Taller Seco

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Una experiencia compartidaUna experiencia compartida

Enrique Longo Tec. Hemoterapiakikelongo@gmail.com

ESTUDIOS INMUNOHEMATOLÓGICOS EN ESTUDIOS INMUNOHEMATOLÓGICOS EN EL RECIÉN NACIDOEL RECIÉN NACIDO

Anti-A Anti-B Anti-AB Anti-D Anti-CDE Neg Neg Neg Neg Pos

Anti-C Anti-c Anti-E Anti-e

Pos Pos Pos Pos

Técnica de Du Negativa

Informar Grupo O RH negativoFenogenotipo Cde/cdE

¿Fenogenotipo Cde/cdE?Madre

O cde/cde

Padre Anti-A Anti-B Anti-AB Anti-D Anti-CDE Neg Neg Neg Neg Pos

Anti-C Anti-c Anti-E Anti-ePos Pos Pos Pos

Madre O cde/cde

Bebé O cde/CdE

Padre O cde/CdE

DISTINTOS ANTI-D, ¿CUÁL/ES USAR?DISTINTOS ANTI-D, ¿CUÁL/ES USAR?

Anti-D Blend

Técnica en lámina o tubo, hasta lectura 37ºC para pacientes y embarazadas

Técnica en fase de SAGH para donantes y recién nacidos

Pacientes y embarazadas

Donantes y recién nacidos

Anti-D IgM que no detecta DVI

Anti-D IgM que detecta DVI

Los Ac monoclonales IgM anti-RH reaccionan mejor a 37ºC La temperatura de la reactividad óptima

Ag-Ac se vincula mas con el tipo de reacción y la naturaleza química de los Ag, que con la clase de Ac.

Los Ag de tipo carbohidrato suelen relacionarse con Ac “reactivos en frío” y los proteicos con Ac “reactivos en caliente”

Manual Técnico 15ª Edición, Pág. 286

Importancia del Importancia del Antígeno DAntígeno D

Sujetos Sujetos Rh NegativoRh Negativo productores de productores de Anti-Anti-DD::

80%80% de los receptores de grandes volúmenes de de los receptores de grandes volúmenes de sangre sangre D positivoD positivo

20%20% de los transfundidos con plaquetas provenientes de los transfundidos con plaquetas provenientes de de dadores D positivodadores D positivo

10%10% de las pacientes que han tenido hijos D positivo y de las pacientes que han tenido hijos D positivo y ABO compatiblesABO compatibles

GENTILEZA DE THEI CARLOS REY

Paciente femenina de 69 años que ingresa la institución para una cirugía de cadera.

Grupo A Pvo(+) Genotipo R1r

Antecedentes: varias cirugías de cadera desde niña con transfusiones. 2 embarazos.

Hace 20 años por el mismo diagnóstico la estudian en otra Institución y detectan e identifican anticuerpos con especificidad Anti-E + Anti-Jka. Ingresa en plan de Autotransfusión y en la cirugía sólo recibe unidades autólogas.

En esta oportunidad en nuestra institución solo se detecta el cuerpo anti-E. Panel 1 de 11 viales.

Panel 1 Anti-E

A VECES MENOS ES MAS

PCDgenotipo

A Pvo(+) R1r

Panel 2

Panel 3 con bromelina

Y también con bromelina, detectando solo el Anti-E

Se realizan paneles de 16 viales de otra marca (Panel 2)

No pudiendo ingresar en plan de autotransfusión, se comienza la búsqueda de unidades compatibles:

Se realizaron las pruebas de compatibilidad en gel a unidades E (-) negativas con 50ul de suspensión globular y 25 ul del suero de la paciente. También se estudió con muestra sangre del yerno de la paciente.

El antígeno E se determinó en gel con 50ul de dil globular + 1gota del gotero del frasco de anti-E.

50ul de suspensión globular + 25ul del antisuero utilizando pipeta automática y no gotero.

En la determinación del anti-E no hubo modificaciones en ninguna célula estudiada, pero sí con el anti-Jka, la del yerno resultó Jka positivo.

A pesar de no haber detectado el anticuerpo anti-Jka (si identificado en la otra institución) también se investigó el antígeno Jka a las unidades compatibles y en la sangre del yerno.

Se realizó con 50 ul de dilución globular + 1 gota del gotero del frasco de anti-Jka.

Se reservan 5 unidades compatibles hasta la fecha de la cirugía. Pasan varios días, (cambiaron varias veces fecha de cirugía) entonces se rechequean las unidades con compatibilidad negativa, pero en ese momento se realiza la determinación del anti-E y del anti-Jka de la siguiente forma:

Segundas pruebas con pipeta

YERNOYERNO

Finalmente se compatibilizaron nuevas unidades y a las compatibles se les determinó el antígeno utilizando 25 ul de los antisueros específicos dispensándolos con pipeta automática y no con el gotero del frasco.

