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Introducción:
Este laboratorio se realizo para poder demostrar el funcionamiento de las enzimas amilasa,
pepsina, catalasa. Demostrar como la temperatura tiene efecto en la función de la enzima
amilasa. Entender como las enzimas aceleran las reacciones químicas.
Las enzimas son catalizadores biológicos que permiten que las reacciones metabólicas ocurran a
gran velocidad en condiciones compatibles con la vida. En las células, la actividad secuencial de
muchas enzimas permite que las moléculas se degraden o se formen moléculas de mayor tamaño
a partir de moléculas sencillas. Desde el punto de vista biológico las enzimas son proteínas. Para
cumplir su función requieren conservar su estructura nativa en la que se destaca una región
formada por un número reducido de residuos aminoaciditos que poseen afinidad por los
compuestos que intervienen en la reacción. Ese lugar se llama sitio activo y en él se desarrolla la
reacción. El estudio de las enzimas y su actividad ha sido importante para conocer los distintos
pasos de las vías metabólicas y su regulación, para detectar enfermedades, pero también desde un
punto de vista práctico para elaborar productos útiles a nivel alimenticio, medicinal, industrial o
farmacéutico.
En la parte A de la primera actividad tuvimos la oportunidad de observar la función de la
temperatura en la enzima amilasa. La reacción de la enzima de amilasa ante la presencia del
reactivo de yodo en el almidón. Como reacciona la amilasa y almidón con el, la solución de
Benedict ante el calor. En la parte B se muestra como reacciona la amilasa en el agua con hielo y
en el agua hirviendo. En el plato de prueba se demostró como la muestra de 1ml de la muestra
del tubo #3 con los 3ml de almidón más los 3ml del tubo #1 de la amilasa calentada actúan ante
el reactivo de yodo y su diferencia atreves del tiempo. También demostraremos como la muestra
de 1ml del tubo #4 con 3ml de almidón más 3ml de amilasa que estuvo en agua fría .Se demostró
como la muestra del tubo #3 y la muestra del tubo #4 reaccionan ante la solución de Benedict al
calentarla. La hipótesis planteada es que la amilasa una vez se calienta se desnaturaliza no
funcionando y la amilasa que estuvo en el agua con hielo se inactiva pero cuanto se calienta esta
vuelve a funcionar.
En la segunda actividad se pudo observar la acción catalítica de la pepsina con la ayuda de la
solución de Biuret en agua, gelatina, solución de albumina, solución de albumina con 0.2% HCI
y su diferencia observada en periodos de 10, 20 y 30 minutos. La hipótesis planteada es que la
enzima de pepsina degrada las proteínas de manera continua hasta que no queden proteínas en
las muestras.
En la tercera actividad se pudo observar la acción catalítica de la catalasa esto se realizo
utilizando el plato de prueba y observado la reacción de la catalasa con el agua en un hueco y en
con el H2O2 en otro hueco. Y comparar los resultados obtenidos con el efecto de el extracto de
papa en el agua en un hueco y en con el H2O2 en otro hueco. La hipótesis es que la catalasa
reacciona diferente que el extracto de papa.
Materiales y métodos:
En la parte A de la primera actividad tomamos tres tubos de ensayo al tubo #1 le añadimos 3ml
de amilasa al tubo #2 se le añade 3ml de almidón. En un plato de prueba colocamos una gota de
tubo #1 más una gota de yodo en un hueco y una gota del tubo #2 más una gota de yodo en otro
hueco. El tubo #3 colocamos 1ml del tubo #1 mas 1ml del tubo #3 y lo mezclamos. En otro
hueco del plato colocamos una gota del tubo #3 más una gota de yodo. Cada minuto repetimos el
proceso de colocar una gota del tubo #3, en otro hueco hasta que no se observe el color negro
presente. Después tomamos 1ml de la muestra del tubo #3, lo colocamos en otro tubo de ensayo
más 1ml de solución de Benedict, luego la calentamos para observar su reacción y anotamos los
resultados.
