hay que tomar y lo precavido que hay que ser. Adems aprend cmo mantener un ambiente desinfectado y que hay cosas tan simples como el fuego y el alcohol que pueden mantener un ambiente limpio e higinico. Tambin pude experimentar con distintos reactivos qumicos. Aprend de diferentes medios como el medio Luria-Bertani (LB) o el medio Terrific Broth (TB) y adems pude conocer diferentes procesos de esterilizacin y diferentes procedimientos que me llevaron a encontrar el adecuado para mi objetivo.Principalmente mi proyecto estaba enfocado en las bacterias, por lo cual tuve que investigar sobre ellas. En un principio no conoca lo que eran las cepas E.coli, y gracias a todo lo que investigu, ahora conozco con claridad lo que son. Pero no simplemente aprend informacin de conceptos o definiciones, sino que tambin gan la experiencia de cultivar la perseverancia frente a un objetivo. Estuve cerca de dos meses en este proyecto, casi durmiendo en el laboratorio, estando ah todas las maanas, incluso postergando mis recreos.Cada vez que pienso o veo a doctores operando pienso en el trabajo que deben realizar para mantener un ambiente limpio. Deben tener todas sus manos desinfectadas e incluso el ambiente y sus materiales. Tal vez yo no me podra llegar a comparar con ellos, pero ahora entiendo y comprendo lo complicado que debe ser lograr un ambiente esterilizado, relacionndolo con lo complejo que fue mantener mi mesa e implementos desinfectados.Seguramente mis compaeros y otras personas, que estn en los dems electivos, no entienden cmo puedo estar en biologa. Muchas veces se preguntan el por qu elegir el electivo ms difcil, hasta yo mismo he dudado en cambiarme. Pero siempre reflexiono que cuando algo es fcil de hacer y no me toma mucho trabajo realizarlo, yo no aprendo realmente y no le tomo el real valor que debera. A veces observo que si algo es difcil y cuesta llegar a tu objetivo, muchas personas se pierde en el camino, pero siempre estn los que perseveran y lo logran. Al final del camino uno se da cuenta de todo lo aprendido y toda la experiencia ganada, la cual va a formar una parte muy importante en los distintos proyectos de mi vida.Como ya reiter este proyecto no fue fcil, tuve que pasar por muchos desafos, invert mucho tiempo en l, pero al final de todo me siento contento con el resultado. Gracias al profesor de ciencias, aprend muchas cosas tericas pero lo ms importante es que me motiv a conocer y valorar la perseverancia, el cmo organizar mi tiempo, agradecer los desafos y me mostr la disponibilidad y voluntad que tiene l para acompaarnos en nuestros aprendizajes.Este trabajo tambin me ha hecho reflexionar sobre mi vocacin, estaba muy motivado con la informtica, la arquitectura, la mecnica y ahora gracias a este proyecto la biologa es parte tambin de mis futuras inquietudes vocacionales. Estoy muy confundido. Gracias profe.

Matas NavarreteColegio Santa CruzEduardo Cepeda