La paciente se operó, recibió 5 unidades.

Ya fue dada de alta.

PRESENTACION DE UN CASOPRESENTACION DE UN CASOPACIENTE: DOLORES FUERTESSE SOLICITAN 2 UNIDADES DE GRD.GRUPO Y RH: 0 POSUNIDADES COMPATIBILIZADAS:

UNIDAD

L. I. 37ºC SAGH

2028 0 0 4+

2059 0 0 4+

ANAMNESISANAMNESIS

ANTECEDENTES TRANSFUSIONALES:ANTECEDENTES TRANSFUSIONALES:

NO REFIERENO REFIERE

ANTECEDENTES GESTACIONALES: ANTECEDENTES GESTACIONALES:

2 EMBARAZOS2 EMBARAZOS

2 HIJOS2 HIJOS

MEDICACION: MEDICACION:

NO REFIERENO REFIERE

IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOSIDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS

PANEL DE 11 TUBOS:PANEL DE 11 TUBOS: 11 TUBOS POSITIVOS 4+11 TUBOS POSITIVOS 4+

AUTOCONTROL: AUTOCONTROL:

POSITIVO 4+POSITIVO 4+

PAD MONOESPECIFICA: PAD MONOESPECIFICA:

ANTI IgG 4+ANTI IgG 4+

ANTI CANTI C33b Cb C33d NEGATIVOd NEGATIVO

¿ ?¿ ?

COMO DIJO EL DR. TORRES:COMO DIJO EL DR. TORRES:

BUSCAR LA SANGRE MAS ADECUADABUSCAR LA SANGRE MAS ADECUADA

ALGORRITMO DE TRABAJOALGORRITMO DE TRABAJOSEGÚN EL GRADO DE URGENCIASEGÚN EL GRADO DE URGENCIA

• DETERMINACION DE ABO, FENOTIPO RH Y K.DETERMINACION DE ABO, FENOTIPO RH Y K.

TRANSFUNDIR RESPETANDO ABO, FENOTIPO RH Y KELL, PREVIENE EL 80 % DE LAS REACCIONES

POSTRANSFUSIONALES.

ESTE CRITERIO SOLO ES VÁLIDO PARA TRANSFUNDIR A UN PACIENTE EN ESTADO

CRITICO.

SI EL TIEMPO LO PERMITE, ES NECESARIO REALIZAR ESTUDIOS COMPLEMENTARIOS

SI ES POSIBLE: SI ES POSIBLE:

TIPIFICAR PARA K, Fy, Jk, MNSs.TIPIFICAR PARA K, Fy, Jk, MNSs.

PARA TIPIFICAR SERA NECESARIO NEGATIVIZAR LA PAD.

• CLOROQUINA

• EDTA GLICINA

SOLUCIÓN DE DIFOSFATO DE CLOROQUINA

• Los hematíes que exhiben una PAD positiva se incuban en una solución isosmótica de difosfato de cloroquina durante un tiempo límite de dos horas a temperatura ambiente.

• Luego se lavan y se resuspenden en salina fisiológica.

La reactividad de los antígenos eritrocitarios, después del tratamiento de cloroquina, no está relativamente afectada.

Disociación de inmunoglobulinas unidas a hematíes

Principio del ensayo

PROCEDIMIENTO

• Lavar los hematíes que se vayan a tratar al menos tres veces en volúmenes suficientes de salina fisiológica para quitar el suero o plasma humano contaminante.

• Colocar 1 volumen de los hematíes lavados y empaquetados en un tubo apropiadamente rotulado.

• Añadir 4 volúmenes de cloroquina y mezclar minuciosamente.

• Incubar durante un tiempo mínimo de 30 minutos y un máximo de dos horas a temperatura ambiente (23°C±3°C).

• Lavar los hematíes por lo menos 3 veces con solución fisiológica.

• Realizar una PAD de control para ver si el anticuerpo está disociado.

REACTIVO EDTA GLICINA

Consiste en tres soluciones.

•Solución 1: Una solución concentrada de sodio EDTA.

•Solución 2: Una solución de glicina de bajo pH.

•Solución 3: Una solución de aminometano TRIS (hidroximetil).

Disociación de inmunoglobulinas unidas a hematíes

PROCEDIMIENTO

• Lavar minuciosamente los hematíes recubiertos con IgG.

• Suspenderlos brevemente en una solución ácidoglicina EDTA para desasociar el anticuerpo.

• Llevar inmediatamente a un pH neutro con el TRIS Buffer.

• Centrifugar y volver a lavar tres veces con solución salina.

• Si la PAD es negativa, los hematíes lavados ya están preparados para examinar sus antígenos de superficie mediante el test de antiglobulina.

Se ha demostrado que el método ácido-EDTA es el procedimiento de elección más adecuado para determinar los hematíes recubiertos con aloanticuerpos reactivos en caliente: IgG o autoanticuerpos.