En la parte B de la primera actividad, tomamos cuatro tubos de ensayo al tubo #1 le añadimos
3ml de amilasa y la colocamos en un Becker con agua hirviendo por 10 minutos. Al tubo #2 le
añadimos 3ml de amilasa y la colocamos en un Becker con agua con hielo por 10 minutos. El
tubo #3 le añadimos 3ml de almidón mas 3ml del tubo #1 luego de estar los 10 minutos en el
agua hirviendo y lo mezclamos bien se anotan los resultados observados. El tubo #4 le añadimos
3ml de almidón mas 3ml del tubo #2, luego de estar 10 minutos en el agua con hielo y lo
mezclamos bien se anotan los resultados observados. En un plato colocamos una gota del tubo #3
en un hueco más una gota de yodo. Se repite este proceso cada 10 minutos hasta que no
observemos el color negro. Luego tomamos 1ml de la muestra del tubo #3 mas 1ml de solución
Benedict y en otro tubo de ensayo tomamos 1ml de la muestra del tubo #4 mas 1ml de solución
de Benedict y calentamos ambos muestras se anotan los resultados observados.
En la segunda actividad se tomaron cuatro tubos de ensayo al tubo #1 le añadimos 2ml de agua
mas 2ml de pepsina esperamos 10 minutos y en otro tubo le añadimos 0.5ml del tubo #1, mas
0.5ml de solución de Biuret, se repite este proceso a los 20 minutos y a los 30 minutos anotamos
lo observado en cada periodo. El tubo #2 le añadimos 2ml de gelatina mas 2ml de pepsina
esperamos 10 minutos y en otro tubo le añadimos 0.5 del tubo #2 mas 0.5ml de solución de
Biuret repetimos este proceso a los 20 minutos y a los 30 minutos anotamos lo observado en
cada periodo. El tubo #3 le añadimos 2ml de solución de albumina mas 2ml de pepsina
esperamos 10 minutos y en otro tubo le añadimos 0.5 del tubo #3 mas 0.5 de solución de Biuret
repetimos este proceso a los 20 minutos y a los 30 minutos se anota lo observado en cada
periodo. Al tubo #4 le añadimos 2ml de solución de albumina, mas 2ml de pepsina mas 2ml de
0.2%HCI esperamos 10 minutos y en otro tubo le añadimos 0.5ml del tubo #4 mas 0.5ml de
solución de Biuret repetimos este proceso a los 20 minutos y a los 30 minutos se anota lo
observado en cada periodo.
En la tercer actividad se utilizo un plato prueba en el hueco #1 colocamos 2 gotas de H 2O2 más 2
gotas de catalasa. En el hueco #2 colocamos 2 gotas de agua más 2 gotas de catalasa. Al hueco
#3 le añadimos 2 gotas de H2O más 2 gotas de extracto de papa. En el hueco #4 le colocamos 2
gotas de agua, más 2 gotas de extracto de papa.
Resultados:
Tabla 1:1 Efecto de la temperatura en la amilasa
TUBO CONTENIDO REACTIVO COLOR RESULTADO
1 3ml de amilasa Ninguno Blanco claro No hay reacción solo hay
amilasa.
2 3ml de almidón Ninguno Blanco
intenso
No hay reacción solo hay
almidón.
3 1ml del tubo #1 mas 1ml
del tubo #3
Ninguno Verde claro La amilasa comienza a
degradar el algodón.
4 1ml del tubo #3 mas
solución de Benedict
1ml de solución
de Benedict
Verde oscuro Se degrado el algodón y el
Benedict detecta azucares.
La tabla 1:1 pertenece a la primera actividad de la parte uno que demuestra el efecto de la
temperatura en la enzima de amilasa. Los tubos 1, 2, 3 estaban a temperatura ambiente el tubo #4
fue el único al que se le aplico calor.
Tabla 1:2 Gota del tubo #1 y #2 mas el reactivo de yodo
HUECO CONTENIDO REACTIVO COLOR RESULTADO
1 1 gota del tubo #1 de de amilasa Yodo claro Negativo para almidón
2 1 gota del tubo #2 de almidón Yodo oscuro Positivo para almidón
En la tabla 1:2 muestra que en el hueco #1 dio negativo para el almidón y la muestra del hueco
#2 dio positivo para almidón.
Tabla 1:3 Mezcla gota del tubo #1 mas gota del tubo #2
HUECO CONTENIDO REACTIVO COLOR
0 1 gota del tubo #3 con amilasa y almidón Yodo 9
0.1 1 gota del tubo #3 con amilasa y almidón Yodo 8
0.2 1 gota del tubo #3 con amilasa y almidón Yodo 7
0.3 1 gota del tubo #3 con amilasa y almidón Yodo 6
0.4 1 gota del tubo #3 con amilasa y almidón Yodo 5
0.5 1 gota del tubo #3 con amilasa y almidón Yodo 4
0.6 1 gota del tubo #3 con amilasa y almidón Yodo 3
0.7 1 gota del tubo #3 con amilasa y almidón Yodo 2
0.8 1 gota del tubo #3 con amilasa y almidón Yodo 1
En la tabla 1:3 para identificar la intensidad de color de cada muestra se utilizo una escala de
valores donde 9 es mas intenso y 1 es menos intenso. Cada hueco se identifico con números
desde 0 que fue la muestra inicial hasta la muestra 0.8 que fue la última muestra.
Tabla 1:4 Efecto del calor y el frio en la amilasa
TUBO CONTENIDO TEMPERATURA RESULTADO
1 3ml amilasa Agua hirviendo 10 minutos. Se desnaturalizó
2 3ml amilasa Agua con hielo 10 minutos. Se inactivo
3 3ml almidón mas 3ml del tubo #1 Ambiente No hay reacción
4 3ml almidón mas 3ml del tubo #2 Ambiente Se activo
En la tabla 1:4 muestra el resultado del calor y el frio en la enzima de amilasa.
Tabla 1:5 Muestra del tubo #3 con el reactivo de yodo.
HUECO CONTENIDO RECTIVO COLOR
10.0 1 gota del tubo #3 Yodo 9
10.1 1 gota del tubo #3 Yodo 9
10.2 1 gota del tubo #3 Yodo 9
10.3 1 gota del tubo #3 Yodo 9
10.4 1 gota del tubo #3 Yodo 9
10.5 1 gota del tubo #3 Yodo 9
10.6 1 gota del tubo #3 Yodo 9
10.7 1 gota del tubo #3 Yodo 9
10.8 1 gota del tubo #3 Yodo 9
En la tabla 1:6 el contenido del tubo #3 es 3ml de almidón mas 3ml del tubo #1 luego de estar
10 minutos en el agua hirviendo. Cada muestra se identifico con el tiempo seguido por el número
de hueco. Para identificar la intensidad de color de cada muestra se utilizo una escala de valores
donde 9 es mas intenso y 1 es menos intenso.
Tabla 1:6 Muestra del tubo #4 con reactivo de yodo
HUECO CONTENIDO REACTIVO RESULTADO
1.10 1 gota del tubo #4 Yodo 9
2.10 1 gota del tubo #4 Yodo 8
3.10 1 gota del tubo #4 Yodo 7
4.10 1 gota del tubo #4 Yodo 6
5.10 1 gota del tubo #4 Yodo 5
6.10 1 gota del tubo #4 Yodo 4
7.10 1 gota del tubo #4 Yodo 3
8.10 1 gota del tubo #4 Yodo 2
9.10 1 gota del tubo #4 Yodo 1
En la tabla 1:6 el contenido del tubo #4 era 3ml de almidón más 3ml del tubo #2 luego de estar
10 minutos en agua con hielo. Cada muestra se identifico con el número de hueco seguido por el
tiempo. Para identificar la intensidad de color de cada muestra se utilizo una escala de valores
donde 9 es mas intenso y 1 es menos intenso.
Tabla 1:7 Solución de Benedict en almidón y amilasa
TUBO CONTENIDO REACTIVO RESULTADO
#5 1ml del tubo #3 Solución de Benedict No hubo reacción
#6 1ml del tubo #4 Solución de Benedict Se torno verde claro
En la tabla 1:7 el tubo #3 contenía 3ml de almidón mas 3ml de amilasa luego de estar 10 minutos
en agua hirviendo. El tubo #4 contenía 3ml de almidón más 3ml de amilasa luego de estar 10
minutos en agua con hielo.
Tabla 2:1 Acción catalítica de la pepsina.
TUBO CONTENIDO REACTIVO COLOR TIEMPO
1 2ml de agua mas 2 ml de pepsina Ninguno Violeta claro 0
1.1 0.5ml del tubo #1 0.5 solución Biuret Violeta claro 10
2.2 0.5ml del tubo #1 0.5 solución Biuret Violeta claro 20
3.3 0.5ml del tubo #1 0.5 solución Biuret Violeta claro 30
2 2ml de gelatina mas 2ml de pepsina Ninguno Violeta 0
2.1 0.5ml del tubo #2 0.5 solución Biuret Violeta oscuro 10
2.2 0.5ml del tubo #2 0.5 solución Biuret Violeta intermedio 20
2.3 0.5ml del tubo #2 0.5 solución Biuret Violeta claro 30
3 2ml de albumina + 2ml de pepsina Ninguno Violeta 0
3.1 0.5 del tubo #3 0.5 solución Biuret Violeta intenso 10
3.2 0.5 del tubo #3 0.5 solución Biuret Violeta claro 20
3.3 0.5 del tubo #3 0.5 solución Biuret azul 30
4 2ml albumina +2ml pepsina +2ml HCI Ninguno Violeta 0
4.1 0.5 del tubo #4 0.5 solución Biuret Violeta 10
4.2 0.5 del tubo #4 0.5 solución Biuret Violeta 20
4.3 0.5 del tubo #4 0.5 solución Biuret Violeta 30
En la tabla 2:1 se puede observar como la pepsina actúa ante las proteínas y su efecto atreves del
tiempo.
Tabla 3:1 Acción catalítica de la catalasa.
HUECO CONTENIDO REACTIVO RESULTADO
1 2 gotas de H2O2 2 gotas de catalasa Comenzó a burbujear.
2 2 gotas de agua 2 gotas de catalasa No paso nada
3 2 gotas de H2O2 2 gotas de extracto de papa Empezó a burbujear
4 2 gotas de agua 2 gotas de extracto de papa No paso nada.
En la tabla 3:1 demuestra los resultados de la catalasa y el extracto de papa en el agua y en el
peróxido de hidrogeno.
Discusión de los resultados:
Todos los resultados obtenidos fueron datos cualitativos esto se debe a que no se pudo medir que
cantidad de almidón, proteínas, azucares y que cantidad de enzimas de amilasa, pepsina y
catalasa había disponible en cada muestra. Simplemente nos limitamos a observar el color de
cada muestra con ayuda de los reactivos de yodo, solución de Benedict y solución de Biuret. La
hipótesis resulto ser cierta cuando se calienta la amilasa esta se desnaturaliza y este efecto no es
reversible pero cuando se enfría la enzima de amilasa esta se inactiva sin embargo este efecto se
puede revertir. En la primera parte cuando se uso el plato de prueba se pudo notar que cuando se
coloco la gota en el primer hueco que contenía la muestra del tubo #1 con amilasa cuando se le
aplico el reactivo de yodo la muestra se torno de color claro dando negativo a la presencia de
almidón. En el segundo hueco que contenía la muestra del tubo #2 con almidón cuando se le
aplico el reactivo de yodo la muestra se torno de color oscuro dando positivo a la presencia de
almidón esto sucede por que el reactivo de yodo es usado para detectar la presencia de almidón.
En el plato de prueba, cuando se le añadió la gota del tubo #3 que contenía 1ml de amilasa, mas
1ml de almidón, cuando se le aplico la gota de yodo se pudo observar que cada minuto que
pasaba en cada hueco se notaba en el centro era de un menor tamaño y de un color mas claro.
Demostrando menos presencia de almidón como esta demostrado en la tabla 1:3 en la cual se
utilizo una escala de 9 para mayor intensidad hasta 1 para menos intensidad en el color. Esto
sucede por que el yodo detecta almidón y la amilasa rompió los enlaces glicosidicos y al pasar
cada minuto la presencia de almidón disminuía quedando en los huecos del plato de prueba solo
azucares simples las cuales el yodo no las puede detectar. En el tubo #4 que contenía 1ml del
tubo #3 cuando se le añadió 1ml de solución Benedict y se calentó la muestra se torno de color
verde esto sucede por que la enzima de amilasa degrada el almidón convirtiéndolo en pequeños
polisacáridos que el Benedict puede detectar. Y por eso la muestra se torno de color verde.
En la segunda actividad de la primera parte se pudo comprobar como la amilasa actúa en frio y
en calor. Cuando se colocaron los 3ml de amilasa en el tubo #3 y se calentó por 10 minutos se
desnaturalizo el efecto de la enzima amilasa cuando esto sucede este efecto no puede ser
revertido. Pero en el tubo #2 que contenía 3ml de amilasa en agua frio lo que se logro fue
inactivar la enzima amilasa este efecto si puede ser reversible. En el tubo #3 que contenía 3ml de
almidón mas 3ml de la amilasa calentada no sucedió nada por que la amilasa esta desnaturalizada
y no puede actuar sobre el almidón. En el tubo #4 que contenía 3ml de almidón mas 3ml del tubo
#2 con la amilasa luego de estar 10 minutos en agua fría al añadir el almidón la enzima de
amilasa se activo y actuó ante la presencia de almidón. Igual sucede cuando se coloco la gota del
tubo #3 en el plato de prueba, mas una gota del reactivo de yodo dando negativo a la presencia
de almidón, esto sucedió por que la enzima de amilasa esta desnaturalizada y no actúa ante el
almidón. En el hueco #2 se le añadió una gota del tubo #4 que contenía almidón, mas la amilasa
que estuvo en agua con hielo por 10 minutos mas la gota del reactivo de yodo y se puedo
observar que cada minuto que transcurría se tornaba de un color fuerte a un color claro esto
sucede por que la enzima de amilasa esta actuando ante el almidón y en cada minuto que
transcurre se puede apreciar la degradación del almidón en cada hueco del plato de prueba.
Cuando tomamos 1ml del tubo #3 se coloco en otro tubo, mas 1ml de solución de Benedict y se
calentó no hubo cambio se quedo igual. Pero cuando se añadió al tubo nuevo 1ml del tubo #4
mas 1ml de solución de Benedict se pudo observar la muestra se torno de color verde claro
demostrando la presencia de monosacáridos.
En la segunda parte se pudo observar la acción catalítica de la Pepsina. La hipótesis resulto ser
verdadera la pepsina degrada las proteínas de manera continua que es notable en cada periodo
que se observan las muestras utilizando la solución de Biuret En el tubo #1 que contenía 2ml de
agua y 2ml pepsina. A los 10 minutos cuando se tomo 0.5ml del tubo #1, más los 0.5ml de
solución de Biuret, cuando no hubo reacción y la muestra se quedo igual, lo mismo sucedió a
los 10 minutos, 20 minutos y 30 minutos. Esto sucedió debido a que el agua no contiene
proteínas y la enzima de pepsina no actúa sobre el agua y al aplicar la solución de Biuret no hubo
reacción ni cambio por eso se utilizo al tubo #1 como grupo control.
En el tubo #2 que contenía 2ml de gelatina y 2ml de pepsina. A los 10 minutos cuando se tomo
0.5ml del tubo #2, mas los 0.5ml de solución de Biuret la muestra se torno de un color violeta
obscuro esto sucede por que la enzima de pepsina degrada las proteínas de la gelatina dando la
muestra positivo y observándose un color violeta oscuro. A los 20 minutos, cuando se tomo
0.5ml del tubo #2, mas los 0.5ml de solución de Biuret se puede observar un violeta intermedio
o menos intenso que al principio esto sucede por que la enzima de pepsina continua degradando
las proteínas de la gelatina y se puede observar menos presencia de proteínas en la muestra. A los
30 minutos, cuando se tomo 0.5ml del tubo #2, mas los 0.5ml de solución de Biuret en la
muestra se observa un violeta claro demostrando que la enzima de catalasa continua
degradando la gelatina quedando menos presencia de proteínas en la muestra.
En el tubo #3 que contenía 2ml de solución de albumina, mas 2ml de pepsina. A los 10 minutos,
cuando se tomo 0.5ml del tubo #3 mas los 0.5ml de solución de Biuret se pudo observar que la
muestra se torno de un color violeta intenso mostrando una alta presencia de proteínas. A los 20
minutos, cuando se tomo 0.5ml del tubo #3 mas los 0.5ml de solución de Biuret la muestra se
torno un color violeta claro demostrando que la pepsina continua degradando la albumina y
queda poca proteína presente. A los 30 minutos, cuando se tomo 0.5ml del tubo #3 mas los
0.5ml de solución de Biuret la muestra se torno de color azul que es el color del Biuret esto
sucedió por que la enzima de pepsina degrado totalmente la albumina y no quedan proteínas
presentes.
En el tubo #4 que contenía 2ml de solución de albumina, mas 2ml de pepsina, mas 2ml de 0.2%
de HCI. A los 10 minutos cuando se tomo 0.5ml del tubo #4, mas los 0.5ml de solución de
Biuret no hubo cambio alguno ni cuando transcurrieron lo 20 minutos ni los 30 minutos todas la
muestras se quedaron completamente iguales ya que el HCI con un PH bajo desnaturalizo la
enzima de pepsina.
En la tercera parte pudimos observar la acción catalítica de la catalasa. Luego de realizar la
actividad se pudo comprobar que la hipótesis planteada resulto falsa debido a que la catalasa si
tuvo reacción con el H2O2 pero no con el agua y el extracto de papa reacciono con el H2O2 pero
no con el agua. Ambas muestras actuaron iguales lo que indica que el extracto de papa contiene
catalasa y por eso el mismo resultado. En el primer hueco del plato de prueba que contenía las 2
gotas de H2O2 cuando se le añadió las 2 gotas de catalasa comenzó a burbujear creando
efervescencia que es la liberación de oxigeno esto sucede por que la enzima de catalasa degrada
el peróxido. En el hueco #2 que contenía las 2 gotas de agua, más las 2 gotas de catalasa no
sucedió nada debido a que el agua no tiene sustrato y la enzima de catalasa no actúa sobre el
agua. En el hueco #3 que contenía las 2 gotas de H2O2 cuando se le añadió las 2 gotas de
extracto de papa comenzó a burbujear creando efervescencia esto se debe a que el la papa
también contiene catalasa. En el hueco #4 que tenia las 2 gotas de agua cuando se le añadió las 2
gotas de extracto de papa no sucedió nada por que el agua no tiene sustrato y aun que la papa
contiene catalasa no hay reacción.