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Uso
Base utilizada para la preparacin de diferentes medios
destinados al aislamiento, cultivo y diferenciacin de
micobacterias, fundamentalmente Mycobacterium
tuberculosis.Fundamento
Originalmente la frmula de Lowenstein de 1931 contena los
indicadores rojo congo y verde de malaquita. En 1932 Jensen modific
el medio eliminando el rojo congo e incrementando la concentracin
de verde de malaquita. Los nutrientes de este medio basal, ms los
aportados por el agregado de la mezcla de huevos, constituyen un
rico soporte para el crecimiento de una gran variedad de
micobacterias excepto Mycobacterium leprae.
El verde de malaquita inhibe el desarrollo de la flora
acompaante Gram positiva y de algunas bacterias Gram negativas. Con
el agregado de glicerina se estimula el crecimiento de
Mycobacterium tuberculosis, aunque gran parte de Mycobacterium
bovis es inhibido. Si se adiciona cloruro de sodio al 5%, se pueden
seleccionar micobacterias tolerantes a la sal, como es el caso de
Mycobacterium smegmatis.
Indicaciones sobre la recoleccin y el tratamiento de las
muestras
Realizar un estudio seriado con tres cultivos por cada paciente
para aumentar la posibilidad de aislar al germen y en caso de
tratarse de una micobacteria diferente al Mycobacterium
tuberculosis, el estudio seriado permite contar con suficientes
aislamientos para considerar a dicha micobacteria como responsable
de la enfermedad.
La muestra a analizar tiene que ser representativa, de calidad y
cantidad, es decir provenir de la lesin a estudiar y en cantidad
suficiente.
Esputo, hisopado larngeo, lavado gstrico, lavado bronquial,
aspirado bronquial, lquido cefalorraqudeo, lquido peritoneal,
pericardio, lquido sinovial, pus, orinaInstrucciones de
preparacin
Suspender 37,3 g del polvo en 600 ml de agua purificada y
agregar 12 ml de glicerina. Calentar agitando continuamente y
hervir un minuto para disolucin total. Distribuir en recipientes
apropiados y esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos.
Enfriar a 50C aproximadamente.
Mezclar aspticamente un litro de huevo ntegro, evitando la
formacin de burbujas de aire y agregar al medio base ya
esterilizado y a una temperatura aproximada de 50 C. Mezclar el
huevo y la base hasta uniformar. Distribuir en tubos estriles y
tapar hermticamente. Colocar los mismos en posicin inclinada y
coagular a 85-90C durante 45 minutos. Siembra
Inocular aproximadamente 0,5 ml por tubo sobre la superficie del
medio de cultivo. Rotar los tubos para lograr una distribucin
homognea de la muestra. Generalmente se siembran dos tubos de
Lowenstein Jensen y un tubo de Stonebrink Medio. Este ltimo
contiene piruvato de sodio y favorece el desarrollo de cepas
disgnicas como bacilos isoniazida resistentes y sobre todo de
Mycobacterium bovis que es causal de algunos casos de enfermedades
humanas.Medio Lowenstein Jensen BaseIncubacin
En aerobiosis, a 35-37C.
Observar los cultivos dos veces por semana y registrar el tiempo
de aparicin de las colonias.Si no se observa desarrollo, incubar
hasta 8 semanas.Importante: incubar los tubos con las tapas flojas,
inclinados 5 aproximadamente en bandeja adaptada con varilla de
vidrio y extremos ajustados con tubos de goma. Esta posicin evita
que el inculo contacte con la parte superior del tubo.Controlar a
las 72 horas los tubos sembrados. Si el inculo ha sido absorbido,
ajustar las tapas y agrupar los tubos con igual identificacin.Si an
estn hmedos, incubar hasta que se sequen y luego ajustar las
tapas.Interpretacin de los resultados
Observar las caractersticas morfolgicas y la presencia o
ausenciade pigmento en las colonias. Tener en cuenta el tiempo
queha transcurrido desde la inoculacin hasta la observacin de
crecimiento.Los cultivos positivos generalmente se observan entre
los 13 y 28 das de incubacin, dependiendo del contenido de bacilos
en las muestras sembradas, mientras que el 3% de las micobacterias
suele crecer a los 40 das de incubacin.
La aparicin de colonias color crema, rugosas o cremosas,
amarillentas, es indicio de cultivo positivo, el cual ser
confirmado realizando la coloracin de Ziehl-Neelsen a un extendido
del mismo, para determinar la presencia de bacilos cido-alcohol
resistentes (BAAR).De la misma manera se proceder para los cultivos
contaminados y cultivos negativos (cuando no se observen
colonias).
La intensidad de positividad se informar segn las siguientes
caractersticas:Colonias confluentes: positivo (xxx)Colonias
separadas: positivo (xx)De 20 a 100 colonias: positivo (x)Menos de
20 colonias: positivo. Informar el recuento obtenidoNo se observan
colonias: negativo
CultivoPositivo
CultivoNegativo
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HERNANDEZMICROBIOLOGIA Y TAXONOMIA MICROBIANA