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTOLIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

•El tratamiento inactiva los antígenos del sistema de grupo sanguíneo Kell, así como el Era, Bg, y posiblemente otros.

• Este reactivo no desnaturaliza los antígenos sensibles a las enzimas, como por ejemplo, los que pertenecen a los sistemas Duffy y MNSs.

AUTOABSORCIONAUTOABSORCION

SÓLO SE PUEDE REALIZAR SÓLO SE PUEDE REALIZAR CUANDO EL PACIENTE NO HA CUANDO EL PACIENTE NO HA SIDO TRANSFUNDIDO EN LOS SIDO TRANSFUNDIDO EN LOS ULTIMOS TRES MESES.ULTIMOS TRES MESES.

AUTOABSORCIÓNAUTOABSORCIÓN

UTILIZACIÓN CON POLIETILENGLICOL

OBJETIVOOBJETIVO

Se trata de potenciar la adsorción de autoanticuerpos séricos a eritrocitos autólogos con el fin de detectar e identificar aloanticuerpos enmascarados por la panaglutinina, mediante la adición de PEG.

MATERIALESMATERIALES

•SUERO O PLASMA PROBLEMA.

•GLÓBULOS ROJOS AUTOLOGOS.

•PEG.

METODOMETODO Separar tantas alícuotas de hematíes

como ciclos de autoadsorción se prevean hacer. (NO MAS DE 4)

Rotular los tubos con apellido del paciente y el número de alícuota.

Centrifugar los tubos por 10 minutos a 3000 rpm.

Descartar el sobrenadante por aspiración.

Dispensar un volumen de suero igual al volumen de eritrocitos del tubo 1.

Agregar un volumen de PEG, igual al de suero. Mezclar bien.

Incubar durante 15 minutos a 37ºC.

Centrifugar durante 10 minutos a 3000 rpm..

Trasvasar el sobrenadante al tubo Nº 2.

Realizar una DAI con autocontrol al sobrenadante.

TÉCNICA DE DAI CON AUTOCONTROL

Enfrentar 6 gotas del sobrenadante + 1 gota de GR al 3%.Enfrentar 6 gotas del sobrenadante + 1 gota de GR al 3%.

Para el autocontrol enfrentar el sobrenadante a Para el autocontrol enfrentar el sobrenadante a los GR autólogos (PAD negativa) en la misma los GR autólogos (PAD negativa) en la misma

proporción.proporción.

Incubar 15 minutos a 37ºC.Incubar 15 minutos a 37ºC.

Lavar 4 vecesLavar 4 veces

Agregar 2 gotas de SAGH anti IgG.Agregar 2 gotas de SAGH anti IgG.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

AUTOCONTROL NEGATIVO + DAI NEGATIVA:AUTOCONTROL NEGATIVO + DAI NEGATIVA:

AUTOANTICUERPOS ADSORBIDOS AUTOANTICUERPOS ADSORBIDOS NO SE EVIDENCIAN ALOANTICUERPOSNO SE EVIDENCIAN ALOANTICUERPOS

CONDUCTA: NO SEGUIR AUTOABSORBIENDOCONDUCTA: NO SEGUIR AUTOABSORBIENDO

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

AUTOCONTROL POSITIVO + DAI POSITIVAAUTOCONTROL POSITIVO + DAI POSITIVA

AUTOANTICUERPO LIBRE EN SUERO.AUTOANTICUERPO LIBRE EN SUERO.

CONDUCTA: SEGUIR AUTOABSORBIENDOCONDUCTA: SEGUIR AUTOABSORBIENDO

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

AUTOCONTROL NEGATIVO + DAI POSITIVAAUTOCONTROL NEGATIVO + DAI POSITIVA

AUTOANTICUERPOS ADSORBIDOSAUTOANTICUERPOS ADSORBIDOS ALOANTICUERPOS LIBRESALOANTICUERPOS LIBRES

CONDUCTA: NO SEGUIR AUTOABSORBIENDOCONDUCTA: NO SEGUIR AUTOABSORBIENDOIDENTIFICAR EL ALOANTICUERPOIDENTIFICAR EL ALOANTICUERPO

ANEMIA HEMOLITICA AUTOINMUNEANEMIA HEMOLITICA AUTOINMUNE ESPECIFICIDAD RELATIVAESPECIFICIDAD RELATIVA

FenotipFenotipo de GRo de GR 22 44 88 1616 3232 6464 1212

88252566

rrrr 4+4+ 3+3+ 3+3+ 2+2+ 2+2+ 1+1+ 00 00

RR11 R R11 4+4+ 3+3+ 3+3+ 2+2+ 2+2+ 1+1+ 00 00

RR22 R R22 3+3+ 2+2+ 1+1+ 00 00 00 00 00

GENTILEZA DEL DR. TORRESGENTILEZA DEL DR. TORRES

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MUCHAS GRACIAS!!!MUCHAS GRACIAS