Laboratotio de patologia inclusion,fijacion,corte,tincion de muestras

GRUPO # 3

UNIVERSIDAD LAICA ELOY ALFARO DE MANABÍFACULTAD DE MEDICINA

ANATOMÍA PATOLÓGICA PRÁCTICA

Dr. Angel Vinces

INTEGRANTES:

- BRAVO CRESPO LUIS ARTURO- CHONILLO FRANCO JORDI ALBERTO- FERNADEZ CHACON LUIS DAVID- LOOR VERA JOSSELYN MARIA- GARCIA ZAMBRANO ANGIE LEONOR- OBANDO CHANCAY XIOMARA DAYANA- SALAZAR ALCIVAR CRISTHIAN DAVID

Recolección, procesamiento de muestras y tejidos histopatológicos

Clase #1El diagnóstico histopatológico muchas veces precede y determina la actitud terapéutica en un caso dado. Por consiguiente, el diagnóstico de la biopsia es siempre URGENTE. Esto es importante no sólo por la decisión terapéutica, sino que también porque significa reducir gastos de hospitalización, ahorro de tiempo, entre otros.

1 Recepción de muestras

1. Toda muestra debe ser perfectamente identificada.2. Las muestras se obtienen de pacientes vivos o de una la necropsia, 3. Para la recolección de cualquier otro tipo de muestra, utilizar material

limpio y seco.4. Los envases utilizados para el envío de muestras deben ser en lo

posible irrompibles, herméticos y de dimensiones adecuadas. Las

Para la adecuada recolección, conservación y envío de las muestras, es indispensable tener presentes las siguientes normas:


Clase #1 1 Recepción de muestras

Identificación de las muestras

- Toda muestra para examen histopatológico o citológico debe ser identificada en el frasco, sobre o bolsa con el nombre completo del paciente y el órgano de donde procede.

- La muestra debe acompañarse de un formulario en el que se consigne el nombre completo y edad del paciente, órgano de donde se obtuvo, diagnóstico y antecedentes clínicos y médico que envía


Clase #1QUE ES BIOPSIA?Puede definirse como el procedimiento en el que se remueve tejido de un organismo vivo para examen microscópico y así establecer un diagnóstico.

Según el tipo de muestra se distinguen:

1) Biopsia por punción:2) Biopsia excisional:3) Biopsia incisional:4) Formas especiales de biopsia.


Clase #1 2 Preparación de muestras

a) Fijación

• Es el primer proceso en la preparación de un tejido que engloba un conjunto de técnicas en la que se estabilizan las proteínas y cuya finalidad es evitar la autolisis y crecimiento bacteriano para ello se utilizan una serie de soluciones liquidas como el formol, bouin, y medios físicos como el calor de la llama o la congelación de la muestra por medio del criostato).



b) Inclusión

• Una vez fijado el tejido tenemos que procesarlo para su observación con el microscopio. Hay 2 formas para endurecer el tejido la congelación y la inclusión

• La inclusión es el método más común de endurecer el tejido y consiste en infiltrar la muestra con sustancias líquidas que tras un proceso de polimerización o enfriamiento se solidifican, sin afectar a las características del tejido.

• La congelación de los tejidos previamente fijados permite la obtención de secciones que pueden ir desde unas 50 µm hasta nm, para lo que se utilizan diferentes aparatos: y el ultracriotomo para secciones ultrafinas del orden de nm



b) Inclusión

El proceso para la inclusión de un tejido con parafina es:

o Primero una vez que ya está fijada la muestra se procede a deshidratarla.

o Después se coloca el tejido en un recipiente para poder llenarlo con parafina.

o Se procede a esperar que se forme el bloque.o Una vez formado el bloque se encuentra listo para

proceder a cortar el tejido en el micrótomo



Inclusión



c) Corte • Para realizar el corte de la muestra

vamos a precisar de un micrótomo, con una buena técnica se pueden obtener secciones (rebanaditas de tejido) de unas 5 µm e incluso menores en algunos casos. Durante el corte las secciones unas pegadas a otras forman una fila que es cómoda de manejar y montar. El objetivo de realizar cortes tan delgados es para que estos puedan ser atravesados por la luz del microscopio.



c) Corte

¿Qué es un micrótomo?

INSTRUMENTO DE CORTE

UTILIZAN CUCHILLAS

CUCHILLAS ACERO/ TEJIDOS

BLANDOS

CUCHILLAS VIDRIO/

CORTES FINOS

CUCHILLAS DIAMANTE/

CORTES DUROS



c) Corte

¿Qué es un criostato?En ocasiones se necesitará tener un diagnóstico más rápido de una muestra por lo que la usar la técnica clásica de inclusión en parafina para realizar un corte tardaría mucho, entonces se puede congelar la muestra ganando tiempo, para eso se necesita de un criostato.Un CRIOSTATO en patología es un micrótomo montado en el interior de un congelador para el procesamiento de tejido congelado, puede congelar hasta temperaturas de -35° C, pero en el laboratorio se trabaja entre -20°C a -25°C



d) Tinción El método supone la aplicación de la tinción de hematoxilina, que por ser catiónica o básica, tiñe estructuras ácidas (basofilas) en tonos azul y púrpura,como por ejemplo los núcleos celulares; y el uso de eosina que tiñe componentes básicos (acidofilas) en tonos de color rosa, gracias a su naturaleza aniónica o ácida, como el citoplasma.

Las tinciones diferenciales se utilizan para distinguir entre tipos de microorganismos, malformaciones, virus entre otras. La técnica de tinción diferencial

consta de dos etapas: una tinción primaria (siguiendo el mismo método que en una

tinción simple) seguida de una tinción de contraste.



d) Tinción diferencial

• La tinción de Gram La técnica de la tinción de Gram fue desarrollada por el bacteriólogo danés Christian Gram en 1884. Esta tinción clasifica las bacterias en dos grupos: Gram positivas y Gram negativas.




• La técnica incluye tinción primaria, decoloración y tinción de contraste:• 1. Se tiñe el espécimen con el primer colorante, cristal violeta, que tiñe de violeta.• 2. Se añade el mordiente, iodo.• 3. Se aplica el agente decolorante, normalmente una solución de acetona o etanol. En

este momento, las bacterias Gram negativas pierden su tinción violeta, pero las Gram positivas retienen el colorante.• 4. Como colorante de contraste se añade safranina, que tiñe de rosa las bacterias Gram

negativas, previamente decoloradas; mientras que a las bacterias Gram positivas les proporciona un color violeta más intenso.







• La tinción de ácido-alcoho] resistencia(Ziehl-Neelsen) La tinción diferencial de ácido-alcohol resistencia fue desarrollada por Paul Ehrlich en 1 882. Actualmente se utiliza una modificación de la técnica de Ehrlich que recibe el nombre de tinción de Ziehl-Neelsen. Esta tinción sirve para teñir bacterias del género Mycobacterium, el resto de las bacterias se tiñen de azul por el colorante de contraste. M. tuberculosis, causante de la tuberculosis y M leprae, causante de la lepra o enfermedad de Hansen, se identifican mediante esta tinción.




• La plata metanamina de Grocott es un método de tinción especial más empleado para hongos. La reacción tintorial está basada en que, en presencia de ácido peryódico, los polisacáridos de la pared celular de los hongos son oxidados a aldehídos; éstos, a su vez, reducen el complejo nitrato-plata metanamina (o metenamina) produciendo una coloración de café a negra, debido al depósito de plata reducida en los lugares de localización de los aldehídos.






e) Observación

PROCESO MACROSCOPICO

Comprende el estudio de sus características organolépticas, tales como:• Ubicación o localización• Tamaño• Peso• Forma• Consistencia• Descripción superficie externa• Descripción superficie de corte



e) Observación

Etiqueta:Nombre PacienteFechaLocalización de la lesiónDiagnóstico clínicoNombre del doctorHospital

PROCESO MACROSCOPICO



e) Observación

PROCESO MICROSCOPICO

El microscopio es una herramienta de gran importancia para la observación e identificación de los microorganismos.

Método:• De Menor a Mayor aumento• Recorrido sistemático• Centrado del campo óptico



e) Observación

Pautas Fundamentales1. Criterio tridimensional2. Elementos básicos:• Células• Sustancias intercelulares• Líquidos• Artefactos




e) Observación

Debemos distinguir entre las técnicas para observación de microorganismos vivos y las

preparaciones para tinción. Las tinciones ofrecen una información adicional a la simple observación

de la morfología, ya que ponen de manifiesto características de la pared celular o la existencia

de estructuras especiales, como las esporas bacterianas.


Colecistitis crónica con reagudización hemorrágica en granulación.

Ulcera gástrica activa, en

organización fibrosa avanzada y en partes con reepitelización.

Proceso inflamatorio crónico de reacción

a cuerpo extraño (Granuloma de

reacción a cuerpo extraño).

En muchas ocasiones en una cirugía es necesario la

extracción de muestras de tejidos, que nos permitan definir si el tejido

es benigno o maligno, y que nos permita . tomar una rápida decisión.


Clase #1 3 Acortamiento del proceso

Toma de muestra de

emergencia o en cirugías

Pasos para el análisisDe una muestra congelada:



BiopsiaSe realiza una biopsia del tipo necesario, se realiza un análisis macroscópico, se coloca la muestra en el OCT (un alcohol viscoso con polivinil y polienglicol) el cual permite mejor fijación, congelación y corte



CongelaciónUna vez colocado el tejidoEn el molde para ser congelado,

lo sometemos a - 35° centígrados dentro de la parrilla del criostato



CorteDentro del Criostato, también contamos con un Micrótomo el cual utilizamos para realizar el corte deseado



ColocaciónUna vez que ya se encuentran hechos los cortes o el corte deseado, procedemos a a colocarlo en la laminilla



TinciónProcedemos a teñir, los tejidos pueden teñirse en Hematoxilina Eosina, o también en Azul de Toluideno

